FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIN DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

REA DE MICROBIOLOGIA

Prcticas de Laboratorio de Microbiologa UNIVERSIDAD DEL CAUCA

DETERMINACIN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO Y EL EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES EN UN CULTIVO BACTERIANO.

Gua No. 6

1. INTRODUCCIN Las bacterias, al igual que los dems seres vivos requieren de una serie de condiciones o factores ambientales para el desarrollo celular y conformacin de poblaciones y comunidades. Los factores pueden diferenciarse en abiticos, referidos a aquellos relacionados con aspectos propios del medio donde se desarrollan, como la temperatura, el pH, los gases respiratorios (O2 y CO2), las radiaciones (lumnicas, sonoras, electromagnticas), la presin (atmosfrica, hidrosttica, osmtica) y la presencia de nutrientes y en biticos, referidos a aquellos relacionados con las interrelaciones que se dan entre las diversas poblaciones y comunidades. Cuando la bacteria encuentra condiciones propicias para su desarrollo o se adapta a las nuevas condiciones del medio, ocurre inicialmente un crecimiento en masa celular y posteriormente, en el nmero de clulas a medida que avanza el tiempo. Estos cambios pueden representarse mediante una curva, la cual ha sido denominada curva de crecimiento, tal como se presenta a continuacin:

Las etapas de la curva de crecimiento son:

Fase Lag: Las clulas bacterianas se aclimatan al nuevo ambiente y las caractersticas de estas. En esta fase se da inicialmente un crecimiento en masa celular y luego comienzan a formarse nuevas clulas si se encuentran las condiciones apropiadas Elaborado por: para ello. Revisado Por: Aprobada por: Fecha de Aprobacin:
Jefe Unidad de rea Presidente Comit Tcnico Ambiental

. Presidente Comit de Plan Rector Coordinador Comit Desactivacin Residuos Qumicos

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Fase de crecimiento exponencial: La poblacin bacteriana se incrementa exponencialmente (el mismo nmero de clulas por la misma unida de tiempo). Las clulas se han adaptado al ambiente. Fase estacionaria: La tasa de crecimiento disminuye por la acumulacin de desechos metablicos y el agotamiento de los nutrientes. La tasa de crecimiento iguala la tasa de mortalidad. Fase de muerte: La poblacin bacteriana disminuye por el agotamiento total de nutrientes, los efectos txicos de los desechos metablicos y las modificaciones sustanciales en el ambiente.

2. OBJETIVOS Establecer la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano. Capacitar al estudiante en le Manejo del espectrofotmetro y sus aplicaciones en el trabajo de laboratorio. Proporcionar a los estudiantes los conceptos fsicos y qumicos que permiten a la espectrofotometra ser una herramienta de anlisis en el laboratorio.

3. CONSULTAS PRELIMINARES Cules son los factores ambientales determinantes del crecimiento y desarrollo bacteriano? Cul es el principio de operacin de un espectrofotmetro? Qu es la densidad ptica de un cultivo bacteriano? 4. MATERIALES MATERIAL Cajas de Petri Tubo de ensayo con tapa Asa bacteriolgica Mechero Cultivo bacteriano 5. REACTIVOS SUSTANCIAS* Agar nutritivo Caldo nutritivo
. Presidente Comit de Plan Rector Coordinador Comit Desactivacin Residuos Qumicos Elaborado por: Revisado Por: Jefe Unidad de rea

CANTIDAD 10 2 1 1 1

CANTIDAD 150 ml Presidente Comit 10Tcnico Ambiental ml

Aprobada por:

Fecha de Aprobacin:

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No hay restriccin de seguridad por el uso de los medios de cultivo. 6. EQUIPOS EQUIPOS* Incubadora Espectrofotmetro SQ118 Bao de Mara Cmara flujo laminar con luz UV CANTIDAD 1 1 1 1

La incubadora y el bao de mara debern estar previamente calibrados a la temperatura requerida. No manipular el equipo y mantenerlo cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar. 7. PROCEDIMIENTO
7.1 DETERMINACIN

DE

LA

CURVA

DE

CRECIMIENTO

DE

UN

CULTIVO

BACTERIANO. Transfiera con el asa bacteriolgica una porcin de cultivo bacteriano a un tubo de ensayo conteniendo cinco (5) mL de caldo nutritivo. Prepare dos cultivos (2 tubos de ensayo) para obtener una rplica. Determine el porcentaje de transmitancia (%T) de los cultivos inicialmente preparados en la parte anterior, utilizando el espectrofotmetro previamente calibrado a 660 nm. Coloque los cultivos a incubar en bao de mara a 35 - 37 C, realizando agitaciones suaves cada cinco minutos para asegurarse de distribuir las clulas y los nutrientes. Realice lectura del porcentaje de transmitancia de sus cultivos en el espectrofotmetro cada 10 minutos hasta obtener la curva de crecimiento de su cultivo. Convierta el porcentaje de transmitancia obtenido en cada lectura a el valor de densidad ptica (D.O.) del cultivo, aplicando la frmula: D. O. = 2 log %T Con los valores convertidos realice la curva de crecimiento de su cultivo bacteriano, cruzando las variables tiempos versus densidad ptica.

7. BIBLIOGRAFA BENSON, HAROLD. 1981. Microbiological applications. A laboratory manual in general microbiology. Wm. C. Brown Company Publishers. Iowa. MADIGAN M. T., MARTINKO J.M. y PARKER J. BROCK. Biologa de los microorganismos. Octava edicin. Pearson Prentice Hall, Madrid,2004.
Elaborado por: Revisado Por: Jefe Unidad de rea . Presidente Comit de Plan Rector Coordinador Comit Desactivacin Residuos Qumicos Aprobada por: Presidente Comit Tcnico Ambiental Fecha de Aprobacin: