AISLAMIENTO, CUANTIFICACION E IDENTIFICACION DE PROBIOTICOS A PARTIR DE UN PRODUCTO COMERCIAL RESUMEN La implementacin de probioticos en la industria alimentaria, ha sido de gran importancia

en el mundo en cuanto se refiere a la salud, al incluirlos en alimentos comnmente consumibles como los son los yogures, los cuales poseen un alto nivel nutricional, los probiticos le permitirn aportar valor aadido a sus productos sin que se vean alteradas sus caractersticas sensoriales. Son considerados como probioticos a los microorganismos pertenecientes al grupo latobacillus y bifidobacterium, y son los ms usados en la industria de los alimentos. En la prctica desarrollada en el laboratorio de microbiologa de los alimentos, se procedi a hacer un estudio de la presencia de lactobacillus en el yogur con probioticos NORMANDY, este se someti a una serie de diluciones y a continuacin, se realiza una siembra con agar MRS por profundidad, se paso a incubar y posteriormente hacer el conteo de colonias las cuales fueron adquiridas en un proceso de anaerobiosis. Despus de la obtencin de las colonias, se realizaron pruebas de confirmacin, por medio de pruebas bioqumicas como la tincin de Gram, catalasa, motilidad, VPRM, indol, se busco identificar la cantidad de cultivo probiotico que contena el yogur analizado. Palabras claves: Probioticos, yogures, agar MRS, Lactobacillus, bifidobacterium, anaerobiosis, pruebas bioqumicas. ABSTRACT Implementation of probiotics in the food industry, has been of great importance in the world as it relates to health, commonly included in consumables such as food are yogurt, which have a high nutritional value, will allow you to bring probiotics value to their products to be altered sensory characteristics. Probiotics are considered to belong to the group of microorganisms lactobacillus and bifidobacterium, and are most commonly used in the food industry. In practice developed in the laboratory of food microbiology, proceeded to make a study of the presence of lactobacillus in yogurt with probiotics NORMANDY, this was subjected to a series of dilutions and then performing a MRS agar seeded with depth, step-hatching and subsequently make counting colonies which were acquired in an anaerobic process.

After obtaining the colonies, were tested for confirmation by biochemical tests such as Gram stain, catalase, motility, VPRM, indole, we tried to identify the amount of culture yogurt containing probiotic analyzed. Keywords: probiotics, yogurt, MRS agar, Lactobacillus, Bifidobacterium, anaerobic biochemical tests.

INTRODUCCIN Los llamados productos probiticos contienen microorganismos vivos y activos una vez que colonizan el intestino. Esto a diferencia de los prebiticos, los cuales estimulan la accin bacteriana, o los simbiticos (asociados a ambas categoras). Los probiticos son una buena alternativa, natural y sin efectos secundarios para mejorar sensiblemente el funcionamiento intestinal y, por extensin, optimizar nuestra salud, la cual se ve afectada por el estrs, los malos hbitos alimentarios y el abuso de antibiticos, slo algunos de los factores que pueden afectar negativamente el necesario equilibrio de nuestra flora intestinal. Estos microorganismos, son de gran aplicabilidad para la salud la implementacin de estos cultivos en productos alimenticios ayudan a la prevencin de enfermedades y previenen inflamaciones en el colon. Las especies de Lactobacillus y Bifidobacterium son las ms usadas como probiticos, pero la levadura Saccharomyces cerevisiae y algunas especies de E. coli y Bacillus tambin pueden ser usadas para este fin, Las bacterias de cido lcticas (LAB), entre las que se encuentra la especie Lactobacillus, se han usado para la preservacin de alimentos mediante fermentacin. En cuanto a la importancia de la actividad de los probiticos cabe decir que los cientficos han demostrado su efecto beneficioso en estados patolgicos como diarreas, sndrome de colon irritable, vaginitis, infecciones del tracto urinario, desrdenes inmunolgicos, estreimiento, gripe, intolerancia a la lactosa, hipercolesterolemia y alergia alimentaria, entre otras dolencias. Se les atribuye incluso propiedades para frenar las recidivas de tumores malignos en el colon y en las mamas siempre que el nivel de poblacin de microorganismos sea lo suficientemente alto -igual o superior a los 10 millones de clulas por gramo de contenido- para que ejerza adecuadamente su funcin. Por tanto, es imprescindible que la ingesta de probiticos sea diaria a fin de mantener

niveles elevados digestivo.

en

el

ecosistema

El colon contiene, carbohidratos dietarios no digeribles y algunos almidones resistentes, prebiticos utilizados como nutrientes por los microorganismos presentes en l (Macfarlane et al., 2006). Las bacterias que tendran estos efectos son las que cumplen con una serie de condiciones: existen naturalmente en la flora microbiana intestinal, pueden permanecer vivas durante el trnsito por el intestino delgado y el colon, tienen buena capacidad de adherencia al epitelio intestinal y no son patgenas. Las estudiadas corresponden principalmente a las que se encuentran en las leches fermentadas, como las mencionadas anteriormente y se utilizan comercialmente dentro de preparados lcteos (Lactobacillus johnsonii La1 y Lactobacillus GG) y tambin en pastillas. MATERIALES Y MTODOS Se verificaron los instrumentos apropiados a usar para la elaboracin del ensayo microbiolgico, determinacin de los microorganismos probiticos en el YOGUR DE PROBIOTICOS NORMANDY.

Al tener el material de trabajo adecuado se prosigue a tomar una muestra de 10 gramos del yogur con probiticos en 90 ml de agua peptonada y se homogenizo la mezcla.

Posteriormente se pasa a hacer las diluciones partiendo de la solucin madre hasta la disolucin 10-8 agregando 1 ml de la solucin a 9 ml en un tubo con agua peptonada.

diluciones 10-7 y 10-8 este proceso se hizo por duplicado. Fueron agregados a las cajas de petri 15 mL de agar MRS fundido y se realizo a hacer una uniformidad con movimientos suaves para que los microorganismos se repartieran en el rea total disponible.

A partir de las disoluciones, fue sembrado en cajas de Petri totalmente esterilizadas 1 ml de las ltimas dos

Posteriormente de tener todas las cajas con el cultivo y el agar listas, se esper

unos segundos a que el medio se solidificara por para adicionar una segunda capa de agar MRS lo cual generara una condicin de anaerobiosis.

Seguidamente fueron llevadas todas las placas a incubacin a 37C durante 48 horas, en un envase completamente cerrado, pasa asi generar un ambiente de mas anaerobiosis.

Disoluciones 10-8

Transcurrido el tiempo de incubacin se hizo un anlisis a los resultados obtenidos. Disoluciones 10-7

Se presumi que las colonias obtenidas en el anlisis eran probioticos y fueron realizadas las pruebas bioqumicas estipuladas en la gua. Tincin de Gram

Catalasa

Motilidad

Rojo Metilo

ANLISIS DE RESULTADOS En las cajas de petri no se visualizaron colonias tpicas de probioticos, aunque si

se presentaron colonias a las cuales se le realiz el conteo respectivo. Los datos de crecimiento fueron los siguientes: DILUCIN 10-7 N DE 0 COLONIAS 10-7 5 10-8 152 10-8 2

Lo anterior se puede atribuir a varios aspectos como lo fue una posible contaminacin microbiana en el ambiente o en algn utensilio al momento de sembrar las muestras. Durante el proceso de fabricacin de productos lcteos como el yogurt se desarrollan temperaturas de 75 C o ms para la homogenizacin de la leche, posteriormente para obtener el yogurt se agregan las bacterias probiticas con el fin de obtener ste producto fermentado. La agregacin de estos microorganismos debe hacerse a una temperatura de 45 C ya que es la ptima para su desarrollo y crecimiento. Debido a lo anterior pudo ser posible la muerte de los microorganismos probiticos en el momento de agregarlos durante el proceso a temperaturas mayores de 48 c por tiempo prolongados. El etiquetado de cualquier alimento es de gran importancia para el consumidor ya que en esta se puede observar la presencia o ausencia de ciertas caractersticas nutricionales que pueden llegar a ser decisivas para su salud. El hecho de que en un alimento se asegure la presencia de un componente y en estudios se compruebe que no est presente puede traer consigo mltiples demandas para la empresa productora del mismo y suspender su comercializacin. CONCLUSIONES

N=

[(

) (

)]

N=

[(

) (

)]

N=9,1*106 UFC/gr Se obtiene una cantidad estimada de microorganismos que no son probiticos de 9,1*106 UFC/gr. A los microorganismos obtenidos se les realiz las pruebas bioqumicas obteniendo para todos los casos resultados negativos, con lo cual se corrobora la no presencia de probiticos en el yogurt analizado. El yogurt analizado de marca comercial Normandy no cumpli con la cantidad especificada en su etiquetado de microorganismos probiticos (Streptococcus thermophilus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus y Bifidubacterium) ya que no presento crecimiento de los mismos en el periodo de incubacin de las muestras para las diluciones de 10-7 y 10-8.

No se encontr microorganismos probiticos en el yogurt Normandy lo cual representa un engao para el consumidor. La empresa debe implementar un estudio de laboratorio, que permita estandarizar el proceso de agregacin de los microorganismos probiticos en el yogurt de manera que arroje resultados positivos de presencia en cualquier momento de su vida til. Se present crecimiento de otros microorganismos no identificados en las muestras de yogurt, que pudo haber sido causado por contaminacin del ambiente, contaminacin de las personas implicadas en la toma de muestra y siembra de la misma y/o contaminacin de los utensilios del laboratorio. Las pruebas bioqumicas que se llevaron a cabo en los microorganismos dieron todas negativas, constatando as la ausencia de bacterias probiticas. BIBLIOGRAFIA PROBITICOS www.concienciaanimal.cl/paginas/temas/temas.php?d=9 76 PREZ I, ET AL., Aislamiento e identificacin de cepas del gnero Bifidobacterium presentes en productos lcteos fermentados tipo yogur. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiologa, 2012. 32: p. 29-36.

SANZ Y, COLLADO MC, AND DALMAU J, Probiticos: criterios de calidad y orientaciones para el consumo. Acta Pedriatr Esp, 2003. 61(9): p. 476-482.