RESUMO IMUNOLOGIA

(baseado no livro: Imunologia Celular e Molecular 6Ed Abbas)

SUGESTO PARA ESTUDO: Leia primeiramente o captulo original do livro para depois fazer uso deste resumo, pois necessrio o conhecimento prvio sobre imunologia para melhor entender os conceitos utilizados neste resumo.

O LINFCITO T
Desenvolvimento e maturao de LT Os linfcitos T so gerados a partir de clulas-tronco hematopoiticas (HSCs) presentes inicialmente no fgado fetal e posteriormente na medula ssea. Quando as HSCs recebem estmulos (Ex. IL-7) elas iniciam o processo de maturao, gerando os progenitores comprometidos com a linhagem linfoctica. Os progenitores de linfcitos T (tambm chamados de pr-timcitos) migram para o timo para completarem seu desenvolvimento. Nesta fase, iniciam-se os processos de rearranjo dos genes de receptor de antgeno (TCR) para expresso de um pr-receptor funcional (contendo somente a cadeia beta ou gama rearranjada), que importante para fornecer sinais de sobrevivncia para a clula continuar sua maturao. Aqueles linfcitos que no conseguem expressar um pr-receptor funcional so levados a apoptose. Aps este primeiro ponto de controle do desenvolvimento do linfcito T, as clulas comeam a expressar o receptor antignico completo (TCR), juntamente com as molculas acessrias CD3 (que est presente em todos os tipos de linfcitos) e CD4/CD8 (nesta fase, os LT so duplo positivos), sendo ento, encaminhados para o processo de seleo positiva e negativa. No processo de seleo positiva, os linfcitos que possuem receptores antignicos que apresentam uma ligao de baixa afinidade com ligantes presentes no hospedeiro so selecionados para sobreviver. Este processo garante a restrio ao MHC, pois somente os linfcitos que reconhecem funcionalmente o MHC do hospedeiro so selecionados para sobreviver. Aps este processo, os linfcitos comeam a se comprometer com apenas uma subpopulao especfica (CD4 ou CD8), devido a ter que realizar a ligao funcional adequada com o MHC do hospedeiro. A seleo negativa, o processo que elimina aqueles linfcitos T que apresentam receptor com forte ligao para antgenos prprios presentes nos rgos geradores, impedindo a gerao de linfcitos auto-reativos. Este processo responsvel pelo funcionamento da tolerncia central.

Aps o processo de seleo, os linfcitos j maduros podem deixar o timo e ir para os rgos linfoides perifricos, onde so chamados de linfcitos T naives. Aquelas clulas T que so CD4+ podem ser ativadas e se desenvolverem para linfcitos T auxiliares/regulatrios e as clulas T CD8+, aps ativao se diferenciam para linfcitos citotxicos. Aqueles linfcitos T que expressam o receptor TCR do tipo no passam pelo processo de seleo e so gerados principalmente no fgado fetal durante a gestao e migram para pele e mucosas aps amadurecimento onde formam uma populao auto-renovvel.

Subpopulaes de Linfcitos T (LT) Existem vrias subpopulaes de LT descritas, que podem ser classificadas pelo tipo de receptor que apresentam ( ou ) e pelo perfil de citocinas que produzem aps ativao para exercerem suas funes efetoras (perfis Th1, Th2, Th17, Treg e etc). Assim, baseando-se no receptor antignico presente no LT, existem linfcitos TCR ou TCR, que podem ainda serem classificados em LTCD4+, LTCD8+, NK-T e LT intra-epiteliais. O TCR um heterodmero composto por duas cadeias ( e ) que possuem um domnio V (varivel) e um domnio C (constante). Cada domnio V possui regies CDR (hipervariveis), sendo que o domnio V possui 3 CDR e o domnio V possui uma 4 regio hipervarivel para ligao com superantgenos. A regio constante do TCR serve para interagir com as molculas CD3 e que realizam a transduo do sinal de ativao do TCR, auxiliado tambm, pelas molculas CD4/CD8. Os linfcitos T intra-epiteliais expressam o TCR , que so ativados quando ocorre a ligao a antgenos livres, no sendo necessria a participao do MHC na apresentao do antgeno (no so restritos ao MHC). A transduo do sinal de ativao tambm via CD3/. Estas clulas representam uma linha de defesa rpida e de vigilncia imunolgica. As clulas NK-T apresentam o TCR com diversidade limitada, que reconhecem antgenos apresentados via a molcula CD1 presente em algumas APCs (geralmente os antgenos apresentados por essa via so lipdios bacterianos). Essas clulas tambm no so restritas ao MHC e representam uma fonte de IFN, IL-4 e IL-13, atuando na resposta imune celular rpida, na inflamao e na autoimunidade.

Apresentao de antgenos aos linfcitos T Normalmente, as clulas dendrticas (DCs) esto em estado de repouso (imaturas) no tecido, expressando receptores de reconhecimento padro de patgenos (chamados de PPRs) e os utilizam para reconhecer, capturar ou endocitar antgenos microbianos. As DCs que so ativadas por micro organismos (via os PPRs, como por exemplo os TLRs, NLRs e outros) comeam o processo de amadurecimento, perdendo sua adesividade pelo tecido, migrando rumo zona de linfcito T no linfonodo regional drenante (para encontrar o linfcito T naive). A migrao da DC ativada para o linfonodo controlada pela expresso de receptores para quimiocinas, como o CCR7, que se liga em CCL19, que expresso somente na zona de linfcito T no linfonodo. A ativao converte as DCs em APCs (Clula apresentadora de antgeno) que exibe eficientemente os 3 sinais necessria para a ativao do linfcito (consequentemente a ativao da resposta imune celular): o 1 sinal a exibio do antgeno associados a molculas de MHC (classe I ou II, dependendo da via de entrada do antgeno), o 2 sinal envolve a expresso de molculas co-estimulatrias (como CD40) e o 3 sinal marcado pela produo de citocinas (Ex. IL-12) que so importantes para a correta ativao do LT para algum tipo de perfil especfico.

Processamento e apresentao de antgeno via MHC-II ao LTCD4+: Para apresentao por essa via, os antgenos so capturados/endocitados pelas APCs em vesculas endossmicas, que se fundem com vesculas lisossomais, formando o fagolisossomo. Dentro dessa estrutura, os antgenos so clivados em pequenos peptdeos por enzimas proteolticas para que possam se ligar a molcula de MHC-II e serem apresentados na superfcie da clula. A molcula de MHC-II sintetizada no retculo endoplasmtico juntamente com a molcula da cadeia invariante e a molcula CLIP (a cadeia invariante se liga a protena CLIP que ocupa a fenda de ligao ao antgeno presente na molcula de MHC, evitando assim, a ligao de antgenos prprios durante a montagem da molcula de MHC dentro do reticulo), alm disso, tambm sintetizado no RE a molcula HLA-DM, que promove a estabilizao da molcula de MHC) este complexo levado por vesculas endossmicas at o fagolisossomo que contem o antgeno a ser apresentado, as duas estruturas se fundem e dentro do fagolisossomo ocorre protelise da cadeia invarivel e a molcula de HLA-DM efetua a ligao do peptdeo microbiano na fenda de ligao da molcula de MHC. O complexo peptdeo-MHC levado at a membrana extracelular, onde exposto para o possvel encontro com LTnaive CD4+ que ir reconhecer a molcula de MHC-classe II juntamente com o peptdeo.

Processamento e apresentao de antgeno via MHC-I ao LTCD8+: Os antgenos microbianos presentes no citoplasma (como os vrus) so apresentados por essa via. Primeiramente ocorre a ubiquitinao dos produtos antignicos que so levados protelise dentro do proteassoma para formao de peptdeos do antgeno. Juntamente com este processo, ocorre a biossntese da molcula de MHCClasse I no RE, auxiliado pela molcula calnexina. Neste processo tambm so sintetizadas as molculas TAP e tapasina que iro auxiliar no processo de apresentao do antgeno. O Complexo MHC se liga TAP (que a molcula responsvel pelo transporte dos peptdeos presentes no citoplasma para dentro do RE atravs da tapasina). A ligao do peptdeo na fenda do MHC-I estabiliza a molcula, que direcionada para a membrana extracelular, onde exposta para o possvel encontro com o LT CD8+ naive especfico.

Processo de apresentao cruzada: Clulas dendrticas possuem uma maquinaria especializada que pode transportar peptdeos de dentro do fagolisossomo para o citoplasma da clula, podendo apresentar esses antgenos via MHC-I, alm disso, alguns micros organismos fagocitados podem danificar a membrana do fagossomo e liberar seus antgenos no citosol. Vrus intracelulares podem expressar protenas na membrana da clula que podem ser recicladas e apresentadas via MHC-II. Outros mecanismos incluem a autofagia que pode colocar antgenos do hospedeiro para serem apresentados via MHC-II.

Ativao dos Linfcitos T Incio: Micro organismos e antgenos que atravessam a barreira epitelial so fagocitados ou reconhecidos pelas clulas dendrticas imaturas. As clulas dendrticas que reconhecem os micro organismos (via receptores de reconhecimento de PAMPs, como TLR, NOD e etc) iniciam o processo de amadurecimento e migrao para o linfonodo regional (zona LT). No linfonodo, as DCs (tambm chamada de APC) apresentam os antgenos aos linfcitos T via MHC (do tipo I ou II), fornecendo o 1 sinal para ativao dos linfcitos T. As APCs devidamente ativadas, tambm expressam molculas coestimulatrias (como B7-1, B7-2 e CD58) que fornecem o 2 sinal para ativao e proliferao dos LT, alm de secretarem citocinas (3 sinal), que ajudam a determinar o perfil de LT efetor gerados aps a ativao.

Ativao LTCD4+: No linfonodo, as APCs apresentam antgenos proteicos que foram endocitados, associados ao MHC-II para linfcitos T naives, formando uma sinapse imunolgica, fornecendo o 1 sinal para ativao do LT. As APCs que foram devidamente ativadas, aps reconhecimento do antgeno (via receptores de PAMPs, como os TLRs, scavengers, lectinas) tambm expressam molculas co-estimulatrias (como B7-1, B7-2 e CD58) que se ligam aos LT (via CD28 e CD2) e fornecem o 2 sinal necessrio para ativao do LT, alm disso, as APC's secretarem citocinas (3 sinal, Ex. IL-12) que ir determinar o perfil de diferenciao da clula LTCD4+ para clula T efetora. Na sinapse imunolgica realizada entre APC e o LT tambm so expressos molculas de adeso (Ex. molculas LFA-1, que est presente no LT e se liga molcula ICAM-1 presente na APC, interaes entre integrinas e molculas SLAM-SLAML) que ajudam na sinalizao eficaz e prolongada para promover devidamente a ativao do LT. Inicialmente, o reconhecimento antignico pelo LTCD4+ estimula a produo de IL-2, que promove a expanso clonal e especfica daquelas clulas que foram ativadas. Os Linfcitos TCD4+ efetores expressam molculas na superfcie (Ex. CD40) e liberam citocinas (Ex. INF ou IL-4) que exercem uma srie de efeitos biolgicos em outras clulas do sistema imune, como no caso do linfcito B (ativando a produo de anticorpos, a mudana de classe de Ig e de afinidade), macrfagos (aumentando a produo de molculas microbicidas que levam a morte de patgenos fagocitados) e clulas dendrticas (melhorando a apresentao de antgenos, amplificando o perfil de resposta). Ao final da ativao, tambm so gerados LT de memria que participam da vigilncia imunolgica contra futuras infeces com o mesmo patgeno. Ativao LTCD8+ As respostas via LTCD8+ so desencadeados por antgenos proteicos citozoicos que so apresentados via MHC-I aos LTCD8+ naives, juntamente com molculas co-estimulatrias e geralmente acompanhadas por sinais liberados por linfcitos T auxiliares ativados. O auxilio do LTCD4+ efetor na ativao de LTCD8+ necessrio por que em infeces virais latentes e tumores, as reaes de ativao do sistema imune inato so fracas, sendo necessrio que o LTCD4+ efetor secrete citocinas que auxiliam na diferenciao da clula CD8+ para LT citotxicos, alm de estimular APCs (via CD40) tornando-as mais eficazes na apresentao de antgenos aos linfcitos CD8+ A expanso clonal dos LTCD8+ ativados estimulada pela produo de IL12/IL-15/IL-7 e sua diferenciao em CTLs (clulas citotxicas) envolve a sntese de grnulos citoplasmticos (como as granzimas e perforinas).

As CTLs so capazes de interagir com clulas infectadas via MHC-I, formando uma sinapse onde so secretados grnulos que levam a morte da clula-alvo infectada. Estas clulas tambm representam uma fonte de citocinas (principalmente IFN e TNF) que estimulam a inflamao e a ativao de fagcitos.

Transduo de sinais pelo complexo TCR O reconhecimento do antgeno pelo TCR inicia uma sequncia de sinais bioqumicos nas clulas T que resulta na ativao de fatores de transcrio que controlam determinados genes que codificam protenas que realizam a mediao das respostas biolgicas dessas clulas. O TCR formado por um complexo de cadeias que esto associadas s molculas CD4/CD8, CD3 e . Quando o TCR se liga ao complexo peptdeoMHC, CD4 ou CD8 ligam-se as regies constantes do MHC e a enzima LCK (tirosina cinase associada a cada molcula do CD4/CD8) se aproxima de CD3/, levando a fosforilao dos ITAMs (motivos ativadores baseados em tirosina) presentes nestas molculas. Os ITAMs fosforilados so locais de ligao para a molcula ZAP-70, que ativada e atua fosforilando diversas molculas citoplasmticas sinalizadoras que promovem a ativao das vias de transduo de sinal, como a via da RAS-MAP cinases e PCL1. Essas vias convergem para ativao de fatores de transcrio como NFAT, AP-1 e NFB. O NFAT o fator de transcrio necessrio para expresso de genes de citocinas (como IL-2, IL-4, TNF), estando presente no citoplasma sob a forma fosforilada inativa. Este fator ativado pela calcineurina, que o desforila, permitindo que o NFAT se translouque para o ncleo e se ligue nas regies reguladoras dos genes das citocinas. O Fator AP-1 (composto por duas protenas Fos e Jun) que geralmente est associado a outros fatores de transcrio, fosforilado no final da via das RASMAP cinases, onde ento pode migrar para o ncleo e estimular a transcrio de genes relacionados ativao dos linfcitos T O Fator NFB, que est presente no citoplasma formando um complexo inibidor com IB (que bloqueia a entrada de NFB no ncleo), ativado aps a fosforilao, liberao e degradao de IB, liberando NFB para migrar para o ncleo, sendo um fator essencial para a sntese de citocinas pr-inflamatrias. Os sinais de co-estimulao (principalmente via CD28) cooperam com os sinais do TCR para aumentar a ativao dos fatores de transcrio (como por exemplo, ativam NFB para induzir a produo de IL-2 que promove a proliferao e sobrevivncia do linfcito T ativado).

Vias de atenuao da ativao do LT As respostas funcionais das clulas do SI so reguladas por um equilbrio entre sinais estimulatrios e inibitrios que as clulas recebem. Os principais sinais inibitrios que atuam no linfcito T ativado so: O receptor CTLA-4, que causa a inibio competitiva por se ligar aos coestimuladores (B7), diminuindo os sinais de ativao e atraindo a protena SHIP-1 para a sinapse imunolgica, que bloqueia a fosforilao da molcula CD3 e . O receptor PD-1 contem ITINs (padres inibidores baseados em tirosina) que atuam inibindo a sinalizao de ativao do LT Ubiquitinonas atuam fazendo a marcao de molculas da via de ativao para serem degradadas, atuando como inibidoras.

Mecanismos Efetores da Imunidade Mediada por Clulas A imunidade celular consiste no desenvolvimento de clulas T efetoras em rgos linfoides que migram para os locais de infeco onde produzem citocinas que ativam os leuccitos para eliminao de patgenos. As clulas TCD4+ podem diferenciar-se em subpopulaes de clulas efetoras que produzem conjuntos diferentes de citocinas que promovem mecanismos efetores com caractersticas diferentes. Os perfis de resposta imunolgica mediada pelos LT so dependentes da via de ativao e do tipo de patgeno. Cada perfil promove uma amplificao adicional e inibe o aparecimento dos outros perfis por meio de uma regulao cruzada. O padro de diferenciao dos conjuntos de LT efetores determinado logo no inicio da resposta imunolgica, por estmulos presentes durante sua ativao. Assim os principais perfis de ativao dos LT auxiliares so o Th1 e TH2. A produo de IFN/IL-12 estimula o aparecimento do perfil Th1 que por sua vez caracterizado pela produo de IFN/IL-12/TNF e a presena de IL-4 durante a ativao do LT leva ao aparecimento do perfil Th2, que caracterizado pela produo de IL-4/IL-5/IL-13 A resposta para micro organismos dentro de fagolisossomos mediada por LTCD4+ do perfil Th1 que ativam os fagcitos (via CD40 e IFN) para produo de molculas microbicidas (ROS, NOS, peroxinitrito) para eliminao dos micro organismos fagocitados. Respostas contra parasitos helmintos e alrgenos so mediadas por linfcitos do perfil Th2, que produzem IL-4/IL-5 que estimula a produo de anticorpos da

classe IgE, ativao da inflamao eosinofilica e recrutando a participao de mastcitos na destruio dos helmintos. Respostas contra micro organismos que residem no citoplasma so mediadas por CTLs (LTCD8+) que destroem as clulas infectadas e produzem citocinas inflamatrias, eliminando o reservatrio da infeco.

Perfil Th1: Induo: Naquelas condies onde os patgenos ativam fortemente a imunidade natural (via o reconhecimento de PAMPs pelos PPRs) acompanhado da produo de IL-12/IL-18/IFN. Alguns vrus que ativam clulas NK para produo de IFN tambm estimulam o aparecimento do perfil Th1, alm de atuar sobre APCs para produo de IL-12. Diferenciao: LT naives que so ativados na presente de IL-12/IFN ativam o fator de transcrio Tbet, STAT1 e STAT4 que promove a produo de IFN e estabelece uma ala positiva de amplificao do perfil (Lembre-se: O IFN ativa STAT-1 que induz a ativao T-bet que o regulador mestre da diferenciao do perfil Th1, j a IL-12 ativa STAT-4 e amplifica o sinal de ativao). Funes Efetoras: A migrao de clulas T efetoras para o local da infeco inicialmente dependente da resposta imune inata no local da invaso, que induz a produo de TNF/IL-1 que atua nas vnulas proximais para que o endotlio comece a expressar molculas de adeso (Ex. selectinas E e P, integrinas VCAM-1 e ICAM-1) que iro atrair os linfcitos ativados para o local da infeco. As clulas Th1 interagem com os macrfagos ativados (via CD40) e produzem citocinas (ex. IFNy) que estimula a produo de molculas microbicidas (como NO, ROS, peroxinitritos) por estes macrfagos ativados, aumentando a fagocitose e a morte dos patgenos endocitados. A produo de IFNy tambm potencializa o processo inflamatrio, pois estimula a produo de mais citocinas pr-inflamatrias (como TNF/IL-1), quimiocinas, mediadores lipdicos da inflamao (PAF, leucotrienos, prostaglandinas) e a migrao de neutrfilos e outros leuccitos para o local da infeco. Macrfagos ativados pelos Th1 tambm se tornam melhores APCs, pois aumentam a expresso de molculas MHC, produo de IL-12. Este mecanismo serve como uma ala de amplificao e proliferao do perfil Th1. A interao dos Th1 com LB tambm estimula a produo de anticorpos IgG opsonizantes e de alta afinidade, ativadores do complemento, que contribuem com a eliminao dos micro organismos.

Perfil Th2: Induo: Este perfil aparece em resposta imunes contra helmintos e alrgenos, que inicialmente produzem pouca ativao da imunidade inata, com a participao de eosinfilos e mastcitos que so fontes de IL-4. Diferenciao: A IL-4 produzida pelos leuccitos ativa o fator de transcrio STAT-6 que junto com os sinais do TCR induz a expresso de GATA-3 que o fator regulador mestre na diferenciao para Th2, pois aumenta a sntese de citocinas como IL-4/IL-5 e IL-13. Funes Efetoras: A IL-4 estimula a produo de IgE pelos LB que se liga em receptores de alta afinidade presente em mastcitos e eosinfilos, mediando s reaes de hipersensibilidade imediata. A IL-5 atua sobre eosinfilos, produzindo a inflamao eosinofilica, que importante na defesa contra helmintos. A IL-13 promove a produo de muco e a IL-4 estimula os movimentos peristlticos contribuindo para expulso de parasitos e contribuindo na imunidade de barreira. A IL-4 e IL-13 tambm so capazes de ativar alternativamente os macrfagos, aumentando a expresso dos receptores de manose e enzimas que promovem a sntese de colgeno e fibrose, que contribuem para formao de granulomas e na remodelao tecidual.

Perfil Th17 Este perfil estimulado pela produo de IL-6 e TGF em respostas a inflamao por bactrias extracelulares. As clulas Th17 (que secretam IL-17) esto associadas a inflamaes crnicas e doenas inflamatrias imuno mediadas e tambm na inflamao neutroflica intensas.

Resposta citotxica (via clulas TCD8 Efetoras CTLs) As CTLs promovem a morte altamente especfica de clulas infectadas que apresentam antgenos associados a molculas de MHC-I. A CTL forma uma sinapse com a clula infectada, onde libera protenas citotxicas armazenadas nos grnulos dessas clulas. Entre os grnulos liberados existem as granzimas e perforinas. As perforinas so responsveis por formar poros na membrana da clula-alvo, permitindo a entrada da granzima, que cliva substratos que ativam a morte apopttica da clula-avo. Aps a liberao do tiro fatal, as CTL so liberadas intactas e podem exercer seus efeitos citotxicos sobre outras clulas.

As CTLs tambm pode utilizar-se de mecanismos de morte celular envolvendo o receptor FAS-FASL, que tambm induz a apoptose da clula. As CTLs tambm so fontes de IFNy que estimula a inflamao e ativao de macrfagos.

Clulas T de memria A memria imunolgica formada pelos linfcitos sobreviventes aps o trmino da resposta imunolgica, formando uma populao de clulas responsveis pela vigilncia imunolgica, respondendo de maneira mais rpida e amplificada quando o mesmo antgeno encontrado novamente. Podem ser divididas (com base na propriedade de homing e funes efetoras) em duas categorias: As clulas de memrias centrais, localizadas nos linfonodos e que geram muitas clulas efetoras quando o antgeno encontrado novamente. Tambm existem as clulas de memria perifricas/efetoras, que quando ativadas produzem citocinas pro-inflamatrias rapidamente A manuteno das clulas de memria dependente da produo IL-7 e IL-15.