Keandalan tembaga Somogyi-Shaffer-Hartmann berbagai (1, 2) reagen untuk penentuan glukosa dalam bahan biologis telah ditetapkan.

Adaptasi ini reagen untuk penggunaan kalorimetrik dapat dicapai oleh kelalaian dari iodida dan iodat dalam persiapan mereka, karena ini mengganggu reagen warna molibdat. Kelalaian ini tidak menghasilkan utama perubahan karakter reagen. KI, bagaimanapun, menghambat autoreduction dari tembaga dan dalam ketiadaan suatu hasil reagen stabil. Namun demikian, jika tembaga ditambahkan ke seluruh reagen pada hari penggunaannya, kesulitan ini dihindari. Ketika Somogyi mikro reagen (2) digunakan dengan cara ini dengan hampir semua dari reagen fosfomolibdat berbagai proporsionalitas, sangat memuaskan ditemukan antara kepadatan warna dan glukosa diambil alih berbagai nilai-nilai. Namun, semua reagen fosfomolibdat mencoba meninggalkan banyak yang diinginkan di reproduktibilitas dari waktu ke waktu dan tidak memiliki yang diinginkan stabilitas warna. Oleh karena itu kami mencoba reagen berbagai warna, yang menyebabkan pengembangan dari reagen arsenomolybdate baru. Ketika reagen ini digunakan dengan Reagen mikro Somogyi, itu memberikan stabilitas memuaskan dan reproduktifitas warna. Dengan ini berarti telah memungkinkan untuk memanfaatkan reagen tembaga dalam prosedur fotometrik untuk hampir semua penggunaan dimana titrimetri prosedur disesuaikan. Ini termasuk gula jaringan, glikogen, urin penurunan yang setara, maltosa, asam glukuronat, dll Namun, penentuan diastase belum berhasil karena efek dari tercerna pati pada kejelasan solusi berwarna akhir. Reaksi yang terlibat dalam reaksi molibdenum biru pasti dan di luar ruang lingkup laporan ini. Woods dan Mellon (3) membahas dan memberikan referensi kepada berbagai penafsiran dari reaksi. 1. Tembaga Reagen A. Larutkan 25 gram. N & C03 (anhidrat), 25 gram. dari Rochelle garam, 20 gram. dari NaHCOs, dan 200 gram. dari NaiSOa (anhidrat) di sekitar 800 ml. air dan encer sampai 1 liter. Saring jika perlu 'Solusi ini harus disimpan di mana suhu tidak akan jatuh di bawah 20. ". A sedimen bisa terbentuk setelah beberapa hari. Ini dapat disaring tanpa merugikan untuk reagen. Tembaga Reagen B. 15 persen CuSO4.5HzO mengandung satu atau dua tetes asam sulfat pekat per 100 ml. 2. Arsenomolybdate reagen warna. Larutkan 25 gram. dari ammonium molibdat dalam 450 ml. air suling, tambahkan 21 ml. H & terkonsentrasi SO + campuran, tambahkan 3 gram. dari NazHAsOd.7Hz0 dilarutkan dalam 25 ml. dari HzO, campuran, dan tempatkan dalam inkubator pada 37 "selama 24 sampai 48 jam. Gambar. 1 menunjukkan kemajuan pembentukan senyawa chromogenic selama inkubasi pada 37 ". Jika reagen yang dibutuhkan dengan cepat, prosedur alternatif adalah untuk memanaskan sampai 55 "untuk sekitar 25 menit. Namun, pengadukan harus cukup untuk mencegah local overheating, jika dekomposisi th'e chromogen mungkin terjadi. Ini disertai dengan pengendapan senyawa kuning cerah. Itu Prosedur pertama telah seragam berhasil dan merupakan salah satu yang disarankan; yang kedua adalah nyaman, dan dengan persiapan tertentu arsenate natrium hasil reagen yang, meskipun berguna, lebih rendah dalam pengembangan warna yang potensial kepada mereka disiapkan oleh prosedur pertama. Reagen ini harus disimpan dalam gelas-tutup brown bottle.2 3. 5 persen ZnS04.6HzO. 4. Sekitar 0,3 N Ba (OH) 2. Solusi seng dan barium harus disesuaikan sehingga 5 ml. seng membutuhkan antara 4,7 dan 4,8 ml. barium untuk menghasilkan merah muda pasti untuk fenolftalein. Seng harus diencerkan sampai 20 atau 25 ml. dengan H20 dan Ba (OH) z

ditambahkan setetes demi setetes dengan konstan pencampuran selama titrasi. Simpan dalam botol dilindungi oleh soda kapur dari karbon dioksida dari udara. Hal ini nyaman untuk memiliki pengaturan untuk pengiriman langsung dari Ba (OH) 2 menjadi 5 ml. buret lulus ke 0,01 atau 0,02 ml. Filtrat darah dipersiapkan sebagai berikut? Tambahkan 1 volume darah ke 15 volume air, aduk, tambahkan 2 volume Ba, (OH) 2 campuran, dan setelah campuran telah berubah coklat tambahkan 2 volume ZnSOa dan campuran. Setelah beberapa menit Campuran dapat disaring, filtrat agak lebih dapat dijamin dengan awal sentrifugasi. Untuk jari-tip darah, seseorang dapat mencuci 0,1 ml. dari darah dari pipet dikalibrasi "mengandung" menjadi 1,5 ml. air yang terkandung dalam botol kecil atau tabung. Setelah 0,2 ml. masing-masing Ba (OH) 2 dan ZnS04 adalah ditambahkan seperti dijelaskan di atas, campuran disentrifugasi. Filtrat kemudian ditarik ke dalam 1 ml. pipet berujung dengan kapas dicuci. 1 ml. filtrat dipipet ke dalam tabung reaksi-sempit lulus pada 25 ml. Tabung darah biasa Folin-Wu gula nyaman tetapi tidak essential.41 ml. dari campuran (disiapkan pada hari penggunaan) dari 25 bagian Reagen A ke 1 bagian dari B Reagen ditambahkan. Karena buku ini terakhir ini tidak kritis, buret atau pipet ukur dapat digunakan. 1 ml. porsi yang sesuai standar dan 1 ml. air suling, untuk melayani sebagai kosong, diatur dalam cara yang sama. Solusi yang dicampur dan dipanaskan selama 20 menit dalam mendidih air mandi. Pada akhir 20 menit tabung tersebut didinginkan dalam panci dingin air. 1 ml. dari reagen arsenomolybdate kemudian ditambahkan ke masing-masing; a mengukur pipet nyaman dan memadai untuk pengukuran ini .. itu warna berkembang sangat pesat dan akan selesai pada waktu yang menyeluruh pencampuran dan evolusi * CO selesai. Campuran tersebut kemudian diencerkan untuk menandai, dicampur, dan membaca dalam kalorimeter fotolistrik pada 500 atau 520 mp. Fotometer disesuaikan sehingga berbunyi 100 persen transmisi melalui kosong. Warnanya sangat stabil dan karena itu dapat dibaca di kenyamanan. Stabilitas warna adalah mutlak dan tidak relatif, yang kepadatan kekosongan serta solusi lebih dalam berwarna tersisa tidak berubah dengan waktu. Ini telah praktek kami untuk menjalankan penentuan duplikat pada darah semua. gula dan untuk menjalankan setiap penentuan urin pada dua tingkat pengenceran. Di kami catatan untuk jangka waktu 6 bulan, meliputi lebih dari 2000 penentuan, sebuah penyimpangan 3 persen antara duplikat jarang. Dalam kebanyakan kasus penyebaran adalah kurang dari 1,5 persen dari jumlah yang ditentukan. Kami secara rutin melakukan t.hrough sepasang standar dan kosong dengan setiap set dan sekali setiap hari tiga pasang standar yang disertakan, karena ini kita gunakan 0,05, 0,15, dan 0,3 mg. glukosa per ml, sesuai dengan 1 ml.. dari pengenceran 1:20 darah mengandung 100, 300, dan 600 mg. per 100 ml. masing. Variasi dalam nilai densitas untuk standar ini dari satu batch reagen untuk lain tidak pada dasarnya lebih besar daripada yang dihadapi dari hari ke hari dengan reagen yang sama. Penyebaran maksimum nilai densitas memiliki sudah sekitar 6 persen. Biasanya koefisien kepadatan standar dapat diprediksi dengan 1 atau 2 persen presisi. Data Perwakilan menunjukkan stabilitas warna yang dikembangkan diberikan dalam Tabel I. Kepadatan optik sesekali diperiksa sebagai sebagai akhir 3 hari setelah pembangunan, ketika hanya perubahan kecil dari nilai awal ditemukan. Tabel II menunjukkan kalibrasi yang khas menunjukkan proporsionalitas penting antara kepadatan optik dan glukosa yang diambil. Para densitas warna yang dibaca dalam spektrometer fotolistrik (berdasarkan Gaertner Model 227 monochrometer) dalam tabung kalorimeter Evelyn pada panjang gelombang dari 500 RNP, dengan lebar celah 0,1 mm. Namun, lain laboratorium telah menggunakan Filter 520 dengan kalorimeter Evelyn berhasil untuk tujuan

ini. Pada saat ini gelombang-panjang penyerapan cahaya jauh dari maksimal, yang terletak di 660 RNP (Gambar 1). Gelombang-Panjang 500 RNP dipilih karena itu mewakili kompromi yang memuaskan antara sensitivitas yang diinginkan faktor-faktor seperti kosong karena reagen, reoksidasi oksida cuprous, dll Sensitivitas dapat ditingkatkan lebih dari 4 kali hanya dengan membaca cahaya transmisi pada 660 RNP. Penggunaan reagen warna untuk pengukuran tembaga berkurang terbentuk dalam reagen Somogyi dianggap hanya sebagai alternatif untuk iodometri titrasi. Dalam batas-batas kesalahan dari dua prosedur, hasil setara telah dijamin dalam semua 'aplikasi tetapi pengukuran diastatic. aktivitas. Karakteristik dari reagen yang tersedia dalam bahasa aslinya artikel (1, 2). Tiga puluh sembilan spesimen darah berjalan secara paralel dengan prosedur di atas dan dengan metode titrimetri Somogyi menunjukkan rata-rata 155,7 mg. persen untuk titrasi melawan 155,9 mg. persen untuk teknik fotometrik. Standard error dari perbedaan cara adalah 0,007. Darah gula berkisar 45-585 mg. per 100 ml. dan termasuk spesimen dari normal dan diabetes burung hantu, anjing, monyet, dan manusia. Darah yang sama filtrat digunakan untuk kedua penentuan. Meskipun kita belum pernah menggunakan prosedur dengan kalorimeter Duboscq, ada tampaknya tidak ada alasan mengapa hal itu tidak harus menawarkan beberapa keunggulan dibandingkan metode yang biasa. Sebuah sumber filter atau cahaya kuning seperti yang digunakan oleh Folin (5) mungkin akan memfasilitasi perbandingan standar dengan tidak diketahui. RINGKASAN Sebuah metode fotometrik telah dijelaskan untuk estimasi glukosa (atau setara reduksi) dengan reagen tembaga dan arsenomolybdate suatu reagen. Kepadatan optik warna dikembangkan adalah sebanding dengan glukosa yang diambil dan stabil selama jangka waktu yang lama.