A.

Prinsip Susu di gested dalam H2SO4, kami ing CuSO4 5H2O sebagai kucing Lyst withK2SO4 sebagai mendidih ing titik el e va tor, untuk kembali tro ni gen sewa dari pro Tein dan mempertahankan nitrogen sebagai garam amonium. Konsentrat NaOH ditambahkan untuk melepaskan NH3, yang ditilled, dikumpulkan dalam H3BO3 solusi, dan dititrasi. Metode tradisional B. Aparatur (a) Pencernaan flasks.-Kjeldahl. Keras, cukup tebal, baik anil kaca. Untuk kapasitas tal ca 500 atau 800 mL. (b) Dis tillation flasks.-Sama Kjeldahl termos seperti dalam (a), cocok ted dengan menggosok ber berhenti per melalui yang melewati lowerend dari ef berbulb cientrub fi atau perangkap untuk mencegah saya chanical carry over dari lation duringdistil NaOH. Menghubungkan perend bohlam ke tabung kondensor dengan rubbertubing. Gunakan lulus 500 mL Erlenmeyer termos ti tion tra ke col lectdistil akhir. Perangkap keluar biarkan kondensor dengan cara untuk memastikan penyerapan com plete dari NH3 disuling ke dalam larutan asam borat. (c) Pencernaan / dis tillation sys tem.-Tra di aparat internasional withad hanya kontrol mampu untuk termos individu. (d) Ti trasi buret.-50 mL. Kelas A atau setara. C. Re agen (a) Sulfuric acid.-95-98% H2SO4. Nitrogen bebas. (b) Coppercat alyst solution.-CuSO4 5H2O. Ni trogen free.Prepare solusi 0,05 g / mL H2O. (c) Kalium sulfate.-K2SO4. Nitrogen bebas. (d) Sodium hydroxide solution.-50% (b / b) ni trate bebas NaOH. (e) didih chips.-Mesh ukuran 10 disarankan. Kemurnian tinggi, butiran alundum amfoterik, polos. (f) Metil merah / hijau Bromocresol indikator solution.-Larutkan 0,2 g metil merah dan encer sampai 100 mL dalam 95% eth anol. Larutkan 1,0 g Bromocresol hijau dan encer sampai 500 mL dalam etanol 95%. Campurkan 1 bagian larutan metil merah dengan 5 bagian solusi hijau Bromocresol (com tunas semua kedua solusi). (g) Asam Borat solution.-4%, dengan indikator. Larutkan 40 g H3BO3 dan encer sampai 1 L dalam air dan tambahkan 3 mL metil merah / hijau Bromocresol solusi indi Cator, (f). Tion Solu akan belight warna oranye. (H) Asam klorida standar solution.-0.1000M. Prepareasin 936,15 (lihat A.1.06) atau menggunakan premade sehingga lution dari jangkauan ification bersertifikat spesifikasi 0,09950.1005M dan menggunakan 0.1000M untuk perhitungan. (I) Amonium sulfate.-99,9% (NH4) 2SO4. (J) Tryptophan atau lisin hydrochloride.-99% C11H12N2O2 atau C6H15ClN2O2 (K) Sucrose.-Nitrogen. Bebas. F. Nitrogen Pemulihan Verifcation Jalankan pemulihan nitrogen untuk memeriksa akurasi prosedur dan peralatan. (A) Nitrogen loss.-Gunakan 0,12 g amonium sulfat dan 0,85 g per sukrosa termos. Tambahkan semua reagen lainnya sebagaimana tercantum dalam D. Digest dan menyaring bawah kondisi yang sama seperti untuk porsi susu tes. Penerimaan harus paling sedikit 99%. (B) Pencernaan efficiency.-Gunakan 0,16 g hidroklorida lisin atau 0,18 g triptofan, dengan 0,67 sukrosa g per termos. Tambahkan semua agen otherre sebagaimana tercantum dalam D. Digest

dan menyaring bawah kondisi yang sama seperti untuk porsi susu tes. Penerimaan harus paling sedikit 98%. G. Perhitungan Hitung hasil sebagai berikut: Nitrogen,% = 14007. () '-' V V MW b di mana Vs dan Vb = mL HCl titran digunakan untuk porsi pengujian dan kosong, masing-masing; M = molaritas larutan HCl, dan W = bobot tes porsi, g. Kalikan persen nitrogen oleh faktor 6,38, untuk menghitung persen ini adalah "protein" pada gen nitro Total basis.Maximum direkomendasikan perbedaan antara duplikat adalah 0,03% "protein." "Protein." H. Ulangi kemampuan dan Nilai Reproducibility Untuk hasil dari parameter penelitian antar laboratorium diperoleh studi laborative incol metode ini, nilai r = 0,038 dan nilai R = 0,049 (diekspresikan secara protein [N '6,38]). Block Pencernaan / Uap Distilasi MethodI. Aparat (A) Pencernaan block.-Aluminium paduan blok atau setara aparatus, dengan kontrol suhu disesuaikan dan perangkat untuk mengukur suhu blok. (B) Pencernaan blok tubes.-250 berkapasitas mL. (C) Distilasi unit.-Untuk destilasi uap. Untuk menerima 250 tabung pencernaan mL dan 500 mL labu titrasi. (D) Distilasi titrasi flask.-500 mL Erlenmeyer lulus ti trasi termos. (E) Titrasi buret.-50 mL. Kelas A atau setara. J. Reagen Lihat C (a) - (k). [Catatan: 40% (b / b) NaOH dapat digunakan dalam manfaat dari 50% (b / b). Chip didih tidak boleh digunakan jika produsen peralatan tidak merekomendasikan penggunaan tersebut.] K. Persiapan Uji Solution Tambahkan 12 g K2SO4 dan 1 mL CuSO4 5H2O solusi katalis untuk tabung pencernaan. Susu hangat 38 1 C. Mencampur susu seperti pada 925,21 (lihat 33.2.02) Timbang uji tion por hangat (5 0,1 mL) dan segera tempat di tabung pencernaan.. (Catatan: Bobot harus direkam ke terdekat 0,0001 g.) Tambahkan 20 mL H2SO4. Tabung bisa tutup dan diadakan untuk pencernaan di kemudian time.Digest dan menyaring hari (semua reagen dan bagian notest) kosong masing-masing. Penentuan L. (A) Digestion.-Set blok pada suhu awal yang rendah untuk mengontrol berbusa (ca 180 -230 C). Tempatkan tabung dengan aspirator terhubung dalam pencernaan blok, hisap harus cukup untuk menghilangkan asap. Prearation D. Solusi Uji Tambahkan 15,00 g K2SO4, 1 mL CuSO4 solusi 5H2O katalis, dan 810 mendidih chip ke tabung pencernaan. Susu hangat 38 1 C. Mencampur susu seperti pada 925,21 (lihat 33.2.02). Timbang sampel hangat (5 0,1 mL) dan segera menempatkan dalam termos pencernaan. (Catatan: Bobot harus kembali dijalin dgn tali untuk terdekat 0,0001 g.) Tambahkan 25 mL H2SO4, membilas ada susu pada leher labu ke dalam bola. Flask dapat tutup dan diadakan untuk pencernaan di lain waktu. Mencerna dan menyaring hari (semua reagen dan tidak ada produk test) kosong masing-masing.

E. Penentuan (A) Pencernaan burner setting.-Perilaku pencernaan atas perangkat pemanas yang dapat disesuaikan untuk membawa 250 mL H2O pada 25 C untuk bergulir boilin ca 5-6 min. Untuk menentukan pengaturan pemanas maksimal untuk digunakan selama proses pencernaan, panas min 10 pra (gas) atau 30 menit (elec tric) di burner pengaturan menjadi uated eval. Tambahkan 3 atau 4 chip mendidih untuk 250 mL H2O pada 25 C dan tempat termos pada burner dipanaskan. Tentukan pengaturan pemanas yang membawa air dari 25 C untuk bergulir mendidih dalam 5-6 menit pada masing-masing burner. Ini adalah burner setting maksimal yang akan digunakan selama proses pencernaan. (B) Digestion.-Tempat termos dalam posisi miring dengan sistem ejeksi fume pada. Mulai pada pengaturan cukup rendah sehingga sebagian tes tidak busa sampai leher labu Kjeldahl. Digest setidaknya 20 menit atau sampai asap putih muncul di termos. Selanjutnya, dalam burner lipatan pengaturan setengah jalan ke pengaturan burner maksimum yang ditentukan dalam (a) dan panas selama 15 menit. Selanjutnya, dalam panas lipatan ke pengaturan maksimum yang ditentukan dalam (a). Ketika mencerna membersihkan (jelas dengan cahaya biru-warna hijau), terus mendidih 1-1,5 jam pada pengaturan maksimum (total waktu ca 1,8-2,25 h). Untuk menentukan waktu mendidih khusus yang dibutuhkan untuk kondisi ysis dubur di laboratorium, pilih protein, susu tinggi lemak tinggi sampel pengujian dan menentukan kadar protein menggunakan berbeda kali mendidih ent (1-1,5 jam) setelah kliring. Berarti uji protein dalam lipatan dengan dalam kekusutan (0-1,5 jam) waktu mendidih, menjadi konstan, dan kemudian de kusut ketika waktu mendidih terlalu lama. Pilih waktu mendidih yang menghasilkan uji protein maksimal. Atend pencernaan, mencerna harus jelas dan bebas dari bahan tercerna. Asam dingin mencerna ke suhu kamar (ca 25 min). Mencerna Didinginkan harus cair atau cairan dengan kristal kecil. (Jumlah besar kristalisasi sebelum penambahan air di dicates H2SO4 sisa terlalu sedikit atend pencernaan dan dapat menghasilkan nilai ujian yang rendah) Setelah mencerna didinginkan sampai suhu kamar., tambahkan 300 mL H2O ke tabung dan aduk untuk mencampur (untuk 800 mL labu tambahkan 400 mL H2O). Ketika ruang suhu air ditambahkan beberapa kristal dapat membentuk dan kemudian pergi ke dalam larutan, ini adalah normal. Biarkan campuran dingin suhu kamar menjadi distilasi kedepan. Termos dapat tutup untuk distilasi di lain waktu. (C) Dis tillation.-Hidupkan kondensor wa ter. Tambahkan 50 mL H3BO3 solusi dengan indikator untuk lulus 500 mL Erlenmeyer titrationflask dan termos tempat di bawah condensertip sehingga tip yang jauh di bawah permukaan H3BO3 solusi. Untuk suhu kamar diencerkan mencerna, hati-hati tambahkan 75 mL 50% NaOH sisi dinding labu Kjeldahl dengan agitasi tidak. NaOH membentuk lapisan yang jelas di bawah mencerna diencerkan. Segera terhubung ke tabung padat bulboncon destilasi. Vig atau menerus termos swirl untuk mencampur isinya secara menyeluruh, panas sampai NH3 semua telah disuling ( 150 mL menyaring akhir, 200 mL total volume). Jangan biarkan distilasi tanpa pengawasan. Termos (500 mL) dapat bertemu pada saat ini. Turunkan menerima termos dan biarkan mengalir cair dari condensertip. Matikan pemanas destilasi. Titrasi larutan H3BO3 menerima dengan standar larutan HCl 0.1000M untuk jejak pertama pink. Plate aduk dinyalakan dapat membantu visualisasi titik akhir. Rekam mL HCl untuk setidaknya terdekat 0,05 mL. Digest 30 menit atau sampai asap putih berkembang. Dalam suhu lipatan sampai 410 -430 C dan mencerna sampai jelas. Mungkin perlu dalam ature lipatan marah secara bertahap selama ca 20 menit untuk mengontrol berbusa. Jangan biarkan busa di dalam tabung naik lebih tinggi daripada ca 4-5 cm di bawah permukaan perangkat

koleksi asap di serted ke atas tabung. Setelah membersihkan digest (jelas dengan cahaya biruwarna hijau), terus mendidih (H2SO4 harus mendidih) selama minimal 1 jam, pencernaan total waktu ca 1,75-2,5 h. Untuk menentukan jangka waktu tertentu mendidih yang dibutuhkan untuk kondisi ysis dubur di laboratorium Anda, pilih protein tinggi, susu sampel uji lemak dan menentukan kadar protein menggunakan waktu mendidih yang berbeda (1-1,5 jam) setelah kliring. Berarti uji protein dalam lipatan dengan dalam kekusutan (0-1,5 jam) waktu mendidih, menjadi konstan, dan kemudian menurun ketika waktu mendidih terlalu lama. Pilih waktu mendidih yang menghasilkan uji maxi mumprotein. (Catatan:.. Sebelum menghapus tabung panas dari blok, pastikan tidak ada lapisan kondensat di aspiratorman i melipat Jika ada lapisan cair, di lipatan sebagai piration untuk menghilangkan cairan) atend pencernaan, mencerna harus jelas dan bebas dari tercerna materi. Keren digest kamar tempera mendatang (ca 25 min). Mencerna Didinginkan harus cair atau cairan dengan kristal kecil di bagian bawah tabung. (Kristalisasi berlebihan di di Cates H2SO4 sisa terlalu sedikit pada akhir pencernaan dan dapat menyebabkan hasil yang rendah Untuk mengurangi hilangnya asam selama di gestion, mengurangi asap sebagai tingkat piration..) Setelah mencerna telah didinginkan sampai suhu kamar, tambahkan 85 mL H2O (kosong mungkin kembali quire 100 mL) untuk setiap tabung, aduk untuk campuran, dan biarkan sejuk ke suhu kamar. Ketika ruang suhu air ditambahkan, beberapa kristal dapat membentuk dan kemudian pergi ke dalam larutan, ini adalah normal. Tabung dapat tutup untuk distilasi di lain waktu. (B) Distillation.-Place 50% (atau 40%) NaOH dalam tangki alkali unit distilasi. Menyesuaikan volume dibagikan untuk 55 mL (65 mL NaOH 40%). Pada tabung pencernaan tach mengandung mencerna diencerkan ke unit tion la menyaring. Tempat lulus 500 mL Erlenmeyer termos ti trasi berisi 50 mL H3BO3 solusi dengan indikator pada menerima bentuk plat, dengan tabung dari kondensor memperluas bawah permukaan tion solusi ofH3BO3. Uap-menyaring un til 150 mL menyaring akhir dikumpulkan ( 200 mL total volume). Hapus receiver termos ing. Titrasi larutan H3BO3 menerima dengan standar 0.1000M HCl untuk jejak pertama pink. Plate aduk dinyalakan dapat membantu visualisasi titik akhir. Rekam mL HCl untuk setidaknya terdekat 0,05 mL. M. Nitrogen Pemulihan Verifikasi Jalankan pemulihan nitrogen untuk memeriksa akurasi prosedur dan peralatan. (A) Nitrogen loss.-Gunakan 0,12 g amonium sulfat dan 0,85 g per sukrosa termos. Tambahkan semua reagen lainnya sebagaimana tercantum dalam Persiapan Uji Solution, K. Digest dan menyaring bawah kondisi yang sama seperti untuk porsi susu tes. Penerimaan harus paling sedikit 99%. (B) Pencernaan efficiency.-Gunakan 0,16 g hidroklorida lisin atau 0,18 g triptofan, dengan 0,67 sukrosa g per termos. Tambahkan semua reagen lainnya sebagaimana tercantum dalam Persiapan Uji Solution, K. Digest dan menyaring bawah kondisi yang sama seperti untuk porsi susu tes. Penerimaan harus paling sedikit 98%. N. Perhitungan Lihat G. O. Pengulangan dan Nilai Reproducibility Untuk hasil parameter penelitian antar laboratorium diperoleh dalam col laborative studi metode ini, nilai r = 0,038 dan nilai R = 0,049.
repository.ipb.ac.id/bitstream/handle/123456789/53744/BAB III Materi dan Metode.pdf?sequence=4