BIOQUMICA II

FUNCION HEPATICA NORMAL

La sangre procedente del intestino y del pncreas alcanza al hgado a travs del sistema venoso porta Transportando los bioelementos necesarios para sntesis de protenas, azcares para el almacenamiento de energa y hormonas para regular la produccin de glucosa. Centro de sntesis de: protenas plasmticas, lpidos endgenos, lipoprotenas (colesterol), factores de la coagulacin y glucgeno/glucosa.

FUNCION HEPATICA NORMAL

Metabolizacin de las drogas liposolubles (compuestos potencialmente txicos) Componente fundamental del Sistema Reticuloendotelial y las clulas de Kupffer: constituyen principal dentro de defensa contra bacterias intestinales y de eliminacin de los complejos antgeno-anticuerpo

Centro de almacenamiento: energa en forma de glucgeno, de hierro y vitaminas (A, D y B12).

Localizacin de las enzimas hepatocelulares

Se localizan en distintos sitios del hepatocito Diferentes patrones de liberacin Distintos mecanismos de dao
FAL GGT

GGT

ALT ASTc LDH

ASTm 5 -NT

PRUEBAS DE DAO HEPATICO

Enzimas que reflejan dao celular Las enzimas citoplasmticas y mitocondriales Dao irreversible en la membrana celular (acompaa a la muerte celular) Marcadores: ALT, AST, LDH Enzimas que reflejan dao canalicular Las enzimas canaliculares
Acumulacin de cidos biliares en la obstruccin canalicular

Marcadores: GGT, FAL, 5 N

ENFERMEDADES HEPATICAS
AGUDAS Asintomticas en su mayora. Elevacin de la bilirrubina conjugada (ictericia) Causas: Hepatitis aguda u obstruccin del tracto biliar (ictericia colestsica u obstructiva) CRONICAS Infeccin crnica por VHB o VHC. Hemocromatosis Enfermedad de Wilson Hepatitis Autoinmune Cirrosis Carcinoma hepatocelular Lesiones ocupantes de espacio

PERFIL COLESTASICO

GENERALIDADES
LA SECRECIN BILIAR
Involucra complejos mecanismos. Formacin de bilis (hepatocito). Modificacin en los conductillos y conductos biliares. Excretada en el intestino.

INTERFERANCIA: de los mecanismo a cualquier nivel y por diferentes causas Consecuencia: COLESTASIS. 1956, Hans Popper

GENERALIDADES
Las alteraciones que esta produce, independientemente de la etiologa, son la disminucin del flujo biliar y la acumulacin en el hgado (con aumento en la sangre) de sustancias normalmente excretadas por la bilis. Sndrome clnico-humoral, caracterizada por prurito, ictericia, elevacin de las enzimas colestsicas (fosfatasa alcalina, gamma-glutamiltransferasa y 5-nucleotidasa). Existe un impedimento de la secrecin biliar y defectos en la secrecin de aniones orgnicos.

DEFINICION
SNDROME RESULTANTE DE TRASTORNOS Formacin, secrecin o drenaje Bilis al Intestino. Alteraciones morfolgicas, fisiolgicas y clnicas. PROCESO BIOQUIMICO: incremento de la fraccin hepatobiliar de la FAL, GGT, 5-NT, cidos biliares y colesterol entre otros. MANIFESTACIONES CLINICAS: ictericia, prurito, xantelasmas, etc.

CLASIFICACION

Pueden ser:

Intrahepticas / Extrahepticas. Ictricas / Anictricas. Agudas / Crnicas.

Universalmente aceptada: Normas de Estandarizacin para las enfermedades del Hgado y de Va biliar (1994).

INTRAHEPATICA

EXTRAHEPATICA

Alteraciones hepatocelulares de los canalculos biliares o de los pequeos conductillos.

Alteraciones de los conductos biliares.

ETIOPATOGENIA

Colestasis Extraheptica: Obstruccin parcial o

total de los conductos biliares (por litiasis, tumores benignos o malignos, extrechez inflamatoria, parasitos, etc).

Colestasis Intraheptica: resultado de fallas en

los hepatocitos para secretar cantidades adecuadas de bilis (por injuria viral, hepatitis, drogas, alcohol o toxinas endgenas y exgenas). Destruccin progresiva de los conductillos biliares (Cirrosis biliar primaria).

ETIOPATOGENIA
Colestasis congnita (Colestasis intraheptica familiar progresiva: CIFP)

Caractersticas de Laboratorio de la Colestasis

Los hallazgos comunes a todas las formas de Colestasis son:

Aumento de la bilirrubina conjugada. Aumento de la Fosfatasa Alcalina. Aumento de la Gamma-glutamil-transferasa. Aumento de la 5-Nucleotidasa. Aumento del colesterol total, cidos biliares, aparicin de bilirrubinuria.

Caractersticas de Laboratorio de la Colestasis

La obstruccin del rbol biliar es la causa mas comn del desarrollo de ictericia. Con menor frecuencia, la obstruccin intraheptica generalizada (mecnica o funcional) puede producir ictericia. La ictericia colestsica u obstructiva va acompaada de prurito (opiceos endgenos). El prurito normalmente precede al desarrollo de la ictericia.

Caractersticas de Laboratorio de la Colestasis

Se desarrolla gradualmente un de las enzimas canaliculares (FAL GGT) GGT alcanza valores anormales antes que FAL total Obstruccin extraheptica o dao en conducto biliar intraheptica ( ambas) Se produce de bilirrubina conjugada (ictericia severa en obstruccin total) remisin
Fraccin de bilirrubina (BD) es similar en la Hepatitis y la Obstruccin (no distingue entre dao heptico y Colestasis)

Obstruccin extraheptica transitorio de enzimas citoplasmaticas (similares al dao hepatocelular agudo) remisin a los 10 das aprox.

PATRONES DE COLESTASIS
TIPO LOCALIZACION DE LA OBSTRUCCION Hepatocito ALT N FAL (ALP) N BILI Elev. CAUSAS Sepsis, NPT, esteroides sexuales

Bilirrubinostasis

Hepatitis Colestsica
Dao Ductal

Canalicular

Elev.

Elev.

Elev.

Dao inducido por drogas, deficiencia de AAT neonatal

Cirrosis Biliar Primaria Colangitis Esclerosante Primaria

Conductos biliares Intrahepticos

N Lig. Elev.

Elev.

N Lig. Elev.

Obstruccin Completa

Conductos biliares Extrahepticos

Elev. *

Elev. +

Elev. +

Cncer pancretico Piedras en el conducto biliar.

ALT: Alanina aminotransferasa; ALP: Fosfatasa alcalina; Bili: Bilirrubina; NPT: Nutricin parenteral total; AAT: 1-antitripsina. * Puede aumentar transitoriamente al comenzar la obstruccin. + Aumenta gradualmente con la obstruccin y es normal al principio de la misma.

Distincin entre Dao Heptico y Colestasis

CARACTER DAO HEPATOCELULAR
> 10 x LSR en la mayora de las formas, persiste durante semanas. < 3 x LSR en la mayora de las formas

COLESTASIS
Aumento transitorio > 10 x LSR en la obstruccin completa, disminuye rpidamente > 3 x LSR en la mayora de las formas, normal en la obstruccin temprana

ALT ALP

GGT
BILI TP Anlisis de Imgenes

Normalmente < 5 x LSR

50 % a 80% de reaccin directa Normal o ligeramente elevada en la mayora de las formas Conducto s normales

Normalmente > 5 x LSR, puede ser menor en la obstruccin temprana

50 % a 80% de reaccin directa Normal en la mayora de las formas; puede aumentar en la obstruccin prolongada Conductos anormales en la obstruccin completa

LSR: Lmites superiores de referencia

5 NUCLEOTIDASA (EC 3.1.3.5) 5 ribonucleosido fosfohidrolasa o NTP

5 NUCLEOTIDASA

Es una fosfatasa especfica con un peso molecular de aproximadamente 70 kDa. Acta nicamente sobre nucletidos (ATP Y GTP). Implicada en la produccin de adenosina extracelular, la absorcin de nutrientes y la proliferacin celular. Ampliamente distribuida en el cuerpo (SNC, testculos, pulmn, aorta, hipfisis), unida a membranas celulares (como la ALP, GGT). La 5 NT de plasma deriva principalmente del hgado.

5 NUCLEOTIDASA

IMPORTANCIA CLNICA
Un aumento de la 5 NT en suero puede ser debido a causas Extrahepticas (clculos o tumores ocluyendo el conducto biliar) o Intrahepticas (Colestasis, cirrosis biliar, infiltracin neoplasia del hgado). Contribuye a diferenciar el Incremento de fosfatasas a nivel Heptico, Intestinal u seo. 5 NT no esta comprometida en el metabolismo seo ni en el de la mucosa intestinal. En enfermedades del sistema hepatobiliar la actividad de la 5 NT aumenta paralelamente a la ALP.

La 5 NT cataliza la desfosforilacin de AMP

(adenosina 5 monofosfato) Mxima actividad de 5 NT a pH: 7.5 (alcalino) A este pH el AMP tambin es hidrolizado inespecficamente por las fosfatasas alcalinas AMP + H2O
Ni 2+ Ni 2+ Ni 2+ 5 nucleotidasa ( y ALP)

Adenosina + Pi
P

inhibicion competitiva 5 nucleotidasa

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA 5 NUCLEOTIDASA

Mtodo Enzimtico Cintico de Puntos Mltiples
AMP + H2O Adenosina + Pi
5 nucleotidasa ADA

Adenosina + Pi Iosina + Amonio

GLDH

Amonio + 2-oxoglutarato + NADH

Glutamato + NAD

La velocidad de formacin de NAD, el cual produce disminucin de la absorbancia a 340 nm, es directamente proporcional a la velocidad de formacin de adenosina y por lo tanto de la actividad de la 5-Nucleotidasa.

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA 5 NUCLEOTIDASA

5-NT produce la hidrlisis de adenosin 5-monofosfato (AMP) formando adenosina y fosfato inorgnico (Pi) La adenosin desaminasa (ADA) desamina la adenosina, produciendo inosina y in amonio (NH4+)
En una reaccin acoplada catalizada por L-glutamato deshidrogenasa (GLDH), el amonio reacciona con 2oxoglurato en presencia de Nicotinamida-adeninadinucletido reducido (NADH)

para formar glutamato y NAD.

Causas de resultados anormales

Como ocurra con la GGT, la 5-NT normalmente se utiliza para determinar si los niveles de ALP tiene origen heptico u seo. Los niveles elevados de 5-NT se deben a trastornos colestsicos; sin embargo, la hepatitis aguda produce un ligero incremento. La 5-NT presenta niveles altos en el carcinoma ovrico y en la artritis reumatoide. La mayora de los agentes quelantes (como el EDTA), inhiben la actividad enzimtica.

FOSFATASA ALCALINA (EC 3.1.3.1)

FOSFATASA ALCALINA (ALP)

La ALP representa a una familia de enzimas codificadas por diferentes genes. Las formas mas abundante de ALP estn codificadas por un nico gen en el cromosoma 1; produce la isoenzimas no especifica de tejido que se encuentra en rin, hgado y hueso. Dos genes del cromosoma 2 codifican la ALP de origen placentario e intestinal; otro la isoenzima denominada de clulas germinales o semejante a la placentaria (placental-like).

FOSFATASA ALCALINA (ALP)

En las clulas la ALP se encuentra fundamentalmente unida a membranas. Los hepatocitos producen ALP heptica, unida a la superficie canalicular. Los osteoblastos producen ALP de hueso, implicada en la escisin del pirofosfato, un inhibidor de la mineralizacin sea. Las clulas del epitelio intestinal producen ALP intestinal, se libera al intestino despus de la ingestin de comidas grasas.

FOSFATASA ALCALINA (ALP)

IMPORTANCIA CLINICA - Diferentes mecanismos de liberacin de ALP desde las clulas (distintas formas de ALP plasmtica). - Se observa en suero una forma de ALP heptica; cuando existe dao hepatobiliar se pueden observar tanto el producto normal como la forma unida a membrana. - La vida media de las isoenzimas de ALP vara unas de otras, conocer los niveles aumentados para evaluar la tasa de eliminacin: intestino, minutos; hueso,

un da; hgado, tres das; placenta, siete das.

La variacin diaria de ALP total oscila entre el 5% 10%.

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA ALCALINA

Mtodo de Referencia: Bowers yMcComb Punto Final Colorimtrico
p-nitrofenilo + H2O p-NFp
ALP

p-Nitrofenol + HPO42- + 2H+

ALP p-Nfenol Mg ++ pH: 10.2 (alcalino)

La ALP hidroliza el p-NFp para formar el cromgeno amarillo p-Nfenol. El incremento en la absorbancia a 415nm es proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina.

Causas de resultados anormales

Son las enfermedades del Hgado y Hueso. Los trastornos que causan Colestasis producen elevacin de ALP con mayor frecuencia que los trastornos Hepatocelulares. La actividad osteoblstica aumentada (enfermedad de Paget, osteosarcoma, tumores metastsicos y enfermedades metablicas de hueso) incrementa la isoenzima de hueso. Aumento de la ALP intestinal son normales en pacientes con diabetes, fallo renal y cirrosis.

PERFIL PANCREATICO