Anda di halaman 1dari 1

ALAT DAN BAHAN Alat 1. Batang pengaduk 2. Gelas kimia 3. Gelas ukur 4. Microwave 5. Mikropipet 6. Penangas air 7.

. Perkamen 8. pH meter 9. Tabung sentrifugasi 10. Timbangan Bahan 1. Aquadest 2. EDTA 0,25 M 3. Inhibitor Protease 4. Pewarna Protein 5. Trietanolamin 6. Tris-HCl 7. HCl 1N

Prosedur Pertama-tama dibuat dahulu Nematoda Solubilization Buffer (NSB) dan tris-HCl. Untuk pembuatan Nematoda Solubilization Buffer adalah sebagai berikut, 21 l trietanolamin, 56 l EDTA 0,25 M dan 700 l inhibitor proetease dimasukkan kedalam gelas kimia menggunakan mikropipet dan diaduk hingga homogen. Kemudian ditambahkan aquades sebanyak 6,223 ml dan diaduk homogen. Setelah itu NSB siap digunakan. Adapun langkah-langkah untuk pembuatan Tris-HCl adlah sebagai berikut, Tris-HCl ditimbang sebanyak 1,2114 gr menggunakan perkamen. Kemudian di add aquadest hingga 100 ml dan diaduk hingga semua tris-HCl larut dan homogen. Setelah itu diukur pHnya hingga mencapai 6,8. Bila pH terlalu asam ditambahkan NaOH tetapi bila pH terlalu basa di tambahkan HCl. Setelah pHnya mencapai 6,8 ditambahkan lagi aquadest sebanyak 200 ml, diaduk homogen dan digabungkan dalam botol coklat. Tris-Hcl siap digunakan Untuk mengambil protein dalam pelet (hasil praktikum sebelumnya yang disimpan didalam kulkas) menggunakan langkah-langkah sebagai berikut, pelet tersebut ditambahkan NSB yang telah dibuat sebelumnya, dan diaduk hingg semua pelet terdispersi dalam NSB dan dipindahkan ke dalam gelas kimia. Setelah itu di panaskan dalam microwave pada suhu 90oC selama 1 menit. Dalam keadaan hangat segera tambahkan pewarna protein dan inhibitor protease, kemudian dikocok hingga homogen dan dipindahkan kedalam tabung sentrifugasi. Lalu dipanaskan di atas penangas air mendidih selama 7 menit. Setelah itu, disentrifugasi selama 5 menit pada 6000rpm. Kemudian didapatkan dua lapisan yaitu lysate dan endapan, lapisan lysate (atas) dipindahkan kedalam tabung sentrifugasi baru dan disimpan.