MADURACIN DE LOS LINFOCITOS T

Reorganizacin secuencial y la expresin de los genes del RLT.

Proliferacin celular. Seleccin inducida por el antgeno. Adquisicin de capacidades funcionales.

 Refirindonos a los linfocitos con receptores de tipo a b, podemos hacer un avance resumido de estos procesos de maduracin y activacin: Maduracin: la enorme diversidad antignica potencial se reduce a un 2% durante la maduracin intratmica de los timocitos: slo llegan a madurar aquellas clulas restringidas a reconocer lo no-propio en el contexto del haplotipo MHC propio (autorrestriccin y autotolerancia). Las fases finales de la maduracin ocurren por dos rutas de desarrollo diferentes que generan dos subpoblaciones: linfocitos CD4+(restringidos por MHC-II) y linfocitos CD8+ (restringidos por MHC-I).

 Activacin: La activacin de clulas T maduras perifricas se inicia con la interaccin entre el TCR y un pptido antignico enclavado en la hendidura del MHC. La baja afinidad (10-5M) de esta interaccin ternaria se ve potenciada por la presencia de correceptores y otras molculas de membrana, que funcionan para fortalecer la interaccin ternaria TCR-pptido-MHC, y para transducir la seal activadora al interior de la clula T. Ello desencadena la proliferacin clonal y diferenciacin en dos subpoblaciones, una de T efectoras y otra de T de memoria.

QUIMIOCINA RECEPTORES DE QUIMIOCINA

MADURACIN DE LAS CLULAS T El estroma tmico surge al inicio del desarrollo embrionario a partir de capas ectodrmicas y endodrmicas de la tercera bolsa farngea y de la tercera hendidura branquial. Estas dos estructuras se invaginan, y se cierran, y las dos capas quedan superpuestas, de modo que la ectodrmica rodea a la endodrmica, formando el llamado rudimento tmico. La capa ectodrmica formar los tejidos epiteliales corticales del timo; La capa endodrmica formar los tejidos epiteliales medulares.

Al nacer, los humanos tienen ya plenamente desarrollado el timo. En su corteza encontramos slo timocitos en fases tempranas de su maduracin, junto con algunos macrfagos, dentro del estroma cortical a base de clulas corticales epiteliales. En la mdula encontramos timocitos en fases ms avanzadas de maduracin con clulas dendrticas y macrfagos, todos inmersos en un estroma medular a base de clulas epiteliales medulares.

H. PEPTIDICAS: timulina, timosina a1, factor humoral tmico, timopoyetina.

Rutas de desarrollo en el linaje de las clulas T El primer marcador de superficie en aparecer CD2, ya no se pierde (por lo tanto, se trata de un marcador que caracteriza al linaje de T). Estas celulas CD4- CD8- (dobles negativas) pueden escoger dos vas alternativas:

En una de las dos rutas, las clulas hacen reordenaciones productivas de gamma y delta y expresan CD3 en su membrana. Suponen slo <1% de los timocitos. Son las primeras en aparecer: se detectan al b, pero desaparecen al nacimiento.
La mayora escoge la siguiente va alternativa:

 da 16: se reordenan genes de cadenas beta. Si no se logran reordenaciones productivas, entran en apoptosis. Si la reordenacin es productiva, la cadena beta se asocia con la llamada cadena a sustitutiva (una especie de "pseudo-a", o cadena a de pre-T, que se abrevia pTa), generando el receptor pTa:b(junto con CD3). Este receptor induce la proliferacin celular y la coexpresin de CD4 y CD8: de este modo aparecen los timocitos grandes doble positivos. El receptor pTa:b tambin induce la reordenacin de genes de cadenas alfa.

 Da 17: CD4+ CD8+ TCR-2+ (a b) CD3+. Se trata de los pequeos timocitos dobles positivos, que dejan de dividirse. Estas clulas ya provistas del complejo receptor especfico van a ser sometidas, hasta la poca del nacimiento (en que alcanzan sus mximos niveles), a seleccin positiva y negativa: seleccin positiva: sobreviven clulas con TCR capaces de reconocer MHC-I o MHC-II de clulas epiteliales del timo. Se garantiza la restriccin por propio haplotipo de las clulas T. seleccin negativa: clulas que han pasado seleccin positiva mueren por apoptosis las que posean TCR que reconozcan con alta afinidad pptidos propios enclavados en el MHC o MHC propio solo. Ello tiende a garantizar la propiedad de autotolerancia por eliminacin de los linfocitos T autorreactivos.

 Los timocitos dobles positivos que superan la doble seleccin tmica se desarrollan en una de dos posibles rutas alternativas: CD4+ CD8- TCR-2+ CD3+ (representan el 10% de timocitos) CD8+ CD4- TCR-2+ CD3+ (un 5% de los timocitos) adicionalmente, y quiz procedente de los anteriores, al 5 da del nacimiento se detecta una tercera subpoblacin de CD4- CD8- TCR+ CD3+. abandonan el timo como linfocitos T maduros (inmunocompetentes) vrgenes, circulan por la periferia, pudindose establecer en rganos linfoides secundarios (ganglios) y recirculando continuamente entre sangre y linfa, a la espera de encontrar su antgeno; si no lo encuentra, muere al cabo de unas 5 a 7 semanas.

Localizacin intratmica de las diversas fases madurativas: Linf T doble negativos se localizan en la zona subcapsular de la corteza. Linf T pequeos dobles positivos se localizan en la corteza. Los timocitos maduros CD4+ y CD8+ se ubican en la mdula. En la corteza, las clulas epiteliales corticales establecen contactos por sus largos procesos de membrana con los timocitos.

 Seleccin tmica positiva y negativa Las clulas del estroma tmico: clulas epiteliales tmicas, macrfagos y clulas dendrticas cumplen rol importante; ellas expresan en sus membranas grandes niveles de molculas MHC-I y/o MHC-II. Los timocitos inmaduros dobles positivos (CD4+ CD8+ TCR+ CD3+) interaccionan, con estas clulas estromales, lo que conduce a la seleccin positiva y negativa. En la seleccin positiva se da interaccin de los timocitos con clulas epiteliales corticales del timo (estan provistas de largos procesos de membrana y permiten contactos simultneos con varios timocitos). Se sugiere que la interaccin de los timocitos inmaduros dobles positivos con dichas clulas epiteliales por medio del TCR restringido por MHC podra conllevar algn tipo de seal protectora que libra a estos timocitos de la muerte celular programada

 Algunos timocitos que sobreviven a la seleccin positiva llevan TCR de baja afinidad hacia auto-pptidos presentados por MHC, y otros llevan TCR con alta afinidad hacia autopptidos presentados por ese MHC: estos ltimos sufren seleccin negativa, que ocurre en la zona de transicin cortico-medular y en la mdula tmica, y en la que las clulas dendrticas y los macrfagos interaccionan con los timocitos portadores de TCR de alta afinidad hacia {autopptidos-MHC} o hacia MHC solo.

ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS T COADYUVANTES La activacin y expansin clonal de TH es el acontecimiento central en la produccin de las respuestas inmunes especficas (tanto la humoral como la celular). Se trata de un proceso complejo que en los ltimos aos est siendo paulatinamente desentraado.

los linfocitos T vrgenes son clulas en reposo que se encuentran "aparcadas" en la fase G0 del ciclo celular
La activacin se inicia cuando el linfocito TH interacciona, a travs de su complejo TCR-CD3, con el antgeno peptdico (exgeno) -procedente de procesamiento endosmicoenclavado en el surco de MHC-II de una clula presentadora.

 Esta interaccin inicial una compleja cascada de acontecimientos bioqumicos, en la que son esenciales actividades quinasas y fosfatasas, y que culminan con la activacin y expresin de diversos genes, entre los que se cuentan el de la IL-2 y el de su receptor. IL-2 por parte de los linfocitos TH hace salir de la fase G0 y entren y progresen en el ciclo celular: ello provoca la proliferacin y diferenciacin de la clula T en dos subpoblaciones: una de clulas efectoras (las T coadyuvantes o colaboradoras) y las TH de memoria. Se requieren, adems seales coestimulatorias. Deben suministrarse al tiempo en que se est produciendo la interaccin especfica TCR-pptido-MHC, se induce un estado de incapacidad de respuesta inmune que se denomina anergia, que se manifiesta en tolerancia inmunolgica hacia el estmulo antignico

La seal coestimulatoria Adems de las seales suministradas a partir del contacto entre el complejo TCR-CD3 con el pptido-MHC, la activacin del linfocito TH requiere una seal adicional, denominada coestimulatoria, que puede consistir en alguna de las siguientes: la citoquina IL-1, suministrada por la clula presentadora de antgeno (APC), la citoquina IL-6, de la APC, pero la seal ms potente es la que supone el contacto entre la molcula B7 (=CD80) de la clula presentadora y la CD28 o la CTLA-4 del linfocito TH.

 B7

(=CD80) consta de dos cadenas idnticas con dos dominios de tipo Ig. Se expresa exclusivamente en clulas presentadoras de antgeno capaces de estimular a linfocitos T. Presenta dos versiones de estructura parecidas, B7.1 y B7.2. La CD28 es una glucoprotena homodimrica, monmero 44 kDa, en linfocitos TH en reposo. Cada cadena presenta un dominio de tipo V-Ig, y est muy glucosilada. Tiene afinidad baja hacia la B7. La CTLA-4 codificada por un gen cercano al de la CD28, presentando ambas grandes homologas. CTLA-4 slo se expresa en linfocitos TH activados, siendo su afinidad muy alta hacia la molcula B7. Interviene en interacciones entre TH y B. La interaccin entre CD28 y B7 ejerce un efecto sinrgico sobre la seal transmitida desde el complejo TCR-CD3, de modo que aumenta la produccin de IL-2 y la proliferacin de linfocitos T coadyuvantes.

Activacin gnica Tras la interaccin del linfocito TH con el pptido enclavado en el surco de MHC-II de una clula presentadora de antgeno, se pone en marcha unas rutas que conducen a la activacin de una serie de genes. Los genes que se activan se pueden clasificar segn el momento relativo de su expresin, en tres categoras: Genes de expresin inmediata (una media hora). Estos genes no se activan, sino sus productos ya preformados. Genes de expresin temprana (1 a 2 horas): codifican las citoquinas IL-2 (as como el gen de su receptor IL-2R), IL-3, IL6 e interfern gamma (IFN-g ). Genes de expresin tarda (hasta 2 das o ms): codifican ciertas molculas de adhesin intercelular. La expansin clonal de los linfocitos TH, necesita un incremento en la expresin del gen de la interleuquina 2 (IL-2) y de su receptor (IL-2R)

Diferenciacin de linfocitos T hacia T cooperadores (Th) o reguladores/supresores (Treg) Linfocito T Th1 Linfocito T Clula presentadora Linfocito T CD4+ nave (APC) Th17

Linfocito T Th2

citoquinas

Linfocito T Treg

No recibe seal coestimuladora de la APC

Linfocito T anrgico

Diferenciacin de linfocitos T hacia T cooperadores (Th) o reguladores/supresores (Treg) IFNg, TNFa IL-2 (IgG1) Linfocito T Clula presentadora IL-17 CD4+ nave (APC)

IL-13, IL-4 (IgE)

citoquinas

No recibe seal coestimuladora de la APC

IL-10, TGF-b1 (IgG4, IgA) No produce citoquinas, no prolifera

Desequilibrios en la proporcin de subpoblaciones T se asocian a inmunodeficiencias, alergias, o autoinmunidad

Normal Inmunodeficiencia Alergia Autoinmunidad

Linfocito T Th1 Linfocito T Th2 Linfocito T Treg Linfocito T anrgico

Linfocitos T efectores Unas 48 horas despus de su activacin, la clula T se convierte en blasto (aumenta su tamao) y comienza a proliferar en el ganglio linftico, diferencindose en 5-7 das en una subpoblacin de clulas efectoras especializadas y otra subpoblacin de T de memoria. Las clulas T efectoras pueden ser de tres tipos funcionales diferentes: TC: T matadoras (citotxicas), fenotpicamente CD8+. TH1: T inflamatorias, activa a macrfagos. fenotpicamente CD4+. TH2: T colaboradoras o coadyuvantes, especializadas en secretar ciertas citoquinas esenciales en activacin de clulas B y T. Suelen ser CD4+.

Linfocitos T de memoria Los T de memoria es subpoblacion diferenciada a partir de la proliferacin de T vrgenes y T efectores durante una respuesta primaria. Permanecen en reposo (fase G0) (hasta 30 aos o ms), como una subpoblacin expandida, una vez que ha declinado la subpoblacin "hermana" de clulas T efectoras. Preparadas para respuesta ms rpida e intensa cuando se vuelvan a encontrar con el antgeno (en la respuesta secundaria). Poseen menores requerimientos para ser activadas. Poseen el mismo tipo de molculas de membrana que los T efectores correspondientes. Los T de memoria y los T efectores son difciles de distinguir entre s, los primeros estn en fase G 0 y tardan ms tiempo en responder que los T armados.

 Igual que los T vrgenes recirculan continuamente entre la sangre y la linfa, como carecen de L-selectina y presentar otras molculas de adhesin, su patrn de recirculacin es distinto: no se unen a las vnulas de endotelio alto (HEV) de los ganglios. Tienden al tejido terciario (no linfoide), incluyendo la lmina propia del intestino, superficies epiteliales de pulmones, de piel, etc. En general tienden a emigrar al tejido en el que las clulas T progenitoras fueron estimuladas durante la respuesta primaria. Esto es un valor adaptativo.

TCR-1 (gamma/delta): no requiere MHC clsico, y no participan CD4 ni CD8. Estos LT que se diferencian en la mdula sea y/o en el timo, van a recubrir las superficies epiteliales, aunque tambin se encuentran en sangre y ganglios linfticos. Son LT con actividad citoltica constitutiva, lo cual puede ser una primera lnea de defensa contra microorganismos al destruir clulas infectadas. El reconocimiento de del Ag es por interaccin protena/protena previo procesamiento del antgeno.. Al activarse, pueden adquirir CD8 alfa/beta. Constituyen del 5 al 10% de los T perifricos, y del 1 al 3% de los residentes en ganglios y otros rganos linfoides. Sin embargo, son muy abundantes en la piel, y los epitelios intestinal y pulmonar.