UNAMBA

CURVAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

RESUMEN
En el presente informe se estudio la curva de crecimiento del Saccahromyces cerevisiae, para este objetivo se utilizo un espectrofotmetro a 620nm con el cual se registro la absorbancia cada cierto tiempo, tambin se utilizo el mtodo gravimetrico, pesando la materia celular hmeda cada cierto tiempo, se obtuvieron los siguientes resultados: para la velocidad especifica tato para gravimetra como para absorbancia fue de 0.4h-1 y 0.5h-1 , en lo que se refiere al tiempo de generacin fue de 1.73h y 1.37h respectivamente
Volumen 1, n 1 Fecha del boletn

UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIALLABORATORIO DOCENTE: Bio. Yanett Campos

INTRODUCCION
La clula microbiana son esencialmente una maquinaria de sntesis capaz de duplicarse a s misma. El proceso de sntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000 reacciones qumicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polmeros, el crecimiento contina con el ensamblaje y formacin de nuevas estructuras celulares que finalizan con la divisin en dos clulas hijas. En un medio apropiado fsica y nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente como clulas vegetativas, los nutrientes absorbidos y metabolizados permiten crecer al microorganismo .

ALUMNO: Christian Andrew Aguilar M.

ABANCAYAPURIMAC

Contenido:
Resumen, introduccin, objetivo Marco Terico

1 2 9 11 14 15

Materiales y Procedimiento Resultados

OBJETIVO
Estudiar la curva de crecimiento de Saccahromyces cerevisiae

Discusiones, Conclusiones, y Bibliografa Anexo

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Curvas de crecimiento microbiano

MARCO TEORICO
Crecimiento Microbiano Es un incremento en el nmero de clulas o aumento de la masa microbiana. El crecimiento es un componente esencial de la funcin microbiana, ya que una clula individual tiene un perodo de vida determinado en la naturaleza y la especie se mantiene solamente como resultado del crecimiento continuo de la poblacin celular. En muchas situaciones prcticas es necesario el control de la poblacin celular, el conocimiento de cmo se expande es til para el diseo de mtodos de control para el crecimiento microbiano. Una bacteria es una mquina capaz de duplicarse as misma. Los procesos sintticos de crecimiento celular bacteriano implican no menos de 2000 reacciones bioqumicas de una gran variedad de tipos. Las reacciones principales de la sntesis celular son de polimerizacin, luego se ensamblan las macromolculas, se forman las estructuras celulares: pared celular, membrana citoplasmtica, flagelos etc. El crecimiento microbiana ocurre por fisin binaria, bajo las mejores condiciones de E. coli puede completar su ciclo en 20 minutos. El control de la divisin celular est ntimamente ligado a los acontecimientos de replicacin cromosmica. Crecimiento de poblaciones La velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas por unidad de tiempo. El tiempo requerido para que a partir de una clula se formen dos clulas o el tiempo requerido para duplicar una poblacin de clulas se llama tiempo de generacin o tiempo de duplicacin. En una sola generacin se duplica el nmero de clulas o masa celular, en minutos en ocasiones en horas o das. Crecimiento exponencial Modelo de incremento de la poblacin en el que el nmero de clulas se dobla cada cierto perodo de tiempo. Una de las caractersticas del crecimiento exponencial es que la velocidad de incremento en el nmero de clulas es lenta inicialmente pero despus incrementa constantemente. Como muestra la siguiente figura 1 , tpica curva de crecimiento exponencial expresada aritmticamente, la pendiente va incrementando progresivamente. Esta figura se obtuvo de un crecimiento de una nica clula que tiene un tiempo de generacin de 30 minutos, tabla 1. En la figura 2 se presenta el nmero de clulas en escala logartmica versus tiempo en escala aritmtica (Grfico semilog) lo que da una lnea recta, este es un inmediato indicador de que las clulas estn creciendo exponencialmente. Este tipo de grficos semilog es util para la estimacin de tiempos de generacin a partir de datos experimentales, el tiempo de generacin puede leerse directamente a partir del grfico figura 3.

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Duplicacin de la poblacin

Donde K es la constante de crecimiento para un cultivo cerrado, y K estn relacionaEn algunos casos es necesario emplear una das y reflejan el proceso de crecimiento de ecuacin diferencial para expresar relacio- una poblacin que incrementa exponencialnes cuantitativas de crecimiento: mente. Las densidades poblacionales bacterianas se expresan en notacin cientfica mediante potencias de 10, por tanto en la ecuacin:

se pueden convertir los logaritmos neperianos a los logaritmos base 10 y sustituir la constante instantnea por K::

Clculo del tiempo de generacin Para muchos propsitos en microbiologa es til conocer el tiempo de generacin de una poblacin microbiana durante el crecimiento exponencial, de la figura 2 se deduce que el crecimiento bacteriano exponencial es una progresin geomtrica, existe una relacin directa entre el nmero de clulas presente en el momento inicial y el habido en un momento determinado del crecimiento exponencial as:

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Curvas de crecimiento microbiano

Fase exponencial: Es la consecuencia de Para expresar la ecuacin N =N02n en trmi- que una clula se divida en dos, estas en nos de n, es necesario la siguiente transfor- otras dos y as sucesivamente, la mayora macin: crecen exponencialmente pero las velocidades de crecimiento exponencial pueden variar esencialmente. Es influenciada por las condiciones ambientales (temperatura, composicin del medio de cultivo) y por las caractersticas genticas del microorganismo las procariotas crecen ms rapidamente que las eucariotas. Fase estacionaria: En un cultivo donde no se renueva el medio un cultivo el crecimiento exponencial no puede ocurrir indefinidamente. Una bacteria pesa alrededor de una billonesima de gramo (10-12g), cada 20 minutos en 18 horas producir una poblacin bacteriana cerca de 4000 veces el peso de la tierra, obviamente es imposible mantener ese ritmo de crecimiento. Habitualmente un nutriente esencial del medio de cultivo se acaba, o algn producto de desecho se acumula en el medio hasta que alcanza una concentracin inhibitoria de crecimiento exponencial. La poblacin alcanza la fase estacionaria. No hay incremento neto o decremento del nmero de clulas. Sin embargo, aunque no hay crecimiento, ocurren funciones celulares, incluyendo el metabolismo bioenergtico y algunos procesos biosintticos. Algunos microorganismos pueden tener un crecimiento lento, algunas clulas crecen y otras mueren, siendo el balance total de ausencia de incremento en el nmero de clulas, esto se conoce como crecimiento crptico. En E. coli se han identificado genes que son necesarios para la supervivencia durante esta fase genes sur, si existen mutaciones conducen rpidamente a la muerte celular a medida que entran en la fase estacionaria.

N= nmero final de clulas, No= nmero inicial de clulas y n= nmero de generaciones que ha ocurrido durante el perodo de fase exponencial, el tiempo de generacin de la fase exponencial se calcula t/n, donde t= horas o minutos de crecimiento exponencial y conociendo N y No, es posible calcular el nmero de generaciones y a su vez el tiempo de generacin.

Fase de latencia: Cuando una poblacin microbiana se inocula en un medio fresco, el crecimiento ocurre despus de cierto tiempo. Si un cultivo en crecimiento exponencial se inocula exactamente el mismo medio, no se observa esta fase sino que sigue creciendo exponencial, se requiere cuando las clulas se toman de un cultivo viejo, tambin cuando las clulas han sido daadas por tratamientos: radiaciones, txicos, calor, tambin cuando se pasan de un medio rico a un medio pobre.

Ciclo de crecimiento de poblaciones Se ha visto el ciclo de crecimiento parcialmente en la parte de crecimiento exponencial. Un cultivo bacteriano simple y homogneo tiene un ciclo de crecimiento como el que se representa a continuacin. puede dividirse en varias fases: Fase de latencia, exponencial, estacionaria y de muerte, ver figura 4.

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Fase de muerte: Si la incubacin continua despus que la poblacin alcanz la fase estacionaria las clulas entran en fase de muerte, en algunos casos acompaada de lisis celular, es tambin de acuerdo a la figura 4 una funcin exponencial. Sin embargo, en muchos casos la velocidad de muerte es mucho ms lenta que la velocidad de crecimiento exponencial. Medicin del crecimiento: El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologas. Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las clulas individuales, sto es iniciar y completar una divisin celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como partculas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en el nmero total de partculas bacterianas. Existen dos formas para determinar el nmero total de microorganismos en una muestra:

Determinacin de peso hmedo Determinacin de peso seco Determinacin de nitrgeno total Determinacin qumica de un cido nucleico

Un ltimo grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que ejercen los microorganismos en los cambios qumicos de su entorno como consecuencia del incremento de la biomasa. Recuentos Directos Recuento microscopico: Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio de microbiologa. Para estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos, aunque tambin pueden realizarse a partir de muestras filtradas en membranas y transparentizadas o teidas con colorantes fluorescentes (Naranja de acridina).

La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener reproductibilidad en el llenado de la cmara con lquido. Otra dificultad es la adsorcin de las clulas en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas. Esta adsorcin es Recuento microscpico de partculas crtica en el proceso de dilucin de la muestra Recuento electrnico de partculas y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta fuerza inica (solucin fisiolgica Para otros, el crecimiento implica el au- o medios mnimos sin fuente de carbono). mento de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que slo se tiene Las cmaras ms utilizadas son las de en cuenta el nmero de microorganismos Hawksley y la de Petroff-Hausser. La primera viables, esto es capaces de crecer indefini- tiene la ventaja que puede ser utilizada con damente. Las determinaciones que se uti- objetivos de inmersin, aunque la mayora de lizan son: los recuentos se realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del recuento mi Recuento de colonias croscpico es brindar informacin adicional Mtodo del nmero ms probable sobre el tamao y la morfologa de los objetos contados. Para los fisilogos bacterianos, bioqumicos y bilogos moleculares una medida del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos, la sntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la sntesis de los componentes celulares es una medida del crecimiento. Para este grupo la divisin celular es un proceso esencial pero menor que rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimtico para utilizar los recursos del medio y formar biomasa.

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Curvas de crecimiento microbiano

Tipo de cuadro Cuadrado total

Area 1.00 x 10-2

Volumen 2.00 x 10-5 8.00 x 10-7 5.00 x 10-8

Factor 5.00 x 104 1.25 x 106 2.00 x 107

Cuadrado grande 4.00 x 10-4 Cuadrado peque2.50 x 10-5 o

1/Dilucin: Inversa de la dilucin utilizada Nmero de cuadrados contados: Cantidad

para llenar la cmara de recuento.

de cuadrados de la cmara que se utilizaron para contar un el nmero de bacterias. Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la cmara. Depende del tipo de cuadrado en donde se realiz el recuento. Por ejemplo, cada cuadrado pequeo tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 m x 50 m x 20 m = 5 x 104 m3 = 5 x 10-8 ml). Recuento electronico: Los contadores electrnicos permiten realizar recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o miceliares. Estos instrumentos constan bsicamente de dos compartimientos comunicados a travs de un pequeo conducto. En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia elctrica del sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeo y su resistencia es muy alta, la resistencia elctrica de cada compartimiento es independiente. El principio de funcionamiento de estos instrumentos es el que se explica a continuacin. Un volumen fijo de una suspensin bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a travs del pequeo conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de ste se incrementa debido a que la conductividad de la clula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados. Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas bacterias muy pequeas producen cambios

en la resistencia que son comparables al "ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse clulas que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el pasaje de ms de una clula en un breve perodo de tiempo va a ser tomado como una clula ms grande. Es comn la obstruccin del orificio por microorganismos muy grandes. Medida de la Biomasa La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metablica, o de un constituyente metablico o qumico. Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables, pero pueden volverse complicados si se busca la exactitud. Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de lquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de clulas bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformacin celular. Para corregir el peso hmedo se determina la cantidad de lquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugacin, para ello se utilizan soluciones de

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polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas. Peso seco: El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias. La desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta. Determinacin de acidos nucleicos: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la poblacin. Determinacion de nitrgeno: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una muestra en relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret, Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de Kjeldahl. Incorporacin de precursores radiactivos: Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. En esta tcnica se adiciona al medio un compuesto marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la clula, y luego se determina la cantidad de marca incorporada por toda la poblacin. Dispersin de la Luz Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partcula en suspensin, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de

partculas. La turbidimetra mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz transmitida a travs de la solucin. En relacin a la longitud de onda y al tamao de la partcula pueden existir tres tipos de dispersin. Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy tiles y poderosos pero pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre el peso seco (contenido macromolecular). Turbidimetra: La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas de una suspensin y cuantifica la luz residual transmitida. Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Optica) con el nmero de microorganismos totales o con UFC.

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Curvas de crecimiento microbiano

Absorbancia = K x Peso Seco K: constante que vara con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0).

por la escasez de otro factor. Ley de la Tolerancia de Shelford La presencia y/o ausencia, abundancia de organismos en un ambiente estn determinados no solo por los nutrientes sino tambin por factores fsico qumicos

Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml Esta ley describe la forma en que mg/ml). las variables abiticas controlan la abundancia de los organismos en un La relacin directa entre la absorbancia y el sistema peso seco slo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no 1913, establece que deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya Shelford, cada organismo necesita una serie que valores mayores producen desviaciones de condiciones para sobrevivir y de la ley de Beer. Sin embargo, el inconvedesarrollarse niente de utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de absor- Los mrgenes de tolerancia y la fluctuacin de los factores fsico cin. qumicos en un sistema determinan que m.o. pueden encontrarse o En estos grficos se puede apreciar que susdesarrollarse sobre una base sustentapensiones diluidas de dos microorganismos ble diferentes con igual peso seco tienen la misma absorbancia, mientras que para el mismo Los mrgenes de tolerancia para nmero de microorganismos totales la absoruna variables dada interaccionan con bancia de cada suspensin es distinta. otras variables. Factores que afectan al crecimiento bacteriano:
La distribucin y funcionamiento de la

poblaciones microbianas estn fuertemente influidas por factores abiticos cia ambiental regulan o excluyen la existencia de microorganismos en diferentes ambientes

La limitacin de nutrientes y la toleran-

Los

microorganismos poseen limites inferiores y superiores de tolerancia, as como ptimos para los diferentes factores abiticos

Ley del Mnimo de Liebig: La produccin de biomasa total de cualquier organismo esta determinado por el nutriente cuya concentracin sea mnima, en relacin con lo que requiere el organismo. Un incremento en la concentracin de determinado nutriente limitante permite el crecimiento o reproduccin de la poblacin afectada, hasta que queda limitada

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MATERIALES
Inoculo (para 100ml): Glucosa Extracto de levadura KH2PO4 MgSO47H2O 2 gr. 0.1 gr. 0.5 gr. 0.04 gr. Pipetas Estufa Vasos de precipitados Autoclave Incubadora Levadura Sacharomyces cereviceae Centrifuga Tubos de ensayo Espectrofotmetro

Medio de fermentacin (para 250ml): Glucosa Extracto de levadura KH2PO4 MgSO47H2O Sulfato de amonio 5 gr. 0.25 gr. 0.5 gr. 1 gr. 0.1 gr.

METODOLOGA
Esterilizar el inoculo a 121 C *20 minutos a 15 psi Enfriar a 28 C Inocular aspticamente 5 gr. De levadura Incubar a 28 C por 12 horas
Para inocular se debe hacer los siguientes pasos: -Extraer 5% del inoculo, centrifugarlo a 3000 rpm por 10 minutos. -Eliminar el sobre nadante. -Llenar agua y llevarlo de nuevo a la centrifuga a 300rpm por 10 minutos. -Eliminar el sobre nadante -Inocular el decantado al medio de fermentacin.

Esterilizar el medio de fermentacin a 121 C *20 minutos a 15 psi

Enfriar a 28 C Inocular aspticamente 5% del inoculo Incubar a 28 C por 24 horas

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Para la medicin con el espectrofotmetro (densidad ptica):

Extraer 4 ml del caldo de fermentacin Calibrar el espectrofotmetro a 620nm Llevar la muestra espectrofotmetro a 620nm

Para la medicin por gravimetra:

Extraccin del 5% del inoculo despus de las 12 horas

Extraer 4 ml del caldo de fermentacin Centrifugar a 3000rpm por 10 minutos Pesar el decantado

Realizar los siguientes grficos

Densidad ptica

Peso

Centrifugacin a 3000rpm por 10 minutos

Tiempo

Tiempo

Despus del centrifugado separacin en dos fases

Vaciado del inoculo al medio de fermentacin

Observacin en espectrofotmetro

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Curvas de crecimiento microbiano

RESULTADOS
PARA LOS GRAFICOS

Tiempo 0 1 3 5 24

Absorbancia 0,217 0,749 0,842 1,32 1,259

Gravimetra 0,008 0,01 0,03 0,01 0,185

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CLCULOS MATEMTICOS
Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (absorbancia) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla Tiempo 0 1 3 5 Absorbancia 0,217 0,749 0,842 1,32

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA ABSORBANCIA

N f = N0 et LnN f = LnN0 + t Ln (1.32) = Ln ( 0.217 ) + (5) = 0.4h-1

CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA ABSORBANCIA

N f = N0 e t

Nf = N0 2g

2 g = e t gLn2 = tLne t g= Ln2 0.4h 1 5h g= Ln2 g = 2.89

t g

5 = 2 .8 9 = 1 .7 3

Conclusin: El tiempo de generacin que nos arroja n los resultados nos muestran que cada 1.73 horas se duplica la levadura

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CLCULOS MATEMTICOS
Se analizar la parte de la curva hasta donde haya habido crecimiento y tomaremos como el dato final N (peso) al dato de mayor magnitud tal como se muestra en al siguiente tabla Tiempo 0 1 3 5 Gravimetra 0,008 0,01 0,03 0,1

CALCULO DEL LA TASA DE CRECIMIENTO PARA EL PESO

N f = N 0 e t LnN f = LnN0 + t Ln ( 0.1) = Ln ( 0.008 ) + (5) = 0.5h -1

CALCULO DEL TIEMPO DE GENERACION PARA EL PESO

N f = N0 e t

Nf = N0 2g

2 g = e t gLn2 = tLne t g= Ln2 0.5h 1 5h g= Ln2 g = 3.64

t g 24 = 4 .5 3 = 1 .3 7 =

Conclusin: El tiempo de generacin que nos arroja n los resultados nos muestran que cada 1.37 horas se duplica la levadura

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DISCUSIONES
Con respecto a la velocidad especifica: Fabio Rafael Tarntola 2003, menciona que la velocidad especifica del Sacharomyces es de 0.124h-1 , en los resultados obtenidos se tuvo para la absorbancia un resultado de 0.4h-1 y para la medicin del peso de 0.5h-1 , es probable que se haya cometido erroes en la toma de datos al momento de medir la absorbancia y quiza no estuvo calibrado el espectrofotmetro. Fabio Rafael Tarntola 2003, menciona que el tiempo de duplicacin del Saccharomyces cereviceae es 2 horas a 25 C, e los resultados obtenidos par absorbancia se tiene que el tiempo de duplicacin es de 1.73h, y para la gravimetra se tiene que el tiempo de duplicacin es de 1.37h, los resultados estn cercanos al teorico.

CONCLUSIONES
La velocidad especifica de crecimiento de Saccahromyces cerevisiae es de 0.124h-1 El tiempo de duplicacin de Saccahromyces cerevisiae es de 2horas Las levaduras como Saccahromyces cerevisiae se desarrolla normalmente a 25C

BIBLIOGRAFIA
Fabio Rafael Tarntola 2003, DISEO Y PUESTA EN MARCHA DE UN SISTEMA SEMICONTINUO DE FERMENTACION PARA LA PRODUCCION DE ETANOL A PARTIR DE MATERIAS PRIMAS RENOVABLES MEDIANTE Saccharomyces cerevisiae. Universidad Nacional del Cuyo Mendoza-Argentina. Erika Fajardo Trujillo2007, EVALUACIN DE MELAZA DE CAA COMO SUSTRATO PARA LA PRODUCCIN DE Saccharomyces cerevisiae PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA-FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS- MICROBIOLOGA INDUISTRIAL BOGOT D.C. www.microbiologia.com.ar Buscador www.google.com: Microbiologa clnica crecimiento y muerte de bacterias

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ANEXOS
Tablas de Fabio Rafael Tarntola

EXPERIMENTO SUSTRATO INICIAL Azcar Reductor Inicial 1 1.84 2 3.25 3 5.24

VELOCIDAD ESPECFICA (h-1) 0.090 0.124 0.115

CONSTANTE DE CONVERSIN (Y) N lev x108/g azcar 3.68 295.4 142.8

Organismo

Tiempo de Temp. (C) duplicacin (hs)

BACTERIAS Escherichia coli Bacillus subtilis Pseudomonas putida 37 40 30 0,28 0,43 0,75 6 34

Mycobacterium tubercu37 losis Treponema pallidum LEVADURAS Saccahromyces cerevisiae 25 37