Evaluasi aktivitas hepatoprotektif dari standar etanol ekstrak Curcuma xanthorrhiza Roxb.

Hati memainkan sebuah array menakjubkan fungsi vital dalam pemeliharaan dan kinerja tubuh. beberapa fungsi-fungsi utama meliputi karbohidrat, protein, dan lemak metabolisme, detoksifikasi dan sekresi empedu. Hari ini, dengan penggunaan luas hepatotoxicants di harian rutin hidup, telah menjadi keharusan untuk menjaga manusia populasi yang mendiami kemiskinan terhadap penyakit hati karena hati adalah mamalia sensitif toksisitas yang sangat organ dan bertanggung jawab untuk metabolisme obat (Eaton et al. 1995). Penyalahgunaan alkohol adalah salah satu masalah kesehatan utama di seluruh dunia. Penelitian ilmiah dalam pengobatan herbal dengan aktivitas hepatoprotektif dapat menjadi manfaat besar sebagai terapi alternatif pada penyakit hati yang diinduksi alkohol. Curcuma xantorrhiza adalah anggota dari keluarga jahe (Zingiberaceae) yang merupakan tanaman asli Indonesia. hal ini dikenal sebagai 'Temu Lawak' di Malaysia (Sears, 2005). C. xantorrhiza adalah tanaman yang tumbuh rendah dengan root (rimpang) yang mirip dengan jahe dengan aromatik, bau menyengat dan pahit rasa. Besar daun dan rimpang outsized dari nabati mengandung herbal kualitas berbagai (Sears, 2005). di Asia Tenggara, secara tradisional digunakan untuk berbagai penyakit termasuk hepatitis, keluhan hati, dan diabetes, rematik, kanker, hipertensi dan gangguan jantung. Anti-hepatotoksik efek C. xantorrhiza sudah lama telah dicatat di Asia, dan mulai diakui di Barat. Hal ini dikenal sebagai hepatoprotektif masyarakat Indonesia, dan digunakan khususnya dalam hal Hepatitis. Efektivitas C. xanthorrhiza dalam menurunkan tingkat enzim serum alanine aminotransferase (SGPT), aspartat aminotransferase (SGOT) dan yglutamate transferase menunjukkan hepatoprotection dari tanaman ini terhadap hepatotoksisitas yang diinduksi cisplastin (Seong et al., 2004). Ia juga memiliki fungsi mencegah hati adiposa (degenerasi lemak hati) yang dapat menyebabkan kerusakan fungsi yang tidak dapat diubah, dan menyebabkan kematian yang tak terelakkan. Hal ini sering dikaitkan dengan konsumsi alkohol tinggi. Namun, hanya beberapa studi telah dilakukan selama ini pada efek hepatoprotektif dari tanaman tertentu. Sebagian besar penelitian telah difokuskan pada yang lain farmakologis sifat ini xanthorrhiza C. seperti kegiatannya sebagai antibakteri dan antivirus (Hwang dan Shim, 2000). Selain itu, sampai saat ini, tidak ada kerja telah dilakukan di C. xanthorrhiza menggunakan etanol sebagai hepatotoxicant tersebut. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui

hepatoprotektif aktivitas C. xanthorrhiza terhadap etanol hepatotoksisitas yang diinduksi pada tikus. BAHAN DAN METODE Tanaman bahan identifikasi C. xanthorrhiza tanaman diperoleh dari Perkebunan Johor, Malaysia. Sebuah spesimen voucher (11.022) telah dikonfirmasi dan disimpan di Unit Herbarium dari Sekolah Biologi Sciences, Universiti Sains Malaysia. Persiapan ekstrak Bagian rimpang C. xanthorrhiza dibeli dalam bentuk bubuk bentuk dari Pilot Plant Teknik Kimia (CEPP), UTM, Skudai, Johor, Malaysia. Bahan kasar bubuk (800 g) dimaserasi dengan 8 liter etanol absolut selama 72 jam dengan sesekali gemetar. Maserasi diulang tiga kali. Ekstrak itu disaring dan dipekatkan pada tekanan berkurang pada rotavapor sehingga massa berwarna gelap kuning (menghasilkan 5,2%). eksperimental hewan Pria Sprague Dawley-tikus (180-200 g) diperoleh dari Animal House, Universiti Sains Malaysia. Hewan-hewan itu diaklimatisasi dengan kondisi laboratorium selama tujuh hari sebelum percobaan. Enam tikus ditempatkan per polikarbonat kandang, dengan akses bebas ke makanan (normal laboratorium chow, Gold Coin) dan tekan air ad libitum. Hewan-hewan itu dipelihara pada suhu kamar bawah siklus terang / gelap dari 12 jam. Semua percobaan dilakukan antara jam 9.00 pagi sampai 2:00 untuk mencegah konfrontasi dengan ritme sirkadian. Eksperimental protokol dan prosedur digunakan dalam penelitian ini telah disetujui oleh Etika Hewan Komite dari University Sains Malaysia dengan referensi jumlah USM/PPSF/50 (054) Versi 2. Standardisasi ekstrak etanol C. xanthorrhiza Standarisasi C. xanthorrhiza etanol ekstrak dilakukan berdasarkan metode divalidasi dijelaskan oleh Devaraj et al. (2010). hepatoprotektif aktivitas studi desain Setelah satu minggu aklimatisasi, hewan dibagi menjadi tiga kelompok dari enam tikus (n = 6) di masing-masing. Grup A dan B diberikan dengan cosolvent 5 ml / kg (p.o.). Grup C diberi 500 mg / kg standar C. xanthorrhiza Ekstrak etanol (po). Kendaraan atau ekstrak diberikan secara oral selama 7 hari. Dengan mengacu pada relatedliteratures mengenai dosis hewan (Zeng et al, 2008.; Zhao et al, 2008;.. Khanal et al, 2009), etanol 50% 12 ml / kg adalah diberikan secara oral untuk kelompok B dan C pada 2 jam setelah administrasi kendaraan dan ekstrak, masing-masing selama 7 hari berturut-turut. Biokimia parameter pemeriksaan Enam jam setelah pengobatan alkohol terakhir, sampel darah yang dikumpulkan dari semua kelompok melalui tusukan jantung. Setelah semalam puasa (minimal 16 jam), semua tikus dibius secara singkat oleh dietil

eter inhalasi. Penarikan darah dilakukan melalui jantung tusuk dengan menggunakan jarum (ukuran 0,50 x 16 mm, Terumo). Darah sampel yang diperoleh dibiarkan menggumpal pada suhu kamar selama 60 menit. Kemudian, darah beku disentrifugasi pada 3.000 rpm selama 15 menit untuk memperoleh serum darah dan dianalisa untuk berbagai biokimia parameter. Semua pengujian biokimia serum dilakukan di Lam Wah Ee Hospital, Penang, Malaysia menggunakan Roche (Integra700 ) mesin (Orhan et al., 2003). Histopatologi pengamatan Segera setelah kurban tikus, hati telah dihapus dan tetap di 4% formalin. Setelah pengolahan, jaringan tertanam dalam lilin parafin dengan Pusat Sejarah-II-N (Barnstead / Thermolyne, Iowa, USA) dan ketebalan potong menjadi 4-5 pM menggunakan mikrotom. Bagian-bagian diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H dan E) untuk pengamatan mikroskopis, yang meliputi perubahan lemak, hepatosit disarrangements dan gejala nekrosis. Analisis statistik Analisis statistik dilakukan dengan one-way ANOVA diikuti oleh beberapa tes Dunett itu perbandingan dalam versi SigmaStat 3,5 Perangkat lunak. Hasil dinyatakan sebagai nilai mean SEM menunjukkan perbedaan dalam kelompok. Perbedaan tersebut dianggap signifikan bila p <0,05. HASIL Standardisasi ekstrak etanol C. xanthorrhiza Xanthorrhizol diidentifikasi dan diukur pada 9,58 min retensi waktu. 0,1238 mg xanthorrhizol dihitung dalam 1 mg ekstrak etanol C. xanthorrhiza (Devaraj et al, 2010.). Biokimia analisis Berdasarkan hasil pada Gambar 1, tikus diobati dengan 5 g / kg etanol memiliki elevasi yang signifikan dari ALT, AST, ALP dan tingkat protein total dibandingkan dengan kelompok-kelompok pretreated dengan standar ekstrak etanol C. xanthorrhiza. Pengobatan standar C. xanthorrhiza etanol ekstrak selama 7 hari berturut-turut telah menyediakan signifikan (P <0,05) perlindungan ke hati, mencegah kenaikan dari hati enzim kegiatan.

Histopatologi pengamatan Para histologis fitur dari hati yang normal sebagai 2a Gambar menunjukkan lobular arsitektur hati yang normal dan sel struktur, hepatosit masing-masing memiliki inti yang jelas bulat. Mayoritas hepatosit memiliki inti tunggal tapi binucleates sel juga umum. Retikuler ini Serat (RF) di sekitar Vein Tengah (CV) membentuk sebagian besar jaringan ikat penyangga hati. Dalam jaringan hati normal, serat retikuler terlihat jelas sekitar CV. Tidak ada perubahan patologis pada sehat kontrol hati. Dalam etanol yang diobati kelompok, retikuler yang serat menjadi lebih tipis sekitar CV dibandingkan ke bagian hati cedera indikasi hati yang normal sebagai dalam Gambar 2b (i). Gambar 2b (ii) menunjukkan dengan jelas macrovesicular yang steatosis terkait dengan balon hepatosit dan badan Mallory mengakibatkan kerusakan hati. Peningkatan ukuran sel-sel Kupffer yang muncul jelas dalam lumen sinusoid juga dapat dilihat pada Gambar (B) ii. Hepatosit yang menyimpang dan lapisan sel dapat terdefinisi diamati pada kelompok alkohol diperlakukan juga. Itu perubahan histopatologi yang disebabkan oleh alkohol adalah secara signifikan ditingkatkan dengan 500 mg / kg C. standar xanthorrhiza etanol ekstrak, menunjukkan hepatosit yang lebih rendah balon seperti pada Gambar 2c dibandingkan dengan alkohol diperlakukan kelompok. Bagian hati ditampilkan pemulihan hepatosit ke dalam bentuk polyhedral normal dengan beberapa sel hampir mirip dengan kelompok hati yang sehat lapisan. PEMBAHASAN Alkohol diakui menjadi penyebab kerusakan hati oleh orang-orang Yunani kuno, dan saat ini merupakan yang paling umum menyebabkan penyakit hati selain parasetamol. Besarnya dan berbagai kesehatan dan sosial ekonomi masalah yang timbul dari penyalahgunaan alkohol sangat besar (Lelbach, 1975). Di sini, "alkohol" merujuk secara eksklusif untuk etanol, sekarang alkohol hanya tersedia secara komersial minuman beralkohol. Metabolisme alkohol mengambil menempatkan sepenuhnya di hati, yang berisi berbagai tinggi afinitas enzim sistem seperti alkohol dehidrogenase (ADH) yang mampu mengoksidasi alkohol (Caballeria et al, 1987.). ADH mengkatalisis oksidasi alkohol untuk asetaldehida, mentransfer hidrogen untuk kofaktor tersebut, nikotinamida adenin dinukleotida (NAD), yang diubah ke bentuk direduksi, NADH. Kenaikan dalam rasio NADH / NAD, yang kemudian meningkat oksidasi asetaldehida, bertanggung jawab untuk sebagian besar metabolik ketidakseimbangan yang terjadi alkohol berikut konsumsi dan memainkan peran utama dalam patogenesis awal alkohol-induced penyakit hati berlemak (Vallee dan Bazzone, 1983). Selain itu, metabolisme

alkohol juga menginduksi berpotensi merugikan "Hipermetabolik negara", dan menyebabkan generasi racun radikal bebas yang mampu merusak membran sel, protein dan asam nukleat (Israel et al, 1975;. Palang et al, 1987.). Alkohol-induced cedera hati akut memiliki signifikan mengangkat transaminase serum dan aktivitas ALP. Hasil pada Gambar 1 telah menunjukkan kemungkinan yang menjanjikan bahwa C. xanthorrhiza standar ekstrak etanol memiliki menunjukkan aktivitas hepatoprotektif mengikuti signifikan penurunan transaminase serum dan activeties ALP. Aminotransferases adalah kelompok enzim yang mengkatalisis pemindahan reversible gugus asam amino dari alfa-asam amino menjadi asam okso (James et al., 2003). ALT enzim atau dikenal sebagai transaminase alanin berlimpah dalam sitosol sel parenkim hati (Okuda, 1997). Sedangkan aspartat transaminase (AST) ditemukan dalam sitosol

dan mitokondria dari hepatosit. Hal ini juga didistribusikan di otot jantung, otot rangka, pankreas dan ginjal (Shyamal et al., 2006). Oleh karena itu, ALT pengukuran lebih spesifik untuk menentukan kerusakan hati hepato (Shyamal et al., 2006). Namun, AST masih digunakan di laboratorium sebagai parameter untuk menilai kerusakan hati karena dianggap sebagai indikator yang sensitif dari mitokondria merusak khusus di wilayah centrilobular hati (Pantheghini, 1990). Alkaline fosfatase (ALP) adalah enzim dalam lapisan-lapisan sel dari saluran-saluran empedu dari hati. Itu mampu hidrolisis ester fosfat pada pH alkali dan sering digunakan sebagai penanda untuk disfungsi hati kolestasis (Gaw et al., 1998). Peningkatan tingkat enzim adalah penting indikator kebocoran seluler dan hilangnya fungsional integritas membran sel di hati (Ryan dkk., 1990). Peningkatan enzim ALT dalam etanol yang diinduksi toksisitas hati ini disebabkan oleh hilangnya integritas struktural dari hati (Chenoweth dan semacam ikan, 1962). Karena enzim ini adalah terletak di sitoplasma, maka akan dilepaskan ke dalam darah sirkulasi setelah kerusakan sel sehingga elevasi (Sallie et al., 1991). Peningkatan enzim AST menunjukkan bahwa konsumsi alkohol pada tikus menyebabkan kedua membran plasma dan organel membran (mitokondria) kerusakan (CONDA de la Rosa dkk., 2008). Peningkatan ALP tingkat enzim dapat berhubungan dengan kerusakan saluran empedu atau choleostasis yang akan tumpah keluar ALP ke dalam aliran darah menunjukkan alkohol-akibat kerusakan hati (Nyblom et al. 2004). Ketinggian enzim serum juga memberikan naik ke tingkat total protein. Oleh karena itu, pengurangan tingkat ini enzim pada kelompok perlakuan menunjukkan stabilisasi membran plasma dan perbaikan hati jaringan. Manfaat ekstrak etanol C. xanthorrhiza memiliki telah dikonfirmasi lebih lanjut oleh pengamatan histopatologi. Ia mapan bahwa overdosis etanol menyebabkan penyusutan dari serat retikuler centrilobular, macrovesicular steatosis dengan balon dari sel hati (fatty liver) dan pembentukan badan Mallory (Bujando et al., 2006). Itu penampilan klasik macrovesicular steatosis adalah sebuah tunggal tetesan lemak besar menggusur inti terjadi terutama di hepatosit perivenular (macrovesicular steatosis). Sangat jarang, steatosis adalah panacinar dan mungkin terkait dengan kolestasis berat, cholangiolitis, dan klinis presentasi dengan gagal hati (Morgan et al., 1978). Perubahan lemak ditandai dengan akumulasi trigliserida dalam hepatosit (Salaspuro et al., 1981). Tiga utama mekanisme yang mungkin memainkan peran dalam pengembangan beralkohol lemak hati yang meningkat pasokan substrat untuk asam lemak

esterifikasi stimulasi, langsung dari jalur esterifikasi dan penurunan ekspor dari hati trigliserida sebagai Sangat-Low-density lipoproteins (VLDL) (Salaspuro et al. 1981). Efek ini telah berkurang secara signifikan dengan pretreatment dari standar C. xanthorrhiza etanol ekstrak. Peradangan macrovesicular ditimbulkan oleh etanol sangat berkurang ekstrak berikut pretreatment. Kemungkinan steatosis (fatty liver) dan hati sel standar C. xanthorrhiza etanol ekstrak ekstrak percepatan pemulihan sel hati itu dibuktikan dengan pengamatan histopatologi, yang menunjukkan perlindungan terhadap kerapuhan membran, sehingga mengurangi kebocoran enzim penanda ke dalam sirkulasi.