UNIDAD III INMUNOHEMATOLOGA

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Prof. QFB Jos Alberto Pia Ibarra japina@uas.uasnet.mx http://fcqb.uasnet.mx:8100/~apina Departamento Inmunologa Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas

OBJETIVOS:
Definir lo que se entiende por inmunohematologa, sus aplicaciones en el diagnostico de enfermedades, transfusiones y compatibilidad. - Explicar lo que es el sistema ABO, sus caractersticas principales de grupos y subgrupos. - Explicar como se originan los distintos grupos sanguneos a partir de una sustancia precursora, y la frecuencia de cada uno de ellos. - Definir el termino secretores. - Explicar la importancia y estructura qumica de los principales grupos: A, B, O y Lewis. - Distinguir las diferencias existentes entre anticuerpos naturales e inmunes. - Explicar la accin que tienen las lectinas.
-

- Definir en que consiste cada uno de los grupos siguientes: Duffy, Kell, Lutheran, Kidd y Diego. - Explicar que es el factor Rh: cuales son los antgenos que residen en el, y los problemas que causa. - Explicar que son los anticuerpos anti-Rh, en que casos estn presentes, y como se previene su formacin. - Mencionar en que consiste la eritroblastsis fetal y la anemia hemoltica. - Describir en que consiste las pruebas cruzadas y las pruebas de coombs: directa e indirecta. - Enlistar los requisitos contemplados por la Secretaria de Salud para la realizacin de una transfusin sangunea. - Describir las reacciones post-transfunsionales.

CONTENIDO TEMTICO:
4.1 Definicin 4.2 Sistema ABO 4.2.1 Grupos A, B, AB y O 4.2.2 Subgrupos de A, B y O 4.2.3 Grupo Bombay 4.2.4 Sustancias A, B y H 4.2.5 Secretores 4.3 Grupo Lewis, A y B 4.4 Caractersticas qumicas de los grupos A, B, O y Lewis 4.5 Anticuerpos naturales e inmunes: lectinas 4.6 Otros grupos sanguneos: Duffy, Kell, Lutheran, Kidd y Diego 4.7 Factor Rh 4.8 Isoinmunizacin Materno-Fetal 4.9 Tcnicas para la determinacin de anticuerpos naturales e inmunes 4.9.1 Pruebas Cruzadas 4.9.2 Pruebas de Coombs: Directa e Indirecta

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DEFINICIN DE INMUNOHEMATOLOGIA Es la parte de la hematologa que estudia los procesos inmunitarios que tienen lugar en el organismo en relacin con los elementos sanguneos. Uno de los aspectos ms importantes de la inmunohematologa es el estudio y cuantificacin de los grupos sanguneos eritrocitarios que son componentes antignicos presentes en la superficie de los hemates, ya que se relaciona directamente con la teraputica transfuncional y la prevencin de accidentes hemolticos graves.

DESCUBRIMIENTO DE GRUPOS SANGUNEOS

Globuln! Todas las sangres son iguales?

No!, para entender esto; te contar algo de historia

Karl Landsteiner, investigador, naci en Viena, Austria en 1868, fu quien identific por primera vez los grupos sanguneos, partiendo de la mezcla de sangre de diferentes personas.

l observ que al mezclarse las sangres se produca una formacin de grumos, acumulacin de glbulos rojos, que l denomina aglutinacin. Despus de observar este fenmeno en sucesivas muestras, en 1901 concluy que se trataban de diferentes grupos, a los que llam ABO (grupo AB se descubri posteriormente) y que le valiera ganar el Premio Nobel en Medicina en 1930. Al realizar sus experiencias Landsteiner, dedujo que las combinaciones entre unos grupos y otros se deba a la presencia de una sustancia en la membrana del glbulo rojo denominada antgeno o aglutingeno. Y que la aceptacin o rechazo de una sangre no slo dependa de sta, sino adems de la presencia de protenas en suero denominadas anticuerpos o aglutininas, los que slo se activan ante la protena de un antgeno extrao proveniente de otro tipo de sangre.

Karl Landsteiner (1868-1943)

GRUPOS SANGUNEOS 1901

Qu quiere decir,todo esto?

Ah! No has entendido, eso quiere decir, que existen

Cuatro grupos: Grupo O, Carente de antgenos y con anticuerpos para el grupo A y B; Grupo A, presenta antgeno A y anticuerpo B; el Grupo B, presenta antgeno B y anticuerpo A, mientras que el Grupo AB, surge por una codominancia entre grupo A y grupo B por lo tanto, tiene antgeno A y B y carece de anticuerpos.
karl Landsteiner y los grupos sanguneos. El rincn de la ciencia

GRUPO ABO
Aglutingenos (antgenos de membrana) Aglutininas (anticuerpos contra los antgenos no presentes)
A anti B B anti A 0 anti A, anti B AB ninguno

CLASIFICACIN DE LOS GRUPOS SANGUNEOS ABO

Grupo sanguneo

AB

Glbulos rojos

En la membrana

Antgeno A

Antgeno

Antgenos AyB No anticuerpos

No antgenos

En el plasma

Anti-B

Anti-A

Anti-A y Anti-B

SISTEMA ABO
Este sistema de grupo permite realizar con seguridad las transfusiones sanguneas. Los eptopos implicados aparecen en muchas otras clulas aparte de los eritrocitos, y forma parte de los substituyentes glucdicos de determinadas glucoprotenas.

SISTEMA ABO
Estas molculas se llaman antgenos, porque si se hiciera una transfusin de sangre del grupo A a un receptor del grupo B, se producira un rechazo, ya que para el receptor la sustancia A es extraa, y su sistema inmunolgico la detecta y la intenta eliminar. Las molculas que desencadenan esta respuesta se llaman antgenos.

LOS GRUPOS SANGUNEOS SON ALOGNICOS.

La mayora de los individuos desarrollan anticuerpos frente a los antgenos ABO alognicos aunque no hayan sido expuestos a eritrocitos extraos; esta sensibilidad se debe al contacto con eptopos idnticos que casualmente expresan de forma rutinaria una gran cantidad de microorganismos. Los anticuerpos frente a los antgenos ABO son muy frecuentes, lo que hace especialmente importante la verificacin de los grupos del donante y del receptor antes de llevar a cabo una transfusin sangunea.

HERENCIA DE LOS GRUPOS SANGUNEOS

NO SOLO PODEMOS HEREDAR LOS OJOS

CONTEXTURA FSICA

TAMBIN HEREDAMOS LOS GRUPOS SANGUNEOS

SISTEMA ABO: GENTICA

Los grupos sanguneos son hereditarios, porque su sntesis est dirigida por los genes, concretamente por los que se encuentran en la pareja nmero nueve de nuestros cromosomas. La especie humana tenemos 23 parejas de cromosomas. Los genes responsables de los grupos sanguneos son tres alelos, nombre que reciben los distintos tipos de genes que proceden por mutacin de un primer gen y codifican el mismo carcter.

SISTEMA ABO: GENTICA

Un sistema de grupo sanguneo consiste en un locus gnico que codifica un Ag de la superficie de las clulas sanguneas (generalmente de los eritrocitos). En cada uno de los sistemas puede haber 2 o mas fenotipos. Por ejemplo, en el sistema ABO existen 4 fenotipos ( A, B, AB y O ), por lo tanto son posibles 4 grupos sanguneos. Un individuo con un determinado grupo sanguneo es capaz de reconocer los eritrocitos que posean antgenos del grupo sanguneo alognicos y producir Acs. contra ellos.

SISTEMA ABO: GENTICA

El locus ABO tiene tres alelos, el A, el B, y el 0, y por el hecho de ser diploide todo individuo ser portador de dos alelos. Los genes A y B son codominantes, mientras que el gen 0 es recesivo. Ello hace que existan seis genotipos diferentes pero solo cuatro fenotipos posibles: A, B, AB y 0.

GRUPOS DEL SISTEMA ABO: GENOTIPOS y FENOTIPOS

Grupo sanguneo (fenotipo) A B AB O AA, AO BB, BO AB OO A B AyB H genotipos antgenos anticuerpos sricos frente a ABO anti-B anti-A ninguno anti-A y anti-B

En gentica el trmino gen recesivo es aplicado al miembro de un par allico imposibilitado de manifestarse cuando el alelo dominante est presente. Para que este alelo se observe en el fenotipo, el organismo debe poseer dos copias del mismo, provenientes uno de la madre y otro del padre. Se refiere al alelo que se manifiesta en un fenotipo, si tiene dosis doble, habiendo recibido una copia de cada padre o en dosis simple, en la cual uno solo de los padres aport el alelo dominante .

SISTEMA ABO: GENTICA

Los genes A y B controlan la expresin de las sustancias A y B y el gen 0 se denomina amorfo por no corresponderle ningun antgeno. Sin embargo, los hemates del grupo 0 expresan un antgeno H, que es reconocido por determinados antisueros y lectinas vegetales.

POSIBILIDADES SANGUNEAS
Pueden tener dos personas tipo A un hijo con sangre cero? AO Tipo A AO A O X A AO O A AB B X O O O O

Pueden tener un AB un hijo de sangre O?

Genotipo AA

AO A

AO A

O O O

Genotipo

AO

AO A

Fenotipo A

Fenotipo A

B O B

B O B

Dos personas tipo A pueden tener un 75% de posibilidades de tener un hijo A y 25% de tener un hijo O. Imposible B o AB.

Una persona AB no puede tener un hijo de tipo O Una persona AB con otra O slo pueden tener hijos A B.

POSIBILIDADES SANGUNEAS 2
Pueden tener dos personas tener un hijo con cualquier tipo de sangre? Qu pasa con los RH? (+) Es dominante frente al (-) AO A O X B B O O + +X + +-

Genotipo AB

AO A

B O B

O O O

Genotipo

Fenotipo AB

+ + Fenotipo +

++

++

--

Vemos que hay cualquier posibilidad

Dos personas positivas pueden tener hijo negativo Pueden tener dos negativas tener un hijo positivo?

GENETICA ABO: COMBINACIONES DE LOS GENOTIPOS DE LOS PADRES CON HIJOS DE GENOTIPO POSIBLE.

Herencia del grupo sanguneo del Recin Nacido Sabiendo el grupo sanguneo de los padres, podemos de acuerdo a las leyes clsicas de la gentica, saber las posibilidades del grupo sanguneo del recin nacido.
Madre Padre 0 0 A B AB 0 A A B AB 0 A B B AB 0 AB A B AB
Hijo

0 0A 0B AB 0A AO A , B, AB 0 A, B, AB 0B 0 , A. B, AB B0 A, B AB AB A, B, AB B AB A, B AB

SISTEMA ABH (Sntesis y estructura)

Existen dos tipos posibles de substancias precursoras para los antgenos ABH. Tipo I y II. Ambos constan de azucares idnticos, pero la unin de los azucares terminales difieren en ambos. El precursor de tipo I tiene una galactosa terminal (Gal) unida una N-acetilglucosamina subterminal (GlcNac) por una unin 1,3. Esos mismos azucares se unen mediante un enlace 1,4 en el precursor de tipo II.

Sustancia precursora TIPO I

Gal Glc NA C Gal

Sustancia precursora TIPO II

Gal Glc NA c Gal

Unin 1,3

Unin 1,4

El precursor de tipo I tiene una galactosa terminal (Gal) unida a una N-acetil-glucosamina subterminal (GlcNac) por una unin 1,3.

Los mismos azucares se unen mediante un enlace 1,4 en el precursor de tipo II.

GEN H: SUSTANCIA PRECURSORA

La presencia de los antgenos A, B u O en los hemates depende de la herencia de los genes alelicos, A, B y O. Un gen H situado en un locus separado codifica la sustancia precursora sobre la que actan los productos de los genes A y B.

GEN H: SUSTANCIA PRECURSORA

Las sustancias H, precursora de los antigenos A y B, se forma por adicin de una fucosa (Fuc) a la galactosa terminal (Gal) ya sea en las cadenas de tipo l o en las de tipo ll. Despus de aadirse la fucosa a las cadenas de tipo ll, la estructura que se obtiene se denomina H de tipo ll.

Sustancia H TIPO I

Sustancia H TIPO II

Ga l Fu c

Gl cN Ac

Ga l Unin 1,2

Gal

Gl cN Ac

Ga l

Fu c

1,2 fucosiltransferasa

Gen H

GEN H: SUSTANCIA PRECURSORA

Los antgenos ABH de los hemates derivan de las cadenas de tipo II, mientras que, los antigenos ABH del plasma provienen de los precursores de tipo I y de tipo II.

Gen A B

Enzima 1,3 N-Acetilgalactosaminiltransferasa 1,3 Galactosiltransferasa

Azcar aadido N-Acetilgalactosamina Galactosa

La ESPECIFICIDAD de los antgenos A y/o B esta determinada por la adicin de un monosacrido especfico a la galactosa terminal de la sustancia H. El antgeno A por la adicin de N-acetilgalactosamina.(GlcNAc) El antgeno B por la adicin de la galactosa (Gal).

Las enzimas que aaden los azucares mencionados codificadas por los genes A y B respectivamente.

estn

Antgeno A

Gl cN Ac

Ga l Fu c

Gl cN Ac

Ga l

1,3 N-acetilgalactosaminiltransferasa

Antgeno B

Ga l

Ga l Fu c

Gl cN Ac

Ga l

1,3 galactosiltransferasa

GRUPO BOMBAY
El gen O es un alelo silencioso que no altera la estructura de la sustancia H; por tanto, los individuos del grupo O tienen grandes cantidades de substancias H en sus clulas . Los individuos que no heredan un gen H (genotipo hh) se dice que pertenecen al fenotipo Bombay (Oh). Dichos individuos no producen substancias H y, por tanto, los genes A y B (si los tienen) no pueden expresarse.

Fenotipo Bombay
n

El sustrato H es necesario para unir A o B Alelo h (H-) raro Los individuos hh no producen H Pueden tener genes A o B Tienen transferasa Producen anti-H

n n n n n

FENOTIPO BOMBAY

Sistema ABO se determina por genes alelicos A, B y O. Genes A y B son codominantes Controlan la expresin A y B) y son dominantes respecto a O (no se expresa). Debido a estoGenotipos resultan 6 genotipos por lo tanto 4 posibles fenotipos. Grupo Antgenos Anticuerpos frecuencia
sanguneo fenotipo sericos frente a ABO %

AA, AO

Anti-B

43

BB, BO

Anti-A

AB

AB

AyB

Ninguno

OO

Anti-A y Anti-B

44

DETERMINACION DEL GRUPO SANGUNEO

El grupo sanguneo ABO puede determinarse por dos procedimientos: el grupo hemtico y el grupo srico. Los resultados obtenidos con ambos procedimientos antes deben coincidir y cualquier discrepancia debe ser investigada a fondo y resuelta antes de efectuar la transfusin.

GRUPO HEMATICO:
Para determinar el grupo hemtico del paciente, se enfrentan sus hemates con antisueros especficos: anti-A ( de donantes del grupo B), anti-B (de donantes del grupo A). Con frecuencia se utiliza un tercer antisuero ( el anti-A,B ), como control para el anti-A y anti-B. El anti-A,B aglutina mejor los hemates con subgrupos dbiles de A o B, que los reactivos antiA o anti-B.

Hemates del paciente mas Grupo ABO Anti-A Anti-B Anti-D A B AB O +++ --+++ ----+++ +++ --+++ +++ +++ +++

GRUPO SRICO:
Suero del paciente mas hemates A hemates B

Grupo ABO

A B AB O +

---++++ ---++++

++++ ------+++

El suero del paciente se enfrenta con hemates A y B. La presencia de anti-A y/o anti-B en dicho suero presentara aglutinacin. Ejemplo: un suero del grupo O aglutinara los hemates A y B, ya que contienen ambos anticuerpos anti-A y anti-B.

Sistema ABO: tipificacin

Suero 0 HEMATIES paciente 0 A B AB

Suero A b + +

Suero B a + +

Antic: ab + + +

Prueba inversa Suero (paciente) + Clulas A1, B, 0

ANTICUERPOS ABO
Ahora bien, en el plasma sanguneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podr tener anticuerpos anti-A, pues sto no sera viable (la sangre coagulara). As : los individuos A tendrn anticuerpos anti-B los individuos B tendrn anticuerpos anti-A los individuos AB no tendrn anticuerpos de este tipo los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.

n n n n

ANTICUERPOSDE GRUPOS SANGUINEOS

Presentes en la fraccin globulinica del suero IgG, IgM e IgA IgG, IgM son Ac prcticos de los grupos sanguneos IgA solo existe asociada con los Ac anteriores

ANTICUERPOS NATURALES (ISOANTICUERPOS)

Presentes en al suero sin previa exposicin del Ag eritrocitario Anti-A y Anti-B Individuos normales de para modificar el estilo ( susubttulo del patrn Haga clic entre 3 y 8 meses de edad de avidez aumenta ) Son de tipo IgM (peso molecular elevado) Reaccionan como ANTICUERPOS FROS Aglutinacin de los hemates en medio salino (Ac completos o aglutininas salinas) Gran inters transfusional

ANTICUERPOS NATURALES REGULARES E IRREGULARES

Antigenos (gpo.Sanguineo) A1 A2 B O A1B A2B Anti-A1 (25 %)
Anticuerpos Regulares Irregulares

Anti-B Anti-B Anti A + A1 Anti-A + B Anti-A1 (2 %)

ANTICUERPOS INMUNES Resultado de un estimulo antigenico (estimulo IgM IgG)

Transfusin sangunea o el paso de hematies fetales a la circulacin materna durante el embarazo

Se combinan con el antigeno eritrocitaria a 37 C No aglutinan los hematies en medio salino (incompletos)

Atraviesan libremente la barrera placentaria, pudiendo ser la causa de la Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido

CARACTERISTICA DE LOS ANTICUERPOS NATURALES E INMUNES

Anticuerpos
Naturales Generalmente IgM Inmunes Generalmente IgG Poco importante

Clase de Ig.

Capacidad de Importante aglutinar los hemates en medio salino (NaCl o.15 M) Actividad en suero humano Aumento del titulo con antiglubulinas especificas Temperatura optima de reaccin No aumentada No

Aumentada Si

4 C

37 C No

Fijacin del Si complemento in-vitro Paso a travs de la placenta No

Si

DONADORES y RECEPTORES
Los individuos cuyo fenotipo AB se denominan receptores universales ya que su plasma no contiene anticuerpos anti-A ni anti-B y pueden recibir sangre de cualquier sistema del grupo ABO. Los individuos del grupo O son llamados donadores universales porque sus hemates carecen de antgenos A y B pueden ser trasfundidos a cualquier receptor independientemente de su grupo sanguneo ABO.

En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de s mismo, as que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a cualquier grupo, as que se conoce como "donante universal"
RECEPTOR

grupo A
D O N A N T E

grupo B
NO SI NO SI

grupo AB
SI SI SI SI

grupo O
NO NO NO SI

grupo A grupo B grupo AB grupo O

SI NO NO SI

Grupo ABO del receptor A B A,B O

Donante ABO compatible A,O B,O AB, A, B, O O

GRUPOS SANGUNEOS
Las personas del grupo AB pueden recibir una transfusin de cualquier otro grupo, es decir, es Receptor Universal. En cambio, el grupo O slo puede recibir de su propio grupo, porque no tiene ningn antgeno, y tanto el A como el B son extraos al receptor. Existe, adems, otro antgeno que tambin puede presentar problemas en las transfusiones, se trata del factor Rh., que puede encontrarse en la sangre en cuyo caso es Rh + (positivo) , o no, y pertenecer a los que tienen el Rh- (negativo). Hay igualmente rechazo, si se realiza una transfusin de sangre con Rh + a un receptor Rh-.

SUBGRUPOS A, B Y O
Von Durgern y Hirszfeld en 1910 descubrieron estos subgrupos. Al observar que si al suero del grupo B se adiciona sangre del grupo A, hace perder su poder de aglutinacin y as mismo podia aglutinar otras sangres de los grupo A y AB. As surgieron los subgrupos de estos grupos A1, A2, A1B y A2B.

Haga clic para modificar el Fenotipo A1 A2 estilo de subttulo del patrn Frecuencia 80 % 20 %
Sustancia Precursora H1 H2 H3 H4 H1 H2

SUBGRUPOS ABO
En el grupo sanguneo A se pueden identificar variantes y los subgrupos A1 y A2, que son codificados por alelos diferentes del locus del sistema de grupos sanguneos ABO.

SUBGRUPOS ABO
Las determinaciones de estos subgrupos son un complemento de las investigaciones en inmunohematologa, en la solucin de casos mdico-legales de paternidad dudosa o discutida y es de sumo inters para el estudio de las poblaciones. El Ac anti-A1, presente en un 2 % de individuos A2, y en un 25 % en individuos A2B poca importancia transfusional.

LECTINAS
Sustancias de origen natural (plantas) que tienen actividad aglutinante para los eritrocitos. Las lectinas son comunmente mitgenos. Mitgeno: (fitomitgenos) son sustancias que provocan sntesis del DNA, formacin de blastos y finalmente divisin de los linfocitos. En pocas palabras son estimulantes de los linfocitos B y T. Ejemplos de lectinas: Mitgeno de la fitolaca ( Phytolacca americana ) Lectina del Ulex europaeus Lectina del Dolichus biflorus.

DETERMINACION DE SUBGRUPOS ABO

Los subgrupos de A se determinan con el empleo de las lectinas anti-A1 de Dolichos biflorus y anti-H de Ulex europeaus.

DETERMINACION DE SUBGRUPOS ABO

Se clasificaron como fenotipo A1 los eritrocitos que reaccionaron con una intensidad de 4 cruces de aglutinacin con el anti-A1 y no reaccionaron con el anti-H. Se consideraron hemates de grupo A2 aqullos que no reaccionaron con el anti-A1 y mostraron una intensidad de 2 cruces de aglutinacin con el anti-H.

Frecuencia de los grupos del Sistema Sanguneo ABO (Valle de Mxico)

O A1 B A1B A2 A2B

72% 18% 7% 1% 1% 0.1%

Gentica
1924 Bernstein postula la presencia de 3 genes allicos (cromosoma 9): A, B, O 1930 Thompson propone la presencia de 4 genes: A1, A2, B, O

Fenotipo O A1 A2 B A1B A2B

Genotipo posible O/O A1/A1, A1/A2, A1/O A2/A2, A2/O B/B, B/O A1/B A2/B

SECRETORES
Estudios qumicos demuestran que la sustancia de los grupos sanguneos se encuentran en el cuerpo. 1.- Solubles en solventes orgnicos (eritrocitos y clulas). 2.- Mucopolisacridos solubles en agua (Secretores) La forma soluble en agua se encuentra entre la poblacin caucasoide (75 %) y se le denomina secretores ( sustancia H ). El 25 % carecen de ella siendo los no secretores. Los rganos secretores de alta concentracin son pncreas, vescula seminal y glndulas salivales.

DISTRIBUCIN DE LOS ALOANTGENOS ABO, H y Le: el GEN secretor.

|Los aloantgenos A, B y H y Lea no solo estn presentes en los hemates, sino tambin en algunas clulas epiteliales y en todas las clulas endoteliales. En los sujetos llamados secretores (80%), la saliva presenta en abundancia las sustancias A, B o H, segn sea su grupo sanguneo; el 20% restante se llaman no secretores, con ausencia de las sustancias A, B o H en la saliva, en la que solo se halla Lea.

GENETICA
Este sistema se encuentra bajo el control de dos alelos secretores, Se y se, independiente de los genes A, B y H; el gen Se es necesario para que se exprese la sustancia H en la saliva, pero no para su expresin en los eritrocitos. Las sustancias de los grupos sanguneos presentes en la saliva de los individuos secretores son antignicamente idnticas a las del glbulo rojo.

Cadena precursora
Tipo I en secreciones

beta 1,3
Tipo II en eritrocitos

beta 1,4

N Ac Gl u 3 N Ac Gl u 4

1 D Ga l 1 D Ga l

Se D Fucosa tipo I D Gal cadena precursora tipo II D Gal H D Fucosa

Genes Se y H
Se/se H/h Sustancia precursora
N Ac Glu D Gal Fuc osa

DIAGNSTICO DE LA CONDICION DE SECRETOR/NO SECRETOR

Con la prueba de la saliva (polisacrido especfico de grupo) cuando se trata de secretores. Objetivo de la prueba: Determinar la capacidad de la saliva para inhibir la reaccin de aglutinacin especfica de grupo. La saliva del secretor del grupo A impide que el suero anti-A aglutine a las clulas del grupo A, pero no impide que el suero anti-B aglutine las clulas B. La del no secretor: no inhibir los sueros anti-A ni anti-B. Schiff y Sasaki demostraron que la calidad secretora de un individuo est determinada genticamente, dependiendo del par de genes allicos Se y se pueden ser: Homocigotos: SeSe o heterocigotos: Sese. Los no secretores siempre son homocigotos (genotipo ?)

SISTEMA LEWIS A Y B

Le (a+b-), Le (a-b+) y Le (a-b-)

Los antgenos del sistema Lewis proceden del plasma y se adsorben en los hemates. Los genes allicos del sistema de Lewis se representan por los smbolos Le y le: Le representa el gen dominante. le es un alelo silencioso. El gen Le codifica una enzima, que es la responsable de la adicin de la fucosa mediante una unin 1-4 a la N-acetilglucosamina (GlcNAc) subterminal de una cadena de tipo I de la sustancia prescursora. La fucosa no puede aadirse a las cadenas de tipo II que se hallan en los hemates debido a que el cuarto carbono de la GlcNAc ya est ocupado por la galactosa terminal. Esto explica porqu los Ags del sistema de Lewis no constituyen una parte intrnseca de la membrana de los hemates, sino que son sustancias adsorbidas pprocedentes del plasma. Se han descrito tres fenotipos Lewis comunes: Le (a+b-), Le (a-b+) y Le (a-b-). Estos tres fenotipos son el resultado de la interaccin de los genes Le, H y Se.

SUBSTANCIA PRECURSORA EN EL PLASMA (TIPO I)

SUBSTANCIA PRECURSORA EN EL HEMATIE TIPO (II)

Gal

GlcNac

Gal

Gal

GlcNac

Gal

GEN Le 6 4 3 Gal Fuc 2 Glc NAc 1 ENZIMA 1,4 FUCOSILTRANSFERASA Gal Gal

LA FUCOSA ES AADIDA MEDIANTE UNA UNIN 1,4 EL ANTGENO LEWIS DEL PLASMA SE ADSORBE AL HEMATIE

Glc Nac

Gal

NO SE AADE LA FUCOSA POR ESTAR YA OCUPADO EL CARBONO 4 DE GlcNAc POR TANTO, EL ANTGENO LEWIS NO PUEDE SER UNA SUBSTANCIA INTRNSECA DEL HEMATIE

ANTIGENOS Lea y Leb

La estructura bioqumica de los antgenos Lea y Leb difiere solamente de una molcula de fucosa (fuc). El gen H aade fucosa a la galactosa terminal de las sustancia precursora del plasma, en el suspuesto de que el individuo sea secretor. La sustancia resultante es el entgeno H. Los no secretores no aaden la molcula de fucosa aunque hereden el gen H, de este modo no alteran la sustancia precursora del plasma. Los no secretores que heredan los genes H y Le aaden una sla molcula de fucosa a la N-acetilglucosamina subterminal. Esta estructura es reconocida como antgeno Lea. Los secretores que heredan el gen H y el gen Le aaden dos molculas de Fucosa a la sustancia precursora. El producto resultante es conocido como antgeno Leb.

GENOTIPO

Le H

fu Gal c

Fenotipo de los hematies

GlcNAC Gal

Le (a+b-) sustancia Lea

NO SECRETORES se se

PRECURSOR DEL TIPO I EN EL PLASMA

lele H

Gall

GlcNAC

Gal

Le (a-b-) Sustancia precursora No modificada

G a l

Gl cN Ac

G a l
SECRETORES Se se Se se

Le H

fu Gal c fu c

GlcNAc

Gal

Le (a-b+) Sustancia Leb

lele H

Gal

GlaNAc

Gal

Le(a-b-) Sustancia H

fu c

OTROS GRUPOS SANGUNEOS:

LUTHERAN, Y DIEGO

KELL, DUFFY, KIDD,

OTROS GRUPOS SANGUNEOS:

Existen otros grupos sanguneos, tambin clasificados por letras como, por ejemplo M, N, S y P y otros conocidos por el nombre de las personas en las que se identificaron los anticuerpos por primera vez (Kell, Duffy, etc.).

FACTOR RH
ANTECEDENTES HISTORICOS

1905: Dienst sugiere como causa de toxemia del embarazo la inmunizacion maternofetal 1923: Ottenberg, ictericia del recien nacido debida a una transfusin transplacentaria de sangre materna incompatible con la del feto. 1939: Levine y Stetson, mujer que en su segundo embarazo dio a luz un feto muerto de 8 meses de gestacion y quedando inmunizada 1940: Landsteiner y Wiener inyectaron conejos y cobayos con sangre del mono Macacus rhesus produciendo un anticuerpo que ademas de aglutinar los hemates del mono tambien lo hacia con el 85% de la poblacin blanca de NY. A este grupo se le llamo Rh +, y al resto Rh -. 1940: Wiener y Peters, el suero de ciertos individuos con incompatibilidad transfusional se comportaba igual que el suero antimacaco, y de esta forma se pudo conocer que el suero descubierto el ao anterior por Levine y Stetson poseia el mismo anticuerpo que el suero antimacaco, y as el resultado de la inmunizacin materna por el feto se denomino inmunizacin Rh. 1941: Levine y col. probaron que la eritroblastosis fetal se debia a incompatibilidad sanguinea materno-fetal.

FACTOR RH
El Factor Rh es un aglutingeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glbulos rojos de unos primates (Macacus rhesus) y que tambin existe normalmente en el 85% de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca en el suero de stos ltimos la formacin de anticuerpos, que en sucesivas transfusiones pueden destruir los glbulos rojos del donante Rh +, invalidando as la transfusin y creando efectos adversos. Tambin en el embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh - la produccin de aglutininas que podrn ser la causa de la enfermedad hemoltica de los recin nacidos.

FACTOR RH
El factor Rh est constituido por un complejo de seis antgenos fundamentales, formado por tres pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antgeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e y el E.

GENETICA
El sistema Rh cuyo locus se localiza en el cromosoma 1, tiene un juego de tres determinantes antagnicos; C o c, E o e, y D o d. El antgeno D es el ms inmungeno de este sistema de grupos sanguneos. Hay aloanticuerpos en forma natural para el sistema ABO, mientras que es necesaria la sensibilizacin para desarrollar anticuerpos contra Rh en este sistema.

EL FACTOR (Rh)
SISTEMA RHESUS -Constituido por 40 antgenos. -Existen dos nomenclaturas para designarlo: Fisher-Rice y Wiener
-

FISHER-RACE:
-Se heredan de cada progenitor 3 genes. -Situados en loci prximos. -Los alelos se designan: D y d, E y e, C y c. -Cada gen codifica para un Ag especifico -La presencia o ausencia del Ag D determina si un individuo es Rh positivo o negativo.

Wiener:

-Herencia de un solo gen procedente de cada progenitor. -Cada gen con una estructura de mosaico. -Ej.: El gen R1, codificara factores que corresponden a C, D y e de la nomenclatura Fisher- Race; el gen r producira los antgenos c y e pero no D, C, ni E.

WEINERS THEORY

WEINER & FISHER-RACE TERMINOLOGY

Fentipos Rh+

Genes CDE CDe cDE cDe

Rh-

CdE Cde cdE cde

Fentipos

Gentipos

Rh+

RR, Rr

Rh-

rr

Fenotipos

Genotipos

Rh+

DD, Dd

Rh-

dd

Frecuencias de los diferentes grupos ABO y Rh

Grupo A Rh + 37% Grupo A Rh - 9%

Grupo B Rh + 6% Grupo B Rh - 1,5%

Grupo AB Rh + 3% Grupo AB Rh - 0,5%

Grupo O Rh + 35% Grupo O Rh - 8%

FACTOR RH (ISOINMUNIZACION FETO-MATERNO)

El FACTOR RH de la sangre es independiente al grupo sanguneo del sistema ABO. Desconocer el factor Rh, puede desencadenar en el embarazo Incompatibilidad Rh materno-fetal o enfermedad por factor RH. Si la embarazada tiene factor Rh positivo, no desencadena inconvenientes en durante el embarazo Si la madre tiene factor Rh negativo y su pareja tiene factor Rh positivo el centro de hematologa-hemoterapia completar los estudios necesarios para realizar la vacunacin materna durante el embarazo y evitar la enfermedad por factor Rh. Todos los casos sern chequeados con la prueba de coombs Indirecta, para evaluar la presencia de anticuerpos anti-Rh en sangre materna, los ttulos positivos pueden ser por la vacunacin indicada o por sensibilizacin.

ISOINMUNIZACION FETO-MATERNO
n

Cuando la madre es Rh negativa, el padre Rh positivo y el beb Rh positivo, ste ltimo puede estimular la produccin de anticuerpos de la madre, ya que los glbulos rojos del hijo pasarn por la placenta a la madre. Son los anticuerpos anti-Rh, que podran reaccionar contra los hemates del hijo. Esta enfermedad, hoy en da, se puede prevenir mediante la vigilancia sistemtica de las embarazadas Rh negativas y administrndolas adecuadamente la inmunoglobulina anti-Rh. En las transfusiones, tanto el donante como el receptor deben pertenecer al mismo grupo sanguneo ABO y Rh. Slo excepcionalmente, se puede transfundir sangre de otros grupos compatibles.

P R EV E N C I N
n

Ouch
n

Vacuna de inmunoglobulina hiperinmune : Rh RhIg : (gammaglobulina anti D): RhoGAM. Administrarse nicamente a MUJERES Rh negativas, a la 28 semanas del embarazo independientemente del tipo sanguneo del feto. Y . Si su beb nace Rh positivo se administrar otra dosis antes de

La PREVENCIN es fundamental, y con esta vacuna prcticamente puede evitarse la enfermedad tratando a las mujeres Rh -, que an no han desarrollado Acs frente al factor Rh +. (durante el 1er embarazo). Esta inyeccin previene la sensibilizacin de ms del 95 % de las mujeres Rhnegativas. Sin embargo, los estudios demuestran que alrededor del 2 % de las mujeres embarazadas se sensibiliza antes de dar a luz. Por esta razn se administra la inyeccin de RhIg alrededor de la semana 28 del embarazo, as como

Tambin es necesario administrar RhIg a una mujer Rh-negativa despus de:

Un aborto espontneo. Un embarazo ectpico Un aborto inducido o una transfusin de sangre con sangre Rh-positiva. Una amniocentesis Prueba prenatal llamada muestra del villus corinico (CVS). Una transfusin de sangre con factor rh positivo.

Qu hace la vacuna de RhoGAM?

n

La 1ra dosis a las 28 semanas de embarazo, esta vacuna destruir los glbulos rojos fetales que hayan entrado a su torrente sanguneo (mama)antes de que su cuerpo haya tenido la oportunidad de crear anticuerpos. La 2da. otra dosis a las 72 horas despus del parto, esta evitar que su cuerpo de mama pueda crear futuros anticuerpos que podran ser dainos durante un embarazo subsiguiente en que se presente incompatibilidad Rh. Este medicamento administrado correctamente previene en ms del 99%

n n n

La gammaglobulina anti Rh, slo es efectiva en prevenir la enfermedad. NO LA CURA una vez que sta se ha presentado. DESAFORTUNADAMENTE no existen medicaciones similares para prevenir una isoinmunizacin debida a otro antgeno de los eritrocitos (como Kell).

Cmo funciona la RhIg y que es ?

n

Es un producto biolgico que bloquea la capacidad antignica y hace que no se creen los anticuerpos frente a los glbulos rojos fetales Rh positivos. La RhIg contiene anticuerpos contra el factor Rh. Estos anticuerpos se adhieren rpidamente a las clulas Rh-positivas del feto que se encuentran en el flujo sanguneo de la madre y ayudan a destruirlas. Como consecuencia de esto, el cuerpo de la madre no produce anticuerpos contra las clulas Rh positivas del feto. Al no haber clulas sanguneas del beb

TRATAMIENTO
n

El tratamiento de la enfermedad debe basarse fundamentalmente en los aspectos preventivos. PORQU? Debido a que la incompatibilidad Rh es casi completamente prevenible con el uso de RhoGAM, la prevencin sigue siendo el mejor tratamiento.

El tratamiento del neonato ya afectado depende de la severidad de la condicin. LEVE:

n
n

Aumento agresivo de lquidos Fototerapia usando lmpara de bilirrubina . Exsanguinotransfusion (pueden requerirse varias) Fototerapia

KERNICTERUS:
n

HIDROPESA FETAL: n Amniocentesis para determinar la severidad n Transfusin fetal intrauterina mediante CORDOCENTESIS. n Induccin temprana del parto n Transfusin directa de glbulos rojos empaquetados (compatibles con la sangre del beb) y tambin exanguinotransfusin del neonato para extraerle la sangre que contiene los anticuerpos maternos que estn destruyendo sus glbulos rojos. n Control de la

Funciona siempre el tratamiento con RhIg?

n

La RhIg no funciona en mujeres Rhnegativas que ya han quedado sensibilizadas (es decir, cuyos cuerpos ya han producido sus propios anticuerpos para combatir clulas Rh-positivas) a causa de un embarazo, un aborto espontneo, un aborto inducido o una transfusin de sangre acontecidos anteriormente. Es posible determinar si una mujer Rh-negativa ha quedado sensibilizada mediante un anlisis de

Existe alguna manera de deshacerse de los anticuerpos de la madre?

n

No. Si bien una mujer puede no presentar sntoma alguno y permanecer enteramente sana, puede seguir produciendo anticuerpos como parte de su sangre. Si concibe y alumbra otros bebs de sangre Rhpositiva, stos podran padecer la intolerancia de Rh.

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS

Coombs Directo Haga clic para modificar el estilo de subttulo del Coombs patrn Indirecto

Inmuno-02 Inmunologia Aplicada. Enseanza Experimental. QFB JOSE ALBERTO PIA IBARRA

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS

n

Cuando los anticuerpos de la clase IgM reaccionan con los antgenos de la superficie de los eritrocitos generan in vitro reacciones de aglutinacin. En cambio los anticuerpos IgG pueden unirse a las clulas manifestando o no aglutinacin, esto depende tanto de la concentracin de antgeno superficial como de la cantidad de anticuerpo presente, por lo que esta clase de anticuerpos requieren de ciertas condiciones de laboratorio para poner de manifiesto la reaccin.

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA (PRUEBA DE COOMBS)

Esta prueba detecta anticuerpos Rh incompletos.

El suero de antiglobulina humana (suero Coombs) se prepara inmunizando animales con inmunoglobulinas de origen humano.

El suero antiglobulina humana es en realidad un antisuero (Anti-IgG) que reacciona con el anticuerpo globulnico humano que recubre la superficie del eritrocito.

SUERO DE COOMBS
n

En 1945 Coombs y colaboradores introdujeron el uso de la antigammaglobulina humana como una herramienta alterna para demostrar la unin de anticuerpos IgG a los glbulos rojos (sensibilizacin), los cuales por si mismo no generan aglutinacin. Sin embargo, la reaccin de aglutinacin se favorece cuando el reactivo de Coombs forma un puente entre los anticuerpos previamente unidos a los eritrocitos.

TEST DE COOMBS
La prueba se divide en dos procedimientos conocidos como:
n n

Prueba Directa Prueba Indirecta

TEST DE COOMBS
n n

PRUEBA DIRECTA La prueba directa de Coombs se emplea para demostrar la sensibilizacin de eritrocitos in vivo, provocada por anticuerpos de origen inmune, como ocurre en la incompatibilidad materno-fetal (Aloinmunizacin). La sensibilizacin in vivo se manifesta clnicamente como: la anemia hemoltica del recin nacido, la anemia hemoltica autoinmune, la anemia hemoltica inducida por drogas y en transfusiones incompatibles.

TEST DE COOMBS
n n

PRUEBA INDIRECTA La prueba indirecta de Coombs detecta la sensibilizacin in vitro de los eritrocitos y se aplica para demostrar la isoinmunizacin materna, en la bsqueda de anticuerpos inmunes en las pruebas cruzadas, en la identificacin del fenotipo que reconocen los anticuerpos irregulares y en la tipificacin de la variante dbil del factor Rh (Du).

PRUEBA DE COOMBS

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA

Obtener paquete celular de la muestra por centrifugacin. Lavar paquete celular con SSI del paciente, del testigo(+) y del testigo(-)

Paquete de eritrocitos lavados, preparar suspensin al 2% en medio salino. Coombs testigo negativo

Coombs autotestigo

Coombs directa

Coombs testigo positivo

Eritrocitos del paciente en su propio plasma

2 gotas suspensin al 2% eritrocitos del paciente y 2 gotas de suero de Coombs

2 gotas de la suspensin al 2% eritrocitos sensibilizados con IgG anti D y 2 gotas de suero de Coombs

2 gotas de la suspensin al 2% de eritrocitos no sensibilizados con anticuerpo y 2 gotas de suero Coombs

Agitar tubos, centrifugar a 1000 rpm 1 minuto. Realizar lectura resuspendiendo el botn celular. Reaccin de aglutinacin demuestra la presencia de anticuerpos unidos a las determinantes antignicas de los eritrocitos Los resultados de los tubos testigos validan la prueba.

Obtener plasma o suero de la muestra por centrifugacin Coombs indirecta 2 gotas de suero del paciente y 2 gotas de suspensin al 5% de GRO y con el fenotipo del grupo del sistema sanguneo que reconoce el anticuerpo que se investiga Agitar tubo, centrifugar a 1000 rpm. 1 minuto

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS PRUEBA INDIRECTA

Coombs testigo positivo 2 gotas de la suspensin al 2% de eritrocitos sensibilizados con IgG

Coombs testigo negativo 2 gotas de la suspensin al 2% de eritrocitos sin sensibilizar con anticuerpo

Realizar lectura resuspendiendo el botn celular.

2 gotas de suero de Coombs

2 gotas de suero de Coombs

Reaccin de aglutinacin demuestra la presencia de anticuerpos que reconocen las determinantes antignicas de los eritrocitos

Lavar con SSI a 2500 rpm, 5 minutos. Despus del ltimo lavado retirar sobrenadante y resuspender en SSI remanente

Agitar c/ tubo suavemente centrifugar a 1000 rpm. 1 minuto

Realizar lectura resuspendiendo el botn celular

Si no se observa incubar 37 C durante 30 minutos

+
2 gotas de suero de Coombs

Reaccin de aglutinacin demuestra la existencia en el paciente de anticuerpos que reconocen los antgenos presentes en los eritrocitos

PRUEBAS CRUZADAS
Tambin llamadas PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES ( de Compatibilidad). Las pruebas de compatibilidad es una de las aplicaciones mas importantes de las determinaciones de grupos sanguneos es la que se refiere a preparacin para transfusin.
Se efectan antes de transfundir sangre para asegurarse que Haga clic del donante son subttulo del los hemates para modificar el estilo decompatibles con el patrn

suero/plasma del receptor. Las pruebas de compatibilidad comprenden la determinacin de los grupos ABO y Rh del receptor, as como el estudio de la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del mismo.

PARA CONOCER LAS POSIBILIDADES DE TRANSFUSION PUEDE RECORDARSE LAS SIGUIENTES LEYES: GRUPO O : DONADOR UNIVERSAL GRUPO AB: RECEPTOR UNIVERSAL LA SANGRE PUEDE COMBINARSE RECIPROCAMENTE ENTRE INDIVIDUOS DEL MISMO GRUPO.

O O A AB A AB B B

PRUEBAS CRUZADAS: PRUEBA MAYOR Y PRUEBA MENOR De acuerdo con su importancia relativa, las pruebas cruzadas se dividen en prueba mayor y prueba menor. La fase mayor recibe ese nombre por que permite descubrir en el suero del receptor los anticuerpos que suelen presentar la causa ms comn de las reacciones hemolticas graves o fatales ante las transfusiones. La reaccin a la transfusin suele ser leve, cuando se debe a incompatibilidad en la fase menor de la prueba cruzada.

La mayora de los hematlogos concuerdan con que las pruebas cruzadas deben efectuarse mediante 3 metodos por lo menos:

Prueba de tubo con solucin salina Prueba de coombs indirecta Prueba con protena concentrada

La aglutinacin en la prueba cruzada con aglutininas salinas descubre las incompatibilidades debidas a anticuerpos anti- a, anti-b, etc. La prueba cruzada salina sola, no es efectiva en el caso de anticuerpos incompletos, como los del sistema Rh, y como en una misma persona pueden existir tanto anticuerpos salinos (completos) como incompletos, el empleo de eritrocitos suspendidos en solucin salina, seguido de una prueba de coombs indirecta, constituye un medio relativamente sencillo de detectar la incompatibilidad en que intervienen dos tipos de anticuerpos.

PRUEBAS CRUZADAS EN SOLUCION SALINA

Las pruebas cruzadas en solucin salina se pueden realizar en tubos de ensayo o en portaobjetos. Prueba con tubos con solucin salina: Preparar una suspensin al 4 o 5% en solucin salina, de eritrocitos lavados, usando muestras de sangre recientes del receptor y del donador. Disponer 4 tubos de ensayo de 10 x 75 mm:

Prueba mayor SR/ED Prueba menor SD/ER 2 gotas de suero del receptor 2 gotas del suero del donador

2 gotas de suspensin de 2 gotas de suspension de eritrocitos del donador eritrocitos del receptor TESTIGO PRUEBA MAYOR 2 gotas de suero del receptor TESTIGO PRUEBA MENOR 2 gotas del suero del donador

2 gotas de suspensin de 2 gotas de suspension de eritrocitos del receptor eritrocitos del donador

INTERPRETACIN: La presencia de aglutinacin se interpreta como prueba positiva. compati incompati transfusin Ejemplo bilidad bilidad Prueba mayor (-), prueba menor (-) Prueba mayor (-), prueba menor (+) Prueba mayor (+), prueba menor (-) Prueba mayor (+), prueba menor (+)

100% 75%

0% 25%

Compatible Ambos Lenta

iguales donador O y receptor A

25%

75%

Prohibida

Donador A y receptor O

0%

100%

prohibida

Donador A y receptor B

REACCIONES POSTRANSFUNCIONALES
Estas reacciones involucran una serie de mecanismos tanto inmunolgicos como no inmunolgicos que pueden incluso poner en peligro la vida. La transfusin de sangre y sus componentes se considera, en la actualidad, relativamente segura; sin embargo, a pesar de los avances que existen en el campo resulta imposible prevenir todas las reacciones transfusionales debido en parte a que el espectro de respuesta a la transfusin homloga incluye diversos tipos y vara entre individuos.

En general, se clasifican como

Reacciones de tipo inmunolgico, De tipo no inmunolgico, Inmediatas o retardadas.

Las reacciones transfusionales de tipo inmunolgico involucran una reaccin antgenoanticuerpo (Ag-Ac) in vivo, donde existe una respuesta directa en contra de los glbulos rojos del donador por anticuerpos presentes en el receptor o viceversa.

Reacciones de tipo inmunolgico

Reaccin hemoltica inmediata

n

Este tipo de reaccin resulta de la destruccin intravascular de los glbulos rojos transfundidos por los anticuerpos del paciente y es la ms grave de las complicaciones transfusionales. El nmero de desenlaces fatales ocurren en el rango de 1 en 250,000 a 1 en 1 milln de transfusiones.

Reaccin hemoltica inmediata

n

Desembocan con frecuencia en insuficiencia renal. La lesin renal es resultado de mltiples factores tales como: depsito glomerular de fibrina, disminucin en la circulacin renal debido a la hipotensin y al depsito de complejos inmunes. La hemoglobina libre contribuye a la insuficiencia por precipitacin en los tbulos renales. Los signos que se presentan son fiebre, escalofros, hipotensin, shock, hemoglobinuria, oliguria, anuria y sangrado; los sntomas incluyen nusea, vmito; dolor en el sitio de la infusin,

FIN

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

GRACIA S