Anda di halaman 1dari 31

PEMBUATAN PREPARAT IRISAN MELALUI METODE PARAFIN

Kelompok 1
Ardhania

Pratiwi Erma Yunita Nur Azizah Yunita Putri

JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI MALANG

TUJUAN
1. 2. 3. 4. 5. 6.

Membuat preparat irisan melintang batang dengan metode parafin Membuat preparat irisan melintang akar dengan metode parafin Membuat preparat irisan melintang daun dengan metode parafin Membuat preparat irisan bujur meristem apikal batang dengan metode parafin Membuat preparat irisan bujur meristem apikal akar dengan metode parafin Mendeskripsikan ciri khas preparat irisan yang dihasilkan terkait dengan: a. Struktur anatomis spesimen b. Teknis fiksasi dan pewarnaan yang dilakukan

BAHAN
Dikotil : - Akar, batang/cabang, daun tumbuhan Klerek (Sapindus Monokotil : - Akar dan batang tumbuhan Jagung (Zea mays) - Daun tumbuhan Sereh (Cymbophogon nardus)

rarak)

ALAT & BAHAN


- Pompa Vakum - Neraca - Alkohol abs : Xylol = 2:2 - Desikator - Pipet tetes - Alkohol abs : Xylol = 1:3 - Oven - Pipet transfer - Xylol - Kulkas - Gelas koplin - Xylol - parafin - Mikrotom - Jarum preparat - Aquades - Mikroskop - Lampu spiritus - Eritrosin - Loupe - Gliserin - Safranin - Nampan pengering - Formalin - Kristal violet - Pisau - Asam asetat - Fast green - Silet - Alkohol 50% - Orange-G - Kaca benda - Alkohol 70% - Minyak Cengkeh - Kaca penutup - Alkohol 85% - Balsam - Beaker glass - Alkohol 95% Kanada/Entelan - Kuas - Alkohol absolut - Gelas ukur - Alkohol abs : Xylol = 3:1

PROSEDUR
1.
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Koleksi Spesimen Fiksasi Dehidrasi Penjernihan Infiltrasi Pengeblokan Pengirisan Penempelan Pengecatan/Pewarnaan Mounting

KOLEKSI SPESIMEN

AKAR, BATANG, DAUN ( bisa dari tanaman pot, pengecambahan, piaraan dalam tempat lembab, kultur jaringan)

Memotong Spesimen
Memasukkannya ke dalam bejana/wadah yang di dalamnya terdapat air untuk mencegah kekeringan/kerusakan sebelum fiksasi

FIKSASI

Mengeluarkan udara dalam jaringan tumbuhan dengan menggunakan pompa vakum

Hasil koleksi spesimen di rendam dalam akuades di dalam pompa vakum


Jika spesimen sudah tenggelam,mengganti akuades di dalam pompa vakum dengan larutan fiksatif misal: FAA selama 24 jam/ tergantung jenis preparat

DEHIDRASI

Mengganti larutan fiksasi dengan alkohol 50%(rendam 30 menit/tergantung kebutuhan) Mengganti larutan alkohol 50% dengan alkohol 70%(rendam 30 menit/tergantung kebutuhan)

Spesimen dapat disimpan

PENJERNIHAN

Alkohol/Xylol (3 : 1) 1 jam Alkohol/Xylol (1 : 1) 1 jam

Alkohol/Xylol (1: 3) 1 jam


Xylol I, 1 jam Xylol II, 1 jam

INFILTRASI

Xylol/ Parafin (1 : 1)

45o 50o C
Parafin I

1 jam

65o 70o C
Parafin II

1 jam

65o 70o C

1 jam

PENGEBLOKAN

Parafin pada dasar kotak

Tambah parafin dan atur spesimen


Luncur dan selam blok

PENGIRISAN

Menemukan tombol atau alat pengunci pisau mikrotom

Mengatur tebal tipisnya irisan

Memindah hasil irisan dan meletakkan pada kaca benda menggunakan kuas yang basah

PENEMPELAN

Melarutkan 1 gr gelatin dm 100 ml aquades

Memanaskan sampai 30C smbil diaduk.(Hingga Larut)


Menambahkan 2 gr kristal fenol dan 15 ml gliserin Menyaring selagi masih panas

Mengoleskan perekat Haupt diatas kaca benda Meneteskan sedikit formalin 3% diatas perekat Haupt pada kaca benda

Letakkan irisan diatas formalin

Panaskan diatas lampu spiritus

Sisa perekat dan formalin pada kaca benda dihisap menggunakan kertas hisap Mengeringkan preparat bisa menempatkan di kotak pengering

PEWARNAAN

Irisan tempel kering

Xylol I (3 menit)

Xylol II (3 menit)

Alkohol absolut (2 menit)


Alkohol 95% (2 menit)

Alkohol 70% (2 menit)

Safranin 1% dalam alkohol 50% (2-24 jam)

Air

Air

Kristal violet jenuh dalam aquades (1 menit)


Alkohol absolut (3-4 celup)

Alkohol absolut (3-4 celup)

Orange-G jenuh dalam Minyak cengkeh (10 detik)

Fast green 1% dalam Alkohol absolut (5-10 celup dalam 10 detik)

Alkohol absolut : Minyak cengkeh : xylol 1:1:1 Celup+goyang jernih

Xylol I (2-5 menit)

Xylol II (2-5 menit)

MOUNTING

MOUNTING

Hasil pewarnaan
Tetes balsem kanada/entelan Tutup kaca benda Simpan di pengeringan

Pemeriksaan Preparat

PREPARAT AWETAN IRISAN

.terima kasih.