INMUNODIFUSIN RADIAL
Para la realizacin de estas tcnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitacin del complejo Ag-Ac.
La inmunodifusin radial (IDR) es una tcnica que puede determinar cuantitativamente la concentracin de un antgeno. Es una tcnica sensible que es usada clnicamente para detectar niveles de inmunoglobulinas Ig.G, M y A antgenos solubles (C3, C4, transferrina, etc) presentes en muestras biolgicas
creada
doctor en medicina en 1946 escribi algunas notas y clasicos en el que se describen las soluciones de antgenos y anticuerpos de inmunodifusion en gel de agar Recibi premio nobel en 1984 por las teoras en cuanto a la especificidad del desarrollo y control del sistema inmuno y el descubri del principio para la produccin de anticuerpos monoclonales.
Medico sueco ouchterlony desarrollo en su tesis un nuevo mtodo analtico para la inmunodifusion. Este mtodo se llama a menudo el mtodo de ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de la inmunologa durante dcadas. El mtodo se usa en todo el mundo.
Modifica la teora de oudin dando lugar a la doble inmunodifusion
INMUNODIFUSIN RADIAL
Generalmente toma de 24 a 48 horas Para cada antgeno, se formar una precipitacin final en anillo de cierto dimetro
A partir de esta curva de calibracin lineal, la presencia y cantidad de antgeno en las muestras desconocidas pueden ser determinadas.
en un comienzo esta presente en una concentracin relativamente alta y forma complejos solubles
hasta que se alcanza el punto en el cual los reactantes estn ms cerca de las proporciones ptimas (zona de equivalencia),
fundamento
Empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusin tanto Ag como Ac (difusin doble) . De modo que al encontrarse en proporciones optimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitacin visible. Constituye un mtodo mas completo por que permite obtener una informacin mas completa que las anteriores.
principio
La precipitacin ocurre con la mayora de los antgenos, debido a que stos tienden a ser multivalente. Cada anticuerpo, a su vez, tiene por lo menos dos sitios de unin para los antgenos.
procedimiento
En una placa Petri estril se depositara 15ml de agar y enfriado a 50C. Se dejara solidificar y se confeccionaran pares de orificios 5 mm de dimetro, que distaran 1 cm entre si En los distintos orificios enfrentados se agregaran 10 ul de Ag y 10 ul del suero. Se detectaran las correspondientes bandas de precipitacin en el espacio que separan los orificios. Las placas se mantendrn en cmaras hmedas
Difusin simple
Difusin doble
Una dimensin
Dos dimensiones
Concentracin de equivalencia
Exceso de Ac
Reacciones de precipitacin
Sistema con tres reservorios pueden generar bandas de precipitacin que han recibido nombres especficos
IDENTIDAD: los dos sistemas antignicos son iguales, por lo tanto se funden en una banda de precipitacin.
NO IDENTIDAD: los dos sistemas antignicos son distintos, cada uno origina bandas de precipitacin independiente que se cruzan.
IDENTIDAD PARCIAL: los dos sistemas antignicos comparten algn componente (banda que se funde), pero no son iguales (espoln o prolongacin).