UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE BIOLOGIA

CATEDRA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

MICROSCOPA

TEMARIO:

PROFESOR:

RAL A. BELTRN ORBEGOSO

ALUMNO:

SALDAA UGAZ, IRWING SMITH

2013

MICROSCOPA
A) MICROSCOPA DE LUZ (ML)

1. PODER DE RESOLUCIN (PR) Es la capacidad de distinguir dos puntos considerndolos como diferentes. Con eso se puede decir que: A mayor poder de resolucin, menor ser la distancia entre dos puntos a la cual puedan distinguirse como tales.

2. RESOLUCIN Es la distancia mnima entre dos puntos que puede ser distinguida por una lente. Si el objeto que se quiere observar tiene medidas inferiores a la resolucin de la lente, este no podr ser distinguido. La resolucin de una lente se determina con la siguiente frmula: ( )

Donde:

Seno del ngulo de la apertura angular de la lente.

3. DISTANCIA FRONTAL Es la distancia entre el objeto observado y la lente del objetivo utilizada para la observacin cuando este ltimo se encuentra bien enfocado sobre la muestra. Este concepto es inversamente proporcional al aumento, A mayor distancia frontal, menor aumento. Esto explica la amplitud del objetivo panormico.

4. DISTANCIA FOCAL (Df) Se le denomina as a la distancia existente entre el punto medio de una lente y el punto en donde convergen los rayos de luz que atraviesan eventualmente dicha lente; este ltimo es llamado foco. Concluyendo, la distancia focal es la distancia entre el punto medio de la lente y el foco. Adems este concepto nos brinda la explicacin del porqu unas lentes amplifican ms que otras ya que: A menor distancia focal, mayor capacidad de aumentar el tamao de la imagen de un objeto.

5. TIPOS DE IMGENES FORMADAS EN UN ML El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El

aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

B) MICROSCOPA ELECTRONICA (ME) 1. QU CARACTERSTICAS DEBE TENER UN ME? Un microscopio electrnico debe tener como caractersticas fundamentales el uso de electrones como fuente de iluminacin cuyo origen es un ctodo constituido por un filamento de wolframio o tungsteno (W) el cual al calentarse los emite, estos son atrados al nodo. Una segunda caracterstica esta en el necesario sistema de vaco, pues los electrones si corrieran en un no vaco, chocaran con los tomos suspendidos y desviaran su direccin. Tambin es necesario un sistema de direccin y velocidad para manejar los electrones mencionados anteriormente, esto es generado por bulbos electromagnticos colocados a lo largo del corredor de electrones. Por ltimo un sistema de registro que pueda leer la imagen que producen los electrones.

2. TIPOS DE ME EXISTENTES EN LA ACTUALIDAD Podemos encontrar actualmente microscopios electrnicos que fueron desarrollados en el siglo pasado, de lo que queda decir que fueron el punto de partida investigaciones para mejorarlos. Contamos con el Microscopio Electrnico de Transmisin (MET, o TEM siglas en ingls), que proporciona la observacin de imgenes bidimensionales de unos 300000x de aumento con una resolucin de 0,2 a 0,3 nm en cortes ultra finos de grosor no mayor a 0,1 um. El Microscopio Electrnico de Barrido (MEB, o SEM siglas en ingls), cual crea imgenes de la superficie de los objetos observados

previamente liofilizados y cubiertos con una capa fina de algn metal pesado para que los electrones puedan escanear la superficie del objeto para luego ser ledos por el sistema de registro, puede aumentar los objetos unos 200000x. Las imgenes producidas son imgenes tridimensionales muy reales de la superficie del objeto. Es posible actualmente utilizar las dos tcnicas previamente descritas en un microscopio nico. El Microscopio Electrnico de Barrido y Transmisin (MEBT, o STEM siglas en ingls), proporciona un mayor detalle del objeto. Puede mostrar los tomos individuales de un objeto,

adems no slo proporcionan una imagen ampliada de la muestra, como hace un microscopio electrnico, sino que suministra tambin informacin sobre la composicin qumica del material.

3. QU TIPOS DE MICROSCOPIOS ESTAN DESARROLLANDOSE EN LA ACTUALIDAD? Tenemos: Microscopio de Fuerza Atmica: Es un microscopio que
"barre" la superficie de la muestra utilizando un microsensor (tip) que permite una observacin con gran ampliacin en forma tridimensional. Como beneficio una observacin fcil y de gran ampliacin al aire.

- Microscopio Electrnico de Rayos X de Sper-resolucin:

Los investigadores trabajan desde hace muchos aos en los fundamentos de este microscopio de sperresolucin: electrones y rayos X. Tiene la capacidad de contar millones de fotones de un solo rayo X en una zona amplia. Esta propiedad clave permite registrar pautas detalladas de difraccin cuando se barre la muestra a

travs del punto focal de los rayos. Los microscopios convencionales de barrido con rayos X (o de electrones), por el contrario, slo miden la intensidad total transmitida. Microscopio Electrnico de Efecto Tnel: podramos definirlo como una mquina capaz de revelar la estructura atmica de las partculas. Las tcnicas aplicadas se conocen tambin como "de barrido de tnel" y estn asociadas a la mecnica cuntica. Se basan en la capacidad de atrapar a los electrones que escapan en ese efecto tnel, para lograr una imagen de la estructura atmica de la materia con una alta resolucin, en la que cada tomo se puede distinguir de otro. Una vez llevado el proceso en el microscopio, escaneando la superficie del objeto y haciendo un mapa de la distancia entre varios puntos, se genera una imagen en tres dimensiones. Los microscopios de efecto tnel tambin han sido utilizados para producir cambios en la composicin molecular de las sustancias. Es un instrumento fundamental en el campo de la nanotecnologa y la n nanociencia. C) TCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR 1. CRO FRACTURA: La Microscopa Electrnica de Criofractura, constituye un sistema de visualizar el interior de las membranas celulares. Las clulas se congelan a la temperatura del nitrgeno lquido (-196 C) en presencia de un crioprotector (un anticongelante) para impedir la distorsin provocada por la formacin de cristales de hielo, y el bloque se fracciona con la hoja de una cuchilla. A menudo, el plano de fractura pasa a travs del centro hidrofbico de las bicapas lipdicas, exponiendo

as el interior de las membranas celulares. Las caras de fractura resultantes se metalizan con platino, y las rplicas se observan al microscopio electrnico. Estas rplicas estn llenas de pequeas protuberancias, llamadas partculas intramembrana, que corresponden a grandes protenas de la membrana. Esta tcnica proporciona una va adecuada y espectacular para visualizar la distribucin de este tipo de protenas en el plano de la membrana.

2. HISTOQUIMICA: Es denominado as el conjunto de tcnicas que permiten la identificacin, localizacin y cuantificacin de una sustancia en un tejido o en una clula. Las tcnicas histoqumicas son un conjunto
de tcnicas usadas para la localizacin de molculas, dependiendo del nivel donde estemos trabajando se llamarn histoqumicas (tejidos) o citoqumicas (clula) aunque ambos trminos se usan como sinnimos. Existen distintas tcnicas para la localizacin de los distintos componentes en la clula. Antes del uso de los anticuerpos, estas tcnicas eran las nicas que podan servir para detectar estos componentes, ahora se usan tcnicas inmunohistoqumicas o

inmunocitoqumicas que son ms potentes. Existe otro grupo de tcnicas que son las pruebas para localizar reacciones qumicas que se llaman tcnicas de histoqumica de enzimas o histoqumica enzimtica.

3. FRACIONAMIENTO CELULAR: El fraccionamiento celular es usado para

investigar la bioqumica y fisiologa de organelos fuera del ambiente complejo de la clula intacta. El objetivo principal de este experimento es aislar los cloroplastos, ncleo y mitocondria del tejido de plantas por el mtodo de fraccionamiento celular. Los otros objetivos son examinar esas fracciones microscpicamente y estimar el coeficiente de sedimentacin de algunos organelos. Mediante el fraccionamiento

celular se consigue separar conjuntos homogneos, por lo general de orgnulos, a partir de una poblacin heterognea de clulas.

Disgregacin o rotura (homogeneizacin) de las clulas y liberacin de los orgnulos.

Macrofiltracin. Purificacin de componentes celulares o fraccionamiento celular propiamente dicho: Se aplican tcnicas

de centrifugacin diferencial y en gradiente.