Mekanisme Pufa Dalam Mempengaruhi Reproduksi PUFA dan Prostaglandin Dua puluh karbon PUFA merupakan prekursor langsung

dari sejumlah besar kelompok senyawa fisiologis aktif yang disebut eicosanoids yang meliputi prostaglandin (PG), tromboksan, leukotrien, dan lipoxins [10]. Seri-1 dan -2 PG berasal dari n-6 PUFA DGLA dan AA, sedangkan seri-3 PG berasal dari EPA (ekuivalen dengan n-3 AA) (Gambar 1) [10]. Sintesis PG di jaringan tubuh merupakan proses yang sangat ketat diatur. Kelebihan PUFA 'disimpan' dalam sebagian besar sel dalam fosfolipid di membran dalam bentuk yang telah esterifikasi. Tahapan inisial adalah pembentukan subtrat PUFA di dalam sel (misalnya, AA untuk seri-2 PG). AA dibebaskan oleh aksi dari fosfolipase A2 (PLA2). Banyak fosfolipase telah diidentifikasi, yang mana Group IV cytosolic A2 (GIVA) intraselular tampak paling penting dalam mengendalikan ketersediaan AA bebas untuk sintesis PG [11]. Aktivasi PLA2 sitosolik tergantung pada pelepasan dari kalsium yang tersimpan dari retikulum endoplasma, yang pada gilirannya berperan dalam aktivasi protein kinase C [12]. AA bebas (atau PUFA lainnya) dihasilkan, kemudian dimetabolisme oleh enzim prostaglandin endoperoxide synthase (PTGS), yang mana PTGS1 dan PTGS2 paling relevan dengan reproduksi biologi (Gambar 2). Meskipun PTGS1 dan PTGS2 memenuhi fungsi yang sama, mereka dikodekan oleh gen yang berbeda, diatur secara diferensial, diekspresikan dalam sel spesifik [13]. Tabel 2. Ringkasan nomenklatur protein yang digunakan pada pekerjaan ini tertentu, dan ditemukan di kompartemen subselular berbeda

* Singkatan yang digunakan sebagai istilah umum yang mencakup semua aktivitas enzimatik yang sama.

Gambar 1. Skema untuk menggambarkan pembentukan seri - 1, -2 -, dan -3 prostaglandin (PG) dari diet polyunsaturated fatty acid.

Gambar 2. Ringkasan diagram yang berkaitan dengan sintesis prostaglandin (PG). Poin dalam jalur yang mana diterbitkan bukti bahwa sintesis PG dapat diatur oleh polyunsaturated fatty acid (PUFA) telah ditunjukkan. # 1 = komposisi PUFA dalam membran fosfolipid, yang dipengaruhi oleh diet. # 2 = pelepasan PUFA dari fosfolipid oleh fosfolipase A2. # 3 = metabolisme PUFA oleh PTGS1 atau =2 untuk menghasilkan PGH berumur pendek. # 4 = metabolisme dari PGH menjadi PGE aktif melalui membrane prostaglandin E synthase (PTGES).

Enzim PTGS memberikan PGH untuk PG sintase secara terpisah [13]. Dua bentuk PGE sintase (PTGES) telah diidentifikasi, yang mana yang diinduksi membentuk PTGES1, yang terletak di fraksi mikrosomal, merupakan enzim yang bertanggung jawab dalam output PGE2 dalam situasi inflamasi [14]. Terdapat beberapa isoform PGF sintase milik keluarga aldoketoreduktase [15, 16]. Mereka akan disebut kolektif sebagai PGFS. PG berperan melalui serumpun receptors pasangan protein-G (misalnya, EP, FP) [17, 18]. Sampai saat ini, empat subtipe reseptor prostaglandin E (PTGER) telah dikloning (PTGER1, PTGER2, PTGER3, PTGER4), dengan beberapa isoform dari reseptor subtipe PTGER3 [17]. Aktivasi reseptor PTGER dapat mengakibatkan peningkatan [Ca2+]
i

(melalui reseptor

PTGER1), daur phosphoinositol (melalui reseptor PTGER3), pembentukan cAMP (melalui reseptor PTGER2 dan PTGER4), atau penghambatan aktivitas stimulasi agonis adenilat siklase (melalui reseptor PTGER3) [18 dan referensi di dalamnya].Pada saat ini merangkum tipe respon second messenger yang dimediasi reseptor PTGER, namun harus ditekankan bahwa coupling dari subtipe reseptor yang diberikan dapat bervariasi secara dramatis di antara jaringan dan di antara spesies. Karena kesamaan dalam struktur antara molekul PG berbeda, terdapat beberapa lintas reaktivitas PG yang berbeda di antara reseptor. The seri-2 PG umumnya dianggap lebih aktif secara biologis daripada seri-1 dan 3 PG. Sebagai contoh, PGF2 memiliki potensi 10 kali lipat lebih besar dibandingkan dengan PGF3 dalam perlindungan terhadap cedera yang diinduksi ethanol pada mukosa lambung tikus [19]. Pada sel luteal sapi, PGF3 memiliki afinitas yang relatif tinggi untuk reseptor PGF (PTGFR) (39 nM versus 10 nM untuk PGF2), sebagaimana dibandingkan dengan PGF1, yang afinitasnya dianggap lebih rendah (153 nM versus 10 nM untuk PGF2) [20]. Pada sisi lain, pada hamster Cina sel ovarium mengekspresikan subtipe reseptor PTGES yang berbeda, PGE1 dan PGE2 mempunyai nilai Ki yang sangat mirip untuk keempat subtipe reseptor (misalnya, sekitar ~12 nM untuk reseptor PTGER2) [21]. Karakteristik pengikatan reseptor PGE1 dan PGE2 terhadap reseptor PTGER3 pada sel-sel luteal sapi juga sama [22]. Di sisi lain, PGE1 berperan melalui PTGER2 atau PTGER4 lebih efektif dibandingkan PGE2 pada penghambatan proliferasi sel otot polos vaskuler dan 3 mereka. Efek PUFA pada Sintesis PG PUFA mempengaruhi produksi PG dengan bertindak sebagai substrat untuknya, dan kompetitif inhibitor, cyclooxygenation dan dengan mengubah ekspresi atau konsentrasi seluler dari berbagai enzim yang relevan. Proporsi dari PUFA yang berbeda diit mengubah komposisi [23]. Hal ini kemudian menjadikan kita tidak bijaksana bila menganggap bahwa seri-2 PG selalu lebih poten dari keekuivalenan seri 1

fosfolipid membran sel dan ini menjadi signifikan secara kuantitatif karena prekursor setiap kelompok PG bersaing untuk sistem enzim yang sama dalam metabolisme [24]. Hal ini pada gilirannya akan memiliki efek yang besar terhadap jenis PG yang disintesis dan juga respon fisiologisnya [25]. Misalnya, dalam studi kami pada sintesis PG di dalam uterus ruminansia, LA ditambahkan secara in vitro sehingga secara umum menghambat. Entah suplementasi diet in vivo yang diperkaya LA untuk ternak [26] atau suplementasi LA secara in vitro pada sel-sel endometrium yang diisolasi dari akhir kehamilan domba betina juga menyebabkan penurunan signifikan dalam produksi dari seri-2 PG [27]. Sebaliknya, pemberian makan diet tinggi di LA untuk akhir kehamilan domba betina meningkatkan produksi PG endometrium dan plasenta [28-30]. Ini dikaitkan dengan perkiraan peningkatan 50% konsentrasi AA dalam darah dan caruncula endometrium, menunjukkan bahwa dalam kasus ini, metabolisme efektif dari LA menjadi AA telah terjadi, sehingga memberikan prekursor lebih. Dalam mendukung hal ini, suplementasi sel endometrium yang dikultur dengan GLA atau AA meningkatkan sintesis PG secara signifikan [27]. Afinitas untuk prekursor (substrat) menurun dari n-3menjadi n-9 seri PUFA, sehingga ketika EPA hadir dalam jumlah yang cukup, dapat menekan metabolisme n-6 PUFA dan juga sintesis dari 2-seri PG. Substrat yang lebih disukai untuk katalisis PTGS baik oleh PTGS1 atau PTGS2 adalah AA [31]. Meskipun EPA adalah substrat untuk baik PTGS1 dan PTGS2, metabolismenya melalui PTGS1 sangat buruk (sekitar 10% yang dari AA), yang berarti bahwa kemampuannya untuk menghasilkan seri-3 PG juga buruk [31]. EPA juga merupakan penghambat aktivitas PTGS1. Ini berarti bahwa EPA tidak hanya menghambat pembentukan seri-2 PG (misalnya, dalam kultur sel endometrium sapi [32]), tetapi tidak menginduksi, sebagaimana diharapkan, juga meningkatkan secara bersamaan pembentukan seri-3 PG melalui PTGS1. Meskipun demikian, perubahan dalam sintesis seri-3 PG memang terjadi setelah suplementasi diet dengan n-3 PUFA pada manusia [33]. Selain mengubah proporsi dari produksi seri -1 , -2, dan -3 PG, terdapat juga bukti PUFA dapat mempengaruhi keseimbangan antara produksi PGF dan PGE. Kami menemukan bahwa suplementasi sel endometrium endometrium ovine dengan n-6 PUFA dari LA, GLA, atau AA semuanya menghasilkan pergeseran signifikan produksi PGE2 lebih banyak relatif terhadap PGF2 [27]. Sapi sapi yang diberi diet minyak ikan tinggi memiliki ekspresi mRNA PTGES lebih tinggi di endometrium [34], menunjukkan mekanisme yang mungkin untuk efek ini. Di sisi lain sapi perah yang menerima makanan garam kalsium pintas dari minyak ikan secara kronis (diperkaya dengan EPA dan DHA) tidak mengalami perubahan

ekspresi mRNA PTGS2, PTGES, atau PGFS dalam jaringan endometrium yang dikumpulkan pada hari ke-17 dari siklus [35].