BAB I Pendahuluan

1.1 Latar belakang

Terapi gen adalah suatu teknik yang digunakan untuk memperbaiki gen-gen mutan (abnormal/cacat) yang bertanggung jawab terhadap terjadinya suatu penyakit. Pada awalnya, terapi gen diciptakan untuk mengobati penyakit keturunan (genetik) yang terjadi karena mutasi pada satu gen, seperti penyakit fibrosis sistik. Penggunaan terapi gen pada penyakit tersebut dilakukan dengan memasukkan gen normal yang spesifik ke dalam sel yang memiliki gen mutan. Terapi gen telah berkembang pesat selama 4 dekade terakhir, terapi gen telah pindah dari preklinik untuk studi klinis untuk berbagai penyakit, yang salah satunya adalah kanker. Kanker adalah suatu penonjolan atau pertumbuhan tidak wajar yang dapat terjadi pada setiap bagian tubuh. Kanker adalah pertumbuhan sel-sel jaringan tubuh yang tidak normal, berkembang dengan cepat, tidak terkendali, dan akan terus membelah diri, selanjutnya menyusup ke jaringan sekitar (invasive). Kanker merupakan penyebab kematian terbanyak di kalangan masa kini. Telah banyak ditemukan pengobatan untuk kanker, namun masih memiliki beberapa kekurangan. Salah satu metode pengobatan kanker terdahulu adalah kemoterapi. Akan tetapi, metode kemoterapi ini memiliki beberapa kelemahan, salah satunya dapat membunuh sel-sel non-kanker. Baru-baru ini telah ditemukan sebuah pengobatan terapi gen baru yang melibatkan herpes simplex virus. Virus herpes simplex ini telah dimodifikasi sedemikian rupa. Sehingga dapat membunuh sel kanker dengan tepat tanpa mempengaruhi sel-sel yang normal. Walaupun terapi gen merupakan pendekatan baru dalam pengobatan kanker, yang saat ini masih bersifat eksperimental. Sejak mengetahui bahwa kanker merupakan penyakit akibat mutasi gen, para ahli mulai berpikir bahwa terapi gen tentu efektif untuk mengobatinya. Apalagi kanker jauh lebih banyak penderitanya dibandingkan dengan penyakit keturunan akibat kelainan genetis yang selama ini diobati dengan terapi gen.

1.2 Tujuan penelitian Makalah ini bertujuan untuk memberikan informasi kepada pembaca mengenai pemanfaatan HSV-TK (Herpes SimplexVirus-1 Thymidine Kinase) dalam terapi gen

bunuh diri. Terapi gen bunuh diri yang akan dijelaskan dalam makalah ini adalah terapi pengobatan kanker menggunakan virus termodifikasi yang terfokus pada perkembangan pembentukan kanker.

1.3 Metode penulisan Metode penulisan yang digunakan dalam menyusun makalah ini adalah metode pustaka dan studi literatur, yaitu dengan mencari dan mengumpulkan informasi penting dari berbagai sumber seperti buku-buku perpustakaan dan website atau situs-situs internet yang terkait.

1.4 Sistematika penulisan - Kata pengantar - Daftar isi 1. Pendahuluan 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 2. Isi 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. 2.7. 3. Penutup 3.1. 3.2. Daftar pustaka Kesimpulan Saran Pengenalan Terapi Gen Bunuh Diri (Suicide gene) Sifat Gen Bunuh Diri (Suicide gene) Tipe Gen Untuk Terapi Mode aksi HSV-TK Efek Bystander Yang Dimediasi Oleh Gap Junction Variasi Pendekatan HSV-TK Asli (Orisinal) Kerugian Penggunaan Metode Suicide Gen Terapi Latar belakang Tujuan penelitian Metode penulisan Sistematika penulisan

BAB II ISI

2.1 Pengenalan Terapi Gen Bunuh Diri (Suicide gene)

Terapi gen bunuh diri untuk pengobatan kanker yang diusulkan oleh Moolten, dimulai lebih dari 25 tahun yang lalu dan telah mendapatkan momentum dengan variasi kecil dalam teknologi asli. Pada statistik saat ini, dari 1.550 uji klinis terapi gen yang pernah dilakukan, telah dilaporkan di antara mereka ternaya sebanyak 7% menggunakan terapi gen bunuh diri. HSV-TK adalah gen bunuh diri yang paling baik dikarakterisasi atau dikenali, yang digunakan untuk terapi kanker dan penyakit lain tanpa memicu toksisitas sistemik yang signifikan. Obat-obat kemoterapi yang digunakan untuk terapi kanker dapat menimbulkan berbagai masalah karena mereka tidak bertindak diskriminatif dalam modus tindakan. Obat yang tersedia saat ini di pasar tidak spesifik untuk pengobatan kanker sehingga tingkat

konsentrasi fungsional untuk pengobatan tumor tidak dapat dicapai tanpa mengabaikan target tingkat toksisitas. Hal ini berlaku khusus untuk tumor padat di mana vaskularisasi sangat buruk dan nekrotik di pusat tumor karena rendah tingkat oksigen dan pasokan nutrisi. Namun, ketika obat ini diaktifkan oleh reaksi enzimatik lokal secara tepat waktu, metabolit yang dihasilkan beracun untuk jaringan. Gen-gen bunuh diri yang paling banyak digunakan adalah Herpes Simplex Virus-1 timidin kinase (HSV-TK), dan diaminase sitosin (CD) dari virus Herpes simplex viruz Herpes atau bakteri Escherichia coli masing-masing. Penelitian sebelumnya telah difokuskan pada mekanisme inisiasi dan perkembangan tumor. Dimulai dengan mutasi dari 1 atau beberapa gen, kemudian secara bertahap mencapai lebih banyak mutasi genetik dan ketidakstabilan genomik selama evolusi tumor atau kanker. Hampir semua gen jatuh pada 2 kategori - onkogen (berasal dari proto-onkogen) dan gen supresor tumor. Ada banyak cara untuk mengobati berbagai tumor mulai dari jinak sampai metastasis. Diantaranya dengan melakukan operasi dan diikuti dengan terapi obat kemoterapi adalah metode yang digunakan secara luas sebagai pilihan yang akan merusak DNA dan membuat sel-sel apoptosis.

Selain itu, tumor dapat disembuhkan dengan cara yang lebih halus dengan mengembalikan fungsi gen supresor tumor atau menonaktifkan onkogen, untuk memperlengkapi sel kekebalan untukbertindak dan mengatur turun angiogenesis dan kegiatan metastasis. Tumor padat dapat diobati dengan pengiriman gen bunuh diri dengan intra tumor. Produk protein dari gen ini mengkatalisis pembentukan metabolit yang sangat beracun menyusul penerapan beberapa prodrug dengan toksisitas yang lebih rendah. Hal ini menyebabkan apoptosis atau kematian sel diprogram dari sel yang diobati. Sel-sel apoptosis mengundang sel kekebalan untuk lebih jauh membersihkan zona tumor dengan fagositosis. Terapi gen bunuh diri juga dikenal sebagai terapi Gene Directed Enzyme / Prodrug therapy (GDEPT) atau sebagai Gene Prodrug Activation Therapy (GPAT). GDEPT dapat mengambil bentuk CBT (cell Targets in Gene Therapy) di mana sel-sel tumor terdekat dimodifikasi untuk mengekspresikan gen bunuh diri atau tumor itu sendiri mengungkapkan terapi gen bunuh diri. GDEPT juga dapat digunakan untuk vektor virus yang dengan sendirinya membawa gen bunuh diri. GDEPT (kemoterapi molekuler) memiliki keunggulan dibandingkan terapi klasik.

Karena hanya sel tumor dimiliki enzim yang mengkonversi prodrug menjadi metabolit aktif, meningkatkan tingkat toksisitas beberapa kali lipat di dalam tumor sedangkan sebagian besar dari sel-sel inang yang terpengaruh. Dengan menggunakan elemen tumor peraturan spesifik (promotor) obat dapat diaktifkan hanya pada sel tumor telah menggunakan teknik di mana obat hanya istimewa diaktifkan di daerah hipoksia tumor. Dengan memanfaatkan efek pengamat, kerusakan lebih banyak sel-sel tumor telah diberikan.

2.2 Sifat Gen Bunuh Diri (Suicide gene)

Untuk dipertimbangkan sebagai gen bunuh diri, enzim produk harus tidak ada atau hadir dalam konsentrasi rendah (low ekspresi) dalam host. Ini harus memiliki aktivitas katalitik yang tinggi, sehingga sel-sel tumor dapat mengkonversi prodrug ini bahkan dalam konsentrasi substrat yang rendah (kcat tinggi, Km rendah). Untuk dipertimbangkan sebagai agen terapi yang ideal, seharusnya / memiliki kriteria sebagai berikut :

1. Obat harus tidak toksisk atau sangar sedikit beracun sebelum aktivasi dan sangat beracun setelah aktivasi enzimatik. 2. Prodrug harus mampu secara efektif menembus tumor, didistribusikan dan diambil oleh sel-sel individual. 3. Ini harus memiliki afinitas tinggi untuk gen bunuh diri ditransduksi dan afinitas rendah untuk enzim seluler. Enzim HSV-TK memiliki afinitas 1000 kali lebih besar untuk GCV substrat dibandingkan sel inang TK. 4. Metabolit harus memiliki waktu paruh yang memanjang cukup lama untuk membunuh tumor sehingga obat yang diberikan tidak hilang sebelum mencapai konsentrasi.

2.3

Tipe Gen Untuk Terapi

Ada beberapa terapi gen bunuh diri, diantaranya HSV1-TK dan sitodin deaminase adalah penting. Cytidine deaminase atau sitosin deaminase (CD) adalah enzim yang ditemukan di beberapa bakteri dan jamur yang mendeaminasi sitosin menjadi urasil. Hal ini juga dapat mengkonversi zat tidak beracun 5-fluorocytosine (5-FC) menjadi senyawa beracun 5-fluorouracil(5-FU). Sel mamalia tidak mengandung CD. Karakteristik ini memungkinkan obat dapat digunakan untuk terapi gen bunuh diri terutama untuk pengobatan kanker. Sensitivitas tumor terhadap obat CD tergantung pada dosis, durasi dll. HSV-TK: TK mengkonversi GCV menjadi metabolit beracun yang membunuh sel-sel sehingga banyak digunakan untuk terapi kanker. HSV1-TK juga dapat memfosforilasi analog nukleosida berbagai GCV seperti acyclovir, gansiklovir, dan penciclovir.

2.4

Mode aksi HSV-TK

HSV-1 meng-encode sekitar 70 gen dan beberapa gen awal. TK adalah salah satu gen awal (Immediatte Early Gen/IE) yang mengkode 376 asam amino yang rantai panjang. Gen IE dapat didefinisikan sebagai gen yang menunjukkan ekspresi yang cepat akan tetapi tidak tetap dalam hal keberadaan sintesis protein de novo. HSV1 virus neurotropik (lebih menyerang sel-sel saraf dibanding menghindari sel imun) dan TK diperlukan ketika virus masuk ke dalam siklus litik dari dorman tahap dalam sel-sel saraf. Selama terapi gen bunuh diri TK, GCV diinjeksi sistemik dan setelah mencapai daerah tumor, obat akan mengalami monofosforilasi oleh HSV-TK, dan fosforilasi lebih lanjut dilakukan oleh

kinase sel inang. Hasil fosforilasi nya adalah deoxythymidine trifosfat yang sangat toksik. GCV hasil fosforilasi ini akan berkompetisi dengan substrat triphospat untuk menduduki DNA polymerase. Selanjutnya akan terjadi penghentian sintesis DNA, yang akhirnya sel akan mati dengan sendirinya.

2.5

Efek Bystander Yang Dimediasi Oleh Gap Junction

Efek Bystander memperkuat efek toksik berkali-kali lipat. Bentuk toksik dari obat harus memiliki properti diffusible sehingga dapat membunuh non-transduksi sel tumor melalui efek bystander.

2.6

Variasi Pendekatan HSV-TK Asli (Orisinal)

Terapi gen bunuh diri menggunakan HSV1-TK dapat dilakukan untuk mengobati glioma, kanker prostat, leukimia, dan limfoma. Potensi virus ini ditingkatkan dengan menerapkan berbagai strategi. Sebuah pendekatan dilakukan untuk melakukan fusi protein TK (Timidin Kinase) dan protein viral tegumen VP22 (untuk meningkatkan efek yang dapat diamati) dan penggunaan fusi protein HIV TAT dan TK (lebih stabil dibandingkan versi asli).

2.7

Kerugian Penggunaan Metode Suicide Gen Terapi

GCV memiliki efek toksik terutama pada sel-sel sumsum tulang. Oleh karena itu diberikan dalam konsentrasi yang lebih rendah dan telah digunakan dalam studi hewan model. Kerugian dari menggunakan GCV adalah bahwa meskipun GCV mudah terdifusi, namun metabolit nya yaitu trifosfat, tidak terlarut dalam membran dan tidak dapat menyebar ke sekitar sel. Namun, efek bystander pada sel tetangga mengangkut trifosfat diangkut ke sel-sel terdekat melalui gab junction.

BAB III PENUTUP

3.1 Kesimpulan
Terapi gen bunuh diri adalah metode pilihan untuk ablasi sel-sel dalam berbagai penyakit, termasuk kanker. Tapi seperti teknik lain metode ini tidak sepenuhnya aman dan berkhasiat. Terapi gen HSV-TK masih terus dikembangkan dengan mengubah-ubah metode agar lebih aplikatif dalam berbagai sel dan tujuan.

Daftar Pustaka

Dilip Dey dan Gregory R.D. Evans.2011. Suicide Gene Therapy by Herpes Simplex Virus-1 Thymidine Kinase (HSV-TK.).USA

Kata Pengantar

Puji Syukur penulis panjatkan Tuhan yang Maha Esa atas berkat dan rahmatnya sehingga makalah Bioteknologi dengan judul : Terapi Gen Menggunakan Virus Herpes Simplex-1 Timidin Kinase (HSV-TK). ini dapat terselasikan dengan baik. Sepanjang proses pembuatan makalah, Penulis menerima dukungan dari banyak pihak. Oleh karena itu, Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada : 1. Kedua orang tua yang selalu mendukung penulis selama pengerjaan maklah ini 2. Ibu Amarila Malik Si sebagai dosen mata kuliah Bioteknologi Farmasi 3. pihak pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah membantu Penulis dalam menyelesaikan makalah ini. Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu, Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak. Penulis berharap semoga makalah untuk mata kuliah Bioteknologi Farmasi ini dapat berguna bagi seluruh pihak, terutama dalam bidang farmasi.

Depok, Februari 2013

Makalah Mata Kuliah Bioteknologi Farmasi

Terapi Gen Menggunakan Virus Herpes Simplex-1 Timidin Kinase (HSV-TK)

Kelompok
1. Aldi Putra M 2. Cynthia Catarina P 3. Kristiana Yanuar N (1006705155) 4. Titis Danastri

Fakultas Farmasi Universitas Indonesia Depok 2013