PROTEINURIA La proteinuria es probablemente el signo ms frecuente de que existe una enfermedad renal. En la actualidad, se usan tiras reactivas para detectar protenas cualitativamente, como un screening y si resulta positivo, se debe cuantificar protenas por el mtodo de Exton-Rose e informar en g/L o en g/24 hrs. ANALISIS CUANTITATIVO: MTODO DE EXTON-ROSE. FUNDAMENTO: Las protenas en presencia de cido sulfosaliclico precipitan. La turbidez es proporcional a la cantidad de protenas presentes en la orina. Reactivos necesarios : Acido sulfosaliclico 3 % NaCL 0.9 % Estndar seroalbmina 1 g/L 250 mL 1000 mL 100 mL
Curva de calibracin del mtodo: a. Disear y realizar una curva de calibracin para protena, de 5 puntos, en que las concentraciones varen entre 0,1 y 1 g de protena por litro, a partir de un estndar de albmina de 1 g/L. Volumen de muestra = 0,5 mL. b. c. Graficar : x = concentracin de protenas en g/L y = Absorbancia a 660 nm Calcular el factor de calibracin ( pendiente) en g de protenas por litro .
Curva de calibracin para protenas. Mtodo Exton-Rose Tubo: Estndar seroalbmina 1g/L mL Suero fisiolgico mL Acido sulfosaliclico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente. Leer Absorbancia a 660 nm Concentracin de protena en g/L Blanco ---0.5 2.5 1 2.5 2 2.5 3 2.5 4 2.5 5 ----2.5
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
Una vez obtenido el valor del Factor de calibracin K ( pendiente de la recta ), calcular la concentracin de protena de la muestra de orina (proteinuria) Concentracin de protena en la muestra = Absorbancia de la muestra / K
Procedimiento para proteinuria (con mitad de volumen En cada uno de dos tubos, (muestra problema; blanco de la reaccin) colocar los siguientes reactivos : Blanco ---0.25 1.25 Muestra 0.25 ---1.25
Orina mL Suero fisiolgico ( NaCL 0.9 %) mL Acido sulfosaliclico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente.Leer Absorbancia a 660 nm
Agitar por inversin, esperar 10 min. y leer la absorbancia del tubo problema a 660 nm, ajustando el cero del espectrofotmetro con el blanco de la reaccin. Si la orina es muy coloreada se prepara un blanco de muestra de acuerdo a la siguiente tcnica: 0.25 1.25 mL de orina mL de suero fisiolgico