UNIVERSIDAD PERUANA UNION

Facultad de Ciencias de la Salud E.A.P. de Medicina Humana

Prctica de Laboratorio N 11: Protenas Profesor: Q. F. Pablo Padilla Alumno: Samuel Fernando Velasco Chacn 2013

Introduccin
En el presente informe de laboratorio el estudio fue centrado en el tema de reconocimiento de protenas y por ende sus propiedades fsicas y qumicas; para ello hemos realizado un ensayo de laboratorio mediante el cual pudimos encontrar cada una de las diferentes formas de reconocer la presencia de las protenas en una sustancia en este caso utilizamos la clara de huevo ya que est clara de huevo encontramos la albumina ya que esta a su vez es una protena, para ello empleamos reacciones de solubilidad y de identificacin de sus enlaces. En el presente informe se presenta los resultados de las reacciones y propiedades caractersticas de las protenas. Las protenas son las sustancias que estn compuestas por la unin de dos aminocidos o ms y que forma la compleja estructura de los tejidos de los organismos vivientes tales como los msculos, la piel, las uas, los cabellos, la sangre, leche, huevos, plumas, la sangre, etc. Ya que en ellas podemos encontrar una gran variedad de protenas que cumplen una funcin de gran importancia caracterizndose por poseer un enlace peptdico.

Objetivos
El alumno: Efectuar ensayos fsicos y qumicos caractersticos de una protena.

Materiales y Mtodos
Materiales: Gradilla con tubos Vaso de 250 ml Fiola de 1000 ml Embudo Gasa y algodn Probeta Termmetro Pinzas para tubos Vaso de 600 ml Reactivos: o Albmina de huevo. o Reactivo de Milln. o NaOH al 20%. o Solucin de NaCl al 1% (suero). o Solucin de Pb(CH3COO)2 al 10%. o Solucin de CuSO4 al 1%. o cido ntrico concentrado.

o o o o o o o

Agua destilada. Solucin de K4 [Fe(CN)6] al 10% . Alcohol etlico comercial. Solucin de Ninhidrina al 0.1%. Hidrxido de amonio [6M]. Solucin de AgNO3 al 1%. Reactivo de Biuret.

Fundamento terico:
Protenas:
Las protenas son los materiales que desempean un mayor nmero de funciones en las clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario. Son macromolculas orgnicas, constituidas principalmente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc. Estos elementos qumicos se unen para formar unidades estructurales llamados aminocidos, a los cuales podramos considerarlos como los "las bases de los edificios moleculares". Se clasifican, de forma general, en Holo-protenas y Hetero-protenas segn su conformacin respectivamente slo por aminocidos o bien por aminocidos ms otras molculas o elementos adicionales no aminoacdicos. Los alimentos que consumimos nos proveen protenas esenciales para el organismo. Pero tales protenas no se absorben normalmente en su constitucin normal sino que, luego de su desdoblamiento por hidrlisis o rotura del enlace, debido al proceso de digestin, atraviesan la pared intestinal en su forma desdoblada como aminocidos y cadenas cortas de pptidos. Esas sustancias se incorporan inicialmente al torrente sanguneo y, desde all, son distribuidas hacia los tejidos que las necesitan para formar las protenas, consumidas durante el ciclo vital.

Los pptidos y el enlace peptdico:

Los pptidos estn formados por la unin de varios aminocidos mediante un enlace peptdico, enlace caracterstico en las protenas. Es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del que se encuentra a su lado, dando lugar al desprendimiento de una molcula de agua. As pues, para formar pptidos los aminocidos se van enlazando y unindose entre s formando cadenas de longitud y secuencia variable. Para denominar a estas cadenas se utilizan prefijos muy utilizados como: Oligopptidos.- si el N de aminocidos es menor de 10. Dipptidos.- si el N de aminocidos es 2. Tripptidos.- si el N de aminocidos es 3. Tetrapptidos.- si el N de aminocidos es 4. Polipptidos o cadenas polipeptdicas.- si el N de aminocidos es superior de 10.

Estructura de las protenas:

La organizacin de una protena viene definida por cuatro tipos o niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de las cuales informa de la disposicin de la estructura definida en el espacio. Estructura primaria: La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos muestra qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se pueden formar. La funcin de una protena depende de su secuencia y esta ligada la forma que sta adopte. Estructura Secundaria. La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los aminocidos, a medida que se van uniendo progresivamente durante la sntesis de protenas y debido a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable y definida. Existen dos tipos de estructura secundaria: 1. La a (alfa)-hlice 2. La conformacin beta Dicha estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue.

Estructura terciaria: La estructura terciaria nos da detalles sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular. En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por consiguiente la terciaria. Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones tales como las de transporte, enzimticas, hormonales, etc. Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces: El puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre. Los puentes de hidrgeno. Los puentes elctricos. Las interacciones hidrfobas. Estructura Cuaternaria Esta estructura informa del tipo de unin, mediante enlaces dbiles ( no covalentes) de varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero.

Propiedades de protenas:
Desnaturalizacin: Consiste en la prdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha estructura mantenindola unidad por un tipo de enlace. Todas las protenas desnaturalizadas poseen la misma conformacin, muy abierta y con una interaccin excesiva con el disolvente, por lo que una protena soluble en agua cuando se desnaturaliza se convierte en insoluble en agua y precipita. La desnaturalizacin se puede producir por cambios de temperatura, tenemos como ejemplo el huevo cocido o frito, variaciones del pH. En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una protena desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se denomina re-naturalizacin.

Clasificacin de las protenas segn su solubilidad:

Las protenas fibrosas son insolubles en H2O. Las protenas globulares generalmente son solubles en H2O o soluciones salinas dbiles. Las distintas solubilidades de las protenas son de ayuda en ciertos casos en los que se les requiere, pero no son tiles para su clasificacin.

Es posible formar sales de protenas hacindolas precipitar con sulfato de amonio saturado. Cuando la concentracin de sulfato de amonio se reduce al 50%, algunas se disuelven mientras otras continan precipitadas en el fondo de la solucin. Las globulinas se diferencian de la albmina por su solubilidad como podemos observar en la siguiente tabla. SOLUBILIDAD H2O Soluciones salinas dbiles Soluciones salinas fuertes Sulfato de amonio al 50% Albmina s s s disuelve s no precipita Globulina

Actividades previas:
Qu se entiende por desnaturalizacin de protenas? qu pasa con la estructura de las protenas cuando se desnaturalizan?

a. Desnaturalizacin de protenas: Se presenta cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa. Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior tale como secundaria, terciaria y cuaternaria, quedando solamente la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional definida o fija. La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: Cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin. Una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie. Prdida de las propiedades biolgicas.

Cualquier elemento o factor que afecte la interaccin de la protena con el disolvente disminuir notablemente su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitarn la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena se encuentra desnaturalizada. b. La forma de una protena se cambia sin alterar, manteniendo la estructura primaria, se dice que la protena se ha desnaturalizado. Normalmente, existe una protena nativa, o sea la protena como la podemos encontrar en la clula. Al adicionarle un agente desnaturalizante, este hace que la protena se desdoble y tome otra conformacin denominada: espiral aleatoria, que corresponde a la forma desnaturalizada de la protena. En algunos casos el proceso de desnaturalizacin es reversible. La desnaturalizacin involucra una alteracin de la estructura secundaria y terciaria de la protena; cualquier cambio que perturbe las fuerzas de dispersin, desnaturalizan la protena. Indique que sustancias se producen por la hidrolisis de una protena. Proponga o busque el mecanismo de Hidrlisis.

La hidrlisis total de las protenas da lugar a veinte aminocidos, que son los llamados aminocidos proteicos. Los aminocidos son los monmeros de las protenas, que a su vez son polmeros lineales de aminocidos. En ocasiones, la hidrlisis de una protena da lugar a aminocidos con estructura diferente a la de estos veinte. Se trata, por lo general, de modificaciones pos-traduccionales, Hidrlisis de las protenas La hidrolisis de las protenas termina por fragmentarlas en a -aminocidos. Existen 3 tipos de hidrolisis: Hidrolisis cida: Se basa en la ebullicin prolongada de la protena con soluciones cida fuertes (HCl y H2SO4). Este mtodo destruye completamente el triptfano y parte de la serina y la treonina. Hidrolisis bsica: Respeta los aminocidos que se destruyen por la hidrolisis anterior, pero con gran facilidad, forma racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH). Hidrolisis enzimtica: Se utilizan enzimas proteolticas cuya actividad es lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce racemizacin y no se destruyen los aminocidos; por lo tanto es muy especfica. Cules son los aminocidos esenciales para el hombre y porque se le llamas as? Son aminocidos esenciales aquellos que se requieren en la dieta ya que no se pueden biosintetizar. Los ocho aminocidos esenciales son:

isoleucina lisina fenilalanina triptfano

leucina metionina treonina valina

Aunque la histidina es un aminocido esencial para los nios, se cree que no lo es para los adultos. Todava no es clara la clasificacin de la histidina ni de la arginina; parece ser que ambos aminocidos se pueden biosintetizar en cantidades ms pequeas que los dems aminocidos no esenciales. Se debe anotar que los aminocidos esenciales lo son nicamente respecto a la dieta y no en trminos de su importancia en la estructura o funcin de las protenas.

Procedimiento
1. ENSAYOS DE SOLUBILIDAD A los 4 tubos de ensayo coloque aproximadamente 1 ml de clara de huevo (albmina). A cada tubo adale respectivamente 5 ml de: agua fra agua caliente solucin de NaCl (suero) solucin de NaOH al 20%

Resuma sus observaciones en la siguiente tabla: Solvente Agua fra Agua caliente Solucin de NaCl Solucin de NaOH al 20% 2. PREPARACION DE LA SOLUCION DE ALBUMINA Vace en la fiola la clara de huevo sobrante de la primera parte. Aada aproximadamente 1/2 de litro de agua destilada, tape la fiola y agite fuertemente. Arme un equipo de filtracin, utilizando como filtro una gasa medicinal con una capa de algodn en medio y filtre la solucin preparada a un vaso grande. Solubilidad Muy buena Solubilidad Parcial Insoluble Precipita

3. ENSAYOS DE COLORACION

a. Reaccin de Biuret:
A 1 ml de la solucin de albmina adale 1 ml de la solucin de NaOH al 10% y aada gota a gota la solucin de CuSO4 hasta observar cambios y la reaccin posteriormente. La formacin de una coloracin violeta denota la presencia del enlace peptdico -CO-NH-, ya que los grupos imina -NH- del enlace peptdico forman un complejo de coordinacin con el ion cprico:

b. Reaccin con Ninhidrina:

Coloque 3 ml de la solucin de albmina en un tubo de prueba y adicinele 5 gotas de la solucin de Ninhidrina al 1%. Caliente hasta el punto de ebullicin y enfre. Anote sus observaciones. La coloracin azul con Ninhidrina la producen todos los aminocidos, excepto la Prolina e la Hidroxiprolina que presenta una coloracin amarilla al reaccionar.

Hidrato de Ninhidrina

Violeta

c. Ensayo Xantoprotico:
Vierta a un tubo de ensayo 2 ml de la solucin de albmina y agregue unas 5 gotas del cido ntrico concentrado. Caliente a bao-mara por unos instantes. Posteriormente se debe dejar enfriar. Luego agregue unas cuantas gotas de hidrxido de amonio NH4OH [6M]. La aparicin de una coloracin amarilla, que posteriormente se torna de color naranja intenso con la adicin del hidrxido de amonio denota la presencia de grupos fenilo, que se forman las Nitro-modificaciones amarillas. Anote sus observaciones.

d. Ensayo de Milln:
Coloque 2 ml de la solucin de albmina a un tubo de prueba y agregue 5 gotas del reactivo de Milln. Caliente a bao-mara hasta el punto de ebullicin del mismo. La aparicin del precipitado blanco, que se torna rojo posteriormente al pasar unos segundos, indica la presencia de los grupos fenlicos no sustituidos. Anote sus observaciones.

4.

Ensayos de precipitacin

Las protenas por efecto de sales metlicas dan precipitados de proteinatos metlicos, formados por la parte cida de las protenas. Las sales neutras hacen precipitar las protenas debido al efecto de la desnaturalizacin y deshidratacin. Las protenas precipitadas de esta manera, pueden re-disolverse en el solvente original. En tres tubos de ensayo limpios coloque 3 ml de solucin de albmina y agregue a cada uno respectivamente, 1 ml de: solucin de AgNO3 al 5% solucin de CuSO4 solucin de Pb (CH3COO)2 Anote sus observaciones.

5.

Desnaturalizacin de protenas
a. Efecto de calor:
Coloque 3 ml de la solucin de albmina a un tubo de ensayo y caliente en un vaso con agua y termmetro. Anote la temperatura a la que comenz coagularse la albmina.

b. Efecto de alcohol etlico:

A un tubo de ensayo con unos 3 ml de la solucin de albmina, agrguele 5 ml de alcohol etlico comercial. Anote sus observaciones.

Resultado y Discusin
1. Ensayos de solubilidad:
Se coloc albumina en 4 tubos de ensayo diferentes y se les hizo comprobar las solubilidad de 4 compuestos diferentes y se pueden observar las caractersticas de cada uno en la siguiente tablas. Solubilidad Muy buena Solubilidad Parcial Insoluble Precipita

Solvente Agua fra Agua caliente Solucin de NaCl Solucin de NaOH al 20%

2. Preparacin de las solucin de Albumina

Al realizar el filtrado pudimos observar que no se filtr ya que estamos ante la presencia de un coloide, ya que su estructura tan grande no puede atravesar los poros del filtro adems que hay que tener en cuenta su consistencia.

3. Ensayos de Coloracin a) Reaccin de Biuret: En este experimento, inicialmente habamos obtenidos

una coloracin rosada en la reaccin el resultado de la mezcla nos dio color violeta, el cual en el que la teora no mostraba, que nos indica la presencia

del enlace peptdico comn en las protenas. El Biuret reconoce la presencia de este enlace y por eso decolora con un tie violeta.

b) Reaccin con Ninhidrina: En la solucin preparada con albmina y

Ninhidrina, se ha podido observar que la Ninhidrina produjo una coloracin azul, demostrando que la hay presencia de los aminocidos en esta protena, detectados por la Ninhidrina.

c) Ensayo de Xantoprotico: Cuando mezclamos las soluciones inicialmente

nos dio una coloracin naranja al final de la reaccin pero, inicialmente obtuvimos una coloracin amarilla, que se torn color naranja intenso, demostrando que el ensayo de Xantoprotico reconoce un aminocido aromtico y a los dems no obtienen esa reaccin, y solo se da en un medio bsico, por consiguiente pudimos observar que el hidrxido de Amonio es un confirmador de la reaccin.

d) Ensayo de Milln: Despus de colocar todas las soluciones en un tubo de

prueba, vimos que se form un precipitado blanco, que se torn rojo, esto indica que en la solucin est el grupo fenlicos no sustituidos y que cambio su color pero nos su estructura. El ensayo de Milln detecta al grupo benceno presente en la albumina.

4. Ensayos de Precipitacin: En los tres tubos de ensayo se pudo observar las siguientes caractersticas de las reacciones.
solucin de AgNO3 al 5%: La solucin nos dio color blanco lechoso con la presencia de espuma y con precipitado blanco a su vez. solucin de CuSO4: Desnaturaliza a las protenas. Form una coloracin celeste y a su vez se form un precipitado en la solucin de sulfato de cobre. solucin de Pb (CH3COO)2 Pudimos observar que el acetato reconoce un grupo de azufre en los aminocidos, obtuvimos tambin una coloracin blanca oscura con la presencia de un precipitado del mismo color.

5. Desnaturalizacin de Protenas
a. Temperatura de la reaccin: La temperatura en la que comenz a coagularse la albmina fue de 86C perdiendo la estructura normal de la albumina y obteniendo un color trasparente.

b. Efecto de alcohol etlico: Pudimos observar en la solucin unas tiras de finitos hilos color blanco, esto se puedo obtener debido a que la albmina se ha desnaturalizado dentro de la solucin.

Discusin
Se desarroll cada uno de los experimentos propuestos donde se pudo comprobar cada una de las teoras planteadas en cuanto a que era el posible resultado de las reacciones desarrolladas en el laboratorio (Genaro 2003) en cuanto a las solubilidad de la albumina en agua fra esto debido a que al estar fra el agua no hay energa de donde se pueda sacar para generar la reaccin en cambio en el agua caliente si hay dicha energa necesaria aunque su solubilidad sea parcial. Como pudimos comprobar en el laboratorio la albumina no se puede filtrar o muy poco debido a que posee una carga molecular negativa a pesar de que su tamao es relativamente escaso segn (Kelley1994). Su reaccin con Biuret se realiz conforme a lo expuesto y se obtuvo los resultados esperados como lo son la coloracin violeta formando un complejo debido al reconocimiento que hace la presencia del sulfato de cobre (Quesada Mora 2007). La desnaturalizacin de protenas se da a una temperatura de 70C sin embargo en la prctica de laboratorio hubo un disolucin en agua lo que aument la cantidad de temperatura necesaria para esta reaccin (Hernndez 2007)

Conclusin
Al combinar y mezclar todas las soluciones propuestas, he aprendido que las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo ya que cumplen muchas funciones de gran utilidad para el funcionamiento de nuestro cuerpo en la vida diaria. Las protenas estn constituidas por aminocidos por lo que a travs de esta propiedad de las protenas, por lo que se utilizaron mtodos que se basan a su vez en el reconocimiento de los aminocidos Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo comprobar experimentalmente que este reactivo conocido como albumina es un tipo de protena. En las reacciones donde se obtuvo precipitacin fu como resultado de un cambio en el estado fsico de la protena, mientras que en la coagulacin se ha producido un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso este tipo de reaccin es irreversible. Aprendimos que hay ciertas reacciones teidas que dan las protenas y su color depende de los aminocidos presentes en la molcula proteica. Las que contienen tirosina dan las reacciones Xantoproteica y de Millon.

Cuestionario
1. Qu caractersticas presenta la solucin acuosa de la clara de huevo? Representa el 60% del peso del huevo. Est constituida principalmente por agua (90%) y un 10% de protenas de alto valor biolgico como la ovoalbmina, ovo-globulina, ovo-mucina. Es una sustancia viscosa, transparente y se coagula a una temperatura de 65C adquiriendo un color blanco, la presencia de las protenas ya mencionada, son responsables de la espuma al montar las claras.

2. Porque la solucin preparada de la clara de huevo no se puede filtrar en el papel filtro? El papel tiene poros muy pequeos, la caracterstica del huevo es que es muy viscoso, debido a la presencia de enlaces peptdico adems que la clara de huevo es un coloide, por tal motivo no se pueden separar por filtracin, por lo tanto no se difunden a travs de una membrana permeable o lo hacen con mucha lentitud siendo una caracterstica de los coloides. 3. Cul es la protena principal de la clara de huevo? La Ovoalbumina es la principal protena presente en la clara de huevo y por lo tanto la que posee mayor proporcin en el huevo. Ovomucina: hace al 2 % de la albumina proteica existente en el huevo. Ovoalbumina: ms abundante del huevo y la ms importante Conalbumina: el 14 % de total de las protenas de la clara de huevo 4. Cuando el cido ntrico cae casualmente en la piel, cul de las reacciones efectuadas se produce? El cido ntrico al caer en la piel hidroliza las protenas de la piel causndole quemaduras importante en la misma, el nitrato residual que queda como consecuencia de la reaccin es quien da el color amarillo que tie la piel afectada, ya que la mayora de nitratos acomplejados en compuestos orgnicos dan una coloracin amarillenta. 5. De acuerdo a lo realizado en la prctica, explique lo que ocurre al cocinar un huevo. Si ponemos a cocinar un huevo en agua hirviendo a una temperatura de 100C, lo primero que apreciamos es que en torno a la cscara se van formando unas pequeas burbujas. stas son causadas por el aire atrapado en el interior del huevo, que se va expandiendo y trata de salir a travs de los poros de la cscara. Lo que sucede en el interior del huevo es que las fuerzas de atraccin dbiles que mantienen la estructura molecular de la ovoalbmina de la clara son

bombardeadas por las molculas de agua presentes alrededor de la solucin, de manera que la estructura flucta y oscila. Al ir aumentando la temperatura, la energa de las molculas de agua tambin aumenta proporcionalmente a la temperatura de la reaccin y, en consecuencia, la energa de vibracin interna de la cadena de albmina se ve incrementada, generando la posterior desnaturalizacin y coagulacin de esta protena. 6. La clara de huevo o la leche se usan a menudo como antdotos en los envenenamientos con algunos metales pesados. como plomo, mercurio, bario, etc. En qu fenmeno, de los que realizamos en la prctica, se basa esta aplicacin? Cuando se produce un envenenamiento, como mtodo casero se le da leche o huevo como antdoto, debido a que las sales neutras hacen precipitar a las protenas, esto ocurre por el efecto de desnaturalizacin y deshidratacin. Las protenas precipitadas pueden as disolverse y eliminar el veneno ingerido, quedando una barrera que impide el paso de microrganismos.

Bibliografa
1 McMurry J. Qumica Organica. 3rd ed.: Publishing Company; 1994. . 2 Palacios Rodriguez A, Salome Ordoez V, Salvatierra Cachulli A, . Serrano Yalerque S, Zambrano Sayas L. Informe de Laboratorio N 4. 3 Bruce A, Dennis B, Hopkin K, Alexander J. Introduccion a la Biologa . Celular. 2nd ed. Buenos aires: Editorial Medica Panamericana; 2006. 4 Voet D, G. Voet J, Pratt C. Fundamentos de Bioqumica. 2nd ed. Buenos . aires: Editorial Panamericana; 2009. 5 Garrrido Pertierra A, Teijn Rivera JM. Fundamentos de Bioqumica . estructural. 2nd ed. Madrid, Espaa: Tbar; 2006. 6 B. Donnersberger A, E. Lesak A. Libro de Laboratorio de Anatoma y . Fisiologa. 7th ed. Barcelona, Espaa: Paidotribo; 2002.