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Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb.

Bibiana Duarte Restrepo

ESTUDIO Y DESCRIPCIN DE LAS BACTERIAS Y HONGOS COMUNES DE ESTUDIO EN EL LABORATORIO Y MUESTRAS DE ORIGEN AMBIENTAL.
La descripcin de la morfologa y conformacin tanto microscpica como macroscpica de los aislamientos y cepas de estudio, es un primer paso en el estudio y caracterizacin de los microrganismos, conducente a su clasificacin y profundizacin en sus fisiologa y propiedades susceptibles de ser valoradas o aplicadas en diferentes casos. A continuacin vamos a describir algunas pautas para este estudio: 1. Descripcin Macroscpica de las Colonias Se puede realizar a simple vista, como tambin utilizando una lupa o un estereoscopio. Se debe realizar sobre una superficie de color blanco y pareja, con luz suficiente. Se anota todas las caractersticas relevantes y particulares: color, forma, elevacin, bordes, dimetro de la colonia, textura, presencia de mucosidad, manchas o puntos, olor ?, iridiscencia, presencia de pigmentos difundidos en el medio. Algunas formas caractersticas de las colonias tanto bacterianas, de levaduras y hongos: Figura No. 1. Elementos morfolgicos utilizados para la descripcin de colonias: forma, elevacin y mrgenes

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo 1.1. Descripcin de la morfologa de las colonias de Bacterias y Levaduras. Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin de una Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio slido; aunque vara de tamao generalmente es visible a simple vista. Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien un grupo de microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que tienen tendencia a permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos. Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos color caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie bacteriana que la forme. Debido a que las caractersticas de las colonias ocurren en varios grados y combinaciones dependiendo de las bacterias y son a menudo muy uniformes, sirven para identificar bacterias en cultivos mezclados. Sin embargo, adems de stas caractersticas es necesario estudiar su morfologa microscpica, fisiologa, propiedades inmunolgicas y hasta conformacin gentica, para lograr una clasificacin adecuada y precisa de las cepas aisladas. En el caso de la consistencia mucosa de algunas colonias esta se deriva de la sustancia capsular en aquellas bacterias con cpsula muy grande. Medida o dimetro de las colonias. sta caracterstica es bastante constante dentro de las especies y puede ir desde colonias muy diminutas hasta un dimetro de varios milmetros. Forma. Est determinada por su borde y su espesor (Ver Figura No. 1) se pueden observar varias formas, elevaciones y bordes de colonias bacterianas. Consistencia y textura. Las colonias bacterianas pueden tener una consistencia variable, desde seca y frgil a grasienta y cremosa o viscosa y pegajosa. Esta caracterstica slo se aprecia cuando tocamos las colonias con el asa de siembra. Podremos observar colonias "duras" que se deslizan fcilmente por la superficie del medio, siendo difcil manipularlas con el asa. A menudo estas colonias se fragmentan al intentar cogerlas. Otras colonias tienen apariencia cremosa, con superficie brillante generalmente y fciles de manipular con el asa. La mayora de las colonias tienes consistencia mantecosa, siendo muy fcil obtener pequeas porciones de la misma, que quedan bien adheridas al asa de siembra. En algunas ocasiones las colonias son extremadamente viscosas y tienden a formar filamentos mucosos cuando intentamos retirarlas con el asa. La superficie puede ser uniforme y lisa, rugosa o estriada con muescas concntricas o quebradas. Al examinar la colonia con luz transmitida puede aparecer con textura granular o amorfa. Pigmentacin. Esta caracterstica es muy comn en las bacterias saprfitas en las que las colonias aparecen rojas, anaranjadas, amarillas, etc. Se especifica si el pigmento producido es difusible o no. Luz Transmitida: Al observar a travs de la colonia, se determina si es Opaca (no permite el paso de luz), Traslcida (deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo objetos observados a travs de la colonia o Transparente (deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos observados a travs de la colonia. Luz Reflejada: Al observar la superficie de la colonia se determina si es opaca o brillante De los microorganismos patgenos uno de los pigmentados ms importantes es Staphylococcus aureus que tiene un color amarillo dorado. El pigmento no se aprecia en las clulas individuales a que se debe a grnulos intracelulares muy pequeos para verse con luz transmitida. Para optimizar espacio, materiales y tiempo, se puede tambin realizar ciertas observaciones y determinativas con las cepas ya aisladas transferidas a medios de cultivos en tubos lquidos y solidos/semi-solidos. Figura No. 2. Observacin de crecimiento en Tubos con Agar inclinado

Ramificado

Puntiforme

Puntiaguda

Uniforme

Rizoide

Extendido

Figura No.3. Tipos de crecimiento en tubos con medio lquido

Sin crecimiento

Turbio

Floculacin

Pelcula

Anillo

Precipitaci n

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Figura No.4. Tipos de motilidad en medio semi-solido

No motil

Motilidad leve

Motil

A menos que se tenga un cultivo fresco de 24 hrs directo de la incubadora, no se ver muchos tubos con turbidez. Esto es porque las bacterias tienden a depositarse o a precipitarse cuando se refrigeran por varios das. Despus de fijarse si se form un anillo o una pelcula en la superficie del tubo, tomar los tubos y observar si se presenta el fenmeno de precipitacin. Una vez que se complet este paso, mezclar las bacterias agitando, dando pequeos golpes, rodando el tubo en la palma de la mano. No agitar el tubo de manera que la tapa se contamine con el caldo. Una vez mezclado, se puede observar turbidez, floculacin, o una apariencia de hilo dentro del caldo. 1.2. Morfologa microscpica de las Bacterias. Las diferencias en el tamao, forma y ciertos detalles estructurales son caractersticas de los principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su estudio sistemtico e identificacin. De la misma forma, las colonias bacterianas, compuestas por masas de clulas individuales, tienen caractersticas de tamao, consistencia, textura y color que poseen un valor sistemtico, pero no tienen la importancia fundamental de la morfologa celular. Tamao de las clulas bacterianas. El tamao de las clulas bacterianas se mide habitualmente en micrmetros(equivalente a una millonsima parte de un metro), oscilando entre los 1 x 10 m de los bacilos grandes como Bacillus anthracis, y los 0,2 x 0,7 m de Francisella tularensis. Existen ligeras variaciones de tamao de las clulas bacterianas dentro de algunas especies, siendo mayores las fluctuaciones entre las formas bacilares que entre las formas esfricas. Los lmites de tamao entre las clulas bacterianas y los virus no tienen una frontera bien definida, pues curiosamente existen virus mas grandes que ciertas bacterias. Formas de las bacterias. Desde el punto de vista microscpico, la diferencia mas importante entre las bacterias es su forma, existiendo tres tipos morfolgicos claramente distinguibles: Formas esfricas o cocos: Las bacterias esfricas son las mas homogneas con respecto al tamao, presentando un dimetro medio de 0,6 a 1,0 m. La forma no siempre es exactamente esfrica, observndose como las ms comunes las siguientes variaciones: Formas lanceoladas, formas en grano de caf y formas cocobacilares (achatadas)

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Las diferencias entre los subtipos de cocos se basan en los agrupamientos celulares. Estos aparecen como consecuencia de dos factores: el plano o planos de divisin celular y la tendencia de las clulas hijas a permanecer unidas entre si, una vez que se completa la divisin. Los cocos que se separan completamente despus de la divisin aparecen individualmente, y a esta forma se le llama coco. Cuando hay una ligera tendencia a que las clulas hijas permanezcan unidas y la divisin celular ocurre en un solo plano, los cocos se agrupan predominantemente en pares, llamados diplococos. Si la unin es mas marcada, se ven largas cadenas de cuatro cocos o ms; estos agrupamientos se conocen como estreptococos. Cuando los cocos se dividen en varios planos, y hay una elevada tendencia a que permanezcan unidos, aparecen racimos irregulares de cocos, semejantes a racimos de uvas; estos agrupamientos se denominan estafilococos. Formas alargadas o bacilos. Las formas alargadas o bacilares agrupan una gran cantidad de subtipos morfolgicos. Las diferencias en anchura, longitud y forma de los extremos de la clula proporcionan una considerable heterogeneidad a la forma bacilar. En funcin de la tendencia de las celulas hijas a permanecer unidas, los bacilos presentan tambin agrupaciones celulares caractersticas, citando como ejemplo las formas en empalizada ( ///// ) o en V ( <<< ) o en letras chinas. Aunque son hasta cierto punto caractersticos, los agrupamientos de clulas bacilares no tienen la misma importancia morfolgica que el agrupamiento de cocos. Figura No. 5. Formas y arreglos microscpicos de las Bacterias

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Formas curvadas, comas o espirilos: El tercer tipo morfolgico es la forma espirilar, que puede considerarse como un bacilo que se ha torcido adoptando la forma de hlice. Aunque la curvatura se observa ocasionalmente en muchas formas bacilares, en el genero Vibrio es suficientemente constante como para tener importancia diferencial. Los vibrios pueden presentar una forma espirilar si las clulas permanecen unidas por sus extremos. Las verdaderas bacterias espirilares pueden ser de dos tipos: con espira rgida o con espiral flexible. Al conjunto de las formas espirilares flexibles se le conoce como espiroquetas. La clasificacin y diferenciacin de las espiroquetas patgenas se basa en criterios morfolgicos tales como la longitud de vuelta, el ngulo en los extremos de la clula, la presencia de una envuelta externa y la composicin del filamento axial.

1.3. Descripcin de la morfologa de colonia en los hongos: Se realiza observando tanto en el anverso como el reverso, se describe la textura la define la altura del micelio areo y se describe como: algodonosa, granular o polvosa, afelpada y glabrosa. Textura algodonosa: Se caracteriza por un micelio areo denso y muy alto, con aspecto de algodn. Textura granular o polvorosa: con facilidad se desmenuzan por la excesiva produccin de conidias. Con frecuencia estos dos trminos se intercambian, sin embargo la textura granular es ms rugosa semejante al azcar granulado, mientras que la polvosa parece harina. Textura afelpada: Produce micelio areo bajo, con aspecto de felpa o terciopelo. Textura glabrosa o cerosa: No producen micelio areo, por lo tanto tienen una superficie pareja. Generalmente se presentan en las colonias de levaduras. La topografa describe las desigualdades presentes en la superficie de la colonia, se observa generalmente por el reverso de la caja, debido a que usualmente el micelio encubre esta caracterstica. Se describe como verrucosa o cerebriforme, rugosa y lisa. Topografa rugosa: tiene pliegues irregulares que irradian el centro de cultivo. Topografa verrucosa o cerebriforme: Posee una superficie delgada que semeja un cerebro. Topografa lisa: No posee irregularidades en su superficie.

1.4. Morfologa microscpica de Hongos y Levaduras: Poseen pared celular contiene quitina un polisacrido que le da rigidez y es responsable de su morfologa y en ocasiones celulosa. Algunos hongos presentan cpsula, formada por polisacridos, con propiedades inmungenas y antifagocitarias. La estructura o cuerpo vegetativo de un hongo se denomina talo. El talo esta formado por filamentos, o hifas, de unas 5 m de dimetro, que generalmente estn ramificadas.

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Las hifas son tubos largos que estn formadas por la pared celular de quitina (componente mayoritario) y el citoplasma con sus inclusiones y ncleos con la informacin gentica. Las hifas pueden estar separadas en clulas por paredes transversales (septos) en los hongos superiores (Eumicetos), o carecer de paredes en los hongos inferiores (Ficomicetos). El conjunto de hifas se llama micelio. En el micelio se distinguen dos partes: una que penetra en el medio de cultivo y se extiende por su superficie (micelio vegetativo), y otra que se proyecta y contiene las esporas (micelio reproductor o areo). Los hongos crecen por el extremo de las hifas (crecimiento apical). Una pequea cantidad de micelio es suficiente para la formacin de un nuevo talo. Las esporas son estructuras unicelulares de resistencia que contienen toda la informacin gentica necesaria para el desarrollo completo de un nuevo hongo. La estructura del hongo que produce las esporas asexuales se denomina conidifora. Se forman por estrangulamiento del extremo de las hifas. Los conidiforos son hifas especializadas que presentan gran diversidad de forma, color, tamao, tipo de septacin, etc. Dichas estructuras formadoras de esporas tienen gran importancia en la determinacin taxonmica de los hongos. Las agrupaciones de esporas que all se forman se denominan conidios. Otros tipos de estructuras formadoras de esporas son los Esporangios, Clamidosporas, etc. Figura No. 6. Principales caractersticas de los hongos verdaderos o Eumycetes

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Las Levaduras son hongos que crecen generalmente por gemacin, en forma de agregados sueltos de clulas independientes, que pueden ser globosas, ovoides, cilndricas o alargadas. En algunos casos, forman cadenas de clulas alargadas (pseudohifas8), adheridas de modo suelto (blastospora), semejantes a un micelio, por lo que se les denomina pseudomicelio. Algunas especies forman breves extensiones de verdadero micelio, con frecuencia septado (tabicado). Hay especies de levaduras esporgenas. No existe, por tanto, un lmite de separacin definido entre levaduras y otros hongos que forman un micelio tpico. Algunos hongos patgenos para el hombre presentan dimorfismo, pueden existir en la naturaleza en forma de levadura (forma parasitaria) o en forma filamentosa (forma saprfita). Las levaduras, cuando crecen sobre medios slidos, forman colonias de aspecto caracterstico que recuerdan a las colonias bacterianas. En casi todas las especies de inters industrial, el modo habitual de reproduccin vegetativa es por gemacin. A diferencia de los mohos, las levaduras no pueden identificarse solamente por sus caracteres morfolgicos; se precisa la ayuda de pruebas bioqumicas para la identificacin especfica. Figura No. 7. Morfologa microscpica de las Levaduras

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Figura No. 8. Morfologa microscpica de los Hongos ms comunes

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Tabla Descripcin Morfologa Bacterias Origen de la muestra:

Fecha de aislamiento: Fecha de descripcin: Cdigo: Morfologa Macroscpica En caja de Petri Medio:_________________ Descripcin Forma:

Elevacin:

Margen:

Dimetro:

Consistencia/textura:

Superficie:

Pigmentacin:

Otras caractersticas

En Tubo

Medio:_________________

En Agar inclinado:

En medio liquido:

En medio semi-solido (motilidad):

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Morfologa Microscpica __X Descripcin Forma:

Arreglo:

Color sin tincin:

Gram:

Otras observaciones

Tincin empleada: Generalidades encontradas en literatura:

Posible grupo/genero o Nombre cientfico (si ya esta clasificada):

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Tabla Descripcin Morfologa Hongos Origen de la muestra:

Fecha de aislamiento:

Cdigo: Morfologa Macroscpica En caja de Petri Medio:_________________ Descripcin Forma:

Elevacin:

Margen:

Dimetro:

Textura:

Topografa:

Pigmentacin:

Otras caractersticas

En Tubo Medio:_________________

En Agar inclinado:

Diversidad Microbiana, elementos descriptivos y estudio Microbiologa Departamento de Biologa - FACENED Mb. Bibiana Duarte Restrepo Morfologa Microscpica __X Descripcin Tipo de hifa:

Tipo de conidias/esporas

Otras observaciones

Tincin empleada:

Generalidades encontradas en literatura:

Posible grupo/genero o Nombre cientfico (si ya esta clasificada):