Anda di halaman 1dari 16
Kelompok Farmasi I Febrina Damanik Maulidya Beta Erna Fatmawati Puspanindya YP Evarianti Ratih Kusumastuti (7942)
Kelompok Farmasi I Febrina Damanik Maulidya Beta Erna Fatmawati Puspanindya YP Evarianti Ratih Kusumastuti (7942)

Kelompok Farmasi I

Febrina Damanik

Maulidya Beta

Erna Fatmawati Puspanindya YP Evarianti Ratih Kusumastuti

(7942)

)

(8011)

(8258)

(8265)

(8275)

(7

Obat Herbal Caspase A p o p t o s i s sel HeLa Curcuma

Obat Herbal

Caspase

Apoptosis

sel HeLa

Curcuma parviflora Wall

Parviflorene F

Obat Herbal Caspase A p o p t o s i s sel HeLa Curcuma parviflora
Obat Herbal Caspase A p o p t o s i s sel HeLa Curcuma parviflora

Antikanker

Cell C u l t u r e s Cytotoxicity Western - blot Analysis Caspase-3

Cell

Cultures

Cytotoxicity

Western - blot

Analysis

Caspase-3

Activity

Cell Culture Sel HeLa  kultur dlm medium Iscove’s Modified Dulbecco’s (Sigma) dg 5% FBS

Cell Culture

Sel HeLa kultur dlm medium Iscove’s Modified

Dulbecco’s (Sigma) dg 5% FBS & 4 mML

glutamine inkubasi pd 37°C

Cytotoxicity

Sel HeLa (6 x 1000 sel) treatment parviflorene F konsentrasi 0; 5; dan 8 µg/mL 24 jam pd 37°C medium dihilangkan cek sitotoksisitas

(metode FMCA menggunakan fluorescence

platereader)

Western Blot Analysis Sel HeLa Kontrol & Perlakuan dicuci dg PBS  dilisiskan dlm buffer

Western Blot Analysis

Sel HeLa Kontrol & Perlakuan dicuci dg PBS dilisiskan

dlm buffer sentrifugasi 10 min pd 4°C Supernatan

diambil, disimpan pd 80°C Protein dipisahkan dlm

12.5% SDSPAGE electrophoretically onto a Immun- blot PVDF membrane (Bio-Rad) blocking membran

inkubasi pd temperatur ruang dg rabbit polyclonal anti-DR5

(Sigma), rabbit polyclonal anti-caspase-8 (Stressgen), atau

mouse monoclonal anti-b-actin (Sigma) [antibodi primer]

dicuci dg TBST inkubasi temperatur ruang dg

horseradish peroxidase-conjugated anti-mouse IgG / anti-

rabbit IgG antibodies [ab sekunder ]dicuci dg TBST

immunoreactive bands dideteksi dg Immobilon western chemiluminescent HRP substrate (Millipore)

Caspase-3 activity (dg EnzCheck caspase-3 assay kit (Invitrogen)) Sel perlakuan dikultur dalam perviforene

Caspase-3 activity (dg EnzCheck caspase-3

assay kit (Invitrogen))

Sel perlakuan dikultur dalam perviforene

konsentrasi 4 µg/mL koleksi dilisiskan mereaksikan campuran 50 µl lysate + 50 µl

substrat caspase-3 + pelarut substrat z-DEVD-

R110 (inkubasi 30 min pd 37 ° C fluorescence

diukur pada eksitasi 485 nm dan emisi 538 nm

dengan fluorescence platereader

Caspase merupakan keluarga enzim sitolitik endopeptidase yang menghidrolisis ikatan peptida berupa residu aspartat, dengan

Caspase merupakan keluarga enzim sitolitik endopeptidase yang

menghidrolisis ikatan peptida berupa

residu aspartat, dengan sisi aktif berupa

sistein (Pulich & Allison, 2002)

Apoptosis  mekanisme alami kematian sel Karakter sel berubah : • kromatin berkondensasi dan terfragmentasi

Apoptosis mekanisme alami kematian sel

Karakter sel berubah :

kromatin berkondensasi dan terfragmentasi

Sitoskeleton rapuh,

membran nukleus hilang.

---->> menghasilkan suatu badan apoptotic perubahan kimiawi difagositosis oleh makrofag

Dalam mekanisme apoptosis terjadi serangkaian

reaksi enzimatis berantai (cascade) yang melibatkan

banyak jenis protein.

o o Jalur ekstrinsik  death ligand berikatan dengan reseptornya, interaksi ini menyebabkan caspase-8 mengaktivasi

o

o

Jalur ekstrinsik death ligand berikatan dengan reseptornya, interaksi ini menyebabkan caspase-8 mengaktivasi procaspase-3

menjadi caspase-3.

Jalur intrinsik keluarnya sitokrom-c dari mitokondria.

menginduksi Apaf-1 untuk berikatan dengan procaspase-9. I

Interaksi procaspase-9 dengan Apaf-1 ini mengaktivasi procaspase-9

menjadi caspase-9 yang mengaktivasi caspase-3. Selanjutnya, caspase-3

inilah yang menjadi eksekutor kematian sel .

Intrinsic Pathway

Intrinsic Pathway

Extrinsic Pathway

Extrinsic Pathway
Parviflorene F mampu meningkatkan aktivitas caspase sehingga berkompetensi menginduksi sel HeLa bisa untuk apoptosis

Parviflorene F mampu

meningkatkan aktivitas caspase

sehingga berkompetensi

menginduksi sel HeLa bisa untuk

apoptosis sehingga Parviflorene

dapat dimanfaatkan sebagai obat

herbal anti kanker.

Lavrik IN, A Golks, and PH Krammer. 2008. Caspases : pharmacological manipulation of cell death.

Lavrik

IN,

A Golks,

and

PH

Krammer.

2008.

Caspases

:

pharmacological manipulation of cell death. Science in

Medicine The JCI Textbook of Molecular Medicine. Edited by

: AR Marks and US Neil. Jones and Barlett Pub : Sudbury.

Ohtsuki, T., M. Tamaki., K. Toume., and M. Ishibashi. 2007. A

novel sesquiterpenoid dimer parviflorene F induces

apoptosisby up-regulating the expression of TRAIL-R2 and a

caspase-dependent mechanism. Journal of Bioorganic & Medicinal Chemistry. 16 (2008) : 1756-1763.