CUMARINAS

CONTENIDO Pgs. INTRODUCCIN.2 PRINCIPIOS TEORICOS...3 DETALLES EXPERIMENTALES 3.1 Materiales...6 3.2 Reactivos...6 3.3 Muestra...6 3.4 Procedimiento 3.4.1 Obtencin del Extracto.7 3.4.2 Reaccin de identificacin...9 3.4.2.1 resultados.9 3.4.3 Anlisis cromatogrfico...10 REACCIONES QUMICAS....11 DISCUSIN DE RESULTADOS y CONCLUSIONES......12 RECOMENDACIONES..12 BIBLIOGRAFA.......13 CUESTIONARIO.14

I. II. III.

IV. V. VI. VII. VIII.

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I. INTRODUCCIN

Las cumarinas estn biogenticamente relacionadas a los fenilpropanos como flavonoides y ligninas as como a las sustancias derivadas del acetato, como esteroides y terpenoides, ya que la biosntesis trascurre por ambas vas shikimato y policetido del acetato. Las cumarinas debido a su anillo lactnico, son solubles en soluciones acuosas o alcohlicas de NaOH dando una coloracin amarilla. Las cumarinas son productos naturales ampliamente distribuidos en la naturaleza. En el humano el principal metabolito de la cumarina es la 7hidroxicumarina, el cual es la forma activa del compuesto. Estos y otros compuestos relacionados presentan actividades biolgicas de importancia teraputica, entre las cuales destaca su efecto antitumoral. En esta prctica se realizo la extraccin de la cumarina a partir de la ruda la cual se seco por dos das en la estufa, luego se tritur y coloc en un cartucho para llevarla al soxhelt, posteriormente se realizaron las pruebas de identificacin en el papel watman y finalmente se realiz el anlisis cromatogrfico (CCD)

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I. PRINCIPIOS TERICOS CUMARINAS Las cumarinas son compuestos ampliamente distribuidos en las plantas, principalmente en las familias Umbeliferae y Rutaceae; se encuetran en todas las partes de la planta desde la raz a flores y frutos siendo ms abundante en estos ltimos; se presentan a menudo como mezclas, en forma libre o como glicsidos. Los desarrollos en los procesos de aislamiento y anlisis estructural en estos ltimos aos han conducido a un marcado incremento en el nmero de cumarinas aisladas de plantas; ello unido al inters despertado por el amplio rango de actividad biolgica que muchas cumarinas han mostrado, como por ejemplo la accin anticoagulante y antibacterial del dicumarol, la accin antibitica de la novobiocina, el agua hepatotoxidad y carninogenicidad de ciertas aflatoxinas astrognica del cumestrol, la accin fotosensibilizadora de furanocumarinas como el bergapteno y la xantotoxina, la accin insexticida de los surangin A y B, entre otros; cabe destacar tambin las aplicaciones de las cumarinas como saborizantes y en perfumera. (Figura 6) Las cumarinas de las cuales solo el 5% aproximadamente carece de oxgeno en la posicin 7, pueden clasificarse como: Simples, o sus derviados hidroxilados, alcoxilados y alquilados, y sus glicsidos. Furanocumarinas, lineales o angulars Piranocumarinas, anlogas a las anteriores con un anillo de pirano, pueden ser tambin lineales o angulares. Cumarinas preniladas, y Cumarinas sustituidas en el anillo de pirona. Proceden de la lactonizacin del cido 2-hidroxi-cinmico

Sustituciones en el C-7: OH. Tri-hidroxiladas en 6,7,8 OH: metilarse, hetersidos : Ej.: Fraxsido, Esculsido

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Cumarinas policclicas: -Furanocumarinas: Ej . Bergapteno, Psoraleno -Piranocumarinas: Ej.: Visnadina Con el nombre de cumarinas se conoce a un grupo muy amplio de principios activos fenlicos que se encuentran en plantas medicinales y tienen en comn una estructura qumica de 2H-1-benzopiran-2-ona, denominada cumarina. Sobre esta estructura, que se origina biosintticamente por lactonizacin del cido cumarnico (2-hidroxi-Z-cinmico), se disponen sustituyentes de distinta naturaleza qumica lo que da lugar a distintos tipos de cumarinas: sencillas y complejas. Prcticamente todas las cumarinas, a excepcin de la cumarina propiamente dicha, poseen un sustituyente hidroxlico en posicin 7 ya sea libre, como sucede en la umbeliferona, o combinado (metilo, azcares, etc.). Las cumarinas sencillas pueden poseer adems hidroxilos adicionales tambin libres o combinados. Ejemplo de ellas son el esculetol del castao de Indias con dos hidroxilos libres sobre los carbonos C-5 y C-7 o el escopoletol presente en algunas Solanceas (belladona) que posee un hidroximetilo en C-5 y un

hidroxilo libre en C-7. Distribucin: Ampliamente distribuidas: -ASTERCEAS -FABCEAS -APICEAS -RUTCEAS Propiedades fsico-qumicas: extraccin y caracterizacin -Slidos cristalizables -Color blanco o amarillento -Frecuentemente en forma de hetersidos por los grupos OH

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-Solubilidad: -glucsidos: mezclas hidroalcohlicas -geninas: disolventes orgnicos apolares (ac. de etilo; cloroformo, eter -Fluorescencia a la luz UV: azul, amarillo o prpura) Identificacin: -Extraccin con mezclas hidroalcohlicas -Separacin por CCF -Identificacin : luz UV Valoracin -Tcnicas espectrofluorimtricas Importancia farmacolgica: (Limitada) Entre las principales: Vitamnica P Tnicos venosos (esculsido) Fotosensibilizantes (psoraleno) Vasodilatadores coronarios (visnadina) Anticoagulantes (dicumarol) Drogas con cumarinas: Meliloto Castao de Indias Kela

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II. DETALLES EXPERIMENTALES

3.1 Materiales:

2 vasos de 250 mL Equipo soxhlet Equipo CCD Lmpara uv 365nm Bagueta Probeta Cromatofolio 2.1 x 4.8cm

3.2 Reactivos: Etanol NaOH 10% Sistema: hexano : EtOAc (3:1) CHCl3 : MeOH (1:1) 3.3 Muestra:
Ruda

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3.4Procedimiento 3.4.1Obtencin del extracto Se pes unos 30g aproximadamente de hojas de ruda, y se llevo a un extractor soxhlet con EtOH durante 3 horas. Se concentro en un rotavapor.

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Referencias: 1. buzo / agitador / granallas o esferas. 2. Baln. 3. brazo para ascenso del vapor. 4. cartucho de extraccin o cartucho Soxhlet. 5. muestra (residuo). 6. entrada del sifn. 7. descarga del sifn. 8. Adaptador. 9. refrigerante (condensador). 10. entrada de agua de refrigeracin. 11. salida de agua de refrigeracin.

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3.4.2 Reaccin de identificacin: Mtodos cualitativos 3.4.2.1Resultados Para la reaccin de identificacin se obtuvo una coloracin amarilla fluorescente.

3.4.3 Anlisis Cromatogrfico Del extracto obtenido se le practico una CCD. Para ello se realizo usando los sistemas: Sistema: hexano : EtOAc (3:1)

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CHCl3 : MeOH (1:1)

FLUORESCENCIA VERDE

Se calculo el Coeficiente de Reparto (RF) : RF = Distancia recorrida por la muestra (cm) Distancia recorrida por el solvente(cm)

Sistema 1: hexano : EtOAc (3:1) Muestra Ruda

Distancia recorrida por La muestra (cm) Distancia recorrida por el solvente (cm)

BANDA 1 5.0 1.8 0.36

BANDA 2 5.0 3.8 0.76

BANDA 3 5.0 4.4 0.88

RF

Sistema 2:CHCl3 : MeOH (1:1) Muestra Ruda BANDA 1

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Distancia recorrida por La muestra (cm) Distancia recorrida por el solvente (cm)

4.9 4.05 0.827

RF

III. REACCIONES QUMICAS

IV. DISCUSION DE RESULTADOS y CONCLUSIONES La ruda dio un resultado positivo para ambas pruebas debido a la alta presencia de cumarinas y furanocumarinas como el bergapteno.

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Las cumarinas debido a su anillo lactnico son solubles en soluciones acuosas o alcohlicas de NaOH dando una coloracin amarilla. La muestra tratada con hidrxido de sodio 1 mol/L provoca una marcada disminucin de la cumarina, lo cual evidencia una degradacin del compuesto en este medio, aspecto que era de esperar pues se conoce que las cumarinas presentan en su estructura un agrupamiento lactnico, los cuales en medio bsico sufren rompimiento del anillo y forman sales de cadenas abiertas.

El mtodo para extraer cumarinas de manera confiable es utilizando el mtodo soxhlet. Las furanocumarinas presentan actividad fotosensible debido a la reactividad del estado triplete que presentan las cumarinas que se genera cuando estas interactan con la radiacin UV. La extraccin de las cumarinas puede realizarse tanto sobre material seco como fresco, con solventes de polaridades diferentes, dependiendo de los tipos de estructura, algunas son ligeramente solubles en solventes apolares. V. RECOMENDACIONES Dado que los ensayos son cualitativos se debe usar una cantidad adecuada de muestra para poder notar el cambio de coloracin y dar una respuesta de veracidad. Cuando se prepara el sistema de cromatografa de capa delgada, los cromatofolios no deben ser movidos del solvente, es decir no se debe trasladar de un lugar a otro hasta que el solvente haya alcanzado la distancia mxima. VI. BIBLIOGRAFA

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Domnguez, Xorge A. Mtodos de Investigacin fotoqumica. Editorial Limusa, Mxico, 1973 Lock de Ugaz. Investigacin Fotoqumica, Segunda Edicin. 1994. Editorial fondo PUCP. Pg 146-160 G. G Alicia, Burton Seldes y Gerardo, Introduccin al Estudio de los Productos Naturales, Tercera Edicin, Tomo 14 1985 Garca Barriga, Hdo. Flora Medicinal de Colombia: Tomo II Instituto Nacional de Ciencias Naturales Bogot Colombia, 1975, p 340 http://es.wikipedia.org/wiki/cumarina#mw-head http://www.elergonomista.com/fitoterapia/cumarinas.htm http://farmacia.udea.edu.com http://www.elergonomista.com/fitoterapia/cumarinas.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Extractor_Soxhlet

VII.

CUESTIONARIO

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1.- cuales son las funciones de actividad biologica de estos compuestos. De 5 ejemplos con su actividad biologica Sus principales actividades son: a) Tienen propiedades vitamnicas, disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las paredes de capilares (protegen la fragilidad capilar y actan como tnico venoso). b) Las piranocumarinas tienen accin antiespasmdica y vasodilatadora de coronarias. c) Algunos tienen propiedades sedantes, como la angelicina. d) Accin antibacteriana. e) Reconocimiento de algunas drogas (mana, solanacaeas midriaticas, castao de indias). 2.- Nombre 5 cumarinas con sus estructuras.

La Psoralen (furanocumarina):

Escopoletina (hidroxicumarina):

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Umbeliferona (hidroxicumarina):

3.- a qu cree ud que se debe la fotosensibilidad de estos compuestos? Esta actividad fotosensibilizante es explicable debido a la reactividad del estado triplete de las furanocumarinas que se genera cuando estas interactan con la radiacin UV y cuyas posibles reacciones se pueden agrupar en dos categoras. Los fotoenlaces directos con macromolculas como el DNA, el RNA y las protenas. Las fotomodificaciones indirectas a los sustratos biolgicos a travs de formas reactivas del oxigeno. Las furanocumarinas se han usado, junto con la radiacin UV en el tratamiento de varias enfermedades d la piel como psoriasis, el vitiligio y la micosis fungoides; el bergapteno, adems se usan como protectores solares en preparaciones cosmticas. La actividad fotosensibilizante de las furanocumarinas sobre las clulas, se

manifiesta como fototoxicidad que altera y desorganiza numerosos procesos biolgicos en diferentes tipos de clulas como clulas bacteriales o fngicas, en

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virus a nivel de DNA, en clulas de mamferos in vitro, en tejidos vegetales, y en clulas epidrmicas en aves y mamferos.

4.- Porque se usa la cromatografia para su deteccin? cual es la diferencia de usar una cromatografia de celulosa y otra de silicagel? Se usa la cromatografa por ser un mtodo sencillo que nos permite ver a travs de la lmpara UV y porque permite una buena expansin, permitiendo as separarse de alguna impureza que se encuentre. Cromatografa en papel: Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una nica tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado como la fase mvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil en el fondo. Despus de unos minutos cuando el solvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el solvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin dl solvente y la del papel de filtro. Cromatografa de silicagel: La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de

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Hidrgeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el solvente. La diferencia es que se pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre l papel destruirn el cromatograma. 5.- que son aflatoxinas? Cmo se forman? Quin las produce? Cmo se les puede identificar? Las aflatoxinas son micotoxinas producidas por muchas especies del gnero de hongos Aspergillus, como metabolitos secundarios. Las aflatoxinas son un grupo de compuestos que cobraron importancia a partir de la muerte repentina en Escocia (1960), de cien mil pavos alimentados con man infectado con una especie fngica: Aspergilus flavus proveniente del Brasil. Las aflatoxinas son generadas por diferentes especies de hongos que aparecen en distintos cultivos que se encuentren expuestos a altas temperaturas durante bastante tiempo o por el contrario estn sufriendo sequias severas, condiciones que se dan en pases con climas hmedos y clidos. Los cultivos afectados por los hongos comprenden cereales, especias, oleaginosas, etc. Cuanto ms propicias son las condiciones, mayores son los niveles de aflatoxinas. El crecimiento de este hongo se ve afectado por la termohigrotropa, es decir que responde al estmulo de la temperatura y la humedad relativa de la atmsfera y del sustrato. As, la formacin de aflatoxinas en el man tiene lugar si este se almacena entre 20 y 40C con un 10-20% de humedad y con un 7090% de humedad relativa en el aire: el crecimiento del hongo se ve favorecido si los granos estn daados por insectos o roedores. Pero, an en ausencia de estas condiciones, si ya han germinado algunas esporas en el sustrato, se pueden formar "nichos ecolgicos" que favorecen el desarrollo de sectores con

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micelios generadores de aflatoxinas porque al crecer produce agua por respiracin aumentando as la humedad de algunas semillas o granos.

6.- en qu tipos de alimentos se pueden formar las aflatoxinas y que dao causara al hombre? Los micelios de sta y otras especies afines productoras de aflatoxinas, son capaces de colonizar semillas y tortas de oleaginosas de man, girasol, algodn, soja, ssamo, avellanas, almendras y cereales y sus derivados dispuestos en sacos o silos. Los posibles efectos que se pueden mostrar en el hombre pueden ser: La aflatoxicosis aguda cuando se consumen niveles medios a altos de aflatoxinas. Los efectos de esta intoxicacin pueden incluir hemorragia, dao agudo del hgado, el edema, la alteracin en la digestin, la absorcin y/o el metabolismo de alimentos, y posiblemente la muerte. La aflatoxicosis crnica resulta del consumo de niveles bajos a moderados de aflatoxinas. Los efectos son generalmente subclnicos y difciles de reconocer. Algunos de los sntomas comunes son una difcil y deteriorada absorcin de los alimentos e ndices de crecimiento ms lento. Para que un animal (o ser humano) haya muerto por causa de aflatoxinas debi ser suministrado con grandes dosis de las mismas -y 'posiblemente' durante largo tiempo-, esto pone en duda la cadena entera de control de calidad sobre la que el gobierno nacional (adems de la empresa) tiene una gran cuota de responsabilidad. 7.- que son ligninas? de ej. con sus respectivas estructuras.

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La lignina es un grupo de compuestos qumicos usados en las paredes celulares de las plantas para crear madera. La palabra lignina proviene del trmino latino lignum, que significa madera; as, a las plantas que contienen gran cantidad de lignina se las denomina leosas. La lignina est formada por la extraccin irreversible del agua de los azcares, creando compuestos aromticos. Los polmeros de lignina son estructuras transconectadas con un peso molecular de 10.000 uma. Se caracteriza por ser un complejo aromtico (no carbohidrato) del que existen muchos polmeros estructurales (ligninas). Resulta conveniente utilizar el trmino lignina en un sentido colectivo para sealar la fraccin lignina de la fibra. Despus de los polisacridos, la lignina es el polmero orgnico ms abundante en el mundo vegetal. Es importante destacar que es la nica fibra no polisacrido que se conoce. Las ligninas son polmeros insolubles en cidos y solubles en lcalis fuertes como el hidrxido de sodio, que no se digieren ni se absorben y tampoco son atacados por la microflora del colon. Pueden ligarse a los cidos biliares y otros compuestos orgnicos (por ejemplo, colesterol), retrasando o disminuyendo la absorcin en el intestino delgado de dichos componentes.

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Estructura generalizada de la Lignina (reproducida con permiso de "RealWorld Cases in Green Chemistry," copyright 2000 de la Sociedad Americana de Qumica)

8.- porque es importante el uso de bloqueadores solares? Son importantes porque evita que los rayos UV e IR penetren la piel de manera intensa, se dice intensa por el debilitamiento de la capa de ozono. son productos que tienen ingredientes qumicos que nos ayudan a protegernos de la radiacin UV. El mecanismo de accin es por absorcin, reflexin y dispersin de los rayos ultravioleta que llegan a la piel. Incrementa su accin la capacidad que tenga el bloqueador para adherirse. Es importante usar bloqueadores solares porque estos podran causar:

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Cncer de piel, tiene una rpida ramificacin que podra producir metstesis en otros rganos del cuerpo. Pudiendo llegar a producir la muerte. Debilitamiento de las defensas del organismo Manchas en la piel Daos en los ojos Foto envejecimiento 9.- qu tipo de cumarinas est presente en la ruda y el apio? Las cumarinas que estan presentes en la ruda y el apio son: APIO: Piranocumarina de la familia Apiaceae. RUDA: Furanocumarina (bergapteno y psoraleno) de la familia Rutaceae. 10.- Dnde se encuentran a las cumarinas generalmente? Se encuentran en los tegumentos d las semillas. Frutos. Flores. Races. Hojas. Y tallos; aunque la mayor concentracin se encuentra en general en frutos y flores. 11.-Fundamente el mecanismo de accin. Accin farmacolgica y empleos -Escina -Extracto de Castao de Indias -Esculsido: tnico venoso Probadas propiedades anti-inflamatorias y antiedematosas EXPERIMENTAL Extracto: protector de pequeos vasos: red capilar USOS: Extracto y escina: componentes de preparados indicados en la insuficiencia venosa: va tpica y va oral. Flebologa:-lceras varicosas, flebitis Proctologa:-hemorroides, fisuras anales Traumatologa:-edemas, inflamaciones, contusiones La corteza del tronco: extraccin de esculsido 12.- en qu consiste la fluorescencia? Indique 3 ejemplos que reportan esta propiedad.

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La fluorescencia es la propiedad de una sustancia para emitir luz cuando es expuesta a radiaciones del tipo ultravioleta, rayos catdicos o rayos X. Las radiaciones absorbidas (invisibles al ojo humano), son transformadas en luz visible, o sea, de una longitud de onda mayor al incidente. En el proceso, una molcula absorbe un fotn de alta energa, el cual es emitido como un fotn de baja energa (mayor longitud de onda). La diferencia de energa entre la absorcin y la emisin, es disipada como calor (vibraciones moleculares). Todo el proceso es muy corto (millonsimas de segundo) y este tiempo es la principal diferencia con otro conocido fenmeno luminoso, la fosforescencia. Las sustancias que producen este tipo de radiacin se denominan fluoritas, mientras que el fenmeno en s mismo, se debe a la presencia de materia orgnica o de iones de tierras raras. Sin embargo, en una muestra de minerales que poseen propiedades fluorescentes, no todos ellos, incluso los que se han extrado de un mismo lugar, presentan la caracterstica luminiscencia. Por otro lado existe una amplia variedad de colores, dependiendo de la longitud de onda emitida. Existen muchos compuestos naturales y sintticos que exhiben fluorescencia, y tienen un nmero de aplicaciones. Algunos animales del fondo del ocano, como los ojiverde, usan la fluorescencia. Las molculas biolgicas pueden ser marcadas con un grupo qumico fluorescente (fluorocromo) mediante una reaccin qumica simple, lo cual permite una deteccin sensible y cuantitativa de la molcula. Algunos ejemplos:

La microscopa de fluorescencia de tejidos, clulas o estructuras subcelulares es lograda marcando el anticuerpo con un fluorocromo y permitiendo que ste encuentre su antgeno correspondiente presente en la muestra. Al marcar varios anticuerpos con diferentes fluorocromos se puede lograr la visualizacin de mltiples objetivos dentro de una misma imagen. Secuenciacin automtica de ADN por el mtodo de terminacin de la cadena: cada uno de los cuatro ddNTPs se encuentra marcado con un fluorocromo especfico de tal forma que se generan cadenas de diferente longitud que al ser sometidas a una fuente de UV se puede determinar la base nitrogenada terminal de cada cadena debido a la longitud de onda emitida caracterstica de cada fluorocromo.

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Gel de agarosa teido con bromuro de etidio. El bromuro de etidio se intercala en el ADN y fluoresce naranja cuando se expone a luz UV.

Deteccin de ADN: el compuesto bromuro de etidio, libre de cambiar su conformacin en solucin, tiene poca fluorescencia. La fluorescencia del bromuro de etidio se aumenta enormemente cuando se une al ADN, de tal forma que este compuesto es muy til para visualizar la localizacin de fragmentos de ADN en el mtodo de electroforesis en geles de agarosa. El bromuro de etidio puede ser txico por tanto, una alternativa ms segura es teir con SYBR Green. Microarreglos Inmunologa: los sitios de unin de un anticuerpo a un espcimen microscpico por ejemplo, pueden ser vistos, e incluso cuantificados, empleando la fluorescencia si se le ha unido previamente un grupo qumico fluorescente al anticuerpo especfico. La fluorescencia ha sido empleada para el estudio de la estructura y conformacin del ADN, as mismo como de protenas, con tcnicas como la transferencia de energa de resonancia, la cual mide distancias a nivel de angstroms. Lo anterior es especialmente importante en complejos de biomolculas mltiples. FACS (Citometra) La Protena Verde Fluorescente (GFP), de la medusa Aequorea victoria, se ha convertido en una herramienta de investigacin muy importante. GFP y otras protenas relacionadas son usadas como reporteros de un sin nmero de eventos biolgicos incluyendo aquellos de localizacin subcelular. Los niveles de expresin gnica son medidos en algunas ocasiones uniendo el gen de produccin de GFP con el gen de inters.

Tambin, diversas molculas biolgicas tienen fluorescencia intrnseca y por tanto, pueden ser empleadas sin necesidad de unirlas a una etiqueta qumica. Algunas veces, esta fluorescencia intrnseca cambia cuando la molcula se encuentra en un ambiente especfico, de tal forma que la distribucin o el ligamiento de la molcula pueden ser medidos. La bilirrubina, por ejemplo, es altamente fluorescente cuando se une a la albmina srica en un sitio especfico. La protoporfirina zinc, la cual se encuentra en las clulas sanguneas cuando la produccin del grupo hemo es inhibido por la existencia de plomo o la ausencia de hierro en la sangre, tiene una fuerte fluorescencia y puede ser, por tanto, empleada para detectar estos problemas.

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13.- Esquematice el mtodo de extraccin de las cumarinas e indique otro mtodo de extraccin. METODO DE SOXHLET Ruda seca por dos das en la estufa

Molido de muestra

Llevar al soxhlet con EtOH durante 3horas

Reaccin de identificacin en papel watman colocando NaOH 10%

Anlisis Cromatogrfico (CCD)

MTODO DE ANLISIS POR CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (HPLC) Para la determinacin de cumarina en la muestra, se desarroll un mtodo de anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). Este mtodo fue aplicado en la planta Justicia pectoralis Jacq. es una especie vegetal de la familia Acantaceae. Nativa de los trpicos de Amrica, se encuentra tanto en las Antillas, como en la zona continental. Comnmente recibe diversas denominaciones como son curia (Puerto Rico), sana herida (Jamaica), anador (Brasil), entre otras. En Cuba es conocida como tilo o tila, carpintero o t criollo y se emplea en general como neurosedante en forma de decoccin de las

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hojas frescas o secas,accin esta que ha sido demostrada por diversos autores a lo largo de los ltimos 20 aos. Se ha comprobado que entre los elementos mayoritarios que aparecen en los extractos obtenidos a partir de esta planta, se encuentra la cumarina simple, componente al que se le atribuyen propiedades antiinflamatorias, analgsicas y sedantes, entre otras. Estudios recientes, no publicados, han demostrado que despus de realizarse diversos fraccionamientos, la accin sedante se mantiene de manera significativa, en las fracciones donde se encuentra presente la cumarina. Por tal razn se ha decidido usar este componente como marcador analtico para el control de la calidad y estudio de estabilidad de la materia prima y las formas terminadas. Se emplearon para ello las condiciones experimentales siguientes: precolumna Aluspher 100 (RP-select B 5 mm) con columna Lichrospher100, RP 18 (25 cm de longitud y 4 mm de dimetro y 5 micras), utilizndose como fase mvil una mezcla de metanolagua (40:60) y detector UV a una longitud de onda de 274 nm. El flujo de la fase mvil fue de 1 mL/min y el volumen de inyeccin fue de 20 mL. La preparacin de las muestras se realiz de la manera siguiente: se pesaron con exactitud alrededor de 25 mg de extracto seco y se trasvasaron a un matraz aforado de 25 mL de capacidad. Se adicionaron 15 mL de fase mvil y se agitaron en forma circular hasta disolucin de la muestra. Posteriormente se llev a volumen con fase mvil y se mezcl. La cuantificacin se realiz mediante una curva de calibracin de un estndar de referencia de cumarina simple (Aldrich Chemical Co.) que abarc un rango entre 4,0 y 20,0 mg/mL a partir de una solucin madre de 0,22 mg/mL. Para la validacin del mtodo, primeramente se evalu la especificidad, donde se estudi la influencia de un medio bsico sobre el polvo seco, para lo que se colocaron 25 mg del polvo seco en otro tubo para ensayo con tapa de rosca y se adicion 1 mL de solucin de hidrxido de sodio 1 mol/L, se mezcl y se mantuvo por 5 min en estufa a 45 C. Por otro lado, se sometieron muestras del polvo a condiciones extremas de oxidacin con perxido de hidrgeno 30 %. El experimento consisti en colocar 25 mg del polvo en un tubo para ensayo con tapa de rosca, adicionarle 2 mL de perxido de hidrgeno 30 % y colocarlo en una estufa a 45 C durante 60 min. Se puede afirmar que el mtodo desarrollado es especfico, preciso, exacto y lineal, por lo que puede ser empleado para la cuantificacin de cumarina en muestras de polvo seco obtenidas mediante secado por aspersin.