Judul Makalah Anti-cancer effects of COX-2 inhibitors and their correlation with angiogenesis and invasion in gastric cancer

Teori
Siklooksigenase-1 dan -2 Awal tahun 90-an ditemukan bahwa enzim siklooksigenase terdapat dalam dua bentuk (isoform), yaitu siklooksigenase-1 (COX-1) dan siklooksigenase-2 (COX-2) [1,8]. Kedua isoform berbeda distribusinya pada jaringan dan juga memiliki fungsi regulasi yang berbeda. COX-1 merupakan enzim konstitutif yang mengkatalisis pembentukan prostanoid regulatoris pada berbagai jaringan, terutama pada selaput lendir traktus gastrointestinal, ginjal, platelet dan epitel pembuluh darah [1]. Sedangkan, COX-2 tidak konstitutif tetapi dapat diinduksi, antara lain bila ada stimuli radang, mitogenesis atau onkogenesis [1]. Setelah stimulasi tersebut lalu terbentuk prostanoid yang merupakan mediator nyeri dan radang. COX-1 mengkatalisis pembentukan prostaglandin baik yang bertanggung jawab menjalankan fungsi-fungsi regulasi fisiologis, sedangkan COX-2 mengkatalisis pembentukan prostag-landin jahat yang menyebabkan radang [1].

Sehubungan dengan hipotesis tersebut maka toksisitas obat antiradang bukan steroid klasik pada saluran gastrointestinal disebabkan oleh hambatan tidak selektif obat tersebut terhadap aktifitas COX-1 dan COX-2. Namun demikian, pada penelitian lanjutan ditemukan bahwa COX-2 ternyata tidak hanya indusibel melainkan juga konstitutif dan terdapat pada berbagai jaringan. Pada kondisi fisiologis ekspresi konstitutif COX-2 ditemukan pada ginjal [11], pembuluh darah [12], paru-paru [13], tulang [13], pankreas [14], sumsum tulang belakang [15] dan selaput lendir lambung [16]. Nampaknya COX-2 bukan hanya pada kondisi patofisiologis melainkan juga pada kondisi fisiologis normal memiliki peranan penting. Akhirnya COX-1 diformulasikan sebagai enzim konstitutif yang mempertahankan fungsi-fungsi homeostatis, sedangkan COX-2 sebagai enzim regulator yang memiliki fungsi fisiologis maupun patofisiologis. Karakteristika enzim siklooksigenase-1 dan 2 dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel Karakteristika siklooksigenase-1 dan -2 (dikutip dari [1] ) Parameter Ukuran gen 22 kb 8,3 kb 1: Siklooksigenase-1 Siklooksigenase-2

Ekson Kromosom mRNA Regulasi mRNA Induktor Jumlah asam amino Lokasi Kofaktor Tempat

11 9q32 q33,3 2,8 kb konstitusi 599 Membran inti 1 mol Heme pengikatan Serin-529

10 1q25,2 q25,3 4,1 kb indusibel Sitokin, LPS 604 Membran inti 1 mol Heme Serin-516

asam asetil salisilat Spesifisitas substrat Asam arasidonoat, Asam arasidonoat,

asam linoleat

asam linoleat, asam eikosapentenoat

Aktivitas

23

mmol

asam 11

mmol

asam

arasidonoat/mg/menit Inhibitor selektif siklooksigenase-2

arasidonoat/mg/menit

Strategi pertama untuk mengurangi toksisitas obat antiradang bukan steroid klasik adalah penghambatan selektif COX-2. Karena semua obat antiradang bukan steroid klasik merupakan inhibitor tidak selektif COX1 dan COX-2 (Gambar 5), maka diusahakan membuat senyawa yang dapat menghambat aktifitas COX-2 secara selektif. Secara struktural terdapat beberapa golongan inhibitor selektif COX-2, yaitu: (1) turunan karbosiklis dan Heterosiklis yang terikat visinal dengan moieties aril, (2) turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan tioeter, (3) turunan cis-stilben, serta (4) keton diaril dan aril/heteroaril [1]. Sampai tahun 2000 telah berhasil disintesis sekitar 500 senyawa inhibitor selektif COX-2 [1]. Dua dari senyawa tersebut, celecoxib dan rofecoxib yang merupakan turunan karbosiklis dan Heterosiklis, telah lolos uji klinik dan telah dipasarkan. Pada penanganan pasien-pasien osteo- dan rheumatoidarthritis, inhibitor selektif COX-2 menunjukkan kerja antiradang yang setara dengan obat antiradang bukan steroid klasik tetapi dengan toksisitas lebih ringan pada saluran gastrointestinal [4]. Namun demikian, dilaporkan pula adanya kecendrungan peningkatan tekanan darah sebagai efek samping inhibitor selektif COX-2 [17]. Dari fakta tersebut timbul pertanyaan, apakah inhibitor selektif COX-2 benar-benar toksisitasnya lebih ringan sehingga lebih aman digunakan atau bahkan memiliki efek merugikan lain yang berbeda dari efek merugikan yang disebabkan oleh obat anti radang bukan steroid klasik. Permasalahan tersebut mungkin baru bisa terjawab tuntas di masa mendatang melalui evaluasi penggunaan dan monitoring efek samping obat. Enzim adalah katalis biologis: ini berarti bahwa mereka mempercepat reaksi kimia dalam makhluk hidup. Katalis adalah zat yang membuat reaksi kimia berjalan lebih cepat, tanpa itu sendiri yang berubah. Katalis dapat digunakan lagi dan lagi dalam reaksi kimia: tidak mendapatkan digunakan. Enzim sangat banyak yang sama kecuali bahwa mereka mudah terdenaturasi (hancur: tapi jangan TIDAK menggunakan kata ini karena molekul protein tidak dipecah menjadi asam-asam amino, itu hanya kehilangan itu bentuk dan tidak akan

bekerja lagi) oleh panas. Enzim kami bekerja terbaik pada suhu tubuh. Enzim kami juga harus memiliki pH yang benar. Semua enzim terbuat dari protein, itu sebabnya mereka sensitif terhadap panas, pH dan ion logam berat. Berbeda dengan katalis biasa, mereka khusus untuk satu reaksi kimia. Sebuah katalis biasa dapat digunakan untuk beberapa reaksi kimia yang berbeda, tetapi enzim hanya bekerja untuk satu reaksi spesifik.
AIM: Untuk mengamati efek anti kanker COX-2 inhibitor dan menyelidiki hubungan antara COX-2 inhibitor dan angiogenesis, infiltrasi atau metastasis di SGC7901 xenografts kanker. Metode: Tiga puluh athymic tikus model xenograft dengan kanker perut SGC7901 sel manusia dibentuk dan dibagi secara acak menjadi 3 kelompok masing-masing 10. Sulindac, satu non-spesifik COX inhibitor milik non-steroid antiperadangan obat (serangkaian COX inhibitor dikenal sebagai NSAID) dan celecoxib, satu selektif COX-2 inhibitor (dikenal sebagai SCIs) yang diberikan secara oral pada tikus pengobatan kelompok. Imunohistokimia digunakan untuk memeriksa ekspresi PCNA, CD44v6 dan microvessel kerapatan (MVD). Apoptosis dideteksi dengan

menggunakan uji TUNEL. HASIL: Tumor di sulindac dan kelompok celecoxib adalah secara signifikan lebih kecil dibandingkan dengan

kelompok kontrol dari minggu kedua setelah obat administrasi (P <0,01). Dalam n kelompok perlakuan, indeks proliferasi sel lebih rendah (P <0,05) dan indeks apoptosis lebih tinggi (P <0,05) dibandingkan orang-orang dalam kelompok kontrol. Dibandingkan dengan kontrol, microvessel kepadatan berkurang (P <0,01) dan ekspresi dari CD44v6 pada sel tumor yang lemah (P <0,05) di kelompok pengobatan. KESIMPULAN: COX-2 inhibitor memiliki efek antikanker pada kanker lambung. Mereka memainkan peran penting dalam angiogenesis dan infiltrasi atau metastasis karsinoma lambung. Para efek antikanker COX-2 inhibitor mungkin termasuk merangsang apoptosis, menekan proliferasi, mengurangi angiogenesis dan melemahkan invasi.

Hasil(data)
Hewan Percobaan Selama percobaan pertumbuhan, diet, aktivitas, dll dari tikus diamati dengan saksama, tidak ada hematuresis dan hematochezia yang muncul selama percobaan. Dua tikus mati dengan tidak sengaj. Namun dalam proses, whichmight disebabkan oleh operasi enema pompa perut. Berat badan antar kelompok tidak berbeda secara signifikan, begitu pula perubahan berat selama percobaan. Pertumbuhan xenografts dalam kelompok pengobatan ditekan secara signifikan dibandingkan dengan kontrol, tetapi ada perbedaan antara dua kelompok perlakuan.

Tumor Histology Xenograft mengambil alih tampilan globular besar neoplasia atau beberapa cluster neoplastik kecil (Gambar 2). Nekrosis bisa dilihat relatif umum pada potongan tumor, dan ukuran area nekrotik tampaknya berhubungan dengan volume tumor. Berkenaan dengan HE-bagian bernoda, sangat ternoda Tumor cellswith besar nucleiwere diatur erat dengan cavum tanpa struktur yang ditemukan di bawah mikroskop, yang bertepatan dengan karakteristik histologi

tumor. Tumor sel di antara semua kelompok menunjukkan tidak ada perbedaan dalam morfologi, sedangkan nekrosis bisa dilihat di bawah mikroskop biasa.

Proliferasi Sel Dan Apoptosis PI kelompok kontrol secara signifikan lebih tinggi dari sulindac kelompok dan celecoxib kelompok (P <0,05), tetapi Perbedaan mencolok tidak antara dua kelompok perlakuan. AI dalam dua kelompok perlakuan lebih tinggi daripada yang di kontrol kelompok (P <0,05), sementara ada juga ada perbedaan antara dua kelompok. Nilai AI / PI dihitung dan dibandingkan antara semua kelompok. Akibatnya, itu tampaknya lebih besar di dua kelompok perlakuan (P <0,01), namun tidak ada perbedaan ditampilkan antara mereka. Tumor Angiogenesis Pewarnaan imunohistokimia dari CD34 mengungkapkan bahwa celecoxib dan menekan angiogenesis sulindac bisa dari SGC7901 xenografts. MVD di sulindac dan kelompok celecoxib tampaknya lebih rendah dari kontrol (P <0,01). Meskipun lebih rendah pada kelompok celecoxib, perbedaannya adalah tidak penting. Invasiveness Sel Tumor Membran sel tumor diwarnai coklat dengan CD44v6 pewarnaan. Dengan analisis intensitas pewarnaan dan kuantitas positif sel-sel dengan Image-Pro Plus perangkat lunak, ekspresi CD44v6 itu nyata melemah oleh pengobatan dengan sulindac dan celecoxib (P <0,05), tetapi tidak ada yang jelas perbedaan antara sulindac dan kelompok celecoxib.

Diskusi
COX-2 berhasil dikloning dan strukturnya telah diakui lebih dari sepuluh tahun sebelum [9]. Ini adalah sebuah diinduksi isoenzim yang mengkatalisis produksi dari serangkaian prostaglandin. Berpartisipasi dalam reaksi inflamasi, COX-2 dinyatakan oleh berbagai sel tumor dan berhubungan dengan tumorigenesis. Beberapa penelitian telah mengungkapkan efek profilaksis NSAID pada karsinoma kolorektal dan efek terapi mereka pada polip usus [10] Berikut themechanismofNSAIDs. Dianggap sebagai penghambat COX-2. Non-spesifik COX inhibitor menghambat COX-1 pada saat yang sama, yang dapat menyebabkan efek samping yang fatal. Akibatnya, mereka tidak begitu ideal dalam jangka panjang aplikasi untuk mencegah tumorigenesis. Akhir-akhir ini dikembangkan selektif COX-2 inhibitor menjelaskan chemoprevention neoplasma. Namun serangkaian penelitian harus dilakukan untuk mengkonfirmasi efektivitas, kehandalan dan kebajikan sebelum aplikasi klinis yang luas. Ekspresi COX-2 juga ada pada kanker lambung sementara tingkat positif mungkin mencapai 61,4% [11]. Kami telah menunjukkan bahwa sel kanker manusia cukup dibedakan lambung SGC7901 dapat mengekspresikan COX-2. Pertumbuhan ditekan di in vitro setelah pengobatan sulindac, baik proliferasi dan apoptosis terpengaruh [5]. Kali ini kami diinokulasi athymic tikus dengan SGC7901 untuk mengamati efek dari sulindac dan celecoxib, sebuah selektif klinis diterapkan COX-2 inhibitor, pada dalam tumor vivo dengan mendirikan model binatang dari kanker lambung. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kedua obat memiliki hambatan penting pada pertumbuhan kanker lambung. Walaupun efek celecoxib adalah lebih baik daripada sulindac, tidak ada perbedaan statistik yang ditampilkan. Untuk menjelajahi mekanisme antikanker COX-2 inhibitor, kami mengevaluasi pengaruh dua obat terhadap proliferasi sel tumor dan apoptosis pada xenografts oleh imunohistokimia, yang memverifikasi hasil penelitian in vitro dalam.

Administrasi dari kedua sulindac dan celecoxib peningkatan apoptosis sel-sel kanker pada vivo. AI / PI, nilai yang mencerminkan cytokinetics, menunjukkan amore perbedaan yang signifikan. Pertumbuhan sel tumor tergantung pada pasokan nutrisi, yang sebagian besar bergantung pada angiogenesis. Iskemia dapat menginduksi apoptosis sel tumor, mempercepat nekrosis dan kepunahan sel. Banyak penelitian diverifikasi hubungan antara COX-2 dan angiogenesis [12] dan efek penghambatan dari NSAID pada darah sel endotel pembuluh [13]. Kami mengamati sulindac itu dan celecoxib jelas penurunan jumlah pembuluh darah dari xenografts dan mengurangi MVD dibandingkan dengan yang dari kelompok kontrol. COX-2 inhibitor menyadari anti-kanker mereka efek oleh menekan ekspresi gen anti-apoptosis Bcl-2 [14] dan mengurangi angiogenesis pada karsinoma lambung, sehingga

merusak pasokan nutrisi tumor, lebih lanjut menghambat proliferasi dan menginduksi apoptosis sel kanker lambung. Hasil kami adalah serupa dengan yang Sawaoka dkk [15].. Beberapa studi menyarankan ekspresi COX-2 adalah berkorelasi dengan karakteristik klinikopatologi lambung kanker, seperti infiltrasi, limfatik atau hematogen metastasis, prognosis, dll [16]. Sebagai adhesivemolecule permukaan sel, CD44 adalah reseptor asam hialuronat dan terlibat dalam cellto-sel dan sel-untuk-matriks interaksi. Terutama, ekspresi varian disambung nya 6 erat berhubungan dengan cellmovement, karsinogenesis, kemajuan, serbuan dan metastasis lambung karsinoma [17]. Dalam penelitian ini kami mengevaluasi COX-2 inhibitor ' pengaruh pada ekspresi CD44v6 dengan menggunakan model binatang, menemukan sel positif untuk mengekspresikan CD44v6 (berpigmen dalam membran) sering ada di pinggiran tumor dengan kecenderungan untuk mengelilingi pembuluh darah. Yang positif dari CD44v6 pewarnaan kuat pada kelompok kontrol dan signifikan melemah dalam dua kelompok obat, yang menunjukkan bahwa COX-2 inhibitor berperan dalam invasi depresi dan mengurangi metastasis kanker lambung, yang bisa menjadi salah satu mereka anti-kanker. Tidak ada metastasis jelas adalah ditemukan oleh kasar anatomi tikus Namun dalam penelitian kami. Hal ini membutuhkan meningkatkan desain percobaan. Secara singkat, mekanisme COX-2 inhibitor menolak pertumbuhan kanker lambung mungkin termasuk sel menekan proliferasi, menginduksi apoptosis, mengurangi angiogenesis dan melemahnya invasi. Tapi selektif COX-2 inhibitor yang tidak diamati jelas lebih efektif daripada non-spesifik COX inhibitor. Yang pertama tidak menunjukkan keuntungan di sisi efek baik, seperti gastrorrhagia, ulserasi, dan sebagainya, yang mungkin relevan untuk model percobaan hewan dan singkat durasi percobaan. Penelitian lebih lanjut diperlukan. Penelitian ini juga menunjukkan nekrosis relatif lebih tumor, namun korelasi terhadap obat administrasi tidak jelas. Dalam perbandingan, peneliti Jepang menemukan tidak ada hubungan antara pengobatan obat indometasin atau NS398 inMKN45 xenografts sel [15]. Ini adalah bagian pertama dari studi serial, dan kami akan memverifikasi hasil setelah menggunakan Western blotting, RT-PCR, dll

http://www.purchon.com/biology/enzymes.htm