Anda di halaman 1dari 6

;UJI ENZIMATIS DAN BOKIMIA NAMA PENGUJIAN FUNGSI MEDIA PEREAKSI ATAU INDIKATOR HASIL PENGUJIAN POSITIF NEGATIF

UJI IMVIC Mengidentifikasi bakteri yang mampu mendegradasi (menguraikan) asam amino triptofan secara enzimatik yang dimediasi oleh enzim tryptophanase yang berfungsi mengkataliskan penguraian gugus indol dari triptofan Mendeteksi bakteri yang memiliki kemampuan mengoksidasi glukosa dan menghasilkan asam campuran (metilen glikon) dengan konsentrasi tinggi Mendeteksi bakteri yang memiliki kemampuan membentuk Acetyl methyl carbinol Mengidentifikasi mikroorganisme yang menggunakan sitrat sebagai satusatunya sumber energy dan karbon Mengetahui terurai tidaknya zat Pati menjadi glukosa/maltose dalam bakteri Mengetahui kemampuan bakteri untuk menguraikan Gelatin menjadi asam amino

Uji Indol

SIM Medium atau Tripton Water

Pereaksi Kovacs atau Ehrlich

Terbentuk cincin merah pada permukaan media

Tidak mengalami perubahan warna

Uji Methyl Red

Nutrien Broth

Metil Merah (indicator)

Media menjadi berwarna merah

Media berwarna kuning

Uji Voges Proskauer

Nutrien Broth

KOH 40% & naphtol 5%

Media menjadi berwarna merah muda

Tidak mengalami perubahan warna Media akan tetep berwarna hijau kebiruan

Uji Penggunaan Sitrat

Simmons Citrat Agar

Brom Thymol Blue (indicator)

Media menjadi berwarna biru

BONTREY PANJANG Uji Hidrolisa Pati Terlihat daerah bening disekitar koloni Gelatin tetap mencair setelah dimasukkan kedalam lemari es Terlihat perubahan warna menjadi birukehitaman Gelatin tetap kental, tidak mencair

Starch Agar

Lugol

Uji Hidrolisa Gelatin

Nutrien Gelatin

Uji Hidrolisa Lemak

Untuk mengetahui mampu atau tidaknya mikroorganisme menghasilkan lipase Untuk mengetahui mikroorganisme yang dapat menghasilkan urea Melihat kemampuan mikroorganisme dalam memfermentasikan gula juga membedakan anggota bakteri Enterobacteriaceae dan kelompok lain dari basil usus

Trybutirin Agar atau Spirit Blue Agar

Reagen Bacto Lipase 3%

Terlihat warna biru disekitar koloni

Tidak akan terbentuk warna biru Media akan tetap berwarna kuning/tidak berubah

Uji Hidrolisa Urea

Urea Broth

Phenol Red

Media berwarna merah

Triple Sugar Ion Agar (Tsia)

TSI Agar (agar miring)

Ferrosulfat

Pada bagian dasar media berwarna hitam

Tidak ada pembentukan warna hitam pada dasar media

Uji Oksidase

Untuk mengetahui adanya oksidase sitokrom pada mikroorganisme

TSA Plate

Campuran naphtol 1% dengan dimetil-pfenilendiamin oksalat 1% (1:1) vol/vol (reagens oksidase) H202 3%

Terjadi perubahan warna menjadi warna hitam pada koloni

Tidak terjadi perubahan warna

Uji Katalase

Uji Reduksi Nitrat

Untuk mengetahui adanya enzim katalase dalam mikroorganisme Untuk mengetaui mampu atau tidaknya mikroorganisme mereduksi nitrat menjadi nitrit lalu menjadi nitrogen Untuk mengetahui suatu bakteri yang mampu memfermentasikan karbohidrat

Kaldu karbohidrat

Terbentuk gelembung udara disekitar koloni Terbentuk warna merah bata pada media Terbentuk gas pada tabung Durham, media menjadi berwarna kuning (AG: Acid and Gas)

Tidak terbentuk gelembung udara Tidak terbentuk warna merah bata

Kaldu karbohidrat / kaldu nitrat NA Kaldu Karbohidrat (glukosa, maltosa, laktosa, sukrosa, manitol)

Asam Sulfanilat & Alpha Nafthilamin

Uji Fermentasi Karbohidrat

Phenol merah atau Brom Cressol Blue

Tidak terjadi perubahan apapun pada media (tetap berwarna merah)

ALAT DAN BAHAN Alat 1. Ose lurus (jarum tusuk) 2. Ose siku 3. Cawann petri 4. Rak tebung reaksi 5. Tabung reaksi 6. Pembakar spirtus 7. Label 8. Incubator 9. Kertas pembungkus tabung reaksi 10. Pipet tetes 11. Pipet ukur 1. 2. 3. 4. 5. Bahan Biakan bakter Lactose Broth Dextrose Broth Sukrosa Broth SIM medium/Tripton water 6. Sim Medium/TSIA 7. TNB 8. MR-VP Broth 9. TSA Slant 10. TSA Plate 11. Nutrient Glatin 12. Starch Agar 13. Trybutirin Agar atau Spirit Blue Agar 14. Urea Broth 15. Simmons Citrat Agar Pereaksi 1. Brom Cresol Purple 2. Phenol merah 3. Reagent Kovacs atau Ehrlich 4. Metal merah 5. KOH 40% 6. -naphtol 5% 7. Lugol 8. H2O2 3% 9. Campuran -naphtol 1% dengan dimetil-pfenilediamin oksalat 1% (1:1) vol/vol (Reagent oksidase) 10. Reagen Bacto Lipase 3% 11. BromThymol Blue 12. Asam Sulfanilat dan -nafthilamin

LANGKAH KERJA 1. Uji IMVIC a. Sediakan biakan bakteri b. Sebagian dari biakan tersebut diambil dengan ose lurus (jarum tusuk) c. Penanaman dilakukan mula mula pada air peptone (untuk uji Indol), kemudian ke dalam tabung methyl red broth, lalu ke dalam tabung VP broth, dan ke dalam tabung citrate sama seperti menanam pada agar miring d. Ose lurus bekas penanaman dipijarkan e. Memberi identitas pada tabung f. Menginkubasi media dalam incubator dengan suhu 37 C selama 48 jam. Esoknya dibubuhkan reagen untuk melihat hasilnya. Hasil: a. Kedalam medium air peptone (untuk melihat reaksi indol) ditambahkan ml reagen, dibiarkan selama 5 menit. Bila tidak terjadi perubahan warna, ditulis sebagai reaksi indol negative (-). Bila terjadi warna merah atau kecoklatan ditulis indol positif (+)

b. Kedalam medium methyl red ditambahkan 1-2 tetes reagen MR (0,4% dalam alcohol 96%). Bila terjadi warna merah disebut MR positif (+), sedangkan bila berwarna kuning disebut MR negative (-) c. Kedalam medium VP ditambahkan ml KOH 40% dan 5 tetes alpha nafthol (5% dalam alcohol 96%), kemudian dipanaskan sebentar. Bila terjadi warna merah kecoklatan yang berupa cincin dipermukaan tabung yang akhirnya warna merah tersebut menjalar kebawah ditulis sebagai VP positif (+), bila tidak ditambahkan terjadi perubahan apa-apa ditulis VP negative (-) d. Kedalam mediun citrate tidak ditambahkan reagen, sebab kedlaam medium terdapat indicator bromthymol blue. Bila perubahan warna yang terjadi menjadi biru tua cerah, ditulis sebagai positif (+), bila tidak terjadi perubahan warna, dan warna tetap hijau kebiruan dutulis citrate negative (-) e. Catatan: media sebelum ditanami harus berwarna jernih dan medium citrate harus berwarna kehijauan dan tidak terdapat adanya koloni. Media jangan smapai tertukar satu sama lainnya, misalnya media untuk melihat indol jangan tertukar dengan media untuk melihat reaksi methyl red 2. Fermentasi karbohidrat a. Sediakan biakan bakteri b. Jarum ose dibakar sampai pijar,kemudian didinginkan c. Dengan ose,diambil sampel bakteri pada biakan yang telah disediakan d. Bakteri yang terdapat pada ujung jarum ditanam pada media gula-gula secara berurutan mulai dari medium glukosa sampai medium terakhir.Setelah itu,jarum tusuk dipijarkan kembali e. Tabung diberi identitas f. Media diinkubasi pada suhu 37C,hasilnya dibaca setelah inkubasi 24 jam Hasil: a. Bila tidak terjadi perubahan warn apada medium (medium tetap merah) artinya tidak terjadi pembentukan asam, hasilnya harus ditulis negative atau (-) b. Bila terjadi perubahan warna menjadi kuning hal ini berarti terjadi pembentukan asam sebagai hasil penguraian gula dalam medium, hasilnya harus ditulis positif atau (+) c. Bila terjadi perubahan warna menjadi kuning dan didalam tabung durham terdapat gas, maka hasilnya ditulis sebagai positif (+g). media sebelum ditanami harus berwarna merah jernih (netral) dan tabung durham harus terisi penuh dengan medium

3. Hidrolisis Pati a. Beri label lempengan agar yang mengandung pati b. Inokulasi lempengan dengan biakan yang disediakan c. Inkubasikan pada suhu 37o selama 48 jam d. Pengamatan terhadap hasil inkubasi dilakukan dengan memberikan beberapa tetes larutan lugol keatas permukaan lempengan. 4. Hidrolisis Gelatin a. Tandai tabung nutrient gelatin dengan nama, tanggal dan mikroorganisme yang akan diujikan b. Media diinokulasi dengan cara menusukkan mikroorganisme yang akan diujikan sedalam bagian dari lapisan permukaan c. Inkubasikan pada suhu 37C selama 24 jam d. Pada hari kedua amati pertumbuhan dalam media gelatin, kemudian masukkan tabung dalam lemari es selama 30 menit. e. Amati pencairan gelatin setelah dikeluarkan dari lemari es 5. Hidrolisis Lemak a. Beri lebel lempengan agar yang mengandung lemak b. Inokulasi lempengan dengan biakan yang disediakan c. Inkubasikan pada suhu 37C selama 24 jam d. Periksa warna lempengan agar setelah diinkubasi 6. Hidrolisis Urea a. Tandai tabung nutrient gelatin dengan nama, tanggal dan mikroorganisme yang akan diuji b. Inikulasi agar miring dengan mikroorganisme c. Inkubasi pada suhu 37C selam 48 jam d. Amati perubahan warna dari merah jingga menjadi merah ungu 7. Uji H2S a. Tabung dengan media SIM diinikulasikan dengan biakan bakteri yang akan diuji, inokulasi dilakukan dengan ose lurus b. Media lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C, amati pada dasar media jika ada endapan hitam berarti positif 8. Uji Oksidase a. Cawan petri yang berisi media TSA diinokulasikan dengan bakteri yang akan diuji lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C b. Indentifikasi hasil inkubasi dengan penamaan pereaksi kovaks c. Amati perubahan warna

9. Uji Katalase a. Media TSA miring (agar miring) diinokulasii dengan biakan bakteri, lalu diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37C b. Indentifikasi dengan penambahan hydrogen peroksida, amati pembentukan gelembung udara 10. Uji Reduksi Nitrat
a. Media TNB diinokulasi dengan biakan bakteri, lalu diinkubasi selam 48 jam pada suhu 37C b. Tambahakan asam sulfanilat dan alpha naftilamin kedalam media yang

sudah diinkubasi, perubahan warna media menjadi merah menandakan nitrat sudah direduksi menjadi nitrit