ISOLASI DNA KROMOSOM

Sumber DNA kromosom :

Mikroorganisme Tanaman

Hewan

4 tahapan dalam proses isolasi DNA kromosom bakteri :

Kultivasi sel dan pemanenan sel bakteri Lisis sel Pemurnian DNA kromosom dari ekstrak sel Pemekatan DNA

1. Pertumbuhan dan pemanenan sel bakteri

Sel ditumbuhkan dalam medium yang

sesuai Pertumbuhan sel diukur dan dimonitor menggunakan pengukuran OD (optical density) Sel dipanen pada fasa pertumbuhan tertentu dengan cara sentrifugasi

2. Persiapan ekstrak sel Lisis sel menggunakan lizosim, EDTA dan SDS Pemisahan supernatan dari debris sel

3. Pemurnian DNA kromosom dari ekstrak sel

Hasil tahap 2 akan mengandung DNA, RNA dan protein. Oleh karena itu, DNA perlu dimurnikan dari campuran lainnya Pemurnian dapat dilakukan dengan : Pertukaran ion Ekstraksi dengan pelarut organik dan enzimatis

4. Pemekatan DNA
Pemekatan DNA dapat dilakukan dengan menambahkan etanol absolut dingin

Penentuan konsentrasi DNA

Dilakukan dengan alat Spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 260 nm, dimana nilai absorbansi 1,0 setara dengan 50 ug DNA untai ganda/ ml

Kemurnian DNA dapat pula ditentukan dengan

membandingkan A260/A280. Bila rasio kemurnian lebih kecil 1,8 menunjukkan DNA belum cukup murni (masih mengandung kontaminan protein maupun fenol).