MINISTERUL SNTII I PROTECIEI SOCIALE AL REPUBLICII MOLDOVA CENTRUL NAIONAL DE TRANSFUZIE A SNGELUI UNIVERSITATEA DE STAT DE MEDICIN I FARMACIE NICOLAE

TESTEMIANU

INSTRUCIUNEA privind determinarea grupului sanguin dup sistemul AB0

APROB Ministrul Sntii i Proteciei Sociale _________________________Ion ABABII _________ ___________________2006

Chiinu, 2006

Au participat la elaborare:

Centrul Naional de Transfuzie a Sngelui

Larisa Catrinici director Svetlana Cebotari - vicedirector, manager calitate Svetlana Crciun medic izoserolog, laborator Izoserologie

Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu

Lucia Andrie d.h..m., profesor universitar, specialist netitular al MS i PS n domeniul Imunologiei, efa laboratorului Alergologie i Imunologie Clinic Prezenta instruciune cuprinde descrierea tehnicilor imunologice utilizabile, mijloacele de recoltare a probelor sanguine, caracteristica materialelor necesare pentru examinare, controlul i rezultatele obinute n urma examinrii. Este destinat studenilor n medicin, precum medicilor de diferite specialiti.

Recenzeni: eful catedrei Diagnostic de Laborator Clinic al USMF Nicolae Vasile Niguleanu Testemianu, d.h..m., profesor universitar eful laboratorului Imunologie i Imunochimie al Institutului de Ftiziopneumologie Chiril Draganiuc, d.h..m. Sergiu Ghinda Instruciunea este aprobat i recomandat pentru editare de Consiliul de Experi al Ministerului Sntii i Proteciei Sociale 21 iulie 2006

Introducere Grupa sanguindup sistemul AB0 se caracterizeaz prin diverse combinaii ale proprietilor antigenice specifice a eritrocitelor denumite aglutinogeni i anticorpilor anti-antigene eritrocitelor aglutinine, circulante n plasma sanguin. Sunt cunoscute 2 aglutinogene de grup A i B i dou aglutinine (anti-A) i (anti-B). Diferite combinaii ale aglutinogene i aglutenine formeaz 4 grupe sanguine dup sistemul AB0: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV). Determinarea grupelor sanguine se efectuiaz cu utilizarea serurilor izohemoaglutinante standard reagenilor ce conin anticorpi monoclonali, seruri hiperimune ale animalelor imunizate cu eritrocite A i B umane, lectinele (reagenii preparai din extrasele plantelor care conin proteine identice anticorpilor anti-A i anti-B) i eritrocitelor standard. Exist dou metode de determinare al grupelor sanguine dup sistemul AB0. 1. Determinarea grupelor sanguine cu ajutorul serurilor izohemaglutinante standard sau cu reageni ce conin anticorpi monoclonali. Aceast procedur este preventiv i se efectuiaz n seciile curative de instituiile medicale sau de grupul de pregtire a sngelui centrelor i seciilor de transfuzie a sngelui. 2. Determinarea grupei sanguine prin metoda ncruciat. Pentru aceast metod se utilizeaz eritrocite standard i ser izohemaglutinant standard sau reageni cu anticorpi monoclonali. Metoda dat permite stabilirea prezenei sau absenei aglutinogenilor A, B i aglutininelor i . Aprecierea rezultatului definitiv privind apartenena grupului sanguin dup sistemul AB0 se constat numai dup determinarea aglutinogenilor i aglutininelor prin metoda ncruciat, fiind obligatorie ! Determinarea grupei sanguine se va efectua de un medic cu o pregtire special n domeniul izoimunologiei. Rezultatele investigrilor izoserologice efectuate la bolnavi se vor documenta n fia medical a bolnavului de staionar cu indicarea datei i semntura persoanei care a efectuat aceast examinare. Grupa sanguin AB0 la donatori se determin la fiecare donare n dou etape (predonare cu utilizarea serurilor izohemaglutinante standard sau reagenilor monoclonali i postdonare prin metoda ncruciat). Rezultatele examinrii donatorului i sngelui donat se documenteaz n cartela donatorului, fia de eviden a rezultatelor examinrilor de laborator a sngelui donat cu indicarea datei i semntura persoanei, care a efectuat aceast examinare. Testarea grupei sanguine la donatori poate fi efectuat cu 2 serii de ser izohemaglutinant standard cu titru 1:32 i mai mare sau cu loturi diferite de anticorpi monoclonali. Determinarea grupelor sanguine, date generale. Principiul reaciei. Aglutinarea eritrocitelor de ctre anticorpii antieritocitari este exprimat prin formarea de hemaglutinate grunji vizibile cu ochiul liber.

Materiale necesare: plci cu godeuri din sticl, metal, ceramic sau material plastic, pipete Pasteur, baghete din sticl sau plastic, soluie izotonic (0,85%) de clorur de sodiu (soluie fiziologic), 2 serii de seruri standard izohemaglutinante a grupelor 0 (I), A (II), B (III) i AB (IV), eritrocite standard de grup 0 (I), A (II), B (III), anticorpi monoclonali anti-A, anti-B, anti-AB, taimer, etc. Condiii de efectuare a reaciei i prepararea prealabil a ingredienilor. 1. Reacia de hemaglutinare se efectuiaz la temperatura 15-250C ntr-o ncpere bine iluminat. 2. Flacoanele cu seruri standard se instaleaz ntr-un stativ cu 3 godeuri (sau n 2 stative la utilizarea a dou serii de ser de fiecare grup). n godeul n partea stng se instaleaz serul grupei 0 (I), n mijloc serul grupei A (II) i n cel din dreapta serul grupei B (III). Separat se instaleaz serul grupei AB (IV), utilizat ca control suplimentar. Acest set se complecteaz cu un tub sau flacon cu soluie fiziologic. n fiecare flacon se introduce cte o pipeta curat i uscat. 3. Pentru splarea baghetelor de sticl sau plastic i pipetelor Pasteur se prepar 2 pahare (150 ml) cu soluie fiziologic. 4. Sngele pentru cercetare se obine prin neptura degetului sau venepunciei. n cazul venepunciei sngele n volum 2-5 ml se colecteaz n eprubete fr stabilizator (anticoagulant) preventiv marcate cu iniialele individului. Se poate utiliza i sngele colectat cu stabilizator (soluie 4% de citrat de sodiu 0,25 ml la un ml snge). Tubul este lsat la temperatura camerei timp de 20 min pentru formarea cheagului cu separarea serului. n cazul necesitii de separare rpid a serului, tubul cu snge poate fi centrifugat la 1500-2000 rot/min timp de 10 min. n unele cazuri se admite pstrarea sngelui pe parcursul a 48-72 ore la temperatura 4-80C pentru cercetarea ulterioar. Sngele pentru testare trebuie colectat pn la hemotransfuzie graie faptului c n acest caz la utilizarea unui volum major a componenilor sanguine sau la transfuzie incorecta a sngelui a grupei 0 (I) medicul poate concluziona apartenena sanguin. 5. Pentru testarea aglutininelor (anti-A), (anti-B) se utilizeaz eritrocite standard conservate de grupa 0 (I), A (II), B (III), care nainte de utilizare se spal de 4 ori cu o soluie fiziologic prin centrifugare la 1000 rot/min pe parcursul 10 min. Eritrocitele splate n tuburi se instaleaz ntr-un stativ n ordinea urmtoare: ncepnd din stnga grupa 0 (I), A (II), B (III). Tehnica de lucru se realizeaz n dou variante: cu ajutorul serurilor izohemaglutinante standard, cnd se determin prezena sau absena aglutininogenelor i prin varianta ncruciat cu utilizarea eritrocitelor i serurilor izohemaglutinante standard. Determinarea grupelor de snge cu utilizarea serurilor izohemaglutinante standard.

n plane din dreapt se indic numele, prenumele persoanei investigate, iar ncepnd din partea stng se noteaz simbolul specialitii serurilor izohemaglutinante: 0 (anti-A+B), A (anti-B), B (anti-A). Sub fiecare simbol se depune cte 0,1 ml (o pictur mare) de ser izohemaglutinant standard grupa corespunztoare cu instalarea imediat a pipetei n flaconul respectiv. Cele dou serii de seruri standard sunt aranjate n dou rnduri una sub alta (vezi figura 1). Picturile de snge cercetate (0,01 ml) se depun cu o baghet de sticl/plastic alturi de pictura de ser izohemaglutinant standard. Coraportul dintre pictura de snge i volumul serului izohemaglutinant standard trebuie s fie 1:10. Pictura de snge se amestec cu cea de ser cu baghet, folosind de fiecare dat alt beior pentru omogenizare. Se poate folosi i o singur baghet, dar dup amestecul fiecrei picturi splm bagheta n vasul cu soluie fiziologic i se terge minuios cu tifon. Picturile obinute n urma omogenizrii vor avea un diametru de cel puin 1 cm. Ulterior placa este agitat prin nclinarea repetat cu pauze de 1-2 minute ntre agitri. Reacia este monitorizat timp de 5 minute, graie posibilitii unei hemaglutinri tardive, de exemplu, cu eritrocitele subgrupei A (II). Dup 3 minute n amestecul de picturi se adaug cte 0,05 ml soluie fiziologic, se omogenizez, apoi urmrim reacia pn la 5 minute. Controlul i interpretarea rezultatelor reaciei. Reacie de hemaglutinare poate fi pozitiv sau negativ. n cazul reaciei pozitive n primele 10-30 secunde, de obicei, dup amestecul reagenilor, apar aglutinate mici de culoare roie, care conin eritrocite aglutinate de anticorpi. Aglutinatele mici devin tot mai mari ca rezultat al aglomerrii lor, iar pictura marginal devine incolor. n cazul reaciei negative pe parcursul a amestecul rmn omogen colorat n rou fr semne de aglutinare. Rezultatul reaciei cu serul izohemaglutinant standard uneia i aceleai grupe a celor dou serii utilizate trebuie s coincid. La cercetarea cu utilizarea serurilor izohemaglutinante standard putem obine 4 variante a reaciei (tabela 1). 1. Dac serurile celor trei grupe au demonstrat reacie negativ, adic toate picturile au rmas difuz colorate n rou fr semne de aglutinare, atunci putem afirma, c sngele cercetat nu conine aglutinogenii A i B i aparine grupei 0 (I). 2. n cazurile apariiei aglutinrii cu serurile grupelor 0 (I) i B (III) i absente cu serul grupei A (II), putem afirma c sngele conine aglutinogenul A i aparine grupei A (II). 3. Reacia pozitiv cu serurile grupelor 0 (I) i A (II), iar negativ cu serul grupei B (III) d posibilitate s afirmm, c sngele cercetat conine aglutinogenul B aparinnd grupei B (III).

Tabela 1 Rezultatele posibile ale reaciei de hemaglutinare specifice cu serurile izohemaglutinante standard Sngele Seruri izohemaglutinante de grup cercetat aparine Seria 0 (I) A (II) B (III) AB (IV) grupei anti-A+B anti-B anti-A control 1 0 (I) 2 1 + + A (II) 2 + + 1 + + B (III) 2 + + 1 + + + AB (IV) 2 + + +
* Aprecierea rezultatelor grupelor de snge cu ajutorul a dou serii de seruri izohemaglutinante. Semnul + indic prezena aglutinrii, iar semnul - absena ei.

4. Rezultatele pozitive cu serurile celor trei grupe indic c sngele cercetat conine ambii aglutinogeni (A i B) i aparine grupei AB (IV). Dar n cazul dat, pentru excluderea aglutinrii nespecifice a eritrocitelor cercetate, e necesar un control suplimentar cu serul standard al grupei AB (IV). Pentru aceasta pe plac se depune 0,1 ml ser grupa AB (IV) i se adug 0,01 ml snge cercetat. Aceste dou picturi se amestec i reacia se monitorirzeaz 5 minute, periodic agitnd placa. Numai absena aglutinrii n aceast pictur i prezena ei n cele care conin serurile standard 0 (I), A (II) i B (III) permit aprecierea reaciei ca specific, iar sngele cercetat - identificat ca grupa AB (IV). Aceast variant de testare a grupei sanguine se folosete pentru investigare izoserologice n instituiile medicale ca metod prealabil. Determinarea grupelor sanguine prin metoda ncruciat cu utilizarea serurilor izohemaglutinante i eritrocitelor standard. Aceast variant de testare a grupelor sanguine permite identificarea aglutinogenilor n eritrocitele sngelui cercetat cu utilizarea serurilor izohemaglutinante standard i aglutininelor de grup i n ser cu ajutorul eritrocitelor standard. Ea este folosit pentru determinarea concludent a grupelor sanguine n laboratoarele instituiilor medicale. Materialele necesare, condiiile i prepararea prealabil a reagenilor vezi compartimentul precedent. Tehnica de lucru. Pentru cercetare se utilizeaz att serul, ct i eritrocitele individului investigat. Pe plac se noteaz numele i prenumele persoanei cercetate i simbolurile grupelor de snge: 0 (anti-A+B), A (anti-B), B (anti-A).

Sngele pentru cercetare este obinut prin venepuncie n volumul de 2-3 ml. Sngele obinut este centrifugat la 1500 rot/min pe parcursul 5-10 min pentru obinerea serului. Este posibil i varianta de instalarea n termostat (370C) a sngelui timp 10 min cu transferarea lui ulterioar la frigider cu temperatura 2-80C i separarea chiagului de la peretele tubului. Testarea aglutinogenelor i aglutininelor sngelui investigat este elucidat n figura 2. Sub simbolurile grupelor sanguine pe plane se picur cte 0,1 ml ser pentru cercetare , iar mai jos se picur ser izohemaglutinant standard de 2 serii fiecare grup cte 0,1 ml, astfel obinnd 6 picturi amplasate n dou rnduri cte 3, avnd semnificaie din stnga spre dreapta 0 (I), A (II), B (III). Alturi de picturile serului cercetat se amplaseaz cte 0,01 ml eritrocite standard grupelor 0 (I), A (II), B (III). Alturi de picturile cu seruri standard se amplaseaz cte 0,01 ml eritrocite a sngelui cercetat. Fiecare pereche de picturi este amestecat cu o baghet curat i uscat pn la omogenizarea complet a picturii. Plana este periodic nclinat peste 1-2 min cu monitorizarea reaciei pe parcursul a 5 min. Aglutinarea n picturile cu ser standard, ca regul, apare peste 10-30 sec, pe cnd aglutinarea n picturile unde se testeaz serul cu eritrocitele standard poate aprea tardiv (la sfritul minutei 5) graie unui titru minor de aglutinine n serul cercetat. Pe msura apariiei aglutinrii, dar numai devreme de 3 min, n picturile unde ea a aprut se adaug cte o pictur (0,05 ml) soluie fiziologic, se omogenezeaz, iar se urmrete reacia i agitarea planei pn la 5 min. Controlul i interpretarea rezultatelor reaciei. Evaluarea rezultatelor obinute cu serurile i eritrocitele standard trebuie s corespund, adic aglutinogenii i aglutininele constatate la cercetare aparin unei i aceleiai grupe. Pot fi posibile 4 variante (tabela 2). 1. Reacia pozitiv a serului cercetat cu eritrocitele standard ale grupelor A (II) i B (III) indic prezena aglutininelor i , absena aglutinogenilor e marcat prin reacia negativ cu serurile standard izohemaglutinante. Aceste fenomene sunt caracteristice grupei de snge 0 (I). 2. n cazurile cnd eritrocitele standard ale grupei B (III) sunt aglutinate de serul cercetat, iar eritrocitele pacientului - de serurile standard izohemaglutinante ale grupei 0 (I) i B (III), grupa de snge este A (II). 3. Dac cu ajutorul eritrocitelor standard se identific aglutinina , iar cu serurile standard aglutinogenul B, putem afirma c sngele cercetat aparine grupei B (III).

Tabela 2 Aprecierea rezultatelor testrii grupei sanguine cu utilizarea eritrocitelor i serurilor izohemaglutinante standard Eritrocite standard Seruri izohemaglutinante standard Sngele cercetat 0 A B 0 A B aparine (anti-A+B) (anti-B) (anti-A) grupei + + 0 (I) + + + + + A (II) + + + + + + B (III) + + + + + + AB (IV) + + + Controlul cu serul grupei AB (IV) rezultat negativ
* Semnul + indic prezena aglutinrii, iar - absena ei

4. n caz c serul cercetat nu aglutineaz eritrocitele standard ale celor trei grupe, iar cu ajutorul serurilor standard constatm prezena aglutininogenelor A i B la eritrocitele individului, presupunem prezena grupei de snge AB (IV). Pentru excluderea aglutinrii nespecifice utilizm serul de control a grupei AB (IV). n cazul dat reacia va fi negativ. Determinarea grupelor de snge cu ajutorul anticorpilor monoclonali anti-A, anti -B i anti AB. Anticorpii monoclonali sunt destinai pentru aprecierea grupelor de snge nlocuind serurile standard izohemaglutinante. Testarea grupei sanguine se efectuiaz n sngele nativ cu i fr conservant, inclusiv i colectat din deget. Se utilizeaz metoda de hemaglutinare pe plane. Pe ultima se indic numele, prenumele individului, simbolurile grupelor sanguine. Metodologia reaciei cu anticorpi monoclonali este elucidat n figura 2. Materialele necesare i condiiile de testare vezi compartimentul elucidat anterior. Tehnica de lucru. Pe plan se indic numele, prenumele celui investigat i specialitatea reactivelor, ulterior picurm cte o pictur mare (0,1 ml) de reageni cu anticorpi monoclonali anti-A, anti-B i anti-AB, alturi amplasm o pictur mic de snge cercetat (0,03 ml), amestecm picturile cu baghete, omogenizm coninutul picturilor prin nclinarea planei. n cazurile reaciei pozitive constatm o aglutinare a eritrocitelor la 3-6 sec, care sub form de agregate roii se adun rapid n aglutinate mari.

La reacia negativ pictura rmne difuz colorat n rou fr aglutinate. Urmrirea reaciei e necesar timp de 3 minute, graie aglutinrii posibile tardive a eritrocitelor care conin aglutinogenii A i B slab exprimai. Controlul i interpretarea rezultatelor reaciei. Aprecierea i interpretarea rezultatelor reaciei de hemaglutinare a eritrocitelor cu reagenii cu anticorpi monoclonali este elucidat n tabela 3. Tabela 3 Interpretarea rezultatelor reaciei de hemaglutinare cu reagenii monoclonali Rezultatul reaciei cu anticorpii monoclonali Sngele cercetat aparine grupei anti-A anti-B anti-AB 0 (I) + + A (II) + + B (III) + + + AB (IV) n cazurile absenei aglutinrii cu anticorpii monoclonali anti-A, anti-B i antiAB constatm absena aglutininogenelor A i B i apartenena sngelui cercetat la grupa 0 (I). Dac hemaglutinarea este constatat cu anticorpii monoclonali anti-A i antiAB, se apreciaz prezena aglutinogenului A la eritrocite i apartenena sngelui cercetat la grupa A (II). Aglutinarea eritrocitelor cu anticorpii monoclonali anti-B i anti-AB denot prezena n eritrocitele cercetate a aglutinogenului B i apartenena sngelui la grupa B (III). n cazurile aglutinrii eritrocitelor cu anticorpii monoclonali anti-A, anti-B i anti-AB constatm prezena ambilor aglutinogeni (A i B) n eritrocitele cercetate i apartenena sngelui la grupa AB (IV). Pentru a exclude aglutinarea spontan nespecific a eritrocitelor amestecm o pictur mare de soluie fiziologic (0,1 ml) cu o pictur mic (0,01 ml) de snge al pacientului. Absena aglutinrii n aceast prob martor confirm corectitudinea reaciei. n cazul aglutinrii spontane este necesar determinarea repetat a grupei sanguine, folosind eritrocitele pacientului dup o splare cu soluie fiziologic (centrifugarea 1500-2000 rot/min, timp de 5-10 min). Surse de eroare. Cauzele apariie unor erori n testarea grupei sanguine dup sistemul AB0 pot avea caracter divers: tehnica, calitatea minor a ingredienilor utilizai i particularitile individuale ale sngelui cercetat. Printre cauzele erorilor tehnice cele mai frecvente sunt: Marcarea incorect a tuburilor cu sngele pentru cercetate de la diferite indivizi; Amplasarea incorect a serurilor izohemoaglutinante sau anticorpilor monoclonali pe plan, nregestrarea incorect a rezultatelor testrii;

 Nerespectarea tehnicii cercetrii: - coraport incorect al serului i eritrocitelor cercetate - utilizarea serurilor i reagenilor cu termen expirat - minorizarea terminului de monitorizare a reaciei - efectuarea cercetrii la temperatura mai sczut de 150C i mai mare de 250C, se poate duce la apariia reaciei fals negaticv. Erorile n rezultatul utilizrii reactivelor de o calitate insuficient pentru testarea grupei sanguine: - aviditatea minor a anticorpilor serurilor standard poate avea ca consecin rezultat fals negativ la identificarea aglutinogenelor i concluzia incorect despre apartinena grupei sanguine - spectrul redus specificitii anticorpilor anti-A a unor serii de reageni monoclonali i seruri izohemaglutinante care nu interacioneaz cu toate variantele antigenice A asigur absena aglutinrii cu unele mostre de eritrocite cercetate care conin antigenul A. Erorile cauzate de particularitile individuale ale antigenilor eritrocitari AB0: - cantitatea i amplasarea determinantelor antigenice pe eritrocte la diferii indivizi variaz pentru aglutinogenii A i B i variantele lor apreciind astfel activitatea interaciunei dintrew eritrocite i anticorpi serurilor standard la testarea grupei sanguine - modificarea expresivitii antigenice sau disporiia determinantelor antigenice eritrocitare (pacienii cu tumori i leucemie). Cauza posibil a acestor modificri nu este elucidat complet, dereglarea sintezei transferazelor care asigur formarea determinantelor antigenice A i B ar avea un rol n acest proces. Regulile necesare de respectare la testarea grupei sanguine: 1. Utilizarea reagenilor de calitate nalt. 2. Recoltarea sngelui i aprecierea apartenenei de grup se efectuiaz dublu cu utilizarea de fiecare dat a 2 serii de seruri sau anticorpi monoclonali. 3. Cercetarea trabuie realizat prin metoda ncruciat. Nu se admite utilizarea eritrocitelor A i B recoltate de la persoanele sporadice se utilzeaz numai eritrocite standarde. 4. Se utilizeaz serul izohemaglutinant AB pentru controlul specificitii reaciei aglutinare. 5. Sngele pentru cercetare se recolteaz de la pacient pn la hemotransfuzie, graie faptului ca transfuzia sngelui incompatibil i volumelor mari ai componenilor sanguini de la persoanele cu grupa 0 (I) pot conduce la concluzii incorecte despre apartenena de grup sanguin. 6. Sngele pentru cercetare se recolteaz pn la trasfuzia soluiilor substituente de plasm pentru excluderea erorilor induse de aglomerarea eritrocitelor n stlpiori numulari ( ). 7. De atras atenia la diagnozul pacientului.

10

8. Zilnic de verificat calitata reagenilor utilizai cu nregistrarea rezultatelor. 9. Participarea n controlul extern al calitii. Tactica aprecierei apartenenei de grup n cazurile aglutinaiei nespecifice i autoaglutinaiei: 1. Testarea repetat a grupei sanguine cu utilizarea altor serii de eritrocite i seruri izohemaglutinante standard. 2. Aprecierea aglutinogenelor eritrocitari prealabil splate cu soluie fiziologic. 3. Utilizarea obligatorie a serului standard AB (IV). 4. Excluderea posibilitii autoaglutinrii. 5. Determinarea corect a grupei sanguin att la pacieni, ct i donatori este una din verigele principale a lanului de asigurare a inofensivitii transfuzionale. Serurile izohemaglutinante standard umane Serie 0 (I) anti-(A+B) A (II) anti-B B (III) anti-A AB (IV) control Grupa sanguin investigat

1 0 (I) 2 1 A (II) 2 1 B (III) 2 1 AB (IV) 2

11

Fr aglutinare NOT Aglutinare Figura 1. Rezultatul reaciei de hemaglutinare cu seruri izohemaglutinante standard umane

Reageni reageni monoclonali anti-eritrocitari anti-A anti-B anti-AB

Grupa de snge testat

0 (I) A (II) B (III) AB (IV)

Fr aglutinare Not: Aglutinare Figura 2. Rezultatul reaciei de hemaglutinare cu seruri izohemaglutinante standard umane

12

Bibliografie selectiv: Directiva 2001/83/CE Parlamentului European i a Consiliului din 6 noiembrie 2001 privind exigenele la calitatea, securitatea i eficacitatea preparatelor medicale produse din snge i plasm; Directiva 2002/98/CE a Parlamentului European i a Consiliului din 27 ianuarie 2003 ce stabilete standarde a calitii i securitii pentru colectare, testare, prelucrare, pstrare i distribuire a sngelui uman i componentelor sanguini; Recomandarea Nr.R(95)14 a Comitetului de Minitri statelor membre referitor la protejarea sntii donatorilor i recipienilor n n domeniul transfuziei de snge (Adoptat de Comitetul Minitrilor la 12 octombrie 1995 la a 545 ntrunire a nlociitorilor minitrilor). Recomandarea Nr.R(95)15 a Comitetului de Minitri statelor membre referitor prepararea, utilizarea i asigurarea calitii componentelor sanguine (Adoptat de Comitetul Minitrilor la 12 octombrie 1995 la a 545 ntrunirea nlociitorilor minitrilor). Recomandarea Consiliului 98/463/EC din 29 iunie 1998 privind corespunderea sngelui i plasmei donatorului i selectarea sngelui de donator n Comunitatea European; Ghid pentru prepararea, utilizarea i asigurarea calitii componentelor sanguine aprobat prin ordinul Ministrului nr.188 din 15.07.02< Tehnici imunologice. A. Olinescu, L. Andrie Compediu de imunologie fundamental, A. Olinescu, L. Andrie Imunoizoserologia. Moscova ,1998;

13