ESTRUCTURA
MORFOLOGA
SOSTEN
ORGANELAS
MOVIMIENTO
Estructura:
Estables Dinmicas Organizacin y ubicacin de organelas
Morfologa:
Esfrica Cbica Bicncava Ahusada Estrellada Con microvellosidades Con axn Con flagelo Con cilias
MOVIMIENTOS CELULARES
Desplazamiento:
Diapdesis Migracin Contraccin muscular
Modificaciones morfolgicas:
Extensin de axones Proyecciones citoplasmticas Constriccin citoplasmtica (citocinesis)
Movimientos internos:
Transporte de vesculas con membranas Separacin de cromosomas (segregacin) Corrientes citoslicas
CITOESQUELETO
Red de filamentos de protenas que se extiende por todo el citoplasma
Tritn X-100
MET: orgnulos y citoesqueleto
CITOESQUELETO
MICROFILAMENTOS: filamentos de actina, 6-8 nm (delgados y flexibles). REDES Y HACES Estructuras: Estables: Microvellosidades haces contrctiles (sarcmera) Transitorias: protrusiones anillo contrctil Funciones: anclaje soporte motilidad: migracin, fagocitosis, contraccin muscular divisin celular (citocinesis).
Si a filamentos de actina se le unen las cabezas de filamentos S1 HMM de miosina, se unen con una orientacin definida en punta de flecha hacia el extremo (-) o barbado hacia el (+).
ACTINA: protena abundante (5-10%) en clulas de mamferos. En musculares y neuronas hasta 20%. En humano, seis isoformas, codificadas por genes diferentes, que se pueden diferenciar por inmunohistoqumica en diferentes tipos celulares. Protena conservada evolutivamente. 4 -actina: en clulas musculares, se asocia con estructuras contrctiles -actina: en filamentos de fibras de estrs -actina: en borde de proyecciones de clulas en movimiento
Adicin reversible de monmeros: aunque ATP no es necesario para polimerizacin, la velocidad depende de unin del monmero a un nucletido trifosfato (ATP) que aumenta su afinidad. La hidrlisis a ADP genera un cambio conformacional que facilita la despolimerizacin de la actina F. Existe una concentracin de monmeros crtica para este intercambio.
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ACTINA
ATP
Concentracin crtica
A partir de Cc, se inicia la formacin de filamentos. A esta Cc los monmeros y filamentos estn en equilibrio.
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Regulacin del ensamblaje y desensamblaje por protenas de unin a la actina: Formina: inicio, nucleacin y elongacin en el sentido de polimeracin rpida
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Regulacin del ensamblaje y desensamblaje por protenas de unin a la actina: Formina: inicio, nucleacin y elongacin en el sentido de polimeracin rpida Cofilina: a monmeros actina-ADP (extremo -). Incrementa velocidad de disociacin. Permanece unida evitando reensamblaje. Profilina: favorece intercambio de ADP por ATP. Favorece incorporacin de Actina-ATP en extremo +. Arp2/3: sitios de nucleacin. Inicio de ensamblaje de nuevos filamentos. Ramificaciones. Estas proteinas son reguladas por vas de sealizacin celular, por lo que el ensamblaje y desensamblaje de microfilamentos de actina responde a estmulos externos.
Twinfilina
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Drogas o frmacos que afectan la despolimerizacin: faloidinas (veneno fngico): se unen a lo largo de los microfilamentos y evita despolimerizacin. Se emplea como marcador fluorescente la polimerizacin: citocalasina (alcaloide fngico): se une al extremo (+), bloquea agregado pero no despolimerizacin e interfiere en locomocin, contraccin muscular, citocinesis o endocitosis.
Faloidina
Citocalasina
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ORGANIZACIN DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA HACES: filamentos paralelos REDES: filamentos que se entrecruzan Todas las protenas de unin a la actina tienen por lo menos dos dominios de unin a la actina (ABD), lo que les permite fijar y entrecruzar dos filamentos diferentes Las secuencias espaciadoras entre los dominios de unin a la actina, varan en longitud y flexibilidad, son responsables de las distintas propiedades de entrecruzamiento
ENTRAMADOS: sol-gel citoplasma: coloide lquido viscoso (sol) redes tridimensionales densas propiedades de un slido (gel)
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Transiciones sol- gel en corteza citoplasmtica rpida reorganizacin de filamentos de actina despolimerizan u orientan en filamentos paralelos
citoplasma: coloide lquido viscoso (sol) redes tridimensionales densas propiedades de un slido (gel) Estos cambios pueden ser activados por molculas que se unen a receptores de la MP u otros estmulos como el fro (plaquetas sanguneas congelarse forma estrellada las incapacita funcionalmente)
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Protenas de unin formadoras de haces de actina Pequeas, rgidas. Fuerzan a los filamentos a asociarse en paralelo
Haces paralelos estrechamente empaquetados (14 nm) Fimbrina: monmero, contiene dos dominios de unin a la actina (ABD) adyacentes. Villina: slo en microvellosidades intestinales y de tbulos renales
Haces contrctiles: paralelos espaciados (40 nm), capaces de contraerse (anillo citocinesis) -actinina: dmero. Cada subunidad contiene un solo ABD y cuatro dominios espaciadores en hlice repetidos
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Protenas de unin formadoras de redes Largas y flexibles. Filamina: dmero flexible en forma de V. Entrelaza filamentos en redes ortogonales. Cada subunidad posee un ABD N-terminal y un dominio de dimerizacin C-terminal separados por dominios espaciadores en lmina repetidos. Forman mallas tridimensionales holgadas subyacentes a la MP.
Forman estructuras planas rodeadas de MP. Dan la forma celular. Ej: eritrocitos
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Filamina conecta red tridimensional de filamentos de actina con protenas del cogulo
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Espectrina se asocia con filamentos cortos de actina (red actina-espectrina) en eritrocitos. Anquirina: protena nexo entre espectrina y protena tansmembrana Banda 3 Protena 4.1: protena que se fija en uniones de espectrina con actina y al dominio citoslico de la protena transmembrana Glicoforina
Espectrina: protena de unin a actina. Tetrmero: 2 cadenas y 2 . Cadena : un solo ABD en N-terminal, mltiples -hlices repetidas, igual que cadena , la que posee un dominio de fijacin al Ca++ en su C-terminal
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PROYECCIONES O PROTUBERANCIAS DE LA SUPERFICIE CELULAR Aumentan superficie celular. Cubiertas por MP. Visibles al MET y SEM.
Microvellosidades: prolongaciones citoplasmticas digitiformes Abundantes en parte apical de epitelio intestinal (borde en cepillo). Aumentan superficie absorcin Estereocilios: microvellosidades auditivas especializadas en la deteccin de vibraciones sonoras Funciones: movimiento celular, fagocitosis, absorcin Estabilidad: permanentes o transitorias Estructura: haces o redes de filamentos de actina
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Haces de filamentos de actina centrales Fimbrina y villina (especial en clulas intestinales y renales) Unidos a MP por brazos laterales de : calmodulina (fijadora de calcio) y miosina I (implicada en movimiento de microvellocidad) Anclados por su base (extremo -) a la red terminal (rica en espectrina) Extremo + inmersos en cpsula de protenas desconocidas
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REGIONES ESPECIALIZADAS TRANSITORIAS EN LA MP Contactos de los filamentos de actina con clulas adyacentes, MEC y otros sustratos (placas de cultivo)
Fibroblastos en cultivo: segregan protenas de la MEC que se adhieren a la superficie plstica de la placa
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PAPEL DEL LAS VIAS DE TRANSDUCCION DE SEALES EN LA LOCOMOCION DE LA CELULA Y ORGANIZACION DEL CITOESQUELETO
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ARRASTRE CELULAR sobre una superficie: forma bsica de locomocin celular Movimiento de amebas Invasin de glbulos blancos a los tejidos (infeccin) Migracin de clulas involucradas en la cicatrizacin Metstasis: propagacin de clulas cancerosas malignas Fagocitosis Extensin de neuronas durante desarrollo embrionario
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Arrastre celular: ciclo coordinado 1) Extensin de borde delantero (pseudpodos, lamelipodios, filopodios) polimerizacin y entrelazado de filamentos de actina 2) Sujecin de la zona anterior al sustrato 3) Disociacin del sustrato y retraccin del borde posterior hacia el cuerpo celular miosina II
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1. Por polimerizacin y entrelazado de filamentos de actina. Citocalasina: bloquea formacin de protuberancias celulares. Arp 2/3: ramificaciones. Reciclaje (cofilina) de filamentos de actina conduce a la formacin de lamelipodios y filopodios en borde delantero. Miosinas no convencionales: extensin de pseudpodos en Dictyosdtelium y filopodios en neuronas. 2. En clulas de movimientos lentos (fibroblastos): contactos focales. En las rpidas contactos difusos an desconocidos 3. Poco comprendido. Se supone participacin de miosina II que generara fuerza contrctil en crtex para retraccin
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Integrinas: protenas transmembranas heterodmeras que conectan MEC con protenas de unin a la actina Talina (se une a integrina) y Vinculina (se une a actina)
FIBRONECTINA
Fibroblastos sobre placa de cultivo
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FILAMENTOS DE ACTINA ASOCIADOS A MIOSINA Involucrados en movimientos celulares: desplazamiento por arrastre, citocinesis, contraccin muscular
Miosina: protenas motoras mecanoqumicas, convierte energa qumica (ATP) en mecnica (fuerza y movimiento) Cadenas pesadas: cabeza globular (ATPasa),cuello y cola. Cadenas livianas (reguladoras) II y V: dmeros, secuencias -hlice de colas forman bastn enrollado Se conocen 14 tipos de miosina (I a XIV). Con 1 2 cabezas globulares. En general sus funciones no estn bien determinadas.
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CONTRACCIN MUSCULAR EN EL MSCULO ESQUELTICO O ESTRIADO Msculo esqueltico: voluntario. Haces de fibras musculares (fusin, multinucleadas) Miofibrillas: filamentos gruesos (miosina II) y delgados (actina)
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PAPEL DEL Calcio EN LA CONTRACCION MUSCULAR La recaptacin de los Ca++ produce la relajacin muscular
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ASOCIACIONES CONTRACTILES DE ACTINA- MIOSINA EN CELULAS NO-MUSCULARES Y EN MUSCULO LISO Regulada por la fosforilacin de la cadena ligera reguladora de la miosina II Aumento Ca++ citoslico Unin de Ca++ a calmodulina Ca++-calmodulina activa a Kinasa de la cadena ligera reguladora de la miosina (MLCK) Este complejo fosforila a cadena ligera reguladora de miosina II y la activa
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Ensamblaje de miosina en filamentos Filamentos polares de miosina se unen a actina Deslizamiento de filamentos de actina en direcciones opuestas
En estas clulas tropomiosina compite con filamina por sitios activos
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Citocinesis: divisin de clula en dos al final mitosis. Anillo contrctil Deslizamiento de filamentos de actina sobre miosina II Grosor de anillo constante: desensamblaje de filamento de actina Al final disgregacin total de anillo
Inicio mitosis: MPF fosforina sitio inhibidor de cadena ligera de miosina II e inhibe formacin de anillo. Anafase: fosfatasas constitutivas desfosforilan cadena ligera de miosina II y se forma anillo contrctil. Telofase: una cinasa especfica fosforila el sitio activador de la cadena ligera de la miosina y favorece cierre de anillo y su despolimerizacin. 39
MIOSINAS NO CONVENCIONALES No forman filamentos (como en msculo) No participan en la contraccin Implicadas en: Transporte de vesculas de membrana y orgnulos Fagocitosis Extensin de pseudpodos En microvellosidades: movimiento de MP a lo largo de haces de actina (hacia extremo+)
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Miosina I: 1 cabeza globular (motor molecular), cola corta. No dimeriza Colas pueden unirse a otras estructuras El movimiento de miosina I a lo largo de un filamento de actina puede transportar lo que lleve unido
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FILAMENTOS INTERMEDIOS:
10 nm (entre actina 7 y microtbulos 25) En clulas animales, no en plantas ni hongos. Funciones: mecnicas, soportan grandes tensiones sin romperse. Forman estructuras fuertes, estables (no se encuentran en equilibrio dinmico), insolubles, resistentes a los cambios de temperatura y dispuestas en densas redes tridimensionales.
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Filamentos intermedios:
diversas protenas que se expresan en distintos tipos celulares. Mas de 50 protenas, asociadas en 6 grupos segn su funcin y similitud en sus secuencias de aminocidos
queratinas duras: pelos, uas, cuernos y lana queratinas blandas: en citoplasma de clulas epiteliales (citoqueratinas)
Grupo III Vimentina: en leucocitos, fibroblastos,clulas endoteliales Desmina: une discos Z Periferina: neuronas perifricas
Grupo IV Neurofilamentos (NF). Determinan el dimetro de un axn, por ende la velocidad de conduccin .
Heteropolmeros de NF-L, NF-M, NF-H
-internexina:
se expresa previamente a los neurofilamentos en axones motores. Sostn de largas prolongaciones (h.1 m)
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Diagnstico oncolgico: el patrn de distribucin de los filamentos intermedios de la clula originaria del tumor se conserva. En general en la composicin molecular de los filamentos intermedios existen pares caractersticos de citoqueratinas para algunos tipos celulares . Esto suele ser de mucha utilidad en el momento de investigar el origen de un tumor maligno
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Queratina y vimentina alrededor envoltura nuclear: posicionar y anclar ncleo Inmunoperoxidasa Coloracin de contraste: hematoxilina (ncleos)
Por su distribucin especfica en los tejidos, la caracterizacin del tipo de FI sirve para caracterizar el origen de un tumor y por ende su tratamiento. 45
Protenas de filamentos intermedios: secuencias diversas , sin embargo poseen organizacin estructural comn: Dominio -hlice central (310-350 aa) Dominio N-terminal globular Dominio C-terminal
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Ensamblaje de los filamentos intermedios Polipptidos paralelos se enrollan por sus dominios centrales: dmeros Dmeros se asocian antiparalelos de forma escalonada: tetrmeros Tetrmeros se asocian cabeza-cola: protofilamento Protofilamentos se asocian (8) lateralmente: filamentos Son apolares
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Laminas nucleares: estructura de envoltura nuclear. Punto de anclaje de la cromatina. Forman malla ortogonal
Laminas A, B (B1 y B2) y C. Laminas A y C originadas por mismo pre-RNAm por empalme alternativo Lamina B codificada por otro transcripto especfico. Postranscripcional se le adosa un cido graso (isoprenilo en el extremo C-terminal) que se incorpora a la membrana nuclear interna, con lo que sujeta la lamina nuclear
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Filamentos de queratina anclados a MP en reas de contacto a travs de (PAFI) protenas adaptadoras Desmosomas: clula-clula (placa densa, desmoplaquina-cadherinas (desmoglena y desmocolina))
Placofilina Placoglobina
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BP160 BP230
alfa
beta
LAMININA
Lmina basal epitelios
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Fibronectina 55
Estudios in vivo: Ratones transgnicos: con gen de queratina mutado. La descendencia con gen mutado alter citoesqueleto de modo que la mnima tensin mecnica (frotar) produjo la lisis de las clulas epiteliales con la generacin de ampollas
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Epidermolisis bulbosa (ampollar) simple (EBS): mismos sntomas. Se demostr que se debe a mutaciones del gen de queratina.
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Enfermedades del sistema nervioso Esclerosis lateral amiotrfica (ELA): fsico Stephen Howking Perdida progresiva de neuronas motoras: atrofia muscular, parlisis, muerte. Se sugiere la participacin de los neurofilamentos en esta patologa
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MICROTBULOS
Movimientos de cilios y flagelos Transporte de vesculas de membranas Alineacin y separacin de cromosomas Migracin de axones Organizacin de la clula Polaridad de la clula
Polimerizacin y despolimerizacin Efecto de protenas motoras Ambos procesos Guiando cono de crecimiento COMT COMT
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Dmero de tubulina
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Extremo (crecimiento lento) corresponde a -tubulina (GTP) Extremo + (crecimiento rpido) corresponde a -tubulina (GTP GDP) Definen direccin de movimiento desplazamiento de molculas y Calentamiento en presencia de GTP orgnulos
Ciclos de ensamblaje-desensamblaje de microtbulos Depende de temperatura y GTP A 4C se despolimerizan en dmeros de -tubulina A 37C +GTP se polimerizan y forman microtbulos
Intercambio rotatorio Molculas unidas a GDP se liberan continuamente de extremo Molculas unidas a GTP se adicionan continuamente a extremo + Dmeros de tubulina se asocian longitudinalmente: protofilamentos Interacciones laterales entre protofilamentos: hoja o cilindro 62
ENSAMBLAJE Y DESARMADO DE LOS MICROTBULOS INESTABILIDAD DINMICA Microtbulos individuales alternan ciclos de crecimiento y acortamiento Depende de concentracin crtica de GTP--tubulina Altas concentraciones: se aaden mas rpido que hidrlisis de GTP Crecimiento de extremo + Bajas concentraciones: hidrlisis de GTP mas rpida que adicin Desensamblaje, acortamiento de extremo Renovacin continua y rpida de microtbulos: importante en procesos como mitosis
Estructura plana
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Microtbulos Estables: cilios, flagelos, axones Inestables: huso mittico Capaces de generar fuerzas de propulsin sin doblarse Microtbulo simple: 13 protofilamentos Microtbulo doble: 13+10 protofilamentos (cilios y flagelos) Microtbulo triple: 13+10+10 protofilamentos (cuerpos basales, centrolos)
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El espacio entre microtbulos depende de la longitud de dominio de proyeccin de las protenas asociadas
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Taxol: estabiliza microtbulos Inhibe ensamblaje Bloquea divisin celular Anticancergeno y experimental
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MICROTUBULOS, PROTEINAS MOTORAS Y MOVIMIENTOS CELULARES -Transporte intracelular y posicionamiento de vesculas y orgnulos con membrana -Segregacin y distribucin de cromosomas (mitosis) -Movimiento de cilias y flagelos Protenas motoras: generan energa mecnica (fuerza y movimento) a partir de hidrlisis de ATP Prototipo de protenas motoras de los microtbulos Familias de CINESINAS (QUINESINAS) y DINENAS, pertenecen a familias de protenas motoras relacionadas a MT.
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Cinesina: dmero de 2 cadenas pesadas, cada una unida a una cadena ligera Cadena pesada: 1 cabeza globular (N-terminal), dominio motor que se une a microtbulo y ATP (estructura similar a la de miosina) y cadena -hlice que se enrolla con la otra cadena Cadena ligera: unida a dominio C-terminal de cadena pesada. Esta regin se une a otros componentes celulares para su transporte. Responsable del tipo de estructura que se transporta (de a + ) Procesividad: propiedad de recorrer un largo tramo de un MT sin desprenderse Citoslicas y mitticas Dinena: Multimricas. 2-3 cadenas pesadas unidas a variables pptidos cortos y medianos. Molcula muy grande (h. 2.000 kDa) Cadena pesada: glogular, dominio motor Porcin basal: unin a estructuras subcelulares. Transporte axnico retrgrado, de vesculas de Golgi (hacia -) Citoslicas y del axonema (cilios y flagelos)
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DINACTINA: complejo proteico que se une a la dinena (sin su presencia la dinena no puede transportar cargas por s sola) La dinactina tambin se une a los microtbulos Complejo dinena-dinactina y el complejo NuMa (protena del aparato nuclear mittico) median la asociacin de los microtbulos con los centrosomas durante mitosis
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Posicionamiento intracelular de: RE, aparato de Golgi, lisosomas y mitocondrias La ubicacin de RE, lisosomas y mitocondrias requiere molculas de la familia de las cinesinas. Dineina en colocacin de aparato de Golgi cerca de centrosoma
(A)
(B)
Antitubulina fluorescente
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Polaridad de MT
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COMT CENTROSOMA Y ORGANIZACIN DE MICROTBULOS INESTABLES Centrosoma: lugar inicio de ensamblaje de microtbulos citoslicos (inestables)
Experimento: fibroblastos de ratn Antitubulina fluorescente Microtbulos durante interfase (A) Incubacin 1 h con colcemida (desensamblaje de microtbulos) Retiro de frmaco Observo a los 30 minutos Microtbulos creciendo desde centrosoma
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Replicacin del centrosoma: inicio en G1. De cada centrilo brota un centrolo hijo. Tambin se replican los otros componentes. En G2 se completa crecimiento de centrolos. Se separan al inicio de la mitosis.
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Microtbulos de interfase
Se disgregan Unidades de tubulina Durante mitosis Reensamblan
Huso mittico
Segregacin cromosomas Inestabilidad dinmica de los microtbulos: durante profase microtbulos de interfase son reemplazados por microtbulos del aparato mittico
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Aparato mittico: mquina de microtbulos para separar los cromosomas Microtbulos cinetocricos Huso mittico Aparato mittico Microtbulos polares (en metafase) Par de steres Microtbulos astrales
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1) Microtbulos cinetocricos: se asocian a cinetocoro por su extremo + y as se estabilizan 2) Microtbulos cromosmicos: unidos a telmeros de cromosomas
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3) Microtbulos polares: emanan de centrosomas y se estabilizan al solaparse uno sobre otro en el centro de la clula
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PROTEINAS MOTORAS DURANTE LA MITOSIS Cinesinas mitticas (CENP-E, BimC, ncd (hacia +). Dinenas: NuMA (asociada a aparato nuclear mittico) y dinena citoslica (hacia -)
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MICROTBULOS ESTABLES CILIOS Y FLAGELOS EN EUCARIOTAS Cilios y flagelos: prolongaciones de la MP. Estructura bsica: axonema (microtbulos y protenas)
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MICROTBULOS ESTABLES DETERMINAN LA POLARIDAD CELULAR Neuronas Dos tipos de proyecciones: dendritas y axones En su estructura poseen: neurofilamentos y microtbulos Axones: extremos (+) de todos los microtbulos hacia la periferia. Protenas tau Dendritas: microtbulos se orientan en ambas direcciones (+ y -). Protenas MAP-2 TODOS los microtbulos nacen en el citoplasma y no en el centrosoma
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ESTRUCTURA DE UN AXONEMA
La marcha de los brazos de la Dinena axonmica que se extienden desde un doblete hacia el extremo (-) del doblete vecino, genera una fuerza de deslizamiento lineal del axonema, el que es restringido por protenas de unin cruzad y se convierte en en curva
9 tripletes
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BIBLIOGRAFIA
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