UNIVERSIDAD DEL QUINDIO, FACULTAD CIENCIAS BSICAS, PROGRAMA DE BIOLOGIA, LABORATORIO DE BIOLOGIA GENERAL.

PRACTICA # 4

ACTIVIDAD ENZIMATICA, ALGUNOS FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA ELIANA MARIA JURADO HOYOS, LEIDY JULIETH CASTILLO B. RESUMEN: Las enzimas son de gran importancia para el funcionamiento del metabolismo de un organismo. Estas son encargadas de acelerar o de contribuir de una u otra forma en las reacciones qumicas como desdoblar molculas ms grandes. Al realizar la prctica, se reconoci la manera de extraer esas enzimas, y de conocer qu factores afectaban la actividad de las mismas. Posteriormente mediante la prctica se comprueba el funcionamiento de la enzima, y se comprueba tambin como se inhibe el funcionamiento de la misma. Adems de esto, se evidencia como el tiempo que se demora una reaccin puede mejorar la calidad y el desarrollo de la misma, ya que al ver si una enzima tiene ms tiempo para actuar, tendr un mejor desempeo en su labor como catalizador. Por otra parte la concentracin de la enzima tambin afecta el producto final de la reaccin, ya que puede ser directa o inversamente proporcional a la velocidad de la misma. Finalmente se concluye que las enzimas tienen una

actividad que se puede ver afectada por diferentes factores tales como la temperatura, la concentracin de la enzima y el tiempo de accin de la misma. PALABRAS CLAVES: Enzima, sacarasa, sacarosa. actividad amilasa, enzimtica, almidn,

INTRODUCCION: Las enzimas son protenas que funcionan como catalizadores bilgicos. Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los propios genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden considerados como las unidades fundamentales de la vida. Por otro lado las enzimas se clasifican de acuerdo a su complejidad las cuales pueden simples las cuales estn formadas por una o ms cadenas polipeptdicas o conjugadas que contiene un grupo no proteico enlazado a la cadena polipeptdica estando conformada por la apoenzima que es la parte polipeptdica de la enzima y el cofactor que es la parte no proteica y la unin de estos dos ltimos forman la holoenzima. (Kimball, 1986).

Las enzimas poseen varias caractersticas en este aspecto tiene una gran influencia los factores externos que permiten que se den. Las enzimas se inactivan por el calor esto sucede ya que por ser protenas pueden desnaturalizarse completamente si se someten a temperaturas altas, otra de las caractersticas es que las enzimas funcionan ms eficientemente, a ciertas temperaturas optimas, es decir, a ciertas temperaturas las enzimas realizan una actividad catalizadora, de tal manera que permiten la continuacin de la reaccin catalizada a la mayor velocidad. A temperaturas por encima o por debajo de la temperatura ptima para la actividad de la enzima esta disminuye o se detiene. De esta manera la enzima trabaja con mayor eficiencia a una temperatura de 37C (Baker, 1972). Cada enzima funciona de una manera ms efectiva a cierta temperatura y pH y, como consecuencia, su actividad disminuye cuando alcanza valores por encima o por debajo de dichos puntos. Los enlaces de hidrogeno son fcilmente destruidos por el aumento de la temperatura lo cual, a su vez, puede perjudicar la estructura terciaria de la enzima que son de gran importancia para la unin con el sustrato. Los cambios de pH alteran el estado de ionizacin de los aminocidos con carga elctrica.

De esta manera las enzimas adems de que necesitan ciertas condiciones ambientales, como la temperatura adecuada, el pH, de la concentracin de la enzima que aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite, la concentracin del sustrato se obtiene la velocidad mxima. Tambin necesitan de la presencia de otras ciertas sustancias antes de poder actuar; un ejemplo claro es la amilasa salivar solo podr actuar sobre la amilasa si estn presentes iones de cloro (Kimball, 1986). Por ltimo las enzimas son de gran importancia es todos los aspectos de los organismos vivos pues nos dan la facilidad de acelerar o facilitar las reacciones que se producen en el interior del organismo y teniendo grandes propiedades como el ser reutilizable. Las enzimas ayudan a funciones de nuestro organismo como: favorecen la digestin y absorcin de los nutrientes, efecto antiinflamatorio, reduce el dao que produce las toxinas, favorece la fertilidad, entre otras.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL: Reconocer la accin de una enzima y algunos factores que afectan la actividad enzimtica. OBJETIVOS ESPECIFICOS: 1. Preparar un extracto de enzimas (cebada y levadura) para estudiar su accin.

2. Reconocer la accin de enzimas que hidrolizan el almidn. 3. Comprobar la hidrlisis sacarosa por la invertasa. de la

4. Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica: Temperatura, concentracin de sustrato y de enzima. MATERIALES Y METODOS: Para realizar la hidrlisis de almidn por la amilasa; se licuo la cebada pre germinada se puso en tubo de centrifugacin y se llevo a centrifugar 2500 rpm (revoluciones por minuto) durante 5 minutos, de all se obtuvo el sobrenadante, es decir, la enzima (amilasa); este quedo en la parte superior del tubo para centrifugar; y abajo el precipitado o pelet. Se tomaron 6 tubos de ensayo los cuales se marcaron de la siguiente forma 3 de ellos con la letra A y cada uno se marco con 0.5%, 1%, 2% respectivamente; los tres restantes se marcaron con B y tambin se marcaron con 0.5%, 1%, 2%. En los 6 tubos se pusieron 0.5 Ml de la enzima (amilasa). Se calentaron nicamente los tubos marcados con la letra B en el mechero hasta una ligera ebullicin. Y los tubos marcados con A se dejaron a temperatura ambiente (20c). Despus se adiciono en cada tubo de ensayo (los A y B ) 0.5 mL de la solucin de almidn en la solucin correspondiente 0.5, 1 y 2% (la solucin de almidn se agito antes de emplearse). Estos se dejaron en reposo por 10 minutos.

Inmediatamente se marco la placa excavada de cermica con las indicaciones A 0.5%, A 1% y A 2%; B 0.5%, B 1% y B 2%. Pasados los 10 minutos se puso la sustancia que estaba en los tubos en la placa escavada de acuerdo a como estaban marcados. All se agrego sobre cada poso una gota de lugol. Se observo el cambio de color. En las muestras donde el lugol no reacciono, a los tubos de ensayo donde estaban estas sustancias se les realizo la prueba de felhing. Se adicione en orden 3 gotas de felhing A y 3 gotas de felhing B, y se flamearon. Para la actividad enzimtica de la sacarasa de la levadura, se maceraron 3g de levadura en 40 mL agua destilada, este se puso en un tubo de centrifugacin y se llevo a centrifugar a 1500 rpm, durante 5 minutos. De este obtuvo el sobrenadante (sacarasa) y el precipitado. Se tomaron 4 tubos de ensayo; 2 se marcaron con A, en uno se grabo 1% y en el otro 5%; los 2 restante se marcaron con B y se procedi igual que con los A. En los 4 tubos se adicionaron 1 mL de sacarasa, y se les agrego 1 mL de sacarosa en la concentracin correspondiente. Los tubos A se dejaron reposar por 10 minutos, y los tubos B por 20 minutos. Pasado el tiempo de reposo se les realizo la prueba de felhing. RESULTADOS Y DISCUCIN: Habiendo puesto las sustancias de

los tubos en la placa escavada, es decir, la amilasa (enzima) con las diferentes concentracin de almidn, y habiendo realizado todo el proceso con estas, se agrego a cada uno una gota de lugol; se observo que el lugol dio positivo en las muestras de los tubos B, es decir, que hallo almidn; esto indica que la enzima de amilasa no actu. Lo que lleva a concluir que el factor de temperatura alta provoco que la enzima se desnaturalizara, y por esto el almidn sigui intacto. El proceso de desnaturalizacin se caracteriza en general por un coeficiente de temperatura elevado, es decir, el aumento de la temperatura en unos grados provoca un gran incremento en la velocidad de reaccin. Tambin hay que sealar la influencia del pH en la velocidad de desnaturalizacin. Consecuencia de la desnaturalizacin por calor que afecta principalmente a la estabilidad de la estructura terciaria, es la disminucin de la solubilidad y el punto isoelctrico. Si la estabilidad trmica, o sea, la resistencia al calor depende de la proporcin relativa entre uniones hidrfobas y enlaces polares y de la presencia o no de puentes disulfuro (Biologa celular y molecular). A diferencia de estas, las muestras de las sustancias A, la prueba de lugol dio como resultado negativo lo que lleva a decir que la enzima de amilasa actu, haciendo un desdoblamiento del sustrato

(almidn) convirtindolo en un monosacridos o un disacrido. A estas se realizo la prueba de felhing, para la identificacin de azucares; en esta su resultado fue positivo, dando a concluir que efectivamente la enzima actu. Toda reaccin o proceso qumico a nivel celular involucra sustratos y enzimas. Los sustratos son las molculas sobre las cuales actan las enzimas. Una enzima representa un tipo de protena (catalizador biolgico) encargado de acelerar las reacciones bioqumicas en una va metablica particular. Las enzimas no sufren cambios durante las reacciones, ni cambian la naturaleza de la reaccin ni su resultado. (http://www.saludmed.com/). En la segunda parte despus de realizar la prueba de felhing a las muestras de sacarosa con la enzima de sacarasa; los resultados fueron, en la concentracin de sacarosa de 5% el resultado fue un color y una especidad mas clara, con respecto a las muestras de concentracin del 1%, en estas el color fue ms fuerte y una mayor especidad. Pero las muestras que duraron en reposo ms tiempo fueron relativamente ms oscuras. Esto se da debido a que entre menos concentracin de sacarasa, mas rpido actuara esta enzima, desdoblando los polisacridos o disacridos en monosacridos, y a mayor tiempo de accin, mejor desdoblamiento de los

polisacridos. Entonces, esto traduce que en este caso la velocidad de la reaccin es inversamente proporcional a la concentracin. Lo que hace la sacarasa bsicamente es pasar esa sacarosa a convertirla en glucosa y fructosa. CONCLUSIONES: Este trabajo permiti que se aprendiera que la actividad enzimtica tiene una secuencia para actuar, en la cual la enzima acta sobre el sustrato dando un producto. Tambin se conoci que la enzima es un catalizador biolgico que mejora la activacin qumica en una reaccin. Por otro lado se pudo identificar las enzimas de la cebada (amilasa) la cual su substrato fue el almidn. La amilasa hidroliz el almidn para convertirlo en azcar; y la levadura (sacarasa) la cual su substrato fue la sacarosa que acelero la reaccin y permiti que se diera un resultado de presencia de azucares ante la prueba de felhing. Cabe destacar que si a medida que se deja expuesto el substrato con la enzima va a ser mejor su desarrollo enzimtico esto se pudo observar en la levadura (sacarosa) que a medida que el tiempo aumenta actuando la sacarasa sobre la sacarosa la prueba realizada dio con mayor nivel de positividad que la de menor tiempo. Tambin se pudo observar que factores como la concentracin de sustrato y temperatura influyen de gran manera en la actividad enzimtica, debido a que menor

concentracin de sustrato hay mayor actividad enzimtica y en mayor concentracin de sustrato hay menor actividad enzimtica, es decir, es inversamente proporcional; y la alta temperatura desnaturaliza la enzima. BIBLIOGRAFIA: Kimball, John. (1986). Biologa. Editorial: Addison Wesley Iberoamericana, S. A. Cuarta Edicin. Baker, J. y Allen, G. (1972) Materia, Energa y Vida. Editorial: Fondo Educativo Interamericano S.A. Muos, E. (1979) Biologa Celular y Molecular. Editorial: H. Blume Ediciones- Rosario, 17. http://www.saludmed.com/. ANEXOS: 1. Mediante los smbolos E= enzima S= sustrato P= producto represente la ecuacin general de una ecuacin enzimtica. E+S E-S E+P

2. Teniendo en cuenta el cambio de energa libre de los re accionantes, que significa trminos de reaccin exogmica y endogmica. Cmo puede aprovechar la clula este tipo de reacciones? Indique un ejemplo de cada una de ellas. La reaccin exergmica es aquella donde el nivel de energa de los productos es menor que el nivel de energa de los reactivos. La energa

es liberada en esta reaccin. La cantidad de energa que se libera que es menor que cero, es decir negativa. La clula puede usar esta reaccin para llevar a cabo procesos de respiracin celular. La reaccin endergnica se da en los procesos anablicos, son aquellas que requieren un aporte neto de energa para tener lugar: los productos resultantes tienen ms energa que los reactivos de partida (la variacin de entalpa, H<0). Esto se manifiesta con un enfriamiento, ya que el sistema qumico toma energa calorfica del medio que lo rodea para que ocurra la transformacin (de ah que se conozcan tambin como reacciones endotrmicas). La clula puede usar esta reaccin para llevar acabo procesos de fotosntesis y sntesis de protenas. En las clulas vivas deben realizarse innumerables reacciones metablicas distintas, en forma simultnea y a una velocidad tal, que asegure el necesario aporte de energa para el mantenimiento de las funciones vitales, y por ello es necesario el uso de enzimas, que a su vez usan estas reacciones para desarrollar todo el metabolismo celular. 3. Represente las formulas qumicas en los sustratos y productos estudiados en los experimentos anteriores. La formula qumica de de Almidn es: (C6H10O5).

La formula qumica de la sacarosa es (C12H22O11) La formula qumica de la amilasa es

La formula qumica de la sacarasa es

4. La sacarosa o el azcar comn estn presentes en muchos vegetales con qu objeto es hidrolizada por las clulas. Estos compuestos estn constituidos por la unin de dos monosacridos. Por ejemplo: la sacarosa (azcar comn azcar de caa) est formada por una glucosa y una fructosa (monosacridos de seis carbonos que posee una funcin cetona en el carbono 2), de frmula C12H22O11. El disacrido sacarosa es la principal forma en que los azucares se transportan a travs del floema (vasos conductores de savia en los vegetales), desde las hojas hasta los sitios de la planta donde son requeridos. Es soluble en agua y ligeramente soluble en alcohol y ter. Cristaliza en forma de agujas largas y delgadas siendo dextrgira. Por hidrlisis (separacin por medio de agua ya que se necesita una molcula de agua para que queden completos ambos monosacridos) rinde una mezcla de glucosa y fructosa, que resulta levgira, por lo que esta mezcla se conoce como "azcar invertido".