Abstrak-Limfosit adalah pemain utama dalam pengembangan dari respon imun bawaan dan adaptif tetapi mereka perilaku

pada pasien dengan stroke akut telah menerima sedikit perhatian. Eksperimental prosedur: Menggunakan flow cytometry kami mengidentifikasi Total limfosit, sel-sel T, T helper (Th) sel, sitotoksik T limfosit (CTL), natural killer (NK) sel, sel B, dan T peraturan (Treg) sel pada 46 pasien berturut-turut dengan akut stroke dalam rata-rata 180 menit dari onset klinis, dan pada hari 2, 7, dan 90. Harian neurologis skor (National Institutes Skala Kesehatan Stroke), difusi-tertimbang pencitraan pada otak magnetic resonance imaging, gangguan fungsional, dan stroke-terkait infeksi (SAI) pada hari ke 7 dinilai. Apoptosis pada subset limfosit, tumor necrosis factor (TNF) -? / Interleukin (IL) -4 produksi di Th dirangsang dan CTL, cluster diferensiasi 86 (CD86) (B7-2) ekspresi dalam B sel, kortisol dan metanephrine dalam serum diukur. Analisis multivariat digunakan untuk mengevaluasi SAI, dan stroke hasilnya. Hasil: Peningkatan apoptosis dan jatuhnya T, Th, CTL, B, dan sel-sel Treg diamati setelah stroke. Severer stroke pada masuk dan SAI diungkapkan penurunan lebih besar dari T, Th, dan CTL sel. Peningkatan kortisol dan metanephrine dikaitkan dengan stroke parah dan SAI, dan berkorelasi terbalik dengan T, dan CTL. Sel T, dan CTL yang berkorelasi dengan infark pertumbuhan. Stroke tapi tidak SAI mengakibatkan rendah TNF-? produksi dalam sel Th. SAI menunjukkan kejatuhan terbesar limfosit, T, Th, dan CTL, tetapi tidak sel B, atau Treg. Hasil yang buruk adalah terkait dengan menurunnya tingkat sel B, dan meningkat ekspresi CD86 pada sel B, tapi tidak dengan SAI.

Kesimpulan: limfopenia dan peningkatan apoptosis T, Th, CTL, Treg dan sel B adalah tanda tangan awal setelah manusia stroke. Sebuah respon seluler menurun setelah stroke adalah penanda dari kerusakan otak yang sedang berlangsung, respon stres, dan lebih tinggi risiko infeksi. Sebuah respon humoral yang lebih rendah adalah prediktor miskin hasil jangka panjang. 2009 IBRO. Diterbitkan oleh Elsevier Ltd All rights reserved. Kata kunci: stroke, limfosit, stroke-terkait infeksi, hasilnya. Studi tentang jalur dua arah yang berkomunikasi SSP dan sistem kekebalan tubuh berdiri sebagai waktu-dihormati fokus penelitian bagi para ilmuwan dasar dan dokter (Hadden et al, 1970;. Besedovsky et al, 1983, 1986;. Keller et al, 1983.), dan hari ini secara luas diakui bahwa di antara banyak fungsi penting SSP kontribusi untuk pengaturan respon imun dalam kesehatan dan penyakit (Turnbull dan Rivier, 1999;. Elenkov et al, 2000). Memang, sebuah sebagian besar informasi penting adalah mengumpulkan dan konsep baru muncul seperti penggunaan potensi imunomodulator terapi pada stroke akut (Hallenbeck et al., 2006). Stroke iskemik dan hemoragik adalah penyebab pertama penurunan nilai permanen pada orang dewasa, penyebab kedua kematian, dan kontributor utama terhadap beban global penyakit di negara-negara Barat. Dampak stroke juga berkembang pesat di negara-negara berkembang meskipun signifikan perbaikan dalam identifikasi utamanya berkontribusi faktor. Terlepas dari angka-angka yang memilukan armamentarium terapi untuk stroke akut sangat terbatas karena hanya rekombinan aktivator plasminogen jaringan (rtPA)

telah disetujui. Namun, karena jendela waktu yang terbatas administrasi (3 jam), kurang dari 4% dari stroke Populasi menerima terapi ini. Oleh karena itu, sangat menarik bahwa pemahaman lebih sehat dari relevansi klinis dari interaksi otak-kekebalan bisa berasal di desain strategi berlaku untuk segmen yang lebih luas dari Stroke populasi. Sebagian besar informasi klinis yang tersedia mengenai otak-kekebalan interaksi diperoleh pada pasien dengan cedera otak traumatis (Hoyt et al, 1990;. Quattrocchi et al,. 1992), atau tumor otak (Woiciechowsky et al., 1998). Oleh karena itu, ekstrapolasi temuan kepada pasien dengan stroke harus dilakukan dengan hati-hati untuk imunologi ciri-ciri dan faktor kerentanan pasien dengan neoplasma, trauma, atau stroke mungkin memiliki perbedaan penting. Meskipun pelopor studi di akhir 1970-an menggambarkan beberapa imunologi perubahan pada pasien dengan stroke akut (Czonkowska et al., 1979), hanya baru-baru bahwa imunologi stroke telah menarik perhatian stroke dokter dan ilmuwan (Woiciechowsky et al, 1999.; Meisel et al, 2005;. Chamorro et al, 2007b).. Namun demikian, data yang dikumpulkan dalam kondisi eksperimental dan klinis bervariasi dalam banyak hal di luar pengaruh yang berbeda spesies. Berbeda dengan situasi yang terkendali dengan baik di laboratorium, studi tentang imunologi stroke di samping tempat tidur harus membayar bonus tambahan heterogenitas manusia. Keterbatasan etis untuk mendapatkan jaringan otak pada penderita stroke atau kesulitan untuk mendapatkan jaringan limfoid adalah pembatasan lain yang menghambat kemajuan lebih cepat. Oleh karena itu, di samping tempat tidur sebagian besar data imunologi diperoleh

belajar darah perifer dengan sitometri. Beberapa temuan ini akan ditinjau di bawah ini dan kemudian kita akan melaporkan data asli kita sendiri. Limfosit subpopulasi Meskipun limfosit adalah pemain utama dalam pengembangan penuh dari respon imun bawaan dan adaptif mereka telah mendapat sedikit perhatian pada pasien dengan stroke akut. Limfosit adalah morfologis sangat mirip dalam penampilan tetapi mereka terdiri dari subpopulasi yang berbeda dengan beragam fungsi. Limfosit B adalah jenis sel hanya mampu memproduksi antibodi dan merupakan komponen utama dari kekebalan humoral. Limfosit B berkembang di sumsum tulang dan sel B matang ditemukan terutama di limfoid folikel dalam organ limfoid sekunder, tulang sumsum, dan darah. Limfosit T adalah mediator imunitas seluler, matang di timus, beredar dalam darah dan mengisi organ limfoid sekunder. Natural killer (NK) sel juga turun dari sel induk yang sama dan mereka diklasifikasikan sebagai limfosit, namun NK sel memiliki dekat kemiripan dengan sel-sel kekebalan bawaan seperti makrofag (Di Santo, 2006). Dua utama subset sel T adalah T helper (Th) limfosit yang mengaktifkan makrofag dan mempromosikan produksi sel B antibodi, dan T sitotoksik limfosit (CTL), fungsi utamanya adalah untuk mengenali dan membunuh sel inang terinfeksi dengan mikroba intraseluler. Selain itu, sel-sel Th terdiri dari subpopulasi yang berbeda termasuk Th1, sel T Th2 dan peraturan (Treg), juga dengan fungsi berbagai macam. Sementara sel Th1 terlibat dalam cellmediated kekebalan dan mensekresi sitokin pro-inflamasi, Sel Th2 meningkatkan kekebalan humoral dan rahasia

anti-inflamasi sitokin (Liew, 2002). Sel Treg memiliki umum menekan efek lebih dari limfosit lainnya dan mensekresi sitokin anti-inflamasi seperti mengubah faktor pertumbuhan-? (TGF-?) Dan interleukin (IL) -10 (Scheffold et al., 2007). Limfosit pada stroke eksperimental Beberapa jalur dukungan bukti eksperimental yang akut stroke mungkin memicu respon kekebalan yang kuat bawaan terhadap molekul SSP endogen yang terlibat dalam kerusakan otak dan gangguan fungsional. Beberapa studi juga mendukung bahwa limfosit memediasi antigen-spesifik inflamasi respon (Becker et al., 2001). Namun akut stroke juga dapat mengganggu penghalang darah-otak dan memfasilitasi akses ke SSP dari limfosit yang bisa berinteraksi dengan antigen serumpun jika tepat co-dirangsang (Schroeter et al., 1994). Menariknya, kekebalan respon menimbulkan di pinggiran oleh cedera otak tampaknya akan condong ke arah jenis humoral respon. Dalam beberapa hewan model cedera otak akut (domba, tikus, tikus, kelinci), respon imun perifer ke SSP yang diturunkan antigen pada kelenjar getah bening leher rahim ditandai dengan (1) respon yang kuat antibodi penetapan non-komplemen isotypes, (2) tidak ada hipersensitivitas tertunda-jenis (yang Th1 tipe respon), dan (3) kurangnya CTL dengan efektor Kegiatan (Harling-Berg et al., 1999). Temuan ini tidak diamati pada limpa dan ini dihubungkan dengan fakta bahwa hanya limfatik serviks dapat memberikan signifikan daerah drainase untuk cairan cerebrospinal (CSF) dan interstisial fluida (Bradbury dan Cole, 1980). Sebagai hasil dari ini anatomi, limfatik serviks akan menerima antigen SSP

pada konsentrasi tinggi, dan mereka juga bisa menerima dengan curah Aliran SSP yang diturunkan imunomodulator molekul yang akan bertanggung jawab untuk respon humoral (Th2 pergeseran). Namun, sifat dari Immunomodulators tidak diselesaikan dan untuk yang terbaik dari pengetahuan kita, keberadaan jalur yang sama komunikasi tetap tidak terbukti dalam manusia. Konsekuensi ke otak dari imun adaptif respon berada di bawah pengawasan hati-hati, karena keduanya menguntungkan dan Hasil yang berbahaya telah mengemukakan tergantung pada jenis Th respon imun digerakkan oleh aktivasi limfosit (Hallenbeck, 2007; Schwartz dan Kipnis, 2002; Gee et al, 2007).. Efek menguntungkan diharapkan jika aktivasi limfosit dicegah dengan induksi dari respon imun terhadap antigen peraturan otak seperti mielin dasar protein (MBP) (Becker et al., 2003). Pada tikus, kerugian genetik ditentukan dari B-limfosit dan T secara signifikan meningkatkan kerusakan histologis awal setelah transien iskemia otak fokal berkaitan dengan penindasan mediator inflamasi di otak (Hurn et al., 2007). Limfosit-kekurangan RAG1 /?? tikus juga menunjukkan infark kecil dan fungsi neurologis yang lebih baik setelah iskemia dibandingkan tipe liar hewan, dan ini tanggapan pelindung terbalik di RAG1? /? tikus dilarutkan dengan baik tipe liar atau, pada tingkat lebih rendah, interferon (IFN) -? /?? splenocytes (Yilmaz et al., 2006). Sebaliknya, Tikus sel B kekurangan gagal menunjukkan peningkatan terhadap stroke iskemik cedera, menunjukkan bahwa sel-sel T dan tidak Sel B yang terlibat dalam cedera otak iskemik awal (Yilmaz et al., 2006).

Studi Pioneer menggambarkan penurunan transien dalam jumlah CTL limpa setelah iskemia otak fokal pada tikus (Gendron et al., 2002). Pada tikus, iskemia otak meningkat kerentanan terhadap infeksi yang didahului oleh mencolok penurunan limfosit dalam darah, limpa, dan timus (Prass et al, 2003., 2006). Setelah otak transien iskemia concanavalin A-dirangsang kultur darah diproduksi lebih anti-inflamasi IL-4 dan kurang pro-inflamasi IFN-?, Dan administrasi rekombinan IFN-? berkurang bakteri diseminasi dalam darah perifer dan paru-paru (Prass et al., 2003). Angkat transfer splenocytes dari tikus wild type tapi tidak IFN-? tikus kekurangan dihindari pertumbuhan bakteri, dan T dan sel NK juga diperlukan untuk melawan stroke-terkait infeksi (SAI) (Prass et al., 2003). Selain itu, memblokir sistem saraf simpatis menurunkan persentase splenocytes apoptosis, menormalkan produksi sitokin, mencegah jatuhnya limfosit dan risiko infeksi, dan meningkatkan Stroke survival (Prass et al., 2003). Penelitian terbaru pada tikus juga menunjukkan mengejutkan cepat aktivasi kekebalan perifer setelah eksperimental stroke (Offner et al., 2006a). Pada awal 6 jam setelah tengah oklusi arteri serebri, korteks ipsilateral dan striatum menunjukkan peningkatan ekspresi diucapkan proinflamasi sitokin dan kemokin, dan diaktifkan splenocytes disekresikan tingkat signifikan disempurnakan pro-inflamasi faktor tumor necrosis factor (TNF) -?, IFN-?, IL-6, monosit chemotactic protein-1, dan IL-2, dan juga anti-inflamasi IL-10 (Offner et al., 2006a). Respon inflamasi yang cepat pascaiskemi dalam limpa dan penyebaran limfosit diaktifkan untuk getah bening

node dan darah yang dikaitkan dengan saraf simpatis stimulasi dimulai setelah kerusakan jaringan otak (Offner et al, 2006a.). Menariknya, para peneliti menemukan bahwa 96 jam setelah stroke ada ungkapan yang sangat rendah sebagian besar yang pro-inflamasi sitokin dan kemokin dan peningkatan ekspresi sitokin anti-inflamasi, bersamaan dengan pengurangan ukuran limpa dan jumlah sel T, dan meningkat tiga kali lipat dari sel Treg (Offner et al, 2006b.). Limfosit dan stroke manusia Respon inflamasi yang mengikuti berkorelasi stroke akut baik dengan risiko klinis et memburuk (Vila al., 2000, 2003, Castellanos et al, 2002;. Chamorro, 2004), dan pendek dan hasil fungsional jangka panjang pada pasien (Vila et al, 1999;. Chamorro dan Planas, 2004). Peran putih sel-sel darah dalam respon inflamasi telah banyak dianalisis meskipun kebanyakan studi terutama ditujukan kontribusi neutrofil (Coller, 2005), sementara peran monosit (Chamorro et al., 2006), dan limfosit (Haeusler et al, 2008;.. Vogelgesang et al, 2008) memiliki kurang mendapat perhatian. Studi yang lebih tua menggambarkan rendah respon limfosit (Czonkowska et al., 1979), perubahan dari respon kulit (Tarkowski et al., 1995) dan menonjol intratekal B-tanggapan sel (Rostrm dan Link, 1981). Baru-baru ini stroke, dan stroke berulang Kematian juga telah dikaitkan dengan peningkatan jumlah sirkulasi cluster diferensiasi (CD) 4? CD28? limfosit, populasi dengan kuat pro-inflamasi dan jaringan-merusak potensial (Nadareishvili et al., 2004). Studi tentang SAI adalah model klinis yang sangat baik untuk menilai

imunologi studi stroke dan terakhir telah dijelaskan bahwa SAI terjadi dalam hubungan dengan rendah TNF/ IL-10? Ratio (pergeseran Th2) (Chamorro et al., 2006), lebih rendah TNF-? produksi dan antigen rendah menyajikan HLA-DR di monosit (Haeusler et al., 2008) peningkatan produksi katekolamin oleh medula adrenal (Chamorro et al., 2007), penurunan limfosit Th (Haeusler et al., 2008, Vogelgesang et al, 2008), dan produksi yang lebih rendah. IFN-? setelah stimulasi ex vivo (Haeusler et al., 2008). Namun, studi ini relatif kecil dalam ukuran, dan telah menggunakan metode yang bervariasi, definisi dan jendela waktu untuk mendeteksi SAI. Oleh karena itu, tidak ditetapkan apakah ada temuan ini dapat digunakan di samping tempat tidur sebagai laboratorium penanda infeksi yang akan datang setelah stroke. Pertanyaan lain yang penting dan belum terselesaikan adalah apakah SAI adalah kontributor atau penanda sederhana kerusakan otak pada Stroke akut penderita. Jika SAI memberi sumbangan pada stroke memburuk itu akan menjadi pusat untuk mengungkap mekanisme yang bertanggung jawab. Secara teoritis, SAI dapat mengganggu kelangsungan hidup neuron dalam penumbra iskemik akibat elektrolitik unbalance, hipoksia, dan demam (Ginsberg dan Busto, 1998), tetapi efek ini bisa dikacaukan oleh awal keparahan stroke (Vargas et al., 2006). Memang, pasien dengan stroke besar mengembangkan lebih sering SAI (Vargas et al, 2006;. Haeusler et al, 2008) dan ini bisa terjadi akibat. beberapa penyebab seperti drive pernapasan menurun, dikurangi kewaspadaan, manuver invasif, kateter berdiamnya, imobilisasi, atau komorbiditas yang lebih besar. Sayangnya, tidak ada studi klinis sebelumnya ditangani secara khusus kontribusi limfosit dengan prognosis stroke. Di

kondisi eksperimental (LPS administrasi), SAI bisa mendukung suatu Th1 sistemik pro-inflamasi respon melalui promosi dan aktivasi co-stimulasi sinyal dan fasilitasi respon autoimun merusak (Gee et al., 2007). Tapi catatan hati-hati diperlukan sebelum ekstrapolasi temuan di samping tempat tidur. Pada manusia yang menderita stroke, SAI mungkin "Decode" keadaan imunologi sebelumnya, itu tidak terjadi secara acak. Sebagian besar data saat ini menunjukkan bahwa SAI adalah didiagnosis pada pasien dengan peningkatan anti-inflamasi drive (Chamorro et al, 2007b,.. Woiciechowsky et al, 1999), dan efek berbahaya teoritis infeksi harus diimbangi dengan salutatory potensial perlindungan disampaikan oleh respon ini. Jelas, lanjut klinis studi diperlukan untuk menjelaskan masalah penting ini. Mengingat kontroversi ini kami berusaha untuk menilai hubungan antara program dan perilaku yang berbeda limfosit subpopulasi dengan risiko SAI dan fungsional hasil setelah stroke. Untuk meminimalkan efek pembaur kami mendirikan inklusi ketat dan eksklusi Kriteria, standar optimal pelayanan, operasional yang ketat kriteria penilaian, akurat dan mencetak gol dari penurunan klinis dan neuroimaging, dan interpretasi multivariat hasil. Temuan utama dari studi ini menegaskan cepat penurunan sirkulasi sel T dan sel B pada manusia stroke, yang paling menonjol pada pasien rentan untuk mengembangkan infeksi. Jatuhnya limfosit T tidak terkait dengan klinis pemulihan sementara penurunan yang lebih besar dari limfosit B diprediksi lebih kerusakan otak parah jangka panjang. Akhirnya, para penelitian sebelumnya pengamatan menegaskan bahwa membantah independen hubungan antara SAI dan hasil stoke.

Sebaliknya, SAI terutama menunjukkan bahwa kerusakan parah pada board dan bahwa Penekanan kekebalan yang kuat dikemukakan untuk meminimalkan respon imun inflamasi. EKSPERIMENTAL PROSEDUR Subjek Kami mempelajari prospektif 46 pasien berturut-turut dengan akut Stroke yang memiliki pra-stroke Rankin Scale (mRS) skor 2, dan Skala Stroke National Institutes of Health (NIHSS)? skor pada masuk? 3. Secara keseluruhan, 51% dan 72% dari pasien pertama kali dievaluasi dalam waktu 3 atau 4 jam masing-masing, dan semua peserta- celana dinilai dalam waktu kurang dari 12 jam. Kriteria eksklusi termasuk riwayat infeksi, infeksi yang sedang berlangsung, dan penggunaan antibiotik, imunosupresan, atau steroid dalam 3 sebelumnya bulan. Studi ini disetujui oleh komite etika lokal dan semua peserta menandatangani informed consent tertulis. Pasien memiliki otak CT scan dan / atau Magnetic Resonance Imaging (MRI) sebelum masuk ke dalam Unit Stroke di mana mereka berhasil sesuai dengan pedoman Eropa Initiative Stroke (Hacke et al, 2003.). Sekelompok 18 pasien menerima rtPA dalam waktu 3 jam dari gejala onset. Pasien dengan stroke iskemik memiliki tindak lanjut MRI menggunakan difusi-tertimbang pencitraan (DWI) urutan dalam 31 h (S.D. 8,8) dari onset stroke. Volume lesi dihitung DWI di-MRI menggunakan MRIcro software (Chris Roden; Universitas Nottingham, Nottingham, Inggris). Kerusakan neurologis dinilai setiap hari dengan menggunakan NIHSS sampai dikeluarkan dari rumah sakit dan kemudian diulang pada hari 90. Gangguan fungsional dinilai dengan mRS pada hari 90 oleh satu penyidik dibutakan (AC) untuk menghindari interrater variabilitas. Hasil yang baik mendefinisikan MRS dari 0-2 dan NIHSS dari 0 atau 1. SAI mendefinisikan semua peristiwa yang terjadi dalam 7 pertama hari stroke dengan suhu tubuh? 37,8 C, sugestif

gejala (yaitu batuk, dyspnea, nyeri pleuritik, gejala saluran kemih), atau sel darah putih jumlah 11.000 /? mL atau? 4000/mL, paru menyusup di dada x-ray, atau budaya positif untuk patogen. Semua SAI didiagnosis oleh ahli saraf stroke dan divalidasi oleh spesialis senior pada penyakit menular eksternal untuk penyelidikan. Dua belas bebas dari gangguan SSP gejala subyek menjabat sebagai kontrol. Arus cytometry Limfosit subpopulasi dan apoptosis. Darah sampel dikumpulkan dalam rata-rata 180 menit (IQR 120-350) setelah onset stroke sebelum obat apapun yang diberikan, dan antara 08:30 dan 9:00 am di hari 2, 7, dan 90 setelah masuk untuk studi limfosit subpopulasi dan imunofenotipe. Limfosit subset dianalisis menggunakan cytometry aliran permukaan standar segera setelah ekstraksi darah oleh peneliti dibutakan untuk klinis mengakhiri poin. Antibodi monoklonal berikut digunakan: CD25 dan CD19 konjugasi isothiocyanate fluorescein, CD3, CD4 dan CD86 konjugasi phycoerythrin,, CD45 CD8 dan CD4 terkonjugasi untuk klorofil peridinin, dan CD3 konjugasi allophycocyanin (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Berikut kombinasi antibodi yang digunakan untuk mengidentifikasi subset limfosit: CD45? untuk limfosit, CD3? untuk limfosit T (sel T), CD3? CD4? untuk limfosit Th (sel Th), CD3? CD8? untuk CTL, CD3-CD56? untuk sel NK (NK) dan CD19? untuk limfosit B (B sel). Untuk Treg kuantifikasi sel, sel mononuklear pertama adalah diisolasi menggunakan Ficoll-Hypaque gradien dan pewarnaan yang dilakukan setelah kit yang tersedia secara komersial (eBiosciences, San Diego, CA, USA). CD4? CD25? Foxp3? sel dianggap Treg. Jumlah absolut dari bagian masing-masing ditentukan oleh mengalikan persentase (dinyatakan sebagai fraksi limfosit total)

dengan jumlah absolut limfosit. Permukaan molekul ekspresi CD86 (B7-2) dalam limfosit B dihitung dengan mengkonversi intensitas median neon (LKM) nilai-nilai ke molekul ekuivalen larut (MESF) unit fluorochrome menggunakan standar neon manik (Quantum PE Tingkat Menengah, BangsLabs, USA). Unit MESF diberikan setelah pengurangan dari isotipe kontrol MESF unit. Akuisisi sel dilakukan pada FACSCalibur aliran cytometer (BD Biosciences) dan CellQuest software (BD Biosciences) telah digunakan untuk analisis. Limfosit apoptosis diidentifikasi menggunakan VFITC Annexin kit (Bender MedSystems, Wina, Austria) setelah mononuklear sel isolasi dengan Ficoll-Hypaque gradien. Setiap limfosit bagian diakui menggunakan CD3, CD4, CD8, CD19 dan CD56 terkonjugasi untuk PE (semua dari BD Biosciences) antibodi. Proporsi Annexin V-sel positif dihitung untuk setiap limfosit subset. Intraseluler sitokin. Setelah menipiskan 500? L darah utuh 01:02 di RPMI 1640 (Gibco BRL, Breda, Belanda) itu dirangsang dengan asetat miristat phorbol (PMA) (25 ng / mL) dan ionomycin (10 g / mL?) di hadapan Brefeldin A selama 4 jam (semua dari Sigma, St Louis, MO, USA). Sel Th yang diakui oleh permukaan ekspresi mereka CD3 dan CD4, dan CTL diakui dengan CD3 dan CD8. Pewarnaan intraseluler dilakukan sesuai dengan protokol produsen (BD Biosciences) menggunakan FITC terkonjugasi TNF-? dan PE terkonjugasi IL-4 dan isotipe kontrol. Aktivasi limfosit dikonfirmasi oleh ekspresi dari CD69. Kortisol dan metanephrine (MN) Antara 8:30-09:00 dari hari 1, kadar kortisol serum (g / dL?) diukur menggunakan immunoassay enzim, dan unconjugated

tingkat MN diukur dengan enzimatik kompetitif immunoassay, seperti yang dilaporkan sebelumnya (Chamorro et al., 2007a). Analisis statistik Perbedaan antara pasien dan kontrol dan kelompok yang berbeda pasien dihitung dengan Student t-test atau MannWhitney U test yang sesuai. Kursus waktu limfosit dinilai dengan uji t-berpasangan, dan korelasi dihitung dengan yang Spearman rank koefisien korelasi. Pengamatan terakhir metode forward dilakukan digunakan untuk menganalisis data klinis hilang. Independen efek SAI dan subset limfosit (dalam kuartil) pada hasil stroke dinilai menggunakan regresi logistik Model disesuaikan dengan usia, dan keparahan awal stroke (NIHSS score). Semua tes yang dilakukan menggunakan versi software SPSS 14,0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA). Nilai P? 0,05 dianggap signifikan secara statistik. HASIL Pasien Faktor demografi dan risiko vaskular penelitian Populasi diringkas dalam Tabel 1. SAI terjadi pada 14 (30%) pasien pada penundaan rata-rata 2,5 hari setelah gejala onset (n? 1 pada hari ke 0, 3 pada hari 1, 5 pada hari 2, 2 pada hari 3, 1 pada hari ke 4 dan 2 pada hari 6) dan pneumonia termasuk (n? 5), tracheobronchitis (n? 5), infeksi saluran kemih (n 2?), dan Infeksi lainnya (n? 2). Sepuluh pasien meninggal pada tindak lanjut. Subset limfosit Kursus waktu sel T, sel Th, CTL, sel B, dan Treg menunjukkan variasi yang signifikan pada pasien, dan jumlah mereka secara signifikan lebih rendah daripada kelompok kontrol (Gambar 1A-E). Itu waktu kursus sel NK menunjukkan penurunan yang tidak signifikan setelah jumlah sel stroke, dan NK memiliki non-signifikan

menurun dibandingkan dengan kontrol (Gambar 1F). Sel B adalah berkurang pada masuk, dan pada hari ke 90, namun jumlah peningkatan antara hari 2 dan 7 (Gambar 1G). Limfosit tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan antara pasien dengan iskemik atau hemoragik stroke (data tidak ditampilkan). Itu Efek potensial dari terapi tidak dinilai untuk daya keterbatasan penelitian dan karena perawatan tidak acak untuk alasan etis. Korelasi antara stres awal stroke, keparahan respon, dan respon imun Penerimaan skor NIHSS berbanding terbalik berkorelasi dengan T sel (r? .48?, P? 0,01), Th sel (r? .47?, P 0,01?), dan SAI, respons stres, dan hasil Pasien dengan SAI memiliki skor NIHSS lebih tinggi dibandingkan pada awal non-SAI pasien [median (IQR) 19 (13-20) dibandingkan sembilan (6 -15), P 0,001],? Dan tingkat yang lebih tinggi dari MN [21,19 (10,75) vs 14.00 (15.26), P? 0,005], dan kortisol [28,82 (8,04) vs 21.02 (4.50) P 0,0001]?. Namun, SAI tidak meningkatkan kemungkinan hasil yang buruk pada 3 bulan setelah penyesuaian untuk pengaruh skor NIHSS dan usia [OR (95% CI) 1,08 (0,07-15,66), P 0,95]?. Infark Volume Volume infark pada DWI-MR pada hari 1 berkorelasi dengan skor dasar NIHSS (r .58,? P? 0,001), dan berkorelasi terbalik dengan sel T pada masuk (r? .44, P 0,01)?, Dan CTL pada masuk (r? .47, P 0,01)?, Dan pada 2 hari (r? .39?, P 0,05?). Apoptosis pada limfosit Dengan pengecualian dari limfosit bagian NK lainnya telah meningkat apoptosis dalam korespondensi dengan penurunan

tingkat sirkulasi (Gambar 2). Apoptosis tertinggi dalam sel CTL, dan terpanjang abadi dalam sel Th. Apoptosis T sel (r .38,? P? 0,03), dan sel Th (r .38,? P? 0,03) berkorelasi dengan kortisol lebih tinggi. Sitokin produksi limfosit dirangsang Pada pasien, TNF-? produksi sel Th tetapi tidak dalam CTL mengalami penurunan (Gambar 3A-B), IL-4 produksi di Th dan CTL adalah serupa pada pasien dan kontrol (Gambar 3C-D). Limfosit dan infeksi Pasien SAI telah jatuh lebih besar dari limfosit, sel T, Th sel, dan CTL dibandingkan non-SAI pasien, namun jumlah yang sama B sel, dan sel-sel Treg (Gbr. 4). Produksi TNF-? dan IL-4 di Th dan sel CTL, dan molekul permukaan ekspresi CD86 (B7-2) dalam limfosit B tidak berhubungan dengan kejadian SAI (data tidak ditampilkan). Limfosit dan hasil Stroke Hasil yang buruk pada 3 bulan dikaitkan dengan rendah tingkat sirkulasi sel B (Gambar 5), dan tidak dengan yang lain limfosit subset (data tidak ditampilkan). Dalam regresi logistik (NIHSS dan usia disesuaikan), ada kecenderungan statistik dalam hubungan antara hasil yang buruk dan penurunan B sel pada masuk (OR 0,40, 95% CI 0,15-1,05, P? 0,06), dan pada hari ke 2 (OR 0,41, 95% CI 0,16-1,06, P? 0,06). Tidak bagian limfosit lainnya menunjukkan sebuah asosiasi dengan Stroke hasilnya. Pasien dengan hasil yang buruk memiliki meningkat secara signifikan permukaan molekul ekspresi CD86 pada limfosit B pada hari ke 2, 35.34 (31.03) vs 1,14 (15,02)? MESF unit, P? 0,006. Dalam regresi logistik (NIHSS dan usia disesuaikan), peningkatan ekspresi CD86 (B7-2) adalah independen

terkait dengan hasil yang buruk (OR 6,85, 95% CI 1,42-33,04, P 0,01)?. PEMBAHASAN Penelitian ini menegaskan limfopenia sebagai signature awal pasien dengan stroke akut (Vogelgesang et al, 2008.; Haeusler et al, 2008.) Dan wawasan lebih lanjut diberikan tentang peran himpunan bagian yang berbeda dari limfosit dalam stroke akibat sindrom Penekanan kekebalan. Sementara baru-baru ini pengamatan menggambarkan penurunan sel T, sel Th, dan CTL setelah stroke akut (Vogelgesang et al, 2008;. Haeusler et al, 2008.) penelitian kami diperpanjang temuan ini juga untuk B sel, dan sel-sel Treg. Jatuhnya sel B terutama mencolok hari masuk stroke ketika sel Treg menurun lebih signifikan pada hari 2. Penelitian ini menguatkan normal jumlah sel NK setelah stroke pada manusia (Vogelgesang et al, 2008;.. Haeusler et al, 2008), dan menunjukkan bahwa penurunan subpopulasi limfosit sangat berkorelasi dengan peningkatan apoptosis. Temuan baru dari penelitian ini adalah bahwa pasien dengan rendah tingkat sirkulasi sel B menunjukkan tren untuk miskin keluar- datang pada tindak lanjut. Dalam kondisi
eksperimental, kurangnya T sel mengakibatkan infark yang lebih kecil dan mengurangi neurologis Defisit setelah iskemia otak, sedangkan B-sel hewan kekurangan gagal untuk menunjukkan perbaikan ini setelah stroke (Yilmaz et al., 2006). Sifat menguntungkan potensi sel B adalah juga didukung oleh pengamatan bahwa antigen menyajikan sel (APC) yang mencapai kelenjar getah bening leher dari CSF menargetkan wilayah yang kaya sel B, daripada daerah sel T yang kaya (Hatterer et al., 2006). Konsekuensi keseluruhan ini dialog dalam kelenjar getah bening leher rahim adalah dominasi humoral dan Th2-jenis anti-inflamasi tanggapan (Harling-Berg et al, 1999.). Kami berspekulasi bahwa penurunan sel B yang kami amati terkait dengan hasil yang buruk adalah indikasi dari pengurangan anti-inflamasi (saraf) sinyal dimediasi oleh sel B ke terluka otak. Namun demikian, kita tidak bisa sepenuhnya mengesampingkan efek kebetulan atau beberapa efek pengganggu belum teruji. Oleh karena itu, penelitian yang lebih besar harus memvalidasi temuan ini. Hasil stroke yang miskin juga independen terkait dengan ekspresi permukaan peningkatan costimulatory molekul CD86 (B7-2) pada sel B. CD86 diekspresikan pada APC diaktifkan, termasuk sel dendritik, makrofag, dan B sel sementara itu tidak hadir atau diekspresikan pada sangat rendah tingkat di APC beristirahat. Ekspresi CD86 meningkat

jika toll-like receptors (TLRs) dirangsang, baik oleh produk dari patogen, atau oleh sitokin yang diproduksi selama bawaan kekebalan reaksi (Massari et al., 2002). Hal ini diterima bahwa stroke akut memicu respon bawaan yang kuat (Kariko et al., 2004) dan juga semakin diakui bahwa beberapa komponen yang secara independen terkait dengan hasil yang buruk pada pasien fungsional (Chamorro et al., 1995, 2000). Kami berpendapat bahwa hubungan tersebut ditemukan antara suatu peningkatan ekspresi CD86 pada sel B dan hasil yang buruk adalah bukti tidak langsung dari bawaan meningkat respon. Memang, respon bawaan diamati dalam pasien dan hubungan dengan sel darah beredar adalah subyek publikasi independen. Hasil prediktor kuat independen pada stroke adalah keparahan awal penyakit dan efek ini selalu harus dipertimbangkan dalam penelitian prognostik. Dalam studi ini, keparahan awal stroke secara langsung berhubungan dengan perubahan yang diamati dalam subset limfosit, dalam korespondensi dengan studi klinis sebelumnya pencocokan besarnya Penekanan kekebalan dari dengan keparahan klinis dan Stroke ukuran (Chamorro et al., 2007a). Pengaruh stroke keparahan berpengaruh pada penurunan sel T dan T subtipe, tetapi tidak sel B, sel Treg, dan sel NK. Di Selain itu, awal musim gugur dari sel T dan CTL diprediksi lebih besar infark pada DWI-MR di follow-up, menunjukkan potensi mereka nilai sebagai penanda awal pematangan infark iskemik. Sebuah penjelasan yang mungkin untuk temuan ini adalah bahwa keparahan awal stroke paralel respon stres yang lebih kuat dari sumbu hipotalamus-hipofisis-adrenal (kortisol tingkat), dan jalur adrenomedullary-simpatik (MN tingkat). Dengan demikian, tingkat yang lebih tinggi kortisol dan MN adalah diamati pada pasien dengan stroke yang lebih berat, dalam perjanjian dengan penelitian sebelumnya (Olsson et al, 1992;. Schwarz et al, 2003; Chamorro et al, 2007a)... Namun, semakin kuat respon hormonal diterjemahkan ke dalam tanda-tanda lebih ditandai Penekanan kekebalan tapi itu tidak mempengaruhi sama limfosit semua subset, dalam perjanjian dengan dogma bahwa subkelompok limfosit yang sangat dipengaruhi oleh glukokortikoid, dan katekolamin (Van Tits et al, 1990.). Di penelitian ini, respon stres berkorelasi dengan peningkatan apoptosis sel T, dan sel Th, dan lebih besar penurunan CTL, sel T, dan sel Th, masing-masing. Atau, kami tidak melihat korelasi yang baik antara respon hormonal dan sel B. Tidak seperti laporan terbaru pada tikus (Offner et al., 2006b), Sel Treg menurun setelah stroke. Namun, sel-sel Treg melakukan tidak menunjukkan hubungan yang relevan dengan perkembangan infeksi atau hasil stroke. Produksi TNF-? adalah juga berkurang pada sel Th pasien stroke dibandingkan dengan kontrol tapi profil ini tidak terkait dengan besar risiko infeksi atau hasil klinis yang berbeda. Juga, pro-inflamasi dan anti-inflamasi kapasitas CTL tidak berhubungan dengan fenotip klinis stroke akut. Potensi keterbatasan penelitian ini adalah relatif ukuran kecil, efek terapi pada fungsi kekebalan tubuh, pengaruh faktor risiko, atau yang iskemik dan hemoragik pasien stroke dimasukkan. Namun, kami tidak menemukan setiap perbedaan yang signifikan dalam perilaku kekebalan tubuh pada pasien dengan stroke iskemik atau hemoragik, atau sesuai dengan individu faktor risiko, namun penelitian yang lebih besar akan diminta untuk mengkonfirmasi temuan ini. Temuan yang paling konsisten terkait dengan risiko Infeksi adalah penurunan global subpopulasi sel T tanpa keterlibatan sel B, seperti yang dilaporkan sebelumnya (Vogelgesang et al, 2008;.. Haeusler et al, 2008). Itu studi juga diberikan dengan pengamatan sebelumnya (Dziewas et al, 2004;. Vargas et al, 2006;. Haeusler et al, 2008).

melaporkan bahwa SAI tidak berkontribusi secara independen untuk buruk klinis hasil. Sedangkan infeksi secara teoritis bisa memiliki efek merusak terhadap jalannya akut stroke dengan meningkatkan reaksi inflamasi autoimun dalam otak (Gee et al, 2007.), data klinis sejauh tersedia menunjukkan bahwa SAI terutama menerjemahkan keadaan kuat anti-inflamasi drive. Oleh karena itu, deteksi dini SAI dan tepat waktu pelaksanaan yang sesuai rejimen antibiotik sangat penting untuk menghindari sistemik komplikasi dari SAI. Menurut temuan kami, prognosis stroke terutama tergantung pada besarnya kerusakan awal sedangkan SAI (diobati) tidak tampaknya berkontribusi terhadap kerusakan lebih lanjut. Dalam kesimpulan, limfopenia dan peningkatan apoptosis T, Th, CTL, Treg dan sel B adalah tanda tangan awal setelah manusia stroke. Sebuah respon seluler menurun adalah penanda dari kerusakan otak yang lebih besar sedang berlangsung, sebuah hormon yang lebih kuat stres respon, dan berisiko tinggi mengalami stroke-terkait infeksi. Sebuah respon humoral yang lebih rendah adalah prediktor miskin

hasil jangka panjang. Secara keseluruhan, penelitian ini menegaskan kembali klinis relevansi dari respon kekebalan tubuh pada pasien dengan akut stroke dan mendorong studi lebih lanjut bertujuan untuk mengidentifikasi imunomodulator terapi untuk menghancurkan Kondisi. Ucapan Terima Kasih Kami berterima kasih kepada-Drs. V. Obach, S. Amaro dan M. J. Gmez-Choco untuk perawatan klinis pasien, dan Francisca Ruiz dan Dr Martha Vargas untuk bantuan teknis yang sangat baik. Dr J. Mensa diakui untuk validasi dari semua endpoint menular. Kami berterima kasih kepada pasien dari penelitian ini karena tanpa mereka penelitian ini akan tidak mungkin terjadi. Penelitian ini didukung oleh Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS) dari Spanyol Departemen Kesehatan (grant FS 06/0909). Drs. X. Urra dan . Cervera didukung oleh FIS.