Fundamentos de Diferenciacin Bioqumica

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ESTEFANA RODRGUEZ SNCHEZ JOS QUEVEDO MNICA MARCELA CASAS MNICA YANQUEN FUENTES 1. 2. 3. 4. 5. Resumen Abstract Palabras Clave: Enzimas Frase introductoria Introduccin

6. 7. 8. 9.

Metodologa Resultados Discusin Conclusiones

10. Bibliografa Fundamentos de cada prueba y como se lee positivo y negativo para cada MO 1. Agar Triple Azcar Hierro Tsi El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. La fermentacin de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. Tambin puede observarse la fermentacin de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo, por el cambio del indicador de rojo a amarillo. La produccin de H2S se observa por la aparicin de un precipitado negro, debido a las sales de hierro presentes. (MCD LAB).

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2. Caldo Verde Bilis Brillante

Es te medio es recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales. En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas. Para leer si estas son positivas o negativas seguimos los siguientes pasos: Positivo Presencia de gas Negativo Ausencia de gas (Mol labs, 2007)

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3. Medio Sulfuro Indol Movilidad (SIM) 4. Agar Urea 5. Agar Rojo-Fenol Lactosa (BPL-Agar) Verde Brillante 6. Agar Hierro Lisina (LIA)

En este medio la peptona provee la fuente de carbono y nitrgeno. El extracto de levadura provee vitaminas y cofactores para el crecimiento. La dextrosa es la fuente de energa. El hidrocloruro de L-lisina es el sustrato donde actan las enzimas descarboxilasa o desaminasa. El citrato frrico de amonio y el tiosulfato de sodio actan como indicadores de la produccin de H2S. El prpura de bromocresol es un indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante. Prueba Produccion H2S de Reaccion positiva Formacion de un presipitado negro en la superficie Fondo y superficie del medio de color purpura (alcalino) Reaccion negativa No hay formacin de precipitado negro Fondo amarillo (cido), superficie purpura (alcalina)

Descarboxilacion de la Lisina

Desaminacion Superficie roja Superficie de la lisina purpura (MCD LAB, 2007) http://books.google.com.co/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA213&dq=medio+sulfuro+indol&hl =es&ei=ZVDLTemkLsK2tgfEmdnbBw&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=1&ved=0CCU Q6AEwAA#v=onepage&q=medio%20sulfuro%20indol&f=false

11. Cuestionario 1. Cules son las rutas bioqumicas de obtencin de energa de las bacterias respiradoras aerobias, las de respiracin anaerobia, las fermentadoras y las anaerobias estrictas. Cul de stas es ms eficiente? Por qu? La respiracin celular es el conjunto de reacciones qumicas mediante las cuales se obtiene energa a partir de la degradacin de sustancias orgnicas, como los azucares y los cidos, principalmente. Comprende dos fases: en la primera se oxida la glucosa (azcar) y no depende del oxigeno, por lo que recibe el nombre de respiracin anaerobica o gluclisis, reaccin que se lleva a cabo en el citoplasma de la clula. La segunda fase se realiza con la

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intervencin del oxigeno y recibe el nombre de respiracin aerbica o ciclo de krebs y se realiza en estructuras especiales de la clula llamadas mitocondrias. Obtencin de energa de las bacterias respiradoras aerobias

Ciclo de krebs o respiracin aerobia. Sucesin de reacciones qumicas que ocurren dentro de la clula, mediante las cuales se realiza la descomposicin final de las molculas de los alimentos y en las que se producen dixido de carbono, agua y energa. Este proceso, que se lleva a cabo por la accin de siete enzimas, es conocido tambin por ciclo de los cidos tricarboxlicos. El ciclo de Krebs ocurre en todos los animales, plantas superiores y en la mayora de las bacterias. En los organismos que tienen clulas con ncleo, el ciclo tiene lugar dentro de un orgnulo membranoso que se llama mitocondria, una estructura que se compara a menudo con la central de produccin de energa de la clula. Los alimentos, antes de poder entrar en el ciclo del cido ctrico, deben descomponerse en pequeas unidades llamadas grupos acetilo. Cada grupo acetilo (CH3CO) contiene slo dos tomos de carbono, junto con hidrgeno y oxgeno. Al comienzo del ciclo, un grupo acetilo se combina con una molcula con cuatro tomos de carbono llamada oxalacetato, para producir un compuesto con seis tomos de carbono: el cido ctrico. En los restantes pasos del ciclo, la molcula de cido ctrico se transforma, y pierde dos de sus tomos de carbono, que salen en forma de dixido de carbono. As mismo, se liberan tambin cuatro electrones. Estos viajan dentro de la clula gracias a una serie de mleculas transportadoras, la cadena transportadora de electrones, en la que se produce energa en forma de una molcula rica en energa llamada trifosfato de adenosina, o ATP, antes de reaccionar con el oxgeno para formar agua. Un producto adicional del ciclo es otra molcula con gran contenido energtico, llamada trifosfato de guanosina, o GTP. La clula utiliza estas molculas, el ATP y el GTP, como combustible en muchos procesos. Otra molcula usada como combustible, el fosfato de creatina, puede servir tambin para proveer de energa extra a las clulas del cerebro y de los msculos. La molcula original de oxalacetato se regenera al final del ciclo. Esta molcula puede reaccionar entonces con otro grupo acetilo y comenzar el ciclo de nuevo. En cada giro del ciclo se produce energa. En el ciclo, slo se destruyen los grupos acetilo; tanto las siete enzimas que llevan a cabo las diferentes reacciones, como los compuestos intermedios sobre los que actan, pueden volver a utilizarse una y otra vez. Muchos de los compuestos intermedios que se producen en el ciclo se usan tambin como materiales de construccin para la sntesis de aminocidos, hidratos de carbono y otros productos celulares. Obtencin de energa de las bacterias respiradoras anaerobias

Glucolisis o respiracin anaerobia. Al estudiar los cambios bioqumicos que se producan durante la contraccin muscular se observ que cuando un msculo se contrae en ausencia de oxgeno (de forma anaerobia), se utiliza el glucgeno y aparecen como productos finales el piruvato y el lactato. Sin embargo, si la contraccin ocurre en presencia de oxgeno (de forma aerobia), no se acumula lactato y el piruvato es oxidado completamente hasta dixido de carbono y agua. En base a estas observaciones, se adopt la costumbre de distinguir las fases aerobia y anaerobia en el metabolismo de los hidratos de carbono. Pero esta distincin es arbitraria, puesto que las reacciones con o sin oxgeno son las mismas, diferencindose nicamente en el punto hasta el que se producen y, por tanto, en los productos finales. La coenzima esencial NAD (dinucletido de adenina y nicotinamida) es necesaria para un paso de conversin enzimtica en la formacin del piruvato. Cuando el oxgeno es deficiente, esta coenzima slo puede regenerarse por la reoxidacin del NADH durante la produccin de lactato a partir de piruvato. Esto es debido a que las centrales elctricas de las clulas, las mitocondrias, slo pueden utilizar NADH en presencia de oxgeno, produciendo NAD, energa

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(como molculas de trifosfato de adenosina o ATP) y agua. La glicolisis puede continuar en condiciones anaerobias con la formacin de lactato y la regeneracin de NAD, pero a cambio de producir menos energa por molcula de glucosa metabolizada. Secuencia de reacciones en la glicolisis En conjunto, la ecuacin de la glicolisis para producir lactato es la siguiente: Glucosa + 2 ADP (adenosina difosfato) + 2 Fosfato 2 Lactato + 2 ATP (adenosina trifosfato) + 2 H2O Aunque las etapas intermedias implicadas son muchas y complejas, una visin simplificada podra describir el proceso como: 1. La incorporacin inicial de dos grupos fosfato dentro de la molcula de glucosa de seis tomos de carbono. Los grupos fosfato los proporcionan dos molculas de ATP, mediante la utilizacin de energa. 2. El compuesto intermedio de seis tomos de carbono que se forma, fructosa 1,6 bifosfato, se rompe en dos compuestos ms simples, con tres tomos de carbono cada uno. 3. Estos compuestos de tres tomos de carbono, fosfato de dihidroxiacetona y gliceraldedo-3 fosfato, son cada uno metabolizados para dar piruvato, en una va con numerosos pasos intermedios. Durante este proceso, cada uno de los compuestos de tres tomos de carbono produce dos molculas de ATP (cuatro en total), con lo que se genera una ganancia neta de dos molculas de ATP, ya que dos molculas de ATP se utilizaron en la etapa 1. Adems, se producen dos molculas del cofactor intermediario NADH, las cuales pueden ser oxidadas bajo condiciones aerobias, en una ruta separada que rinde seis molculas de ATP. De esta forma, la glicolisis puede producir seis molculas de ATP por cada molcula de glucosa cuando hay oxgeno disponible, pero slo dos molculas de ATP bajo condiciones deficitarias de oxgeno. 4. Las dos molculas de piruvato resultantes pueden ser utilizadas por el ciclo mitocondrial del cido ctrico despus de convertirse en acetil-CoA, produciendo otras 30 molculas de ATP. En resumen, se pueden producir un total de 36 molculas de ATP mediante el metabolismo completo de una molcula de glucosa bajo condiciones aerobias, pero slo dos molculas de ATP bajo condiciones anaerobias. 5. Por ltimo, una de las molculas intermediarias de tres tomos de carbono, el gliceraldedo-3 fosfato puede, en una reaccin lateral, convertirse en 2,3 bifosfoglicerato, un compuesto que ayuda a la hemoglobina de los glbulos rojos sanguneos a descargar el oxgeno en los tejidos. Obtencin de energa de las bacterias fermentadoras

La fermentacin anaerbica puede definirse como el proceso metablico por el cual se obtiene energa qumica a partir de diferentes combustibles orgnicos en ausencia de oxgeno molecular. Si bien los combustibles ms frecuentemente utilizados en los procesos de fermentacin son los azucares, y particularmente la glucosa, de algunas bacterias son capaces de obtener energa a partir de la fermentacin anaerobia de otros combustibles orgnicos como aminocidos, purinas, piridinas, o cidos grasos. (Alonso, 2007) La fermentacin corresponde a un proceso de oxidacin, en el que las bacterias facultativas o anaerobias obligadas utilizan un compuesto orgnico como dador y aceptor final de hidrgenos. (Villafae, 2008, marzo) El ms eficiente de los mtodos de obtencin de energa de las bacterias es el ciclo de Kreps, debido a que los compuestos que actan en las 7 reacciones, pueden volver a utilizarse una y otra vez, esto optimiza el rendimiento y hace que las otras vas sean menos contribuyentes al desarrollo de la produccin.

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2. Describa brevemente las actividades enzimticas que se identificaron en cada uno de los medios de cultivo utilizados en la prctica. Cul es la reaccin bioqumica que cataliza cada una? Cules son exoenzimas y cules son endoenzimas? 3. Explique por qu los tubos de fermentacin de azcares deben evaluarse a las 24 y 48 horas? Qu resultados se observarn en los tubos en el caso de que un microorganismo metabolizara oxidativamente la glucosa? Una baja relacin de carbohidrato:protena reduce la formacin de aminas alcalinas que pueden neutralizar pequeas cantidades de cidos dbiles provenientes del metabolismo oxidativo; las grandes cantidades de hidrato de carbono, aumentar la cantidad de cido encontrado. (MacFaddin, 2003). En conclusin al permanecer ms del tiempo adecuado, se puede determinar una oxidacin positiva, cuando en realidad este cambio de pH se da por s solo en el medio luego de 48 horas, los resultados que se observan en Escherichea Coli son de color amarillento ya que los hidratos sufren un ataque de oxidacin, la glucosa es fermentada en el medio de sellado y el tubo abierto es el primer ataque de la fermentacin y la respiracin. En el caso del tubo sellado la coloracin es verde ya que es incapaz de descomponerse el azcar. (MacFaddin, 2003)

4. Explique por qu se busca la presencia de precipitados de sulfuros en el fondo del tubo de TS1 y no en la superficie?
En el medio TSI por fermentacin de azcares, se provocan cidos, que se revelan por medio del indicador rojo de fenol, el cual cambia al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro suministrando el sulfuro de hierro de color caracterstico negro. (Britania Lab). Por tal razn se busca los en el fondo porque al formarse una sal, por diferencia de densidades este se va a precipitar.

Bibliografa
MCD LAB. (s.f.). Especificaciones producto. Recuperado el 04 de mayo de 2011, de http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_hierro_lisina.pdf