EKSTRAK TEH SEBAGAI PENANGKAP RADIKAL BEBAS

A.

Pendahuluan Hampir seluruh orang yang ada di dunia ini minum teh. Hal ini dikarenakan selain menyegarkan teh juga mengandung senyawa anti oksidan yang disebut polifenol yang mampu menangkal (menangkap) radikal bebas. Semua makhluk hidup pasti akan dipengaruhi molekul negatif seperti radikal bebas. Senyawa radikal adalah senyawa oksigen yang tidak stabil yang memiliki elektron tidak berpasangan dalam kulit elektron atom. Karena semua molekul cenderung memiliki pasangan elektron lengkap, senyawa radikal bereaksi agresif dengan molekul lain, memerangksp elektron menjauh. Molekul-molekul ini menjadi radikal, dan memulai reaksi berantai. Radikal endogen merupakan hasil metabolisme normal, sedangkan radikal eksogen berkembang diluar tubuh manusia dan berasal dari lingkungan seperti radiasi UV, polusi udara, dsb. Dalam makhluk hidup telah dikembangkan sistem antioksidatif, enzimatis dan non enzimatis, Penelitian menunjukkan bahwa pengaruh radikal yang dihasilkan oleh faktor lingkungan yang berbeda pada kesehatan manusia dan stabilitas pangan, tetapi masih ada kebutuhan untuk menemukan zat yang mempunyai sifat antiradikal. Radikal bebas beroperasi di sel memodifikasi protein penting, merusak membran sel dan genotipe tersebut. Penelitian telah menunjukkan bahwa semua jenis organ dan jaringan yang tunduk pada efek bervariasi radikal '[6,7]. Beberapa penelitian epidemiologi telah menyarankan pentingnya produk tanaman sekunder - konsumsi polifenol dalam mengurangi insiden penyakit degeneratif [8]. Mereka yang memiliki aktivitas antioksidan zat yang kuat dan mitra untuk stres oksidatif. Banyak penelitian telah difokuskan pada zat tumbuhan alami - polifenol [10, 11, 12]. Salah satu sumber polifenol adalah daun teh (Camelia sinensis L.), terdiri dari flavonoid, terutama katekin (EGCG, EKG, C, EGC, EC), yang mengalami oksidasi untuk

membentuk theaflavin dan thearubigens dalam pembuatan teh. Jumlah kelompok hidroksil bebas, kehadiran orto-hidroksilasi pada B-cincin molekul flavonoid, sebuah C2-C3 ikatan ganda di C-cincin dan keberadaan kelompok 3-hidroksil terdaftar sebagai utama kondisi properti antiradikal dan antioksidan Parameter universal digunakan kemampuan radikal bebas

'pembilasan serta evaluasi potensi antioksidan adalah reaksi dengan kation radikal ABTS+ dan stabil radikal DPPH. Pengukuran kemampuan scavenging dari ABTS+ adalah alat yang sangat efektif bila komposisi campuran antioksidan tidak terkenal (didefinisikan sebagai TAA - aktivitas antioksidan total) serta pengukuran aktivitas zat halus atau campuran mereka (didefinisikan sebagai TEAC - kapasitas antioksidan trolox setara). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memenuhi syarat efektivitas Yunan teh hijau dan hitam ekstrak sebagai ABTS + dan DPPH radikal pemulung. Penelitian ini melibatkan empat ekstrak teh Yunan: ekstrak etanol dan air teh hijau dan hitam.

B.

Prosedur Penelitian Reagen (+)-katekin (C) (Merck), Folin-Cocalteu reagen dibeli dari Fluka, (2,2 '-azinobis-(asam 3-etil-benzothiazoline-6-sulfonat) diamonium garam (ABTS) (Fluka); microperoxidase-8; 6-hidroksi-2 asam,5,7,8tetramethylchroman-2-karboksilat (Trolox) (Aldrich); 2,2 difenil-1pikrilhidrazil (DPPH) dibeli dari Sigma-Aldrich (Polandia); etanol Poch (Polandia). Semua reagen yang digunakan adalah analisis kelas. Bahan Hijau dan teh hitam Yunan dibeli di toko khusus teh. Ekstrak disusun menurut metode et al Gramza. [25]. Ekstrak teh berair disusun oleh pemanasan daun teh tanah (100 g) dalam air suling ganda (1000 ml), diikuti dengan pengadukan selama 15 menit pada 80 C. Prosedur ini diulang tiga kali. Dikumpulkan ekstrak disaring melalui kertas

saring dan disentrifugasi (4500 rpm, 15 menit). Kemudian ekstrak beku dan lyophilized bawah vakum. Ekstrak etanol dibuat dengan maserasi daun teh (100 g) dengan 250 ml etanol 95%, pada suhu kamar selama 24 jam, kemudian disaring. Prosedur ini diulang tiga kali. Ekstrak dikumpulkan, disaring dan disentrifugasi (4500 rpm, 15 min). Pelarut diuapkan pada evaporator rotary (RVO 200A, LSM). Ekstrak air dan etanol bubuk disimpan beku (-18 C) sampai penggunaan lebih lanjut. Tingkat hasil produksi adalah sebagai berikut: etanol teh hijau - 12,2% dan ekstrak air - 23,1%, etanol teh hitam - 6,2% dan ekstrak air 18,8%. Jumlah kandungan polifenol Tingkat polifenol total ditentukan menurut metode Horwitz [26] dengan menggunakan reagen fenol Folin-Ciocalteu. Hasilnya

dinyatakan sebagai setara katekin dalam mg / g ekstrak. Konsentrasi standar (+)-katekin antara 000-600 mg / ml digunakan untuk menyiapkan kurva kalibrasi. ABTS Aktivitas antioksidan ekstrak teh diukur dengan alat tes TAA dijelaskan oleh Lemaska et al. [27]. Nilai TAA didasarkan pada stabilitas antioksidan untuk mengais-ngais yang ABTS+ berwarna biru-hijau radikal kation dibandingkan dengan pembilasan kemampuan analog vitamin E yang larut dalam air - Trolox. Untuk menghasilkan ABTS + di-buffered saline fosfat (pH 7,4), microperoxidase-8 (MP8) digunakan. Setelah pencampuran, reaksi dimulai dengan penambahan hidrogen peroksida. The ABTS + solusi, dengan absorbansi stabil pada 734 nm untuk minimal 2 jam, digunakan untuk penentuan assay TAA dengan ekstrak teh dalam etanol untuk memberikan konsentrasi akhir yang diperlukan. Penurunan absorbansi, mencerminkan ABTS + kapasitas scavenging radikal antioksidan, telah diplot terhadap konsentrasi antioksidan. Para TAAvalue merupakan rasio antara lereng

plot ini untuk mengais-ngais dari ABTS + oleh antioksidan, dibandingkan dengan lereng untuk ABTS + pemulungan oleh Trolox. DPPH Pengaruh air teh hijau dan hitam dan ekstrak etanol diperkirakan sesuai dengan prosedur yang dijelaskan oleh al-et Sanchez Moreno, dengan sedikit modifikasi [24].. Sebuah alikuot etanol (0,1 ml) larutan yang mengandung ekstrak yang berbeda konsentrasi (1-100 ppm), ditambahkan menjadi 3,9 ml DPPH 0,025 g-1 liter dalam etanol disiapkan setiap hari. Penurunan absorbansi pada 515 nm diukur terus menerus dengan data yang diambil pada interval 1min pada Carl Zeiss Spektrofotometer (Jena Optik), sampai dataran tinggi reaksi tercapai. Etanol digunakan untuk nol spektrofotometer. DPPH larutan stok yang disimpan pada 4 C sampai digunakan. Persentase sisa DPPH telah diplot untuk mendapatkan jumlah antioksidan yang diperlukan untuk mengurangi konsentrasi awal sebesar 50%. Waktu yang dibutuhkan untuk mencapai kondisi mapan untuk EC50 konsentrasi (T EC50) dihitung secara grafis. Turunkan EC

nilai membuktikan kemampuan antioksidan yang lebih tinggi dari dasar dipelajari. Penurunan absorbansi dihubungkan dengan kemampuan scavenging radikal oleh antioksidan yang terkandung dalam ekstrak dipelajari. Semakin cepat berkurang penyerapan, semakin kuat antioksidan, memiliki kemampuan yang lebih tinggi dari sumbangan hidrogen [28]. Kisaran konsentrasi ekstrak dan frekuensi pengukuran didirikan eksperimental. Dengan mempertimbangkan bahwa EC50 dan T , mempengaruhi kapasitas antiradikal, efisiensi antiradikal

didefinisikan: AE = 1) EC50 TEC50.EC50 Parameter ekstrak ke efisiensi dalam antiradikal diperbolehkan aktivitas membagi antiradikal:

berbagai

kelompok

AE = 1 10-3 aktivitas rendah antiradikal 1 10-3 AE <= 5 10-3 aktivitas medium antiradikal 5 10-3 AE <= 10 10-3 aktivitas tinggi

antiradikal AE> 10 10-3 yang sangat tinggi aktivitas antiradikal Analisa statistik Hasil yang diperoleh dari minimal empat percobaan independen dan rata-rata. Data dianalisis dengan analisis varians (p 0,05) untuk mengestimasi perbedaan antara nilai-nilai senyawa diuji. Hasil diolah dengan menggunakan STATISTICA 6.0 perangkat lunak. Hasil Polifenol total dinyatakan sebagai setara catechin (Gambar 1). Tingkat total fenol dalam teh Yunan hitam dan hijau daun dan ekstrak bervariasi antara 148,6 dan 837,7 mg / g (p <0,001).

Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan total polifenol dalam teh ekstrak bervariasi antara 837,6-245,8 mg / g, dan tergantung dari pelarut yang digunakan untuk jenis ekstraksi dan teh (p <0,001). Kandungan polifenol tertinggi diamati dalam ekstrak dengan etanol 95% yang digunakan, namun ini lebih rendah dengan penggunaan air. Analisis statistik memungkinkan kami untuk menyampaikan perbedaan yang signifikan dalam isi polifenol dalam semua sampel (p <0,001). Itu menegaskan bahwa ekstraksi etanol diperbolehkan memperoleh empat kali, namun, air tentang konten polifenol dua kali lebih tinggi, daripada diperkirakan dalam daun teh hijau dan hitam. Hasil analisis ABTS+ scavenging radikal kation

kemampuan oleh ekstrak teh disajikan pada Gambar 2. Aktivitas antioksidan tertinggi di antara ekstrak dipelajari ditegaskan untuk ekstrak teh hitam: berair 1256,0 pM / g dan etanol 1206,5 pM / g berat kering, ekstrak air dan etanol teh hijau, 237,4 pM / g dan 342,4 pM / g berat kering. Analisis biner ragam menunjukkan bahwa teh hijau

ekstrak memiliki kemampuan jauh lebih rendah dari ABTS+ scavenging radikal kation dibandingkan dengan teh hitam (p <0,001). Pengaruh pelarut yang diterapkan tidak ditunjukkan. ketergantungan Kurva dari sisa DPPH teh konsentrasi radikal dalam sistem reaksi dan Yunan ekstrak di waktu yang tepat disajikan pada

Gambar 3. Analisis kurva diizinkan penegasan bahwa ekstrak dipelajari menunjukkan DPPH scavenging radikal kemampuan, tergantung pada konsentrasi mereka dalam sistem. Konsentrasi terendah yang diperlukan untuk mengais-ngais 50% dari DPPH radikal (EC) telah ditegaskan untuk etanol ekstrak teh hijau (209,61 g / kg) dan hitam (210,70 g / kg). Waktu untuk DPPH mencapai stabil konsentrasi radikal (TEC50) adalah 19 dan 20,25 menit, masing-masing. Aktivitas antiradikal ekstrak teh disajikan pada Tabel 1, sebagai parameter AE (efisiensi antiradikal) [15]. Parameter ini memungkinkan perbandingan Tujuan ekstrak aktivitas antiradikal, dengan memperhitungkan konsentrasi, sangat diperlukan untuk menurunkan DPPH awal EC50 radikal kuantitas untuk 50%, serta waktu proses ini. Aktivitas antiradikal analisis diizinkan mengelompokkan ekstrak teh dalam kelompok aktivitas rendah. Ekstrak etanol teh hijau

menunjukkan kemampuan tertinggi scavenging radikal dipelajari (0,25 10-3), terendah menunjukkan teh hijau ekstrak air (0,13 10-3). nilai lebih tinggi dari koefisien AE ditegaskan untuk etanol, tidak mengandung air, ekstrak teh. Analisis variansi multifaktor radikal oleh menunjukkan bahwa kemampuan DPPH scavenging

ekstrak teh Yunan tergantung pada konsentrasi ekstrak dan yang terbaik pada 1000 ppm (p <0,001). Kemampuan DPP scavenging radikal juga sangat tergantung pada diterapkan pelarut (p <0,001), lebih tinggi untuk ekstrak etanol.

Jumlah isi polifenol dalam teh hijau dan hitam Yunan ekstrak [mg katekin / g berat kering ekstrak].

Gambar. 2. Pemulungan pengaruh ekstrak teh pada kation ABTS radikal. Pembahasan Total Polifenol Konten Penelitian kandungan polifenol dalam daun teh dan ekstrak nya menunjukkan hasil yang berbeda. Jumlah isi polifenol dalam teh hitam dan hijau daun diukur dengan Khokhar dan Magnusdottir [29] adalah 80,5-134,9 mg / g dan 65.8106.2 mg / g, masing-masing. Hoff dan Singleton estimasi tingkat yang sama polyphenol dalam teh hijau dan hitam daun [30]. Namun, Manzocco et al. diperkirakan lebih tinggi kandungan polifenol dalam daun teh hijau (94,5 mg / g) dibandingkan dengan hitam (80,1 mg / g) [31]. Hasil tersebut dikonfirmasikan dalam etanol dan ekstrak air daun teh. Polifenol total dalam penelitian ini secara signifikan lebih tinggi, membenarkan hipotesis bahwa ekstrak daun teh dan polifenol konten tergantung pada asal-usul dan jenis teh. Present penelitian menunjukkan bahwa ekstraksi dengan etanol diperbolehkan menerima konten 60% lebih tinggi polyphenol dibandingkan dengan ekstraksi air. Nwuha et al. [32] juga menganalisis kelarutan konstituen daun teh, dan menemukan kelarutan lebih tinggi

katekin dalam etanol 99,5% dibandingkan dengan larutan 50% etanol dengan air. Isi polifenol dalam ekstrak etanol lima sampai tujuh kali lebih tinggi dibandingkan ekstrak air. Pembilasan Efek Ekstrak Teh pada ABTS + Radikal (TAA) Seni et al. [33] mempelajari kemampuan ABTS + kation radikal pemulungan oleh teh ekstrak komersial jenis yang diketahui mengandung fraksi polifenolik. Penelitian dikonfirmasi aktivitas lebih tinggi dari ekstrak teh hijau (7,3 mM TEAC (g ekstrak) dari teh hitam (5,8 mM TEAC (g ekstrak). Para penulis berpendapat bahwa kegiatan teh hijau merupakan hasil dari kehadiran jumlah besar catechin . Dalam teh hitam, bagaimanapun, catechin terjadi dalam jumlah yang sangat rendah Ini mungkin dipertimbangkan;. bagaimanapun, bahwa

komponen teh hitam - tanin, membuat 91,5% dari ekstrak menunjukkan norma antiradikal sangat kuat Pengamatan yang disebutkan di atas belum. dikonfirmasi dalam penelitian ini. Ada menegaskan radikal jauh lebih rendah pemulungan aktivitas ekstrak teh ekstrak teh hitam menunjukkan. hampir empat kali aktivitas yang lebih tinggi antiradikal dibandingkan dengan ekstrak teh hijau, mengandung jumlah jauh lebih besar dari catechin. Demikian pula Seni Rupa [33] saran, yang kuat norma dari ABTS + scavenging radikal oleh teh hitam mungkin diduga oleh adanya tanin. Salah et al. [34] mengukur aktivitas antioksidan dari catechin terhadap radikal dihasilkan dalam fase air, dinyatakan sebagai TEAC. Efisiensi ABTS +

scavenging radikal kation terbentuk sebagai berikut: ECG> EGCG> EGC> EC = C. Analisis ekstrak teh hijau dan campuran setara komponen kegiatan juga dilakukan. Hal ini menunjukkan bahwa nilai TEAC ekstrak teh hijau (3,78 mM / g) lebih tinggi daripada untuk campuran komponennya (2,76 mM / g). Hal ini menegaskan bahwa struktur orto-dihidroksi dalam cincin B dari struktur polyphenol sangat penting dalam stabilisasi radikal, serta kemampuan logam pengkhelat. Selain itu, ada ketergantungan di antara jenis antioksidan dan aktivitas

mereka ditampilkan. Hal ini menegaskan bahwa hampir 70% kegiatan dapat diklasifikasikan sebagai kegiatan catechin dan ester gallic mereka. Analisis ekstrak teh konstitusi kimia [5] tidak mengkonfirmasi aktivitas antiradikal lebih tinggi ekstrak teh hijau, mengandung jauh lebih dari EKG dan EGCG dari ekstrak teh hitam. Miller dan RiceEvans [22] mempelajari aktivitas theaflavin dalam pengaturan dengan Trolox (TAA) dan menunjukkan bahwa aktivitas scavenging radikal kation dari ABTS + meningkat dengan derajat esterifikasi dengan gallates. Pietta et al. [36] menegaskan bahwa teh hijau ekstrak etanol 70% mengandung katekin menunjukkan kemampuan tertinggi scavenging ABTS + radikal, jauh lebih tinggi dari Ginseng, Ginko Biloba, atau kulit dan ekstrak biji anggur. Ia juga menegaskan bahwa aktivitas tinggi ekstrak tumbuh-tumbuhan di scavenging tersebut ABTS + radikal ini disebabkan oleh adanya komponen lain, bukan hanya catechin. Namun literatur dunia miskin di informasi yang berkaitan dengan kegiatan mereka. Gao et al. [37] mempelajari kegiatan etanol dan ekstrak air dari mawar liar. Mereka menegaskan bahwa karakter ekstrak lipofilik menunjukkan ABTS terendah + radikal kation pemulungan kemampuan dibandingkan dengan ekstrak karakter hidrofil. Penelitian Zielinski dan Koz owska [38] dikonfirmasi kegiatan serupa yang lebih tinggi di scavenging tersebut ABTS + radikal kation oleh butir serealia yang berbeda hidrofilik dari ekstrak lipofilik. Yang disebutkan di atas ascertainments konsisten dengan hasil penelitian ini, adalah etanol ekstrak teh hitam fraksi lipofilik terdiri 70%, dan air 26%, dari ekstrak Scavenging Effect of Tea Extracts on DPPH Radical jauh lebih tinggi daripada BHT dan -tokoferol. hasil penelitian sekarang tidak mengkonfirmasi aktivitas yang lebih tinggi dari teh hijau ekstrak air, di mana aktivitas antiradikal adalah sekitar 25% lebih rendah daripada aktivitas ekstrak teh hitam. etanol teh hijau ekstrak, bagaimanapun, menunjukkan sekitar 8% lebih tinggi DPPH

aktivitas scavenging radikal dari ekstrak teh hitam. Sanchez-Moreno et al. [24] menegaskan bahwa asam galat menunjukkan aktivitas antiradikal DPPH menengah di scavenging radikal bebas tes (2,62 10-3). Quercitin dan rutin menunjukkan aktivitas rendah pada 0,19 103 dan 0,21 10-3, masing-masing. Perbandingan aktivitas antiradikal dari -tokoferol (0,52 10-3) dan BHA (0,10 10-3) juga dilakukan. Tinggi antiradikal potensi pemulungan dari DPPH radikal itu

ditegaskan untuk EGCG [30]. Hatano et al. [41] dan Nanjo et al. [42] menegaskan, bagaimanapun, bahwa meskipun kehadiran asam galat dalam 3'position cincin katekin C, aktivitas EGCG tidak berbeda dari EGC dan GC. Dalam penelitian ini aktivitas antiradikal tertinggi ditunjukkan dalam warna hijau (0,25 10-3) dan hitam (0,23 10-3) teh ekstrak etanol, meskipun 10 kali lebih tinggi kadar EGCG dalam teh hijau dibandingkan teh hitam ekstrak etanol [35]. Endo et al. [43] mempelajari kemampuan DPPH radikal bebas scavenging oleh klorofil dan pheophitin. Hal ini ditegaskan klorofil yang dapat memberikan hidrogen untuk DPPH pengurangan radikal serta

mengais radikal lemak, terbentuk selama oksigenasi lipid. Hasil penelitian disajikan mengkonfirmasi tesis yang disebutkan di atas. Analisis klorofil dan kadar pheophitin dalam ekstrak teh menunjukkan bahwa aktivitas antiradikal di DPPH sistem yang lebih tinggi pada sampel dengan kadar yang lebih tinggi dari senyawa. Perbandingan DPPH ekstrak teh Yunan dan ABTS + radikal bebas scavenging kemampuan diperbolehkan untuk menegaskan keragamannya. Dalam ABTS + Uji aktivitas radikal faktor utama adalah jenis teh, dan aktivitas lebih tinggi pada ekstrak teh hitam. Dalam DPPH tes,

Namun, faktor penting yang mempengaruhi aktivitas antiradikal adalah semacam diterapkan pelarut dan lebih tinggi pada ekstrak etanol. Perbandingan dari kedua kemampuan radicals'scavenging adalah luar biasa sulit berkaitan dengan mekanisme aksi yang berbeda faktor oksidatif, termasuk radikal bebas. Ia juga menegaskan bahwa aktivitas

antiradikal kemungkinan ekstrak tumbuh-tumbuhan dikondisikan oleh struktur antioksidan serta interaksi komponen lainnya Simpulan ABTS-2, 2'-azinobis-(asam 3-etil-benzothiazoline-6-sulfonat)

diamonium garam; TEAC-Trolox Setara Antioksidan Kapasitas; TAATotal Antioksidan Kegiatan; EGCG-(-)-epigallocatechin gallate; ECG(- )-epikatekin gallate; EGC-(-)-epigallocatechin; EC-(-)-epikatekin, C(+)-katekin, konsentrasi EC-antioksidan yang diperlukan untuk mengais-ngais 50%; DPPH-2,2-difenil-1-pikrilhidrazil DPP radikal ; TEC50 -waktu EC50 mencapai DPPH EC50 radikal stabil konsentrasi; efisiensi AE-antiradikal; hydroxyanisole BHA-butil; hidroksitoluen BHT-butil.