El mtodo elegido est basado en la medida de la cantidad de azcares reductores (glucosa + fructosa) liberados durante la hidrlisis de la sacarosa, catalizada

por la invertasa. Para ello se utilizar el reactivo 3,5-dinitrosalicilato (DNS; este reactivo fu introducido por Summer en 1921 para la determinacin de sustancias reductoras en sangre y orina). En presencia de azcares reductores el 3,5-dinitrosalicilato es reducido a 3,5-diaminosalicilato. Este compuesto presenta un mximo de absorcin a 530 nm y, por lo tanto, el valor de la absorbancia a dicha longitud de onda ser proporcional a la concentracin de azcares reductores (glucosa + fructosa) presentes en el medio. Reactivos Sacarosa 0.3 M, 0.15 M, 0.075 M, 0.0375 M y 0.0187 M; utilizada como sustrato de la enzima. Tampn acetato sdico 0.05 M de pHs 3.5, 5, 6.5 y 8.5 (normalmente se utiliza el de pH 5 por ser el ptimo) para mantener controlado el pH del medio de reaccin. Disolucin acuosa de glucosa + fructosa (0.005 M cada una) que se utilizar como testigo de azcares reductores para la construccin de la curva patrn. 3,5-Dinitrosalicilato, el reactivo de color. La solucin de DNS se ha preparado del siguiente modo: 2.5 g de DNS se disuelven en 50 ml de NaOH 2N a 80C; por otro lado, 75 g de tartrato sdico-potsico se disuelven en 125 ml de agua destilada y se mezclan las dos soluciones en caliente, completando el volumen hasta 250 ml con agua destilada. CURVA PATRN La curva patrn permitir relacionar la absorbancia a 530 nm de los tubos con la cantidad de moles de glucosa y fructosa presentes en la disolucin y, por lo tanto, haciendo el clculo correspondiente, se podr estimar la velocidad a la que ha funcionado la enzima (moles de sacarosa hidrolizados por la enzima por unidad de tiempo), es decir, su actividad.