Cultura de clulas

Nathalia dos Reis Lestard

Recapitulando
Exitem culturas aderidas ou em suspenso Podem ser culturas primrias ou linhagens

Centrfuga Microscpio Geladeira Estufa Fluxo laminar

Equipamentos essenciais

UV Congelamento e descongelamento Contagem celular

Cultura 2D

Cultura 3D

Garrafas de cultura Placas de Petri ou de polmeros plsticos Interao clula-clula

Transwell Matrizes (sintticas ou biolgicas) Interao clula-clula e clula-matriz

Cultivo em 2D x 3D
Fibroblasto aderido em superfcie recoberta com colgeno Fibroblasto em uma matriz 3D de colgeno

Grinnell et al., 2003

FASES DO CRESCIMENTO DA CULTURA

Contaminao

Conhecendo o inimigo...
Outros tipos celulares Bactrias 1. Gram-positivas 2. Gram-negativas 3. Micoplasmas Archaeas Fungos 1. Leveduras 2. Hifas

Vrus

Fonte
Assepsia inadequada Falta de experincia Falha na esterilizao 1. Solues 2. Vidraria 3. Pipetas M conservao de incubadoras Filtros do fluxo laminar imprprios Linhagens contaminadas.

Como saber se est contaminado?

Meio de cultura 1. Turbidez 2. pH Aspecto da cultura microscpio 1. Morfologia celular 2. Contaminante

Fungos
Leveduras Presena de partculas ovides , menores que as clulas Hifas crescimento lento, visvel a olho nu.

Leveduras

Hifas

Bactrias
Acidificao intensa do meio de cultura Turbidez Pode apresentar uma pelcula ou espuma na superfcie que se dissipa ao mover Identificao do tipo de bactria com objetiva de 40x

Micoplasma
Tamanho reduzido (0,3 a 0,8 uM) No perceptvel ao microscpio ptico(rotina) Pode levar a alteraes morfolgicas e de metabolismo celular Deteco por: 1. Marcao fluorescente de DNA 2. PCR 3. ELISA 4. Microbiologico Recomenda-se verificao peridica

Marcao nuclear
fcil de ser realizada Usa-se Hoechst ou DAPI Fina pelcula ou marcao filamentosa no citoplasma

MCF-7 MDCK

PCR
Sensvel Especfico Rpido

Elisa
Enzimtico Arginina deiminase Nucleosdeo fosforilase

Microbiolgico

Vrus
Incomum com linhagem celular Comum no meio, soro , tripsina , material de fonte animal Fornecedor de confiana Screening com anticorpos, ELISA ou PCR

Eliminando o inimigo...
Descartar a cultura e os reagentes em uso Recomear a cultura Tentar descontaminar em casos extremos(antibiticos e antimicticos) Os reagentes podem ser autoclavados ( em casos extremos)

Agora s botar a mo na massa....