INFORME PRCTICA DE LABORATORIO IV OBTENCIN DE LECITINA Y CEFALINA A PARTIR DE LA YEMA DE HUEVO

ESTUDIANTES: PAOLA RODRGUEZ MUOZ VCTOR HUGO ESCALLN M. COD: 160591 COD: 160588

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE INGENIERA AMBIENTAL OCAA (N.S) 2010

INFORME PRCTICA DE LABORATORIO IV OBTENCIN DE LECITINA Y CEFALINA A PARTIR DE LA YEMA DE HUEVO

ESTUDIANTES: PAOLA RODRGUEZ MUOZ VCTOR HUGO ESCALLN M. COD: 160591 COD: 160588

DOCENTE. Qumico Puro. CARLOS ALBERTO PATIO

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE INGENIERA AMBIENTAL OCAA (N.S) 2010

INTRODUCCIN

Esta prctica ponen a prueba los conocimientos adquiridos tericamente en Bioqumica, sobre los lpidos complejos, particularmente los fosfoglicridos, los cuales estn constituidos por Cefalina y Lecitina. Parte de aqu la dispendiosa tarea de comprobar por medio de la prctica que estos fosfoglicridos se obtuvieron a travs de la yema de huevo. Es importante la responsabilidad del estudiante al efectuar el laboratorio, los conceptos se deben tener claros para aplicarlos en el desarrollo de esta prctica. Esta prctica se fundamenta en la clasificacin compleja, de los lpidos saponificables, como son los glcidos y los fosfolpidos. Los fosfolpidos son los componentes ms abundantes de la membrana citoplasmtica. En su estructura qumica podemos observar una molcula de glicerol, dos cidos grasos, un grupo fosfato y una base nitrogenada. De igual manera son anfipticos, es decir que son simultneamente hidroflicos e hidrofbicos, tienen en la "cabeza" (cido fosfrico + alcohol) es decir un grupo fosfato cargado negativamente y las dos "colas"(cidos grasos) cadenas hidrocarbonadas fuertemente hidrofbicas. Los fosfoglicridos o glicerofosfolpidos son molculas lipdicas del grupo de los fosfolpidos. Estn compuestos por cido fosfatdico, una molcula compleja compuesta por glicerol, en el que se han esterificado dos cidos grasos (uno saturado y otro insaturado) y un grupo fosfato; a su vez, al grupo fosfato se une un alcohol o un aminoalcohol. La lecitina contiene glicerol y cidos grasos como las grasas simples, pero adems poseen cido fosforito y colina. Es uno de los principales constituyentes de las bicapas lipdicas de las membranas celulares proporciona elasticidad a las membranas celulares y las protege de los efectos destructores de los radicales libres. . La lecitina pura es un slido ceroso de color blanco que expuesta al aire se oxida de inmediato. En contraste con las grasas y aceites, se dispersa en el agua en forma coloidal y es insoluble en acetona. Por tanto, es posible separar la lecitina de un extracto etreo, aadiendo acetona. La lecitina Posibilita la entrada y salida de nutrientes dentro de la clula, este nutriente ayuda a proteger los rganos y las arterias de la acumulacin de grasa,

mejora el funcionamiento del cerebro y facilita la absorcin de algunas vitaminas del complejo B y de la vitamina A. Promueve la reduccin de los niveles de colesterol y triglicridos en la sangre. La Cefalina est compuesta por un glicerol esterificado en los hidroxilos 1 y 2 por dos cidos grasos, y en el hidroxilo 3 con un grupo fosfato que, a su vez, se esterifica con el aminoalcohol etanolamina, un derivado del etanol. Las cefalinas desempean una funcin muy importante en el proceso de coagulacin de la sangre. Las cefalinas difieren de las lecitinas solo en que la etanolamina reemplaza a la colina, es, junto con la fosfatidilcolina, uno de los fosfolpidos ms frecuentes en la bicapa lipdica de las membranas celulares.

JUSTIFICACIN

En Bioqumica es necesario concederle gran importancia a las prcticas realizadas en laboratorio, ya que permiten la deduccin, e interpretacin lgica a los problemas planteados, mediante la demostracin y experimentacin de los resultados. De igual forma estas prcticas experimentales son el complemento de los conocimientos adquiridos en la parte terica. Mediante esta prctica se comprob la importancia de los lpidos complejos, especialmente de los fosfolpidos, quienes poseen caractersticas anfipticas, hidroflicas e hidrofbicas. Adems se caracterizan por poseer un grupo fosfato que les otorga una marcada polaridad, clasificados en dos grupos segn posean glicerol o esfingosina. En esta prctica adems de la extraccin de lpidos totales, se extraen y separan dos grupos de lpidos muy importantes, ambos conocidos como fosfolpidos, por contener fosforo: lecitinas y cefalinas. Se pudo establecer que los fosfoglicridos son molculas lipdicas del grupo de los fosfolpidos, que participan en la estructura de las membranas celulares, en la estabilizacin de la estructura las protenas, en la solubilizacin de lpidos no polares en las lipoprotenas. De igual manera los fosfoglicridos estn constituidos por Cefalina y lecitina, Las cefalinas difieren de las lecitinas solo en que la etanolamina reemplaza a la colina, la Cefalina y lecitina, son los fosfolpidos ms frecuentes en la bicapa lipdica de las membranas celulares.

OBJETIVOS

Extraer y separar de un material biolgico de fraccin lipdica como la yema de huevo. Determinar la cantidad de porcentaje de lpidos extrados.

MARCO TERICO

Las grasas se obtienen de fuentes naturales por medio de una gran diversidad de procesos, el calentamiento, la filtracin de los tejidos grasos de los cerdos, produce manteca, el batido de leche separa la mantequilla de la leche, el prensado y la filtracin de semillas produce los aceites vegetales y su respectiva torta. En algunos casos la extraccin de algunas grasas de hace por medio de los disolventes, compuestos orgnicos, tales como el ter o alcanos de bajo peso molecular, bencenos entre otros ya que una caracterstica de los lpidos es su insolubilidad en agua. LOS FOSFOLPIDOS: son lpidos saponificables formados por cidos grasos, cido fosfrico y un alcohol. Son molculas con caractersticas lipdicas formadas por una molcula de glicerol a la cual se le unen dos cidos grasos y un grupo fosfato. En las membranas celulares los fosfolpidos juegan un papel muy importante, ya que controlan la transferencia de sustancias hacia el interior o exterior de la clula. Los fosfolpidos son anfipticos, esto es que son simultneamente hidroflicos e hidrofbicos. En efecto, una parte de su estructura es soluble en agua (hidroflica), mientras que la otra, es soluble en lpidos (hidrofbica). Es en la parte hidroflica donde se encuentran el grupo fosfato y el aminoalcohol o base nitrogenada. Esta caracterstica estructural hace posible que los fosfolpidos participen en el intercambio de sustancias entre un sistema acuoso y un sistema lipdico, separando y aislando a los dos sistemas, a la vez que los mantiene juntos. En medio acuoso las colas de los fosfolpidos (constituidas por la molcula de glicerol y los cidos grasos) tienden a disponerse en manera tal de formar un ambiente local hidrofbico. Al entrar en contacto con el agua, las molculas de fosfolpidos se organizan formando micelas o bicapas que son grupos macromoleculares con gran cantidad de lpidos. En estas estructuras las cadenas hidrofbicas de cidos grasos se alinean unas con otras, interactuando entre ellas y dejando sus extremos hidroflicos en contacto con el agua.

Micelas: estructura esfrica con las colas de los fosfolpidos (no polares) hacia adentro y, las cabezas (polares) hacia fuera de la estructura, en contacto con el medio acuoso. Bicapa: dos capas de fosfolpidos con las cabezas hacia afuera, en contacto con el medio acuoso, y las colas hacia el medio de la bicapa. Se cierra sobre s misma y delimita un espacio interno. FOSFOGLICRIDOS: Estn constituidos por cidos grasos de 14 a 24 carbonos, glicerina, acido fosfrico y un aminoalcohol que puede ser colina, serina, o etalonamina Los fosfoglicridos, como los dems lpidos son solubles en disolventes orgnicos (ter, cloroformo), aunque se distinguen de los lpidos menos polares por su escasa solubilidad en acetona fra, lo que permite su precipitacin selectiva. Se clasifican de acuerdo con el aminoalcohol unido al fosfato, si el alcohol es la colina, el fosfoglicrido es la fosfatidilcolina o lecitina y si el alcohol es uno de los restantes la serina o etanolamina, los fosfoglicridos se denominan cefalinas. LECITINA: Fosfatidilcolina o lecitina es un solido con la apariencia de una cera, adquiere una coloracin amarillenta al exponerse al aire y forma una suspensin coloidal en el agua. La lecitina es muy abundante en la yema de huevo y la soya, es utilizada como emulsificante de las grasas en los helados y las mayonesas. Los agentes emulsificantes son sustancias que ayudan a suspender las grasa en el agua . La molcula de lecitina tiene dos partes la cabeza y la cola, en la cabeza se encuentran dos grupos inicos, fosfato y colina, y en la cola las dos cadenas no polares de los esteres de cidos grasos. CEFALINA: Son otro grupo de fosfoglicridos, el aminoalcohol que se une al fosfato puede ser la serina o la etanolamina, son los componentes de la capa de mielina o membrana que rodea una fibra nerviosa. Son los componentes primarios de las membranas celulares. En su estructura qumica podemos observar una molcula de glicerol, dos cidos grasos, un grupo fosfato y una base nitrogenada. La Cefalina es el segundo fosfolpido ms abundante en los animales. Juega un papel clave en la estructura de las membranas, jugando un rol especifico en la

estabilizacin de la estructura de algunas protenas, permitindoles que desempeen en la membrana una funcin de transporte o enzimtica.

MATERIALES Y REACTIVOS

Disolventes orgnicos: Acetona, Etanol, ter. Material Biolgico: Yema de huevo Vaso precipitado de 100 ml Varilla de vidrio Papel filtro Bao Mara: (Vaso de 600 ml, mechero) Embudo de vidrio Soporte universal Malla de asbesto Pinzas para crisol Aro de hierro

PROCEDIMIENTO

1. Pese un vaso de precipitado de 100 ml. Rompa el huevo, separe la yema y vacela en el vaso precipitado de 100ml. Pese la yema. 2. Aada ter hasta cubrir totalmente la yema y agite con una varilla de vidrio para homogenizar bien y con cuidado durante dos minutos. 3. Agregue lentamente y sin dejar de agitar el volumen de acetona igual al del ter. Se observara inmediatamente un precipitado. 4. Deje reposar la mezcla por 10 minutos. 5. Filtre sobre un papel filtro humedecido con etanol. 6. Lave el residuo que quedo en el papel filtro con alcohol etlico bien frio. 7. Deje secar un poco y luego lleve el residuo a la estufa hasta que sequedad. 8. Evapore el filtrado lentamente en un bao de vapor. 9. Pese los dos precipitados.

CUESTIONARIO Por que se usan diferentes solventes para separar lpidos? Escriba las formulas general de los lpidos que usted separo en cada fraccin y ubquelos en la clasificacin de lpidos. Anote el peso de la yema, peso del vaso precipitado, y clculo del porcentaje de lecitina y cefalina luego de la separacin. Porcentajes totales de fosfolpidos.

DESARROLLO DE LA PRCTICA

Por que se usan diferentes solventes para separar lpidos?

Porque permiten romper los enlaces covalentes y la extraccin de las sustancias de inters. Se utilizaron los siguientes disolventes: ter, permiti diluir y homogenizar completamente la mezcla. Acetona, se uso para dar miscibilidad a la mezcla, pero se precipito formando dos interfaces, (una liquida y una solida). Etanol, permiti la fcil filtracin de la mezcla.

Los solventes: Son compuestos orgnicos basados en el elemento qumico carbono. Su importancia y patrn de uso determinan su clasificacin en solventes activos, cosolventes, solventes latentes y diluyentes. La acetona es un solvente intermedio entre los muy polares y los no polares, sirviendo para hacer miscibles dos solventes que no lo son o para extraer conjuntamente sustancias no polares y polares. El ter es un solvente de muy baja polaridad y de bajo punto de ebullicin 35C, solvente especial para los lpidos, resinas y grasas minerales. Etanol o alcohol etlico, es un alcohol que se presenta como un lquido incoloro e inflamable con un punto de ebullicin de 78 C. Es el solvente por excelencia de uso en el laboratorio.

Escriba las formulas general de los lpidos que usted separo en cada fraccin y ubquelos en la clasificacin de lpidos.

ESTRUCTURA GENERAL FOSFOLPIDOS

L - lecitina

L Cefalina

Anote el peso de la yema, peso del vaso precipitado, y clculo del porcentaje de Lecitina y Cefalina luego de la separacin.

Peso del material utilizado en laboratorio. Vaso precipitado de 100 ml Yema Papel filtro Embudo de vidrio Erlenmeyer Vidrio reloj CEFALINA Peso antes del secado Vidrio reloj + papel filtro 25.46 gr + 1.062 gr = 27.08 gr 27.08 gr + Cefalina = 54.95 gr Cefalina = 27.87 gr 54.95 27.08 = 27.87 gr Peso de secado al horno 61.548 gr 17.990 gr 1.062 gr 16.53 gr 115.368 gr 25.46 gr

Peso de vaso precipitado = Peso de vaso precipitado seco = Cefalina = 61.548 gr 53.780gr = 7.768 gr

61.548 gr 53.780 gr 7.768 gr

Cefalina Antes del secado Cefalina despus del secado. 27.87 7.768 gr = 20.102 gr

LECITINA Peso antes del secado Erlenmeyer + Lecitina = 123.853 gr Peso Erlenmeyer = 115.368 gr Lecitina = 8.485 gr 123.853 115.368 = 8.485 gr Peso de secado al horno Peso de lecitina en seco = Peso de papel filtro = Lecitina = 9.142 gr 1.062 gr 8.08 gr

Lecitina antes del secado lecitina despus del secado. 8.485 gr 8.08 gr = 0.405 gr

Porcentajes totales de fosfolpidos.

PORCENTAJE PARA LECITINA 8.485 gr 0.405 gr 100% X

PORCENTAJE PARA CEFALINA 27.87 gr 20.102 gr 100% X

0.405 gr x 100 % X= --------------------------8.485 gr X= 4.77 %

20.102 gr x 100 % X= ---------------------------27.87 gr X= 72.12 %

PORCENTAJE DE ERROR

Valor Terico Valor Experimento Porcentaje de error = ------------------------------------------------------- x 100 % Valor Terico

Valor Terico: Valor o resultado que dice en los libros o que debas obtener. Valor Experimental: Valor obtenido mientras hacas el experimento.

Porcentaje de error para la Cefalina

78. % 72.12% Porcentaje de error = --------------------------------- x 100 % 78. % Porcentaje de error = 7.53%

Porcentaje de error para la Lecitina

5 % 4.77% Porcentaje de error = ------------------------ x 100 % 5% Porcentaje de error = 4.6 %

CONCLUSINES

A travs de la prctica desarrollada en el laboratorio, se aprecio que la yema de huevo corresponde casi al 30% del peso total, tiene una mayor densidad de nutrientes, contiene vitaminas exceptuando la C, tambin contiene lpidos (triglicridos 65%, fosfolpidos 29% y esteroles 5% aprox). Se determino que la lecitina es el principal fosfolpido, seguido por la Cefalina y pequeas cantidades de fosfatidilserina. Los porcentajes obtenidos para la lecitina y Cefalina en la yema de huevo fueron de 4. 77 % y 72.12%. La lecitina es una sustancia blanca de aspecto grasoso, que expuesta a la luz se oxida y descompone tomando coloracin caf. Las cefalinas se diferencia de las lecitinas por tener a la colamina como base nitrogenada. En la yema de huevo se encuentran las lecitinas en gran abundancia y el colesterol en suficiente cantidad para hacer su asilamiento y deteccin fcil. La principal propiedad funcional de la yema es su gran poder emulsionante. La yema de huevo es soluble en solventes orgnicos como el ter, que al mezclarse se homogeniza y separa los lpidos, caso contrario se observo al

realizar la mezcla con acetona, un precipitado que formo un aislamiento de dos fases, una lquida en la parte superior y otra semidura (coagulo), en la parte inferior; indicando la presencia de lecitina, sustancia insoluble en acetona que tiene como particularidad el aislamiento o la separacin.

BIBLIOGRAFA

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http://centros.edu.xunta.es/iesastelleiras/depart/bioxeo/pres2b/plipid.pdf http://www.google.com.co/search?hl=es&q=cefalina+y+lecitina&aq=f&aqi=&aql=&o q=&gs_rfai=