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Coordenadores:
WILLIBALDO SCHMIDELL
URGEL DE ALMEIDA LIMA
EUGENIO AQUARONE
WALTER BORZANI
BIOTECNOLOGIA
INDUSTRIAL,
VOLUME II
ENGENHARIA
BIOQUIMICA
~
EDITORA EDGARD BWCHER LTDA.
,
v
--_c::::====
Este conjunto de quatro volumes, reunidos sob 0 titulo amplo de BIOTEC
NOLOGIA INDUSTRIAL,e 0 resultado do trabalho de urn grupo de profissionais
com vistas aatualizacao da colecao BIOTECNOLOGIA, cuja publicacao foi iniciada
em 1975 e terminada em 1983.
A experiencia acumulada e as muitas mudancas ocorridas nestes ultimos vinte
anos, ao lado da indiscutivel e crescente importancia das aplicacoes da BIOTEC
NOLOGIA em diversos setores de producao de bens e services, justificam plena
mente - assim pensam os Coordenadores e 0 Editor desta nova Colecao - esta
primeira atualizacao, principalmente pelo fato de se destinar ao ensino em cursos
de graduacao.
Nosso primeiro objetivo, nesta Apresentacao, e tomar conhecimento do que,
hoje, se entende por BIOTECNOLOGIA, e do que vern a ser BIOTECNOLOGIA
INDUSTRIAL.
A demarcacao nitida do campo de atuacao de qualquer ramo do conhecimento
e sempre tarefa muito dificil, para nao dizer impossivel.
Tanto isto e verdade que, com certa frequencia, tratados relativos a urn dado
setor do conhecimento atacam diretamente 0 exame de uma serie de temas sem
tentar esbocar, preliminarmente, urn quadro que, em largos traces, indique os
objetivos e asaplicacoes do que vai ser estudado.
. Tal maneira de agir, principalmente em cursos de graduacao, nao nos parece
aconselhavel. Julgamos importante, no inicio dosestudos, a apresentacao de urn
panorama que de, aos alunos, uma ideia, ainda que nao bern definida, daqueles
objetivos e aplicacoes.
Nao nos parece que seja imprescindivel transcrever, aqui, todas as propostas
de "definicao" do que se deva entender porBiotecnologia. Algumas delas serao
suficientes para que seja possivel alcancar nosso objetivo.
lniciaremos com a proposta que 0 Prof. Antonio Paes de Carvalho, em seu
trabalho intitulado "Patentes para a Biotecnologia", apresentou, em dezembro de '
1993, em reuniao realizada na Academia Brasileira de Ciencias:
"Entende-se por Biotecnologia 0 conjunto de conhecimentos, iecnicas e meiodos,
de base cientifica ou pratica, que permite a uiilizacdo de seres vivos como parte
integrante e ativa doprocesso de producdo industrial de bense seroicos'' , .
&n
... "
.;
-'.,'
VI
oOfficeof TechnologyAssessment, por sua vez, II definiu" Biotecnologia como
sendo:
, "0 conjunto de processos industriais queenglobam processos bio16gicos".
Por outro lade, a Union lntemationale de Chimie Pure et Appliquee, concei
tuou Biotecnologia como:
"Aplicacdo da Bioquimica, da Biologia, da Microbiologia eda Engenharia Qufmica
aos processos e produtos industriais (incluindo os produtos relativos 11 saude, energia
e agricultura) eaomeio ambiente".
Finalmente, 0 ConselhoNacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecno16gico
(CNPq), em seu Programa Nacional de Biotecnologia, "definiu" Biotecnologia nos
seguintes termos:
"A utiiizacao desistemas celulares para obiencdo deprodutos oudesenvolvimento
de processos industriais".
. As poucas tentativas de definicao aqui transcritas mostram, nitidamente, que
a Biotecnologia tern por base varies ramos do conhecimento que poderiam ser
classificados de FUNDAMENTAlS (como, por exemplo, Bioquimica, Fisiologia,
Genetica, Microbiologia, Virologia, Botanica, Zoologia, Ecologia) ao lade de outros
que poderiam ser agrupados sob a denominacao generica de ENGENHARIAS (prin
cipalmente a Engenharia Quimica).
Trata-se, portanto, de urn campo de trabalho tipicamente multidisciplinar, 0
que toma absolutamente imprescindivel a efetiva colaboracaode .profissionais
atuantes em diferentes setores do conhecimento.
.Destaque-se, porem, que essa atividade multidisciplinar nao deve ser enten
dida como resultante de uma simples justaposicao de profissionais, cada urn deles
com sua formacao especializada e preocupado apenas com sua area especifica.
lmporta que seja, de fate, urn trabalho de varies profissionais efetivamente
integrados, de modo que cada urn deles tenha conhecimento, obviamente nao
aprofundado, dos principios e das tecnicas dos campos de atuacao dos demais.
Assim, apenas para citar urn exemplo, caso ummicrobiologista participe de urn
grupo que estuda a otimizacao de urn dado processo, edesejavel que tenha alguns
conhecimentos, mesmo que superficiais, a respeito das estrategias empregadas para
a modelagem matematica. Vice-versa, 0 especialista em modelagem deve efetuar
urn esforco adicional para compreender as caracteristicas do sistema microbiano
em estudo, a fim de incorpora-Ias ao modelo. Somente desta forma a atividade
, multidisciplinar efetivamente existira e podera ser mais eficiente.
--L --.
I
VII
Se everdade, por urn lado, que a Biotecnologia s6 passou a ser considerada
altamente prioritaria ha relativamente pouco tempo, tambem everdade, por outro,
que processos biotecnol6gicos vern sendo utilizados na producao de varies hens,
principalmente alimentos, desde a mais remota antigiiidade. Basta, neste particu
lar, fazer referencia ao preparo de bebidas fermentadas a partir de cereals na
Babilonia e no Egito (8.000 a 6.000 anos a.C), a producao de pao, utilizando
. fermentos, no Egito (4.000 anos a.C) e aproducao de vinhos na Crecia (2.000a.C).
A Biotecnologia encontra muitas aplicacoes importantes nas seguintes areas
de atividade:
Agricultura
Pecuaria
Saude
Preservacao do meio ambiente
Industria
Suas aplicacoes na industria constitutem 0 objetivo primordial da Biotec
nologia Industrial. A Fig. 1, adaptada de urn artigo publicado pelo Prof. Rainer
Jonas, euma boa representacao grafica da "localizacao" da Biotecnologia Indus
.trial e de sua interacao com outros ramos do conhecimento.
Figura I - Represe ntacao esquematica da irrteracao da Biotecnologia Industrial com outros ramos do conhe
cimento.
- - --...
VIII
Convem, finalmente.ressaltar que, como ocorre em outros campos de trabalho,
as areas de aplicacao da Biotecnologia, anteriormente apontadas, nao sao "gavetas"
estanques. Ha entre elas, freqiientemente, fortes interacoes, Apenas para citar um
exemplo, considere-se 0 caso de uma dada vacina, desenvolvida na area da Saiide.
Na etapa final de producao dessa vacina em larga escala surgirao, muito provavel
mente, problemas de cunho tecnol6gico e de engenharia que poderao tomar impres
cindivel a efetiva participacao da Biotecnologia Industrial na busca das solucoes
mais adequadas.
Apresente Colecao consta de quatro volumes. No primeiro - FUNDAMEN
TOS - reunem-se, como 0 proprio nome claramente indica, temas fundamentais
indispensaveis ao estudo de processos biotecnol6gicos. 0 segundo - ENGENHA
RIA BIOQufMICA - focaliza os principais problemas de engenharia envolvidos
naqueles processos, ao lade de assuntos correlatos de ambito mais geral, mas im
portantes na producao em larga escala. Os dois iiltimos volumes - PROCESSOS
FERMENTATIVOS E ENZlMA.TICOS e BIOTECNOLOGIA NA PRODUC;Ao DE
ALIMENTOS - foram dedicados adescricao e discussao de processos biotecno
logicos de importancia industriaL
Todos os temas foram tratados partindo-se do pressuposto de que a obra se
destina, primordialmente, a cursos de graduacao. A bibliografia indicada no final
de cada capitulo podera servir como ponto de partida para os que pretenderem um
exame mais aprofundado de urn ou outro t6pico.
Os Coordenadores, 0 Editor e, seguramente, tambem os Autores, agradecem
todas as sugest6es relativas aestrutura da Colecao ou de qualquer de suas partes,
bem como a identificacao de falhas ou incorrecoes, infelizinente sempre possfveis,
que lhes sejam encaminhadas pelo leitor. .
Literatura Recomendada
1) Anciaes, W. & Cassiolato, J.E. Biotecnologia: seus impactos no setor industrial.
CNPq, Brasilia, 1985.
2) Haehn, H. Bioquimica de las fermentaciones. Aguilar S.A. de Ediciones, Madri,
1956.
3) Jonas, R. GBF -Scientific Annual Report (pp. 35-46). Alemanha, 1990.
4) Paes de Carvalho, A. Patentes para a Biotecnologia. Apresentado aAcademia
Brasileira de Ciencias em 6.12.1993.
IX
Cuando la coleccion "Biotecnologia", editada por los profesores Eugenio
Aquarone, Walter Borzani y Urgel de Almeida Lima, aparecio en 1975, causa un
hondo impacto entre los biotecnologos latinoamericanos. Se trato de la primera
obra sobre el tema escrita y publicada en nuestra region y represento una
contribucion especialmente valiosa al estudio y ensefianza de esa pujante disciplina.
"Biotecnologia" consto originalmente de tres vohimenes: Tecnologiadas
Fermentacoes, T6picos deMicrobiologia Industrial y Engenharia Bioquimica, a los cuales
se sumo en 1981 Corrosiio Microbiol6gica y luego Alimentos e Bebidas produzidos por
Ferm eniacdo en 1983. Ahora, pasados ya mas de veinte afios, losmismos editores,
com la participacion del profesor Willibaldo Schmidell, nos brindam la oportunidad
de apreciar y disfrutar la nueva coleccion "Biotecnologia Industrial" como una
sucesora natural de "Biotecnologia". El contenido de la nueva obra ha sido
totalmente renovado y actualizado en concordancia com los notables avances
experimentados por el conocimiento en estaarea en las tiltimas decadas.jncluyendo
las modemas tecnicas de la ingenieria genetica y el uso de microorganismos recom
binantes en bioprocesos.
La nueva coleccion esta dividida en cuatro vohimenes que abarcan los mas
variados topicos relacionados com la biotecnologia industrial: Fundamentos, Ingenieria
Bioquimica, Procesos Fermentativos y Enzimdticos y Biotecnologia en la Produccci6n de
Alimentos. En: total son 74capitulos escritos por distinguidos especialistasbrasileros,
conteniendo informacion actualizada acerca tanto de los aspectos basicos como de
los aplicados de la utilizacion de celulas microbianas y no microbianas para
finalidades productivas.
El Volumen I, Fundamentos, entrega un completo panorama del estado del
conocimiento en microbiologia, genetica, bioquimica y enzimologia, finalizando
com un panorama de las aplicaciones industriales de la biotecnologia, abriendo asi
el camino a los proximos vohimenes, En el Volumen 2, Ingenieria Bioquimica, se
exponen los principales aspectos relacionados com la cuantificacion de los procesos
microbianos y enzimaticos y el disefio y operacion de los equipos de proceso
requeridos en una instalacion industrial. El Volumen 3 ~ Procesos Fermentativos y
Enzimaiicos, presenta y discute la apllcacion de los microorganismos a la produccion
de una amplia gama de metabolitos y enzimas de interes practice, el uso de enzimas
como biocatalizadores industriales y la aplicacion de los procesos microbianos a
diversos sectores industriales y a la descontaminacion de efluentes liquidos y
residuos solidos, Finalmente, el Volumen 4, Biotecnologia enla Producci6n deAlimentos,
. . . .. ._.. _ - - - - - - - - - - - - - ' - - - : . . . . ~ ~
x
detalla la aplicaci6n de la biotecnologia a una amplia variedad de industrias de ese
importante sector. ,
Por su estructura y contenido, y por la indiscutible autoridad de sus editores
y autores, estoy cierto que Biotecnologia Industrial esta destinada a constituirse en
una obra insustitufble para la ensefianza universitaria de pre y post-grade, asi como
tambien en una valiosa fuente de consulta para el biotecn6logo en la industria.
Fernando Acevedo
Profesor
Escuela de Ingenieria Bioquimica
Universidad Cat6lica de Valparaiso
Valparaiso, Chile
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~ - _ . - - -
- - - - - - - - ~ - _ .._---_._.._--- - _.
XI
Adalberto Pessoa Junior
Professor Doutor
Universidade de Sao Paulo
Faculdade de Ciencias Farrnaceuticas
Departamento de Tecnologia .
Bioquimico-Farmaceutica
Av. Prof. Lineu Prestes, 580-BIoco 16
05508-900, Sao Paulo, SP, Brasil
Aberto Colli Badino Jr.
Professor Adjunto I
Universidade Federal de Sao Carlos
Departamento de Engenharia Quimica
Caixa Postal, 676
13565-905, Sao Carlos, SP, Brasil
Antonio Bonomi
.Pesquisador Coordenador
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao Quimica
Agrupamento de Biotecnologia
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP,Brasil
Beatriz Vahan Kilikian
Professora Associada
Universidade de Sao Paulo
Escola Politecnica
Departamento de Engenharia Quimica
Caixa Postal, 61548
05424-970, Sao Paulo, Sp' Brasil
Deise Maria Fontana Capalbo
Pesquisadora
Empresa Brasileira de Pesquisa
Agropecuaria .
EMBRAPA/CNPMA
Rodovia SP 340, km 127,5
Caixa Postal, 69
13820-000, [aguariuna, SP, Brasil
_ _ _ _:_ , __ - - , __ . " ' C-- ...... .. ' : -- -- " , -
Haroldo Hiss
Pesquisador Cientiftco
Insituto Butanta
Av. Vital Brasil, 1500
05503-900, Sao Paulo, SP, Brasil
Iracema de Oliveira Moraes
Professora Titular
Universidade de Guarulhos
Centro de Ciencias Exatas e
Tecnol6gicas
Prac;a Teresa Cristina, 1
07033-070, Guarulhos, SP, Brasil
Joao Carlos de Carvalho
Professor Doutor
Universidade de Sao Paulo
Faculdade de Ciencias Farmaceuticas
Departamento de Tecnologia
Bioquimico-Farmaceutica
Av. Prof. Lineu Prestes, 580-BIoco 16
05508-900, Sao Paulo, SP, Brasil
Jose Geraldo da Cruz Pradella
Pesquisador
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao Quimica
Agrupamento de Biotecnologia
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Josef Ernst Thiemann
Pesquisador Senior
Biobras S.A.
Avenida C, 1413 - Distrito Industrial
Caixa Postal, 377
39404-004, Montes Claros, MG, Brasil.
......_.. ..
XII
Luiz Carlos Urenha
Pesquisador
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao Quimica
Agrupamento de Biotecnologia
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Manuel Filgueira Barral
Pesquisador
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao Quimica
Agrupamento de Biotecnologia
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Maria Candida Reginato Facciotti
Professora Titular
Universidade de Sao Paulo
Escola Politecnica
Departamento de Engenharia Quimica
Caixa Postal, 61548
05424-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Maria Filomena de Andrade Rodrigues
Pesquisadora
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao Quimica
Agrupamento de Biotecnologia
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Michele Vitolo
Professor Titular
Universidade de Sao Paulo
Faculdade de Ciencias Farmaceuticas
Departamento de Tecnologia
Bioquimico-Farmaceutica
Av. Prof. Lineu Prestes, 580-Bloco 16
05508-900, Sao Paulo, SP, Brasil
Pedro Sergio Pereiralima
Pesquisador
Instituto de Pesquisas Tecnol6gicas do
Estado de Sao Paulo S.A.
Divisao de Mecanica e Eletricidade
Agrupamento de Sistemas de Controle
Caixa Postal, 0141
01064-970, Sao Paulo, SP, Brasil
Rafael Almudi Villen
Professor Associado
Centro Universitario do Instituto Maua
de Tecnologia
Escola de Engenharia Maua
Departamento de Engenharia Quimica
e de Alimentos
Praca Maua, 1
09580-900, Sao Caetano do Sui, SP,
Brasil
Sunao Sato
Professor Titular
Universidade de Sao PauIo
Faculdade de Ciencias Parmaceuticas
Departamento de Tecnologia
Bioqufmico-Parrnaceutica
Av. Prof. Lineu Prestes, 580-Bloco 16
05508-900, Sao Paulo, SP, Brasil
Urgel de Almeida Lima
Professor Pleno
Centro Universitario do Instituto Maua
de Tecnologia
Escola de Engenharia Maua
Departamento de Engenharia Quimica
e de Alimentos
Praca Maua, 1
09580-900, Sao Caetano do Sui, SP,
Brasil .
Vanildo Luiz Del Bianchi
Professor Doutor
Universidade Estadual Paulista
Intitutode Biociencias, Letras e
Ciencias Exatas
Rua Cristovao Colombo, 2265
15054-000, Sao Jose do Rio Preto, SP,
Brasil
Walter Borzani
Professor Pleno
Centro Universitario do Instituto Maua
de Tecnologia
Escola de Engenharia Maua
Departamento de Engenharia Quimica
e de Alimentos
Praca Maua, 1
09580-900, Sao Caetano do SuI, SP,
Brasil
~ . _ - - - - - '
XIII
Willibaldo Schmidell
Professor Titular
Universidade de Sao Paulo
Escola Politecnica
Departamento de Engenharia Quimica
Caixa Postal, 61548
05424-970, Sao Paulo, SP, Brasil
(
xv
;:::::=:::=======
1 ENGENHARIA BIOQUiMICA: UMA SUI GENERIS
DA ENGENHARIA QUi.MICA 1
Literatura recomendada : 3
2 MICRORGANISMOS E MEIOS DE CULTURA PARA
INDUSTRIAL 5
2.1 Introducao 5
2.2 Fontes de microrganismos de interesse 7
2.3 Caracteristicas desejaveis de microrganismos e meios de cultura
para aplicacao industrial 10
2.4 Consideracoes finais 18
Referencias bibliograficas : 18
DO EQUIPAMENTO 19
3.1 Introducao 19
3.2 Terminologia e modo de atuacao 20
3.3 Esterilizacao por agentes fisicos 25
3.4 Esterilizacao e desinfeccao por agentes quimicos 33
Referencias bibliograficas 38
DE MEIOS DE POR
AQUECIMENTO COM VAPOR : 39
4.1 Introducao 39
4.2 Descricao sumaria dos processos de esterilizacao por calor umido 40
4.3 Cinetica da destruicao termica de microrganismos 45
4.4 Destruicao de nutrientes do meio como consequencia da esterilizacao 51
4.5 Consideracoes gerais a respeito do calculo do tempo de esterilizacao 53
4.6 Calculo do tempo de esterilizacao por processo descontinuo 56
4.7 Calculo do tempo de esterilizacao por processo continuo 60
Literatura recomendada 62
DE AR 63
5.1 Introducao 63
5.2 Aerossois microbianos 64
5.3 Amostradores 65
5.4 Metodos para a esterilizacao de ar 75
5.5 Consideracoes finais ; : 90
Referencias biliograficas 90
XVI '
6 CINETICA DE PROCESSOS FERMENTATIVOS 93
6.1 Introducao ; 93
6.2 Parametres de transformacao ; : 95,
6.3 Calculo das velocidades 101
6.4 A curva de crescimento microbiano 103
6.5 Classificacao dos processos fermentativos 107
6.6 Influencia da concentracao do substrato sobre a velocidade
, espedfica de crescimento 110
Apendice 114
Referencias bibliograficas : 121
7 MODELAGEM MATEMATICA E SIMULA(:Ao DE PROCESSOS
FERMENTATIVOS 123
7.1 Introducao 123
7.2 Formulacao dos modelos maternaticos de processos fermentativos 124
7.3 Ajuste de parametres do modelo formulado 148
7.4 Avaliacao do modelo maternatico 164
7.5 Simulacao de processos fermentativos 172
Referencias bibliograficas , 175
8 BIORREATORES E PROCESSOS FERMENTATIVOS 179
8.1 Introducao 179
8.2 Classificacao dos biorreatores : 180
8.3 Formas de conducao de urn processo fermentativo 185
8.4 Exemplos de comparacao de desempenho de biorreatores 189
Referencias bibliograficas 190
9 FERMENTA(:Ao DESCONTiNUA : 193
9.1' Introducao 193
9.2 ' Inoculo 194
9.3 Mosto 196
9.4 Classificacao 199
9.5 Niimero de dornas : 200
Referencias bibliograficas 204
10 FERMENTA(:AO DESCONTiNUA ALiMENTADA 205
10.1 Introducao .: ; 205
10.2 Aplicacoes 207
10.3 Classificacao 210
10.4 Modelos matematicos : 212
Referencias bibliograficas 216
11 FERMENTA(:,Ao SEMICONTiNUA 219
11.1 Definicao : 219
11.2 Produtividade do processo semicontfnuo 220
11.3 Comentarios finais 222
Referencias blbliograficas 222
12 FERMENTA(:AO CONTiNUA 223
12.1 Conceitos basicos 223
12.2 Vantagens e desvantagens do processo continuo em relacao
ao descontinuo 224
. '. . .-.. ... ~
, 1 i I I i i i I i i ~ 1 i i i i I -
XVII
12.3 Formas de operacao no sistema continuo ; 225
12.4 Formacao de produtos no sistema continuo 242
Referencias bibliograficas 245
13 FERMENTA(:AO EM ESTADO SOLIDO 247
13.1 Introducao 247
13.2 Historia do processo da FSS 248
13.3 Microrganismos comumente utilizados 250
13.4 Substratos: caracteristicas e composicao 250
13.5 Reatores para fermentacao semi-solida 254
13.6 Controles do processo 259
13.7 Vantagens e desvantagens 264
13.8 Exemplos de casos 266
Referencias bibliograficas 270
AGITA(:AO E AERA(:AO EM BIORREATORES ~ ..277
14.1 A importancia da transferencia de oxigenio ; 277
14.2 Sistemas para a transferencia de oxigenio 279
14.3 Concentracao de oxigenio dissolvido em soluc6es saturadas 281
14.4 Transferencia de oxigenio e respiracao microbiana 284
14.5 Transferencia de oxigenio em sistemas agitados e areados 308
14.6 Consideracoes finais 329
Referencias bibliograficas 329
VARIA(:AO DE ESCAlA 333 .
15.1 Introducao , : 333
15.2 Criterios para a ampliacao de escala 336
15.3 Comparacoes entre criterios para a ampliacao de escala 348
15.4 Reducao de escala : ~ 351
15.5 Consideracoes finais 352
Referencias bibliograficas ~ ~ 353
16 REATORES COM CElUlAS IMOBILIZADAS : 355
16.1 .Introducao , 355
16.2 Metodos de imobilizacao 356
16.3 Tipos de biorreatores empregados , 360
16.4 Aspectos relativos ao transporte de massa 363
16.5 Processos que utilizam celulas imobilizadas 366 .
16.6 Conclus6es 370
Referencias bibliograficas 371
17 REATORES COM ENZIMAS IMOBILIZADAS 373
17.1 Introducao ~ , ; 373
17.2 Reatores enzimaticos : 374
17.3 Exemplos de processos enzimaticos 388
Referencias bibliograficas ;..; 395
18 AUTOMA(:AO E CONTROlE DE PROCESSOS FERMENTATIVOS 397
18.1 Introducao 397
18.2 Principais instrumentos para monitoracao em linha de processos
fermentativos 398
411
XVIII
18.3 Controle aplicado a processos fermentativos
Referencias bibliograficas 423
19 DE INSTALA(:OES INDUSTRIAlS DE
FERMENTA(:AO : .425
19.1 Prindpios gerais paraoperacao 425
19.2 Condicoes gerais para a execucao de urn processo fermentativo .426
19.3 Operacao de uma industria 429
19.4 Operacao de urn processo fermentativo asseptico 434
19.5 Exemplo de operacao de industria de ferrnentacao .435
Bibliografia 439
20 CONSTRU(:AO DE EQUIPAMENTOS DE FERMENTA(:AO 441
20.1 Introducao 441
20.2 Caracteristicas basicas de reatores para cultivo de bacterias ou
celulas animais 442
20.3 Construcao do fermentador 448
20.4 Cultivo de celulas animais 468
20.5 Obtencao e manutencao das condicoes de esterilidade e
biosseguranca 470
20.6 Valvulas e purgadores de vapor 480
20.7 Outros tipos de reatores 485
Bibliografia 489
21 PURIFICA(:AO DE BIOTECNOLOGICOS 493
21.1 Introducao : : 493
21.2 Classificacao : 494
21.3 Rompimento de celulas microbianas 501
21.4 Precipitacao 504
21.5 Ultrafiltracao 507
21.6 Extracao em sistemas de duas fases aquosas 507
21.7 Cromatografia 510
21.8 Tratamentos finais 514
21.9 Rotinas analiticas 515
21.10 a processo integrado de purificacao 518
Referencias bibliograficas 520
22 ASPECTOS ECONOMICOS 523
22.1 Introducao 523
22.2 Consideracoes sobre as diferentes variaveis e suas relacoes
existentes em todo 0 estudo economico 523
22.3 Analise de viabilidade economica 528
22.4 Aspectos economicos de processos fermentativos 530
22.5 Metodos de avaliacao de investimento , 535
Bibliografia 541
--- - --,--- -_....... ._.__.._--- - -- - ---_ ._ - --- -------- --- ---------- ----- .__..
- - .

.

-==ENGENl A
H
-RI - I . ...
- - . .. '-

Walter Borzani
Durante a Segunda Grande Guerra (1939-1945), os entao "Aliados" concen
traram esforcos consideraveis na consecucao de urn objetivo muito espedfico:
transferir para escala industrial 0 processo de laboratorio, entao conhecido, de
producao de penicilina por fermentacao.
Ao lado de profissionais ja de longa data envolvidos no estudo de ativida
des microbianas, passaram entao a atuar engenheiros quimicos, com vistas asolu
de questoes bastante complexas inerentes adesejada ampliacao de escala.
Foi nesse periodo que nasceu 0 ramo da Engenharia Quimica que, mais tar
de, por suas peculiaridades, receberia 0 nome de Engenharia Bioquimica.
Neste praticamente meio seculo de existencia, esse novo ramo da Engenha
ria Quimica progrediu rapidamente, conduzindo a muitos resultados de indiscuti
vel importanciapratica.
. a objetivo da Engenharia Bioquimica e a aplicacao dos conhecimentos da
Engenharia Quimica na solucao de problemas que se apresentam na implantacao
de processos biotecnologicos em larga escala, e em sua otimizacao.
Segundo AlBA, HUMpHREY e MILLIS: "Biochemical engineering is concer
ned with conducting biological processes on an industrial scale, providing the
links between biology and chemical engineering. The authors believe, moreover,
that the heart of biochemical engineering lies in the scale-up and management of
cellular processes".
BAILEYe OLLIS, por sua vez, dizem: "Processing of biological materials and
processing using biological agents such as cells, enzymes or antibodies are the
central domain of biochemical engineering. Success in biochemical engineering re
quires integrated knowledge of governing biological properties and principles
and of chemical engineering methodology and strategy. (...) Reaching this objecti
ve clearly requires years of careful study and practice".
Convern citar que 0 primeiro livro dedicado a Engenharia Bioqufrnica foi
publicado em 1958, por STEEL.
.-'-
2 Engenharia bioqufmica: umaaplicaosuigeneris daengenharia qufmica
Os problemas que se apresentam no ambito da Engenharia Bioqufrnica sao,
com alguma frequencia, de dificil solucao, dadas as peculiaridades e a complexi
dade dos sistemas em que se desenvolvem os processos biotecnol6gicos.
o estudo de varies desses problemas constitui 0 principal objetivo deste vo
lume, mas parece-nos aconselhavel, neste primeiro capitulo, comentar alguns de
les,com a iinica finalidade de dar, aos alunos, uma ideia das questoes que serao
examinadas.
Comecemos tecendo alguns comentarios a respeito dos balances materiais
em processos fermentativos. A celula microbiana responsavel pela transformacao
que nos interessa em urn dado processo realiza, alem dessa transformacao, urn
grande ruimero de outras reacoes com 0 objetivo, para ela absolutamente primor
dial, de manter-se viva e multiplicar-se. Isso pode dificultar 0 estabelecimento de
balances materiais, alem de afetar 0 rendimento do processo considerado. 0 co
nhecimento das provaveis vias metab6licas que se desenvolvem nas celulas e, nes
te particular, de grande auxilio, fornecendo muitas vezes informacoes que
indicam a maneira mais adequada de conduzir 0 processo que nos interessa.
o fato inevitavel, apontado ha pouco, de a celula ter a iinica "preocupacao"
de manter-se viva e multiplicar-se, tambem pode acarretar series problemas no es
tudo da cinetica da transformacao que se tern em vista, uma vez que a velocidade
de formacao do produto que nos interessa pode ser profundamente afetada pelas
velocidades de outras reacoes integrantes do metabolismo do microrganismo. Isso
pode dificultar 0 estabelecimentode modelos matematicos, cuja importancia na
otimizacao e no controle de processos ja foi constatada muitas vezes.
A manutencao de urn razoavel grau de "homogeneidade" no reator, para que
todos os agentes da transformacao se encontrem, pelo menos aproximadamente,
nas mesmas condicoes (temperatura, pH, concentracoes de substancias do meio), e
outro problema a ser considerado, principalmente em reatores industriais.
Consideremos, agora, a operacao de esterilizacao de grandes volumes de
meio, operacao esta muito freqiiente em industrias de fermentacao. Como proce
der: eliminar os microrganismos por filtracao do meio ou destrui-los por aqueci
mento? Se a esterilizacao por aquecimento tiver sido escolhida, que processo sera
utilizado: 0 descontinuo ou 0 continuo? Que temperatura de esterilizacao sera
adotada equal 0 correspondente tempo do tratamento termico? Quais serao as di
mensoes dos equipamentos e os controles necessaries em cada caso?
o meio, uma vez esterilizado, sera encaminhado ao fermentador onde sera
transformado pela acao das celulas microbianas. Aqui nos depararemos com mui
tas alternativas. Serao utilizados microrganismos em suspensao no meio ou celu
las imobilizadas em suportes inertes? Que processo de fermentacao sera utilizado:
o des continuo, 0 sernicontinuo ou 0 continuo? Com ou sem recirculacao do mi
crorganismo? Se for escolhido 0 processo descontinuo, sera 0 descontinuo simples
ou 0 descontinuo alimentado? Se 0 processo adotado for 0 semicontinuo, que fra
c;ao de meio fermentado sera periodicamente retirada do reator e substitufda por
igual volume de meio novo? No caso de se ter optado pelo processo continuo,
adotar-se-a urn iinico reator de mistura, varies reatores de mistura ligados em se
rie, ou urn reator pistonado? Quais serao as dimensoes e 0 formato do reator?
Como controlar as condicoes de fermentacao? Como adicionar alguns nutrientes:
- ~ - - ~ - ~ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~ - - - - - - - - ~ - - - - - - - ----- --- --
Engenhariabioqufmica: umaaplicao suigeneris da engenhariaquimica 3
todos de uma s6 vez no preparo do meio, ou de maneira programada durante 0
andamento do processo?
No caso de se tratar de urn processo enzimatico continuo com enzimas imo
bilizadas, lancar-se-a mao de urn reator de leito fixo, ou de leito fluidizado?
Outro t6pico a ser lembrado, e 0 da ampliacao da escala de trabalho ("sca
le-up"): se bons resultados foram obtidos, em certas condicoes, em urn reator de
pequena capacidade, como operar urn reator industrial para que os mesmos resul
tados sejam alcancados?
Finalmente, para nao alongarmos demasiadamente estes comentarios, nunca
sera demais ressaltar a importancia de que se reveste a escolha dos processos que
serao utilizados, tanto na separacao dos produtos e subprodutos, como no trata
mento, ou no aproveitamento dos residuos.
A solucao adequada de muitas das questoes com que se defronta a Engenha
ria Bioquimica passa, necessariamente, pelo estabelecimento de modelos materna
ticos, como se constatara ao longo deste Volume. Parece-nos oportuno, por esse
motivo, ressaltar a utilidade desses modelos, valendo-nos de urn artigo publicado
por FREDRICKSON e colaboradores em 1970:
"1. Models serve to correlate data and so provide a concise way of
thinking about a system or process.
2. Models allow one - within limits - to predict quantitatively the per
formance of a system or process.Thus, they can reduce the amount of
experimental labor necessary to design and/ or optimize a process.
3. Models help to sharpen thinking about a system or process and can
be used to guide one's reasoning in the design of experiments, to isola
te important parameters and elucidate the nature of the system or pro
cess. That is to say,' the combinations of mathematical modelling and
experimental research often suggests new experiments that need to be
done."
Literatura recomendada
(1) AIBA, 5., HUMPHREY, A.E. & MILLIS, N.F. Biochemical Engineering.
University of Tokyo Press, T6quio, 1973.
(2) BAILEY, J.E. & OLLIS, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals.
McGraw-Hill Book Company, Nova York, 1986.
(3) SIMON, P. & MEUNIER, R. Microbiologie Industrielle et Genie Biochi
mique. Masson et Cie., Editeurs, Paris, 1970.
---. . . - - I - - - , - , . . - ' - - - ~ - - - - _ . ' - _ . _ -
I .
------1__ ~ _

5
_._--- - - ------ - - --
Willibaldo Schmidell
2.1 -
o objetivo central do presente capitulo reside na descricao das caracteristi
cas gerais que microrganismos e meios de cultura devem apresentar, a fim de ser
possivel utiliza-los em uma operacao industrial de grande porte, ou seja, executa
da em biorreatores com volumes de dezenas de mil hares de litros.
Apesar de se procurar mencionar, ao longo do texto, alguns exemplos, nao
ha a preocupacao em descrever caracteristicas particularmente importantes para
urn determinado processo fermentativo, pois isto tornaria 0 tema extremamente
longo, alemde apresentar uma importancia questionavel, tendo em vista 0 escopo
geral do presente capitulo.
Retomando as ideias ja abordadas no Capitulo 9 (Vol. 1), na Figura 2.1 en
contra-se urn esquema geral de urn processo fermentativo, na qual buscou-se res
saltar alguns pontos essenciais, que permitem urn inicio de discussao dentro do
objetivo acima tracado.
Conforme se pode observar na Figura 2.1, 0 sucesso de urn dado processo
fermentativo depende muito de uma correta definicao de quatro pontos basicos: 0
microrganismo, 0 meio de cultura, a forma de conducao do processo fermentativo
e as etapas de recuperacao do produto.
Na verdade, esses quatro pilares de urn processo fermentativo interagem
enormemente, sendo necessario buscar defini-los de forma conjunta, levando em
consideracao aspectos biol6gicos e economicos, 0 que torna bastante complexa
esta adequada definicao. Para tornar clara essa ideia, pode-se mencionar que sem
pre se pretende empregar meios de cultura baratos, mas deve-se lembrar que 0
rnierorganismo deve encontrar neste meio condicoes adequadas para realizar a
... _
"'
"I


II
_L_
_ : .
----
6 Microrganismos e meios de para industrial
Em termos de formas de conducao do processo fermentativo, seria dificil
imaginar a producao presente de etanol no Brasil (algo como 15 bilh6es de litros
por ano), caso nao se operasse os biorreatores em sistema descontinuo alimentado,
ou mesmo continuo, porem com 0 reciclo das celulas.Da mesma forma, 0 grande
avanco alcancado pela digestao anaer6bia no tratamento biol6gico de aguas resi
.duarias, deveu-se muitissimo ao surgimento dos reatores continuos operados com
fluxo ascendente e reciclo interne de celulas.
Figura 2.1 - Esquema geral de um proc esso fermentativo
As operacoes finais para a recuperacao do produto (operacoes de
"downstream"), sao igualmente da mais alta importancia, Sabe-se que a melhor
forma presentemente para a recuperacao do etanol, ap6s uma fermentacao alcooli
ca, ea operacao de destilacao, mas ela incide significativamente no custo do pro
duto final, em virtude da energia necessaria para a sua execucao. No entanto, a
importancia de uma adequada definicao das operacoes de recuperacao do produ
to, fica mais clara quando se aborda a producao de produtos de alto valor agrega
do, como a producao de antibi6ticos, enzimas, ou outras protefnas (insulina,
hormonios de crescimento, vacinas etcJPa'ra esses casos, as operacoes de recupe
racao doproduto podem serresponsaveis por 50 a 70% do custo do produto final,
indicando, claramente, a sua importancia em termos de uma adequada definicao.
as aspectos relacionados com a forma de conducao de biorreatores, assim
como as operacoes de recuperacao de produtos, serao abordados em varies capi
tulos do presente volume.
.',
Biorreatar

Materias-prlrnas
1
Mlcrorgariismo

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Preparo'do':
in6culo:':eta'pa
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(gerrninaoores)
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7 Fontes de microrganismos de interesse
Cabe, portanto, conforme salientado anteriormente, abordar alguma refle
xao sobre microrganismos e meios de cultura que podem ser eventualmente em
pregados em uma operacao industrial.
2.2 - Fontes de microrganismos de interesse
Microrganismos que possam ter interesse industrial, podem ser obtidos ba
sicamente das seguintes formas:
isolamento apartir de recursos naturais
compra em colecoes de culturas
obtencao de mutantes naturais
obtencao de mutantes induzidos por metodos convencionais
obtencao de microrganismos recombinantes por tecnicas de
engenharia genetica.
o isolamento de microrganismos a partir de recursos naturais, tais como
solo, agua, plantas etc., sempre foi uma atividade de grande importancia para a
obtencao de novas linhagens de interesse industrial.
Trata-se de uma atividade que envolve muito trabalho experimental, signifi
cando urn custo relativamente elevado, porem pode conduzir ao isolamento de li
nhagens melhor produtoras de urn dado produto, mas, rnais importante do que
isto, pode conduzir adescoberta de novos produtos, 0 que confere a esta possibili
dade uma relevancia inquestionavel,
Cumpre lembrar que as grandes empresas produtoras de antibi6ticos, ou en
zimas, mantem programas de isolamento de linhagens de recursos naturais, justa
mente com 0 objetivo de incrementar a producao de certos produtos, ou com 0
objetivo de encontrar linhagens produtoras de novos antibi6ticos por exemplo.
Eclaroque 0 isolamento de linhagens deve ter inicio com certas premissas,
definindo-se 0 que se pretende obter, pois 0 simples isolamento podera levar a
disponibilidade de urn mimero inimaginavel de culturas, 0 que dificulta a conver
genera para 0 processo ou 0 produto que se pretende produzir.
A compra em colecoes de culturas epresentemente bastante viavel, tendo
em vista a existencia de muitas colecoes de culturas em varies paises. Nesse
sentido, STANBURY et al.' listam nada menos do que 11 colecoes de culturas em
varies paises, podendo-se ainda acrescentar a Agricultural Research Service
Culture Collection (EVA), tambem conhecido como NRRL Culture Collection
(http://nrrl.ncaur.usda.gov) e a Colecao de Culturas Tropical (Campinas - SP;
http://www.cct.org.br). 0 contato com essas colecoes eatualmente muito facilita
do, podendo-se utilizar os recursos da Internet para tal tarefa.
Ede se esperar que 0 microrganismo utilizado para a producao de urn dado
antibi6tico nao estara disponivel em uma colecao de culturas, sendo, com muita
frequencia, oriundo de programas de melhoramento genetico.
Como se sabe, quando uma dada celula prolifera, ha sempre uma pequena
possibilidadede surgimento de mutantes naturais, os quais podem ser isolados e
ensaiados objetivando a verificacao de suapotencialidade de producao. Conforme
_ _ ~ _ . . . . . . . . . . o = : I i i i i I i i
8 Microrganismos e meiosde cullura para utiliza<;ao'industrial
se Vera adiante, essas alteracoes naturais nao sao, de forma alguma, interessantes
do ponto de vista de urn processo fermentativo, mas eventualmente podem gerar
novas linhagens que apresentem interesse pratico,
No entanto, aguardar 0 surgimento de mutantes naturais de interesse prati
co, podera significar 0 dispendio de muito tempo, razao pela qual prefere-se, ha ja
varias decadas, lancar mao de metodos que forcem 0 aparecimento de celulas mu
tadas, como e0 caso de submeter suspens6es de celulas ou esporos a radiacoes ul
travioleta ou a substancias quimicas mutagenicas, como a nitrosoguanidina. Ao se
permitir essa exposicao ou contato, ocorre uma drastica destruicao da maioria das
celulas, recuperando-se, a seguir, aquelas que sobreviveram, verificando-se se
mutaram na direcao desejada.
Essa tecnica para a obtencao de mutantes e obviamente aleat6ria, tratan
do-se de recuperar as celulas sobreviventes em meios ou condicoes especificas, de
forma a dirigir este isolamento para as celulas que se pretende. Tais programas de
mutacaoZselecao costumam ser bastante dispendiosos, mas levaram a varias con
dicoes de sucesso descritas na literatura.
Urn caso bern relatado foi a significativa melhora de linhagens de Penicillium
chrysogenum para a producao de penicilina. De fato, na decada de 40 obtinha-se
teor de penicilina no caldofermentado da ordem de ' 100 unidadesl em", passan
do-se a obter, ja por volta de 1976, teores da ordem de 51.000 unidades Zcm". Ja
acrescimos da ordem de 4 vezes foram obtidos entre 1970 e 1985 em uma determi
nada empresa,' 0 que indica que este progresso costumaser muito estimulante, es
pecialmente quando se parte de linhagens naturais. Incrementos semelhantes
foram obtidos na empresa Squibb Industria Quimica S.A., no periodo de 1975 a
1992, conforme relatado por SCHMIDELL; FERNANDES.
2
Tais progresses realmente significativos costumam ser atribuidos apenas a
esses programas de mutacaoZselecao, mas e conveniente lembrar 0 necessario tra
balho de adaptacao do meio de cultivo, da forma de conduzir 0 processo.fermen
tativo e as alteracoes nas etapas de recuperacao do produto, a fim de propiciar 0
real surgimento das vantagens, em nivel de producao industrial, da nova linha
gem selecionada."
Finalmente, nas iiltimas decadas, as tecnicas de engenharia genetica (vide
Vol. 1, Cap. 4), tambem designadas por tecnicas ou tecnologia de DNA recombi
nante, sem diivida trouxeram urn imenso avanco nas possibilidades de se obter ce
lulas mais produtivas, ou celulas produtoras de substancias que normalmente nao
produzem. Como se sabe, ao lado dessas possibilidades, igualmente trouxeram
varias reflexoes e inquietudes,cujo teor nao sera abordado no presente capitulo.
A introducao de fragmentos de DNA de certas celulas em outras, via vetores
como os plasmideos, permite a obtencao de celulas alteradas geneticamente, po
rem de forma muito mais dirigida do que as metodologias convencionais anterior
mente mencionadas, sendo possfvel de ser executada nao apenas com microrga
nismos, mas igualmente com celulas animais e vegetais.
Para se ter uma ideia da potencialidadedessas tecnicas, imaginemos que se
.conheca a sequencia metab6lica que leva ao acumulo de urn dado produto de inte
resse, por exemplo 0 produto P na sequencia generica:
. ...__...._. . _
.._-- - - --- - - --- - - - - --- _ .._ -
Fontes de microrganismos de interesse 9
...
Urn estudo rnais aprofundado dessa sequencia, atraves da determinacao das
concentracoes dos compostos intermediaries (B, C, D etc.), pode levar adetermi
nacao da reacao limitante da sequencia (aquela que determina a velocidade do flu
xo metab6lico em estudo, por exemplo a reacao C D) e, portanto, da enzima
responsavel pela reacao especifica (enzima c). As etapas seguintes sao a identifica
do gene que codifica 'para a sintese dessa enzima, introduzir este gene em
plasmideos e volta-los acelula produtora. Com esse procedimento, aumenta-se 0
. ruimero.de c6pias do gene responsavel pela sintese da enzima, 0 que permite au
mentar a velocidade da reacao limitante, pela presenca de umamaior concentra
da enzima responsavel (no caso, a enzima c).
, Essa estrategia foi empregada,por exemplo, no incremento da producao de
cefalosporina C por Cephalosporium acremonium. 1
Ainda, uma etapa intermediaria poderia ser imaginada. Uma vez identifica
da a enzima responsavel pela catalise da reacao limitante, esta enzima poderia ser
manipulada, atraves do conhecimento de sua estrutura e alteracao de determina
dos aminoacidos, por tecnicas de engenharia de proteinas, objetivando obter uma
nova proteina com atividade aumentada. a gene correspondente a essa nova enzi
ma seria, entao, introduzido na celula produtora, conforme acima descrito.
A potencialidade dessas tecnicas erealmente enorme, pois, uma vez solucio
nado 0 problema de uma dada reacao limitante, outra reacao da sequencia meta
b6lica passara a ser limitante, 0 que permite imaginar a realizacao de igual estrate
gia para esta nova reacao. Claro esta que tais procedimentos nao sao de simples
execucao, pois inclusive exigem um amplo conhecimento do material biol6gico
utilizado, mas apresentam urn enorme interesse pratico,
Conforme mencionado, as tecnicas de DNA recombinante tambem podem
ser aplicadas para tornar celulas produtoras de substancias que naturalmente nao
sao por elas produzidas, ,em virtude da ausencia de codificacao genetica para tan
to. Nesse caso, genes de certas celulas sao transferidos, viavetores adequados, a
outras celulas, como e0 caso de introduzir a codificacao para a sintese de glicoa
milase de Aspergillus em celulas de Saccharomyces cerevisiae, 0 que passa a permitir
a realizacao da fermenta)ao alcoolica de materias-primas amilaceas, pela levedura
alterada geneticamente."
Com esse objetivo, a tecnologia do DNA recombinante tern sido empregada
para a obtencao de proteinas heterologas de alto valor agregado, em particular
I
, I
para usa em saude humana, como e 0 caso da producao de hormonio de cresci
mento humann, insulina, interferons, Fator VIII (tratamento da hemofilia) etc.
Como microrganismos receptores da codificacao genetica empregam-se bacterias
(Escherichia coli, Bacillus subtilis), leveduras (Saccharomyces cerevisiae) ou fungos fi
lamentosos (Aspergillus niger).-Igualmente sao empregadas celulas animais (exem
plo: BHK - "Baby Hamster Kidney"), particularmente para a producao de protei
nas mais complexas e de maior valor agregado, 0 que explica 0 crescente interesse
das grandes empresas do setor no cultivo de celulas animais.
Presentemente, einclusive possivel imaginar 0 emprego de urn pequeno rui
mero de microrganismos, bem conhecidos em termos de necessidades nutricionais
e caracteristicas de crescimento, como e0 caso de Escherichia coli ou Saccharomyces
cerevisiae, para a sintese de uma grande variedade de' proteinas, no lugar de se ter
como problema 0 cultivo de uma linhagem para cada composto a ser produzido.
I 0 Microrganismose meiosde cultura para industrial
Claramente isso pode contribuir uma certa simplificacao dos processos pro
dutivos, desde que se consiga obter os mutantes adequados.
2.3 - Caracteristicas desejaveis de microrganismos e meios
de cultura para industrial
Conforme ja anunciado, no presente item pretende-se apresentar algumas
caracterfsticas gerais que microrganismos e meios devern apresentar, a fim de que
seja possfvel 0 estabelecimento de processoprodutivoem larga escala. Buscar-se-a
enunciar as caracterfsticas desejaveis de microrganismos e, em seguida, aquelas
relacionadas aos meios de cultivo, lembrando, no entanto, que 0 desempenho de
urn dado microrganismo depende muito da composicao do meio de cultura em
que ecolocado.
Como se pretende expor caracterfsticas gerais, quando da analise de urn
dado processo fermentativo, epossfvel que algumas destas caracterfsticas nao se
apliquem, enquanto outrasnao abordadas no presente texto, poderao ser de gran
de importancia. No entanto, espera-se estabelecer certas reflexoes que permitam
essa analise critica.
2.3. I - Caracterfsticas desejaveis de microrganismos
Para uma aplicacao industrial, espera-se que os microrganismos apresentem
as seguintes caracterfsticas gerais:
apresentar elevada eficiencia na conversao do substrato em produto;
permitir 0 acumulo do produto no meio, de forma a se ter elevada concen
tracao do produto no caldo fermentado;
nao produzir substancias incompatfveis com 0 produto;
apresentar constancia quanto ao comportamento fisiol6gico;
naoser patogenico:
nao exigir condicoes de processo mtiito complexas;
nao.exigir meios de cultura dispendiosos;
permitir a rapida liberacao doproduto para 0 meio.
As duas primeiras caracteristicas serao discutidas conjuntamente, pois, ape
sar de serem distintas, concorrem para 0 mesmo objetivo geral de extrema impor
tancia.
De fate, uma celula deve permitir elevada conversiio do substrato em produto,
pois, com muita frequencia. tas materias-primas incidem pesadamente no custo do
produto final, podendo-se mencionar uma incidencia de 38 a 73% do custo total de
producao como sendo devido as materias-primas, em particular a fonte organica
de carbone.'
Por outro lade, esempre desejavel que 0 microrganismo permita um elevado
acumulo do produto no meio, sem sofrer inibicao mais acentuada em virtude deste
aciimulo, pois isto concorre para uma reducao nos custos de recuperacao, os quais
tambem podem ser muito acentuados.
Tome-se como exemplo 0 caso da fermentacao alcoolica, aqui representada
simplificadamente pela equacao qufmica final (glicose em anaerobiose sendo con
vertida em etanol e gas carbonico):

Caracterfsticas desejiveisde microrganismos e rneiosde culturaparaaplicacao industrial I I
.....
C
6H1206
2C0
2
Como se pode observar, 0 fator estequiometrico e igual a 0,511, ou seja, cada
grama de glicose convertida gera O,511g de etanol, sendo que 0 Saccharomyces cere
visiae, normalmente empregado nesta fermentacao, com frequencia permite obter
urn rendimento da ordem de 900/0 deste valor estequiometrico, 0 que torna este mi
crorganismo 0 rnais importante para Tealizar esta conversao, lembrando que varies
outros tambem podem acumular etanol, a partir da glicose, porem nao com este
rendimento tao elevado.
Obviamente, nao se consegue manter urn processo de fermentacao alcoolica
obtendo-se 100% de rendimento, pois as celulas tern de proliferar, 0 que significa a
sintese de muitos outros compostos intermediaries, sendo 0 acumulo de etanol a
via metab6lica que permite a geracao de energia na forma de ATP (glic6Iise). Cla
ro esta que esse e urn ponto fundamental, pois a materia-prima incide em algo
como 600/0 do custo do etanol e, desta forma, baixos rendimentos tornariam invia-.
vel a producao deste produto de baixo valor agregado.
Por outro lado, sabe-se que quando se atinge 8 a 10% (em volume) em etanol
no vinho fermentado, ja ocorre uma clara inibicao da levedura, 0 que faz com que
a velocidade da conversao do acucar em etanol fique prejudicada, razao pela qual
procura-se nao ultrapassar estes valores, pelo menos na producao de alcool com
bustivel (nao se esta aqui comentando 0 caso de bebidas alcoolicas).
Isso significa a necessidadede destilar urn liquido que contem apenas 10%
de etanol, 0 que - alem do dispendio de energia - ainda ira gerar 90% de residuo
na forma de vinhaca, que necessita encontrar urn destino adequado.
a ideal seria encontrarleveduras mais resistentes ao etanol, porem sem que
. ocorra queda na velocidade da fermentacao alcoolica (sem queda na produtivida
de), 0 que.naoe tarefa simples..
f
Dequalquer forma, fica claro que a conversao da materia-prima em produto
ja e muito elevada, 0 que nao permite visualizar grandes incrementos, lembrando,
novamente, a necessidade de manter a viabilidade celular para que a ferrnentacao
nao .seja 'intcrrorripida.
-Umasituacao bern diversa e a que ocorre com os processos aer6bios, por
exemplo.maproducao de enzimas ou antibi6ticos. Nesse caso, a conversao do
car pode serrepresentada esquematicamente da seguinte forma:
Acucar + O
2
celulas + CO
2
+ H
20
+ Intermediaries + Produto
Nesse caso, por se operar em aerobiose, a quantidade de celulas geradas cos
tuma ser muito intensa, em relacao ao acucar consumido,ao ladode uma quanti
dade relativamente pequena do produto alvo (antibi6tico ou enzima). Se, por urn
lado, 0 custo da materia-prima incide menos 'pesadamente no custo do produto fi
nal, as operacoes de recuperacao do produto sao necessariamente mais onerosas
(chega-se a valores da ordem de 700/0), mas 0 produto alvo e de mais alto valor
agregado.
Assim, ao se encontrar linhagens que crescam relativamente menos, ou que
acumulem menos compostos intermediaries, e possivel visualizar grandes incre
mentos na sintese do produto, conforme mencionado anteriormente para 0 caso
da producao de penicilina.
12 e meiosde culturaparautilizac.;ao industrial
. Mesmo permitindo 0 acumulo do produto no meio, a celula produtora deve,
ainda, contar com a caracteristica de ndo produzir eubsidnciae que sejam incompativeis
com 0 produto, pois isto pode levar a uma situacao de desinteresse pelo processo
produtivo. .
Esse e 0 caso, por exemplo, de se estar interessado na producao de uma dada
enzima, ou proteina, mas se utilizar uma linhagem que tambem seja uma boa pro
dutora de proteases extracelulares. Assim, ao se produzir a enzima, separar as ce
lulas e armazenar 0 produto, pode-se ter uma reducao sensivel da atividade
enzimatica em virtude da acao das proteases.
Urn exemplo adicional, mais especifico, e sobre a producao de glicoamilase
por Aspergillus. Como se sabe, a glicoamilase e a enzima que hidrolisa 0 amido ge
rando glicose, sendo pois de muito interesse em varias aplicacoes, destacando-se 0
preparo de xaropes de glicose para a industria de alimentos. Ocorre que alguns
microrganismos produtores deglicoamilase tambem sintetizam a transglicosida
se, enzima esta que, quando na de glicose, volta a polimeriza-la, gerando
moleculas que nao sao mais hidrolisadas pela glicoamilase.
Na realidade, a presente caracteristica desejavel em uma celula pode ser
bern mais generalizada. Urn microrganismo ideal, quanta ao aspecto agora abor
dado, deve produzir 0 minima de outras substancias, ao mesmo tempo em que
sintetiza 0 composto pretendido. Isso leva a uma maior disponibilidade de nutri
entes para a sintese do produto (voltando-se a discussao anterior), mas tambem
permite vislumbrar uma maior facilidade na recuperacao deste produto. (
Uma outra caracteristica, da mais alta importancia, refere-se. aesiabilidade fi
sio16gica da linhagem a ser empregada industrialmente. Isso significa que nao bas
ta que se tenha uma linhagem hiperprodutora de uma dada substancia de
interesse, mas que se conheca as tecnicas rnais adequadas para a sua conservacao
e, mais ainda, que ela s.e mantenha como excelente produtora da substancia de in
teresse ao longo de todas as etapas envolvidas desde sua proliferacao em nivel de
laboratorio, germinadores e biorreator principal (Fig. 2.1).
Assim sendo, 0 constante estudo dessas formas de conservacao mais ade
quadas das linhagens e tarefa das mais importantes, mantendo-se, na industria,
aquelas realmente de interesse, assim como 0 imediato descarte dos lotes que de
monstrem alguma tendencia aatenuacao quanta ao acumulo do produto no meio.
Para a celula ha sempre a tendencia em otimizar 0 crescimento, em detrimento da
sintese do produto, motivo pelo qual nao basta verificar, em termos de metodolo
gias de conservacao, se a celula cresce, mas se ela continua a acumular 0 produto
de maneira eficaz.
Conforme ja mencionado anteriormente, quando uma celula prolifera, ha
sempre alguma probabilidade de ocorrerem mutacoes naturais. Em urn processo
fermentative tipico, normalmente parte-se de uma massa muito_pequena de celu
las nas etapas iniciais de preparo do inoculo (Fig. 2.1), chegando-se a biorreatores
de dezenas de milhares de litros, contendo concentracoes celulares com frequen
cia acima de 10 g de materia seca de celulas/L, 0 que significa gerar, em termos de
massa de materia seca, algo em torno de toneladas de celulas, Isso mostra clara
mente a necessidade de se operar com material genetico que seja estavel, a fim de
se contar com celulas competentes em termos de acumulo do produto..
_ 0 emprego de linhagens relativamente instaveis, pode, inclusive, limitar 0
i
empregode sistemas de fermentacao mais eficientes, como os continuos,
i
i .
1
Caracteristicasdesejaveis de microrganismos e meiosde culturaparaaplicao industrial 13
pois podera ocorrer, ao longo do tempo, a selecao de celulas que privilegiem 0
crescimento em detrimento do acumulo do produto.
o fenomeno da atenuacao do acumulo do produto de interesse pode ocorrer
tanto com linhagens naturais como, em especial, com as linhagens mutadas. Na li
teratura' esta bern documentada a viabilidade de se produzir lisina por mutantes
auxotr6ficos, em processo continuo, apenas quando se empregam mutantes auxo
tr6ficos em dois aminoacidos e nao em apenas urn, a fim de evitar os mecanismos
de controle da celula e obter 0 acumulo intenso do aminoacido de interesse. Nessa
condicao, e mais dificil 0 retorno as caracterfsticas da linhagem original, em virtu
de de uma maior alteracao a que a celula foi submetida.
Celulas recombinantes, por via da introducao de plasmfdeos, igualmente
podem ser instaveis em virtude da inexistencia de replicacao do plasmideo para
as celulas filhas, ou mesmo devido a destruicao do plasmideo na pr6pria celula
hospedeira, ou ainda a expulsao desse plasmideo. Enecessario lembrar que a in
troducao de novas codificacoes geneticas pode, eventualmente, significar urn onus
adicional para a celula, a qual esta interessada em aprimorar 0 seu crescimento.
Inclusive, a 'integracao de uma codificacao genetica contida em urn plasmideo ao
cromossomo da celula, 0 que poderia conferir a desejada estabilidade, pode ainda
nao resultar na obtencao de uma hiperprodutora, em virtude da existencia de urn
ruimero limitado de c6pias do gene de interesse.
A operacao de biorreatores de grande porte, conforme mencionado anterior
mente, do ponto de vista tecnico e economico, praticamente exige 0 emprego de
microrganismos niio patogenicos, os quais possam ser manuseados sem riscos ambi
entais, particularmente nas etapas seguintes em relacao ao termino do processo
fermentativo. Mesmo durante a ferrnentacao, caso se manuseasse microrganismos
patogenicos em reatores de dezenas de milhares de litros,os cuidados teriam de
ser bastanteaumentados, particularmente com os gases efluentes, 0 que incidiria
em custos adicionais.
o cultivo de patogenicos e efetuado, por exemplo, para a producao de vaci
nas, em reatoresde pequeno porte (da ordem de centenas ou poucos milhares de
litros), porern confinados em camaras assepticas, tomando-se precaucoes necessa
rias para anao .ocorrencia de contaminacao do meio ambiente. Isso,logicamente,
significa custo adicional, 0 qual pode ser justificado no caso de producao de vaci
nas, mas tornaria inviavel a producao de uma enzima ou mesmo urn antibi6tico.
A obtencao de celulas recombinantes de Escherichia coli, via a introducao de
plasmideos, e sempre algo muito atraente, pois esta e uma das bacterias mais co
nhecidas presentemente, mas encontra resistencias em termos de uma utilizacao em
instalacoes de grande porte, justamente por ser uma enterobacteria. Essa e uma das
razoes (nao a unica), pelas quais hoje se prefere partir de celulas de leveduras, ou
fungos filamentosos nao patogenicos, ou mesmo de celulas animais, a fim de se ob
ter recombinantes. Apesar disso, ainda existem discussoes a respeito da disposicao
final dessas celulas recombinantes, conforme mencionado anteriormente.
Urn microrganismo tarnbem niio deve exigir condicties deprocesso muito comple
xas, por motivos claros de economicidade da producao, sendo que dentro deste to
pico muitos aspectos podem ser abordados.
Como se sabe, sempre existem valores 6timos do pH e da temperatura, por
exemplo, em termos do actimulo do produto. No entanto, tambern se sabe que 0
---___ .,... ,' " ",. , .. ... _" ., .. " . . ' " .. ...... _..,
14 Microrganismos e meiosde cuhura para industrial
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controle preciso do pH e da temperatura apenas epossfvel em reatores de banca
da, sendo que em reatores de grande porte (dezenas de milhares de litros), devera
ocorrer uma certa heterogeneidade ao longo da altura do reator, de forma que a
celula devera manter 0 seu desempenho, apesar de uma certa flutuacao nos valo
res destas grandezas tomadas como exemplo. Em outras palavras, 0 ideal eque 0
microrganismo tenha uma faixa de valores 6timos dessas grandezas e nao valores
pontuais, particularmente no que se refere ao aciimulo do produto.
Nessa direcao, sao igualmente muito interessantes os microrganismos que
conseguem manter urn born desempenho, quando cultivados em baixas concentra
coes de oxigenio dissolvido. Como ficara claro no capitulo sobre transferencia de
oxigenio, a necessidade de manutencao de altas concentracoes de oxigenio dissol
vido traz problemas bastante series no tocante a urn maior dispendio de energia,
em virtude de uma maior agitacao e aeracao do meio. Nesse sentido, os microrga
nismos que crescem de forma aglomerada (forma mice liar, por exemplo), sao sem
pre mais complicados, pois a 'concentracao de oxigenio no meio de cultivo tera de
ser mais elevada, a fim de que as celulas mais internas destes aglomerados tenham
acesso a este oxigenio, quando comparadas as celulas que crescem isoladamente.
Ja foi abordado anteriormente a inconveniencia em operar com linhagens
que excretem quantidades exageradas de proteinas para 0 meio, mas ainda ha
uma questao adicional, pois a geracao de espuma freqiientemente se atribui a pre
senca de proteinas no meio de cultivo, situacao ainda mais complexa para os pro
cessos aer6bios, devido a necessidade de aerar e agitar.o conteudo do biorreator.
Em geral, a geracao de espuma pode ocorrer no inicio de urn processo fer
mentativo aerobic, quando se empregam meios decultivo contendo extratos de
carne ou de levedura, ou agua de maceracao de milho ("corn steep liquor"), e nas
etapas rnais avancadas de urn processo em virtude da de proteinas. Isso
causa series problemas, como a necessidade de empregar urn menor volume titil
do rea tor, a fim de ter condicoes de controlar a espuma, alem da freqiiente necessi
dade de empregar antiespumantes que, alem de onerarem 0 produto final, ainda
podem causar dificuldades nas etapas de recuperacao do produto e uma reducao
na transferencia de oxigenio, 0 que exige 0 aumento da agitacao e da aeracao,
agravando a situacao. Assim, e .importante a selecao de microrganismos que ex
eretern poucas proteinas juntamente com 0 produto desejado.
As caracteristicas que urn meio de cultivo devem apresentar serao discuti
das no pr6ximo subitem mas, neste momento, convem mencionar que 0 microrga
nismo selecionado para urn processo industrial niio deve exigir meio de cultura
extremamente oneroso, por quest6es claramente de economia do processo produti
vo . Essa ea razao pela qual urn maior conhecimento das necessidades nutricionais
de uma linhagem e estudo de vital importancia, objetivando 0 fornecimento dos
nutrientes apenas necessaries. Em algumas circunstancias esse desconhecimento
leva a necessidade da adicao de certas substancias, como extrato de levedura, ex
trato de carne, peptona etc ., as quais costumam ser bastante dispendiosas.
Particularmente na area de producao de vacinas, costuma-se utilizar meios de
cultura bastante complexos e.onerosos, assim como nos cultivos envolvendo celulas
animais, mas aqui, novamente, os volumes de reacao sao relativamente pequenos e
os produtos gerados podem ser considerados como de alto valor agregado.
Finalmente, como com muita frequencia imagina-se a producao de produtos
extracelulares, ha todo 0 interesse em que a linhagem selecionada libere[dcil e rapi
-.......-__..
Caracteristicas deseji veis de microrganismos e meiosde cullura para aplicacao industrial I 5
damente 0 produto para 0 meio, de onde ele sera recuperado nas etapas seguintes ao
processo fermentativo.
Alern do aspecto ligado a uma eventual inibicao do proprio microrganismo,
pela retencao de urn dado produto do metabolismo, ainda cumpre lembrar que,
com frequencia, a primeira etapa de recuperacao do produto significa a separacao
do microrganismo (por centrifugacao ou filtracao), trabalhando, a seguir, com 0 11
quido isento de celulas e estas descartadas. Assim, se algum produto ainda per
manece associado as celulas, sera perdido.
Sabe-se que a retencao de certos produtos pelas celulas depende de uma se
rie de fatores, tais como: da linhagem empregada, da composicao do meio de cul
tivo e das condicoes impostas (pH, temperatura etc.).
Nessa direcao, urn exemplo interessante foi 0 apresentado por AGUERO et
at} trabalhando no estudo da producao de glicoamilase por Aspergillus niger
NRRL 337 e Aspergillus awamori NRRL 3112, sendo esta segunda linhagem, sem
duvida, melhor produtora que a primeira. Esses autores indicaram que, a pH 4, 0
A. niger reteve cerca de 30% da atividade associada as celulas, enquanto que 0 A.
awamori apenas algo em tomo de 10%, indicando que a linhagem melhor produto
ra tende a ser mais eficiente na excrecao do produto de interesse. ]a a pH 6, as ce
lulas de A. niger retiveram cerca de 70% da atividade enzimatica, enquanto que
nas celulas de A. awamori esta retencao foi da ordem de 40%, em relacao a ativida
de total (soma da atividade enzimatica extracelular, encontrada no caldo, e a ativi
dade intracelular, ou seja, a atividade encontrada nas celulas - atividades
enzimaticas expressas por unidade de volume de amostra), mostrando de forma
clara a influencia do pH na eficiencia da capacidade de excrecao das celulas. Ain
da, indicaram que as atividades totais obtidas com cada uma das linhagens atin
giram valores muito proximos, tanto a pH 4 como 6, indicando que 0 pH interferiu
na excrecao, mas nao na sfntese propriamente dita.
Esses resultados indicam a necessidade de se verificar, com a devida aten
<;ao, a retencao do produto de interesse pelas celulas, quando se procura efetuar
trabalhos de selecao de linhagens, .ou se esteja estudando diferentes condicoes de
cultivo, mesmo que 0 interesse resida na recuperacao de produtos extracelulares.
Caso contrario, corre-se 0 risco de descartar linhagens, ou condicoes de cultivo,
que poderiam ser potencialmente interessantes.
23.2 - Caracterfsticas desejaveis de meios de cultivo
Conforme ja comentado no inicio do item 2.3, e sempre muito dificil mencio
nar as caracteristicas de microrganismos, sem associa-los a urn determinado meio
de cultivo. Dessa forma, as caracteristicas acima indicadas, na verdade em muitos
casos, dependem do meio utilizado, de maneira que se poderia repetir, no presen
te item, caracteristicas como permitir 0 aciimulo de produto no meio, nao permitir
a sintese de substancias incompativeis com 0 produto etc. Claramente iss a nao te
ria urn maior interesse, alem de tornar-se monotone, preferindo-se descrever algu
mas caracteristicas mais espedficas, mas que agora, obviamente, dependerao do
microrganismo a ser utilizado. Igualmente. nao sera apresentada uma discussao
item a item, mas sera efetuada uma abordagem mais geral.
~ .-J.__-,....... . ._. __. '"'
16 Microrganismose meiosde culluraparautiliza.;ao industrial
Algumas caracteristicas gerais, que devem ser consideradas, sao:
ser 0 rnais barato possivel;
atender as necessidades nutricionais do microrganismo;
auxiliar no controle do processo, como e0 caso de ser ligeiramente tampo
nado, 0 que evita variacoes drasticas de pH, ou evitar uma excessiva for
macae de espuma;
nao provocar problemas na recuperacao do produto;
os componentes devem permitir algum tempo de armazenagem, a fim de
estarem disponiveis todo 0 tempo;
ter composicao razoavelmente fixa;
nao causar dificuldades no tratamento final do efluente.
Todas essas sao caracteristicas importantes, destacando-se 0 custo do meio
de cultura, que deve ser 0 menor possivel, desde que atenda as necessidades do
microrganismo selecionado.
Justamente essa combinacao de atender as necessidades nutricionais do mi
crorganismo, a fim de que 0 produto possa ser sintetizado, e ser minimamente
oneroso, e que, com frequencia, acaba por causar certas complicacoes, que mere
cern ser mais detidamente discutidas.
Como se sabe, os microrganismos utilizam como fonte de carbono, e fre
qiientemente de energia, diversos aciicares, tais comorglicose, sacarose, frutose,
ou ainda polissacarideos, como 0 amido e a celulose. Como fonte de nitrogenio
sao freqiientemente utilizados sais, como 0 (NH
4hS0
4 (0 qual costuma provocar
\ reducoes significativas do pHe, em alguns casos, fenomenos de inibicao pelo sul
fato), 0 (NH4)2HP04' ou aminoacidos, ou a ureia (a qual permite reduz,ir os proble
mas de controle do pH). Como fonte de f6sforo utilizam-se os fosfatos sohiveis,
como 0 monoamonio fosfato (MAP), ou 0 diamonio fosfato (DAP), os quais pas
sam a ser fontes de nitrogenio e f6sforo simultaneamente. Ainda, necessita-se adi
cionar outros elementos, como: Na, K, Ca, Fe, Cu, Mg, Mn, Co etc., em
concentracoes freqiientemente muito reduzidas, na forma de seus sais soluveis.
Meios de cultura constituidos apenas por essas substancias costumam ser
chamados de meios definidos, ou meios sinteticos, cuja composicao quimica e
sempre muito bern conhecida e pode ser reproduzida a qualquer instante. Por essa
razao, para as celulas que apresentam born desempenho em meios desse tipo, es
pera-se a ocorrencia de urn sistema produtivo muito estavel, alem de, em geral,
nao apresentarem problemas quanta a recuperacao e purificacao do produto final.
Esses meios, mesmo sendo mais onerosos, podem ser preferidos, caso realmente
permitam uma maior economia nas etapas de recuperacao do produto.
i No entanto, para uma grande variedade de linhagens, ha a necessidade da
.ii
f:
adicao de certos "fatores de crescimento", ou seja, alguns aminoacidos especificos
i ouvitaminas (como biotina, tiamina, riboflavina etc.). Claro esta que, quando se
J conhecem essas necessidades especificas, 0 que nem sempre e 0 caso, e possivel
! . adicionar essas substancias puras, a fim de manter 0 meio em sua forma mais defi
_ custo de.stes meios pode tornar-se inviavel, particularmente para ins .Ji . '. nida, mas 0
! ' tala<; 6es de grande porte, a menos que isto signifique urn enorme ganho
, .
~ ---, . . _ I _ ~ _ _~ .. . .... . .. . ._ . . ~
Caraderfsticas desejAveisde microrganismos e meiosde cultura para industrial I 7
economico na recuperacao do produto, ou preserve alguma caracteristica funda
mental deste produto, necessariamente de alto valor agregado.
Alternativamente, para suprir as necessidades de linhagens rnais exigentes
e, em geral, com caracteristicas nutricionais mal conhecidas, pode-se adicionar
certos materiais complexos como: extrato de levedura (autolisado de leveduras),
extrato de carne, extrato de malte, peptona (hidrolisado de proteinas) etc . Esses
materiais (individualmente ou adicionados .conjuntamente) permitem introduzir
no meio de cultura os fatores faltantes em urn meio definido, mas, alern de onero
sas, sao complexas e de composicao variavel ao longo do tempo de armazenagem
e na dependencia do fabricante e do lote empregado. Assim, pode-se imaginar a
ocorrencia de oscilacoes no processo fermentativo, alem de possiveis dificuldades
nas operacoes de recuperacao do produto final, dependendo das caracteristicas
deste produto e das operacoes de recuperacao.
Efreqiiente observar-se, nos trabalhos basicos de isolamento ou selecao de
linhagens, 0 emprego de meios contendo quantidades muito grandes desses extra
tos ou hidrolisados (varies gramas por litro, ou mesmo dezenas de gramas por li
tro) . Dessa forma, no desenvolvimento do processo produtivo, uma das tarefas
iniciais e verificar a possibilidade da obtencao de iguais desempenhos, porem em
meios isentos desses materiais, ou com a adicao de quantidades minimas, tendo
em vista 0 custo envolvido.
Na direcao dos meios mais complexos e, igualmente, menos onerosos, razao
pela qual sao empregados na maioria dos processos fermentativos em grande es
cala, cumpre mencionar 0 uso de materias-primas naturais, tais como caldo de ca
na-de-acucar, melacos, farinhas diversas (farinha de trigo, milho, soja, cevada),
aguade maceracao de milho ("corn steep liquor") etc. . .
Essas materias-primas sao de composicao quimica desconhecida, poden
do-se conhecer os teores dos acucares disponiveis, nitrogenio, f6sforo, mas nao se
conhecem os teores dos sais minerais, pois certamente ha sempre urn ruimero mui
to grande de constituintes. Meios de cultura contendo esses materiais naturais
com frequencia sao completados com alguns sais (particularmente contendo nitro
genio e f6sforo).
Claro esta a composicao quimica estara na dependencia de uma serie de
fatores, tais como solo, variedade do vegetal, safra, clima, processamento durante
a colheita e estocagem etc . Esses fatos indicam ja a expectativa de que possam
ocorrer oscilacoes no processo fermentativo que emprega essas materias-primas,
alem de obrigarem as empresas produtoras de antibi6ticos, ou enzimas a mante
rem instalacoes piloto para 0 ajuste da composicao do meio a cada novo lote de
materia-prima que a empresa recebe (particularmente aquelas que usam a agua de
maceracao de milho), a fim de evitar maiores surpresas nos biorreatores de grande
porte.
Inclusive essas materias-primas naturais podem causar problemas adicionais
na recuperacao e purificacao do produto final, assim como problemas nos trata
mentos das aguas residuarias,
No entanto, ainda continuam a ser as materias-primas preferidas em grande
mimero de casos, pela simples razao de serem as mais baratas.

18 Microrganismos e meiosde culturaparautilizacao industrial
2.4 - finais
A definicao adequada do microrganismo a ser empregado, assim como do
meio de cultura para este microrganismo, eetapa fundamental para 0 sucesso de
urn processo fermentativo.No entanto, ese:rp.pre importante lembrar que a defini
de urn processo fermentativo mais adequado, assim como as preocupacoes
com a recuperacao do produ.to, sao etapas da mais alta importancia,
Em alguns casos, 0 emprego de microrganismos disponiveis em colecoes de
cultura pode levar aodesenvolvimento de processos produtivos que sejam atraen
tes. Enecessario lembrar, no entanto, que presentemente se dispoe de muitos re
cursos para 0 aprimotamento de linhagens produtivas, 0 que torna os processos
fermentativos cada vez rnais promissores.
Essas consideracoes trazem tambem urn importante alerta sobre a constante
necessidade dedesenvolvimento do processo produtivo ja instalado, justamente
por essa grande variedade de desenvolvimentos possiveis. Presentemente ebas
tante dificil imaginar que uma dada empresa disponha do microrganismo "oti
mo", ou do meio de cultura "otimizado". E da rnais alta importancia que essa
empresa continue a busca por melhores condicoes, em termos de microrganismo e
meio; caso contrario, podera ser ultrapassada por outras com ofertas de produtos
de menor custo, ou melhor qualidade.
Referencias bibliograficas .
(1) STANBURY,P.F.; WHITAKER, A.; HALL, S.J. Principles of fermentati
on Technology. 2.ed.Reino Unido, Elsevier Science Ltd., 1995.
(2) SCHMIDELL, W.; FERNANDES,' O.L. 0 aspecto evolutivo dos processos
industriais biotecnologicos. Revista Polttecnica, n. 209, p. 31-3, 1993.
(3) SANTOS, M.G.G.R.; ABOUTBOUL, H.; FARIA, J.B.; SCHMIDELL, W.;
SCHENBERG, A.C.G. Genetic improvement of Saccharomyces for ethanol producti
on from starch. Yeast, v. 5 (Spec. Iss.), p. 11-15, 1989.
(4) ABUD, A.K.S.; TAVARES, L.B.B.; FACCIOTTI, M.C.R.; SCHMIDELL, W.;
FARIA, J.B.; SCHENBERG, A.C.G. Avaliacao do comportamento cinetico da leve
dura Saccharomyces cerevisiae recombinante L36 em biorreator: influencia do meto
do de preparo do inoculo. In: XlSimposio Nacional de Fermentacdes, Sao Carlos
(SP), 1996.'Anais, v.1, p. 1-6, 1996.
(5) AGUERO, J.M.Z.; MACEDO, G.R.; FACCIOTTI, M.C.R.; SCHMIDELL,
W. Influencia do pH na sintese e liberacao de glicoamilase por Aspergillus awamori
NRRL 3112 e Aspergillus niger NRRL 337. Revista de Microbiologia, v. 21, n. 4, p.
355-60, 1990. .
19
- --------
__.==

"'----"' . . _ - ------ _ .- .
--_.._--- - - --- - -- - - - - - - - - - - - - -
Luiz CarlosUrenha
Jose Geraldo da Cruz Pradella
Maria Filomena de Andrade Rodrigues
3.1 -
Esterilizar urn equipamento significa eliminar todas as formas de vida de
seu interior ou superficie. Em alguns processos biotecno16gicos industriais, a eli
minacao parcial da populacao microbiana dos equipamentos esuficiente para ga
raritir a qualidade que se deseja no produto. Por exemplo, nos processos onde
inibidores de crescimento sao produzidos (ferrnentacao alcoolica, producao de vi
nagrel acido acetico, acido lactico ou antibi6ticos e outros biocidas, etc.) 0 teor de
inibidor impede em maior ou menor grau 0 crescimento de variosmicrorganis
mos. Na industria de laticinios, os processos de pasteurizacao destroem a maior
parte, mas nao todos os microrganismos presentes .l" A pasteurizacao eemprega
da quando uma assepsia mais ri gorosa destruiria propriedades importantes do
alimento e seus subprodutos. .
Assim, desenvolveram-se processos de desinfeccao que nao esterilizam, ma s
garantem a ass epsia adequada. Essa situacao ecomum na industria de alimentos,
onde a eliminacao de microrganismos patogenicos elevada a efeito por processos
nao esterilizantes. Nesses casos, a populacao de microrganismos que nao eelimi
nada e mantida sob controle pela imposicao de condicoes que impedem seu de
senvolvimento, como refrigeracao ou aplicacao de inibidores de crescimento (sais,
acucares em altas concentracoes, condimentos, preser vantes quimicos, biocidas,
biostaticos, etc.).
as processos de producao de bens destinados asaude humana ou animal e
os de alimentos enlatados estao entre os mais restritivos com respeito a presen\a
de contaminantes . Nesses casos, a simples presen<;a de uma unica celula de conta
minante pode por a perder todo urn lote do produto.
Para lidar com essas situacoes, desenvolveu-se uma serie de tecnicas para al
cancar 0 tipo adequado de ass epsia. Esse assunto sera abordado no item 3.2.
- __ .
/
. --,._ _._ -- ....
20 Esterilizaodo equipamento
A esterilizacao de equipamentos efeita pela aplicacao de metodos ffsicos ou
qufrnicos. as metodos fisicos mais freqiientes sao 0 calor seco, calor umido, radia
~ a o ultravioleta, radiacao com particulas ionizantes (gama) e ultra-some as meto
dos quimicos consistem na limpeza do equipamento com liquidos ou gases que
matam os microrganismos oudanificam irreversivelmente sua capacidade repro
dutiva (hipoclorito, fenois, formaldeido, oxide de etileno, ozonic, dioxide de en
xofre, etc.).
Reatores bioquimicos e tubulacoes sao, geralmente, esterilizados pela apli
cacao de calor umido (vapor saturado).
Equipamentos destinados ao processamento de produtos de fermentacao
(bombas, filtros, centrifugas, misturadores, separadores, colunas cromatograficas,
homogeneizadores, etc.) sao preferencialmente esterilizados por calor umido. Nos
casos em que isto nao epossivel, empregam-se agentes quimicos adequados,
Material de laboratorio utilizado durante 0 processo eesterilizado por calor
umido (autoclaves), seco (fornos) e mais raramente por radiacao ultravioleta.
Meios de cultura sao esterilizados por calor umido, Nos casos em que a ina
tivacao termica de nutrientes do meio esignificativa (cultura de celulas animais,
vegetais ou de insetos, por exemplo) emprega-se a filtracao em membranas ou car
tuchos esterilizantes para remover fisicamente os microrganismos.
a ar para 0 processo fermentativo eesterilizado por filtracao em cartuchos
esterilizantes.
Embalagens sao em geral esterilizadas por radiacao gama, calor umido, ou
por lavagem com produtos quimicos adequados.
Os metodos de esterilizacao agem destruindo ou comprometendo estruturas
.microbianas, como paredes celulares, acidos nucleicos, etc., ou iriativando enzi
mas, proteinas, etc.
o mimero de microrganismos que sobrevive em qualquer estagio de uma es
terilizacao depende diretamente do ruimero inicialmente presentee Portanto, onde
for necessario aplicar esterilizacao, a limpeza e uma baixa carga inicial de micror
ganismos-interferem fortemente na severidade do processo a ser aplicado."
3.2 - Terminologia e modo de a t u a ~ a o
3.2. I - Esteritizacao
Esterilizacao e0 processo fisico ou quimico que destroi ou inativa todas as
forrnas de vida presentes em um determinado material, especialmente microrga
nismos incluindo bacterias, fungos - tanto em suas formas vegetativas comoes
poruladas - e virus. 0 termo esterilizacao possui um significado absoluto e nao
relativo, ou seja, uma substancia ou material nao pode ser parcialmente esteril,
Um material esteril etotalmente isento de qualquer organismo ativo. Essa condi
~ a o deve semanter indefinidamente.v'<"
Terminologiae modo de alua,ao 21
3.2.2 - Desirfeccao
Desinfeccao e urn processo menos rigoroso de eliminacao de microrganis
mos, envolvendo usualmente 0 uso de urn agente quimico, denominado desinfe
tante ou germicida, geralmente liquido e atemperatura ambiente ou moderada. A
desinfeccao nao implica necessariamente na eliminacao de todos os microrganis
mos. sendo direcionada aos rnais prejudiciais, principalmente em sua forma vege
tativa, que e menos resistente que a forma esporulada.
Antisseptico e urn desinfetante, aplicavel em seres animados (humanos e
animais) para eliminar microrganismos patogenicos.'
A Tabela 3.1 apresenta uma relacao dos principais termos tecnicos relaciona
dos a processos de desinfeccao, com seus significados.
3.2.3 - Modode a<;ao dos agentes esterilizantes
Agentes esterilizantes podem ser classificados como agentes fisicos ou qui
micos. Esses agentes podem induzir, por diferentes mecanismos, a formacao de
substancias quimicas letais no interior das celulas e/ou alteracoes em moleculas
essenciais para a manutencao e sobrevivencia celular, levando amorte do micror
ganismo.
A morte celular pode ser causada por uma ou mais les6es. Na celula viva
normal existem iruimeros alvos possiveis de lesao celular, tais como: (a) enzimas,
responsaveis pelos processos metab6licos; (b) membrana citoplasmatica, que man
tern a integridade do conteudo celular, controlando 0 transporte de substancias
entre a celula e seu meio externo, alem de ser tambem 0 local de algumas reacoes
enzimaticas: (c) parede celular, que proporciona rigidez e resistencia mecanica aos
microrganismos e participa de alguns processos fisiol6gicos. Urna lesao em qual
quer urn desses niveis pode desencadear alteracoes que levam a morte celular.
Alternativamente, urn dana irreversivel a urn gene, responsavel pela codificacao
de alguma enzirna essencial, tambem pode levar amorte celular.
A seguir descreveremos como agem os principais agentes esterilizantes.v' "
Calor umido
A temperatura elevada, associada ao alto grau de umidade, representa urn
dos metodos rnais efetivos para a destruicao dos microrganismos. 0 calor iimido
mata os microrganismos, principalmente pela desnaturacao irreversivel de suas
proteinas, destruindo portanto elementos essenciais para a sobrevivencia e multi
plicacao celular, como enzimas e membranas celulares.
A resistencia das proteinas ao calor e uma funcao da hidratacao da celula.
Quanto maior a quantidade de agua, mais facilrnente esta entrara nos dorninios
internos das moleculas de proteina, causando mudancas conformacionais irrever
siveis.
Alem das proteinas, os carboidratos tambem sofrem alteracoes sob 0 trata
mento de calor, sendo muitas vezes caramelizados e gerando produtos t6xicos.
Essa degradacao exerce, portanto, urn papel importante na esterilizacao.
/
(: 1
H
I:
. I
22 do equipamento
r:
r-
Tabela 3.1 - Principais termos tecnicos utilizados em processos de assepsiae seus significados
. I
TERMO SIGNIFICADO
n:
: =i
"1'"

Remocao de todas as formas de vida

Esterilizacao
I#i
de urn objeto ou material.
, 1
Remocao ou destruicao dos organis

Desinfeccao mos vivos capazes de causar danos

, ,
ou infeccoes.

;:.'"
Desinfectante ou germicida
Agente quimico capaz de promover
desinfeccao.
"f!,:

.
Agente quimico aplicavel em pessoas
\ .
Antisseptico ou animais, com capacidade de elimi
,
'... .
nar microrganismos patogenicos.
:.. .

'!':-.
Rernocao de microrganismos patoge-
I
Assepsia

nicos ou indesejados.
:.t ;
J.:.
"
Tratamento termico (geralmente 62C

'il: ;
por 30 min, seguido de resfriamento
:;/
brusco) para reducao drastica no rui
.
Pasteurizacao
mero de microrganismos presentes

em alimentos, normalmente leite,

seus derivados, e bebidas enlatadas

ou engarrafadas.
J-"..
@
Processo de esterilizacao capaz de

eliminar esporos altamente resisten

tes ao calor. Consiste em manter, 0
Wt
'r r.
material a 100C por varies minutos,

resfria-lo a temperatura ambiente e
f
Tindalizacao
inc uba-lo por cerca de 24 h. 0 proce
lil, '

dimento erepetido varias .vezes. Du

rante a incubacao, os esporos passam

aforma vegetativa, onde sao suscep


tiveis adestruicao durante 0 aqueci

mento seguinte.
h:

Agentes capazes de causar a morte

Biocidas
o '
de microrganismos.


Agentes capazes de impedir a repro-
B Biostaticos ducao de microrganismos, sem neces

sariamente mata-los.
:!<
' , " .' ," ', :a: ':" "' ,",,", ., . c . __. .,.,':',0,.... ' . ' . "";\, ''-'''T",1''i>''" . V , ...., '
.'6.-.. . .
'1:iil\ k! " ;; 0'0," , ' -:: '
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Ii
Ii
Na esterilizacao por vapor sob pressao (por exemplo, nas autoclaves), esta
tern duas funcoes principais: uma delas esta relacionada com a transferencia de
. JL
- -
Terminologia e modo de atuacao 23
mento do nivel de hidratacao no interior das celulas, favorecendo portanto a
coagulacao das proteinas.
Calor seco
-0 calor seco destroi os microrganismos atraves da oxidacao de seus consti
tuintes quimicos. A esterilizacao por calor seco emuito mais lenta e menos eficaz
que por calor iimido. Ao contrario do calor umido, nesse tipo de esterilizacao 0 ca
lor e transferido muito lentarnente e 0 nivel de hidratacao das celulas tende a di
minuir, conferindo uma certa protecao as proteinas.
Apesar de a esterilizacao pelo calor seco ser principalmente urn processo de
oxidacao, nao se pode afirmar que a ac;ao do calor seco seja restrita a isto, pois
nem sempre 0 que ocorre euma esterilizacao apenas por calor seco. Dependendo
do conteiido de agua na celula, pode ocorrer tambem a coagulacao de protefnas.
Irradiacao por luz ultravioleta (UV)
A radiacao UV e absorvida por muitas substancias celulares, mas de modo
mais significativo pelos acidos nucleicos, onde geralmente ocorrem as lesoes. 0 seu
efeito letal eproporcional a dose de radiacao aplicada. A regiaodo espectro de UV
corn ac;ao esterilizante ede 220 a 300 nrn, muitas vezes chamada de regiao "abiotica".
Existe uma relacao entre os comprimentos de onda germicidas e aqueles ab
sorvidos por acidos nucleicos ou seus constituintes. Compostos como as purinas e
pirimidinas, absorvem UV a aproximadamente 260 nm, bern proximo da radiacao
mais efetiva que e253,7 nm. Osaminoacidos aromaticos, como 0 triptofano, feni
lalanina e tirosina, absorvem UV a 280 nm. '.
Dentre os componentes dos acidos nucleicos, os fosfatos de acucares nao ab
sorvem significativamente UV acima de 220 nm. As pirimidinas sao muito rnais
sensiveis ao UV do que as purinas, por isto os efeitos letais e de mutagenese nos sis
temas biologicos sao atribuidos a transformacoes fotoquimicas das bases de pirimi
dina. A acao esterilizante do UV ocorre primeiramente pela producao de Iigacoes
cruzadas entre pirimidinas adjacentes na mesma fita de DNA (acido desoxirribonu
cleico), formando dfrneros. Essa reacao ocorre principalmente entre residuos de ti
mina, formando dirneros de timina, levando a ' perda da integridade do DNA
bacteriano (Fig. 3.1). Essas ligacoes podem causar erro de leitura do codigo geneti
co, resultando ern mutacoes que prejudicam funcoes vitais do organismo e conse
qiientemente causando a morte celular. Existem mecanismos de reparo, pelos quais
a integridade do DNA pode ser recuperada, dependendo do nivel de lesao. .
uv
liminas Dfmero detiminas
Figura 3.1 - Forrnac;ao do dimero de timina
.. ... ......_--- - - ---- - -.-
/
24 do equipamento
,
r, .
i
_ _ _ IiIOooIllIIoiIl...... .IL
f tt 7
Dfrneros mistos de citosina-timina e citosina-citosina tambem foram identifi
cados em DNA de organismos irradiados. Apesar de serem menos freqiientes,
tambem podem apresentar efeitos letais.
RNA tambem pode sofrer ac;ao do UV, que gera dimeros de hidratos e
uracila,que podem causar inativacao do RNA.
\
Varios fatores podem influenciar na sensibilidade microbiana a UV. Desta
cam-se 0 pH, 0 estado fisiologico das celulas (a maior atividade e na fase logarit
mica de crescimento) e a constituicao genetica.
Radiacao ionizante
As radiacoes ionizantes eletromagneticas sao principalmente alfa (a), beta
(13), gama (y), raios X, raios catodicos, alem de protons, neutrons e eletrons de alta
energia. Esse tipo de radiacao pode causar uma grande variedade de efeitos ffsicos
e bioqufrnicos em microrganismos. principal alvo que leva aperda de viabilida
de e a molecula de DNA.
Na radiacao ionizante, urn atomo emite eletrons de alta energia, que ioni
zam sua molecula. 0 eletron e ejetado e absorvido por outro atomo, criando uma
cadeia de ionizacoes na substancia irradiada. Essa atividade excita grupos quimi
cos no DNA, causando a producao de radicais quimicos altamente reativos, os
quais podem alterar grupos quimicos e ate quebrar as- fitas de DNA, causando
mutacoes,
A morte celular resulta da formacao de uma cadeia de ionizacao numa por
c;ao significativa do DNA. Geralmente, a sensibilidade dos diferentes organismos
a radiacoes ionizantes varia com 0 volume de DNA. Em geral, formas multicelula
res sao mais sensiveis aradiacao ionizante do que organismos unicelulares,
6xido de etileno
6xido de etileno (EtO) e urn eter ciclico que mata as celulas, agindo como
agente alquilante. Asua acao consiste na substituicao de urn atomo de hidrogenio
(atraves de uma reacao de alquilacao) de grupos funcionais de proteinas, acidos
nucleicos e outras moleculas (carboxila livre, amino ou sulfidrila) pela molecula
de EtO aberta (CH
2CH20-)
como exemplificado na Figura 3.2. Essa reacao resulta
no bloqueio dos grupos ativos das moleculas. No caso das proteinas, ocorre a des
naturacao.
- CH
2
-CH
20H
H
2C
V
Oxido de et ileno Enzima inativada
Figura 3.2 - de alquilacao entre 0 oxide de etileno e uma enzima
..
Esteriliza.,ao por agentesflsicos 25
Glutaraldeido
o glutaraldeido age na superficie das celulas, onde ocorrem interacoes glu
taraldeido-protefnas, gerando diversos produtos. Essa interacao aumenta com a
elevacao do pH, mas os produtos formados sao estaveis ahidr6lise acida.
o glutaraldeido reage principalmente com os grupos amina livres das pro
teinas da camada de peptoglicana das bacterias, 0 que interfere no transporte de
aminoacidos de baixo peso molecular. Em varies microrganismos ocorre a aglu
tinacao celular, devido aformacao de ligacoes intercelulares.
3.3 - por agentes fisicos
Os principais agentes ffsicos esterilizantes sao: calor seco, calor timido, radia
<;ao ultravioleta, radiacao gama e sonicacao. Cada urn deles encontra aplicacao em
diferentes partes de urn processo de assepsia.
3.3.1 - Esterilizacao por calor umido
o agente de uso rnais frequente e 0 calor urnido, fornecido por vapor de agua
saturado. A facilidade de obtencao, de manuseio, sua eficacia e custo relativamente
baixo explicam 0 uso frequente. 0 vapor e obtido em caldeiras e distribuido por
dutos de aco galvanizado ou aco inoxidavel, isolados termicamente. Pelas altas
temperaturas e pressoes nas caldeiras, 0 vapor e considerado esteril. No entanto,
em alguns casos mais criticos, utiliza-se filtracao em cartuchos esterilizantes ime
diatamente antes da entrada do vapor no processo.
Tubulacoes e reatores (fermentadores), vazios ou carregados com meio de
cultura, sao usualmente esterilizados por calor umido.
Esterflizacao de reatores vazios
A esterilizacao de reatores vazios consiste em injetar vapor diretamente em
seu interior e promover inicialmente a expulsao de todo 0 ar presente. Ap6s a ex
pulsao do ar, 0 reator e fechado e injeta-se vapor ate que a temperatura e pressao
internas sejam adequadas, comumente 121C e 1 atm. A partir desse momento, e
por todo 0 tempo de esterilizacao, novas injecoes s6 sao necessarias para manter
constantes a pressao e temperatura. Terminada a esterilizacao, a entrada de vapor
e fechada e ar esterilizado deve ser injetado, para evitar que 0 resfriarriento e a
consequente condensacao do vaporpresente no interior do reator gere vacuo, 0
que poderia provocar danos ao equipamento ou promover a entrada de ar externo
contaminado, por eventuais pequenas fissuras em soldas, vazamentos em valvu
las, etc. Ap6s 0 resfriamento e estabilizacao da pressao interna, 0 meio de cultura
esterilizado externamente, por esterilizacao continua ou nao, pode ser carregado e
a utilizacao do tanque ser iniciada.
Esterilrzacao de reatores com meio de cultura
A esterilizacao de reatores como meio de cultura (esterilizacao descontinua)
e feita em tres etapas. Durante todo 0 processo de esterilizacao, uma agitacao mi
nima deve ser fornecida ao meio de cultura.
/
- ------ - - - - - - - - - -

rl
26 do equipamento
i/
:1
:1
Inicialmente, circula-se vapor pela serpentina ou camisa ate que a tempera
tura do meio de cultura seja maior que 96 a 97e. Durante essa etapa, a cabeca do
II
1
tanque deve receber vapor fluente para expulsao do ar de seu interior. Ao mesmo
1
I!
tempo, as valvulas, filtros e tubulacoes de entrada e saida do reator tambem sao
1 1
esterilizadas por vapor fluente.
. Na etapa seguinte, injeta-se vapor diretamente no meio de cultura ate que
:1
I este atinja lOOe. A partir desse momento, 0 reator e completamente fechado e a
f: i
injecao de vapor continua ate que a temperatura e pressao internas sejam adequa

,
!
das (por exemplo 121DC e 1 atm).

ri
Atingido esse patamar, a injecao direta de vapor pode ser cortada e 0 centro
f!
ri
le de temperatura e pressao mantidos atraves da serpentina ou camisa pelo tempo
necessario.
II
11
o resfriamento e feito pela circulacao de agua fria na serpentina ou camisa.
Quando a temperatura atingir a marca dos lOOC, deve-se injetar ar esterilizado
i no tanque para evitar formacao de vacuo pelacondensacao do vapor presente.
JI
rl
A injecao direta de vapor provoca urn aumento no volume de meio de cultu

q ra de cerca de 10 a 15%, em funcao da condensacao. Por essa razao, 0 meio de cul
" tura deve ser preparado concentrado, tendo em vista sua posterior diluicao pelo
condensado.
II
1;1
o tempo de esterilizacao e funcao das condicoes do pr6prio rea tor e do pro

cesso. Se urn rea tor e usado sempre com 0 mesmo microrganismo, e se ele estiver

em born estado (perfeitamente limpo, sem fissuras, sem vazamentos em valvulas
ou conex6es de sensores), 20 a 40 minutos a 121DC e 1 atm devem seer suficientes
para sua esterilizacao. Se for urn reator multiprop6sito, utilizado com bacterias ou
ii!
fungos formadores de esporos altamente resistentes ao calor, ele deve passar por
II
assepsia qufrnica antes da esterilizacao por vapor. Nesse caso, a manutencao a
II
121DC e 1 atm deve se estender por urn tempo que pode ser maior que 60 minutos,
,I
desde que nao prejudique 0 meio de cultura.
: ,I
! I!
Vma etapa critica e a de aquecimento do meio de cultura desde a temperatu
i I
! l!iI
ra ambiente ate atingir 96 a 97
DC
, quando 0 processo efeito por serpentinas ou ca
i I: :
i l'l
misa. Nesse caso, uma relacao adequada entre a area de serpentina ou camisa e 0
i I"i
: ii volume de meio de cultura favorece 0 rapido aquecimento. As Figuras 3.3 e 3.4
: f'
apresentam curvas de aquecimento de meio de cultura em reatores de volume uti!
!
I
200 I e 2.000 I respectivamente. 0 tanque de 200 I apresenta 6,5 m
2
de area de troca
di
terrnica por m" de meio de cultura. 0 tanque de 2.000 I apresenta 1,8 m
2
de area de
i tl
; mi
troca terrnica por m"de meio de cultura.
i
n1. Reatores com esterilizacao programavel 11
1
i I Equipamentos mais sofisticados, completamente automatizados, trazem in-
I corporada a funcao de esterilizacao em seu software de controle. Nesse caso, para
I iii proceder aoperacao de esterilizacao, basta urn coinando do operador num painel
i I:: ou em urn microcomputador de controle. Em geral, pode-se escolhero tempoe a
i \, temperatura de esterilizacao. sao disponiveis em quaiquer ca
!l pacidade, desde os de bancada ate os industriais.
]
.- - . -._-- _. ._-_..._- ------ --- -- ----- -- --------------.------------ ---- - - - - ---
-----
Esterilizac;ao por agentes fisicos ' 27
0 0
0 0
0 0
0 0
CURVA DE AQUECIMENTO
fermentador de 200 L
120
100
0
~ 80
~
::J
60
~
Q)
a.
E 40
Q)
I
20
0
0 5 ' 10 15 20 25 30
Tempo (min)
Figura 3.3 - Formato do tanquede 200Luteis(6,5 m
2
serpentina/rn de meio decultura),ecurvadeaquecimento.
Caso a auto-esterilizacao seja feita por injecao de vapor diretamente no meio
de cultura, deve-se considerar a di luicao de lOa 15% provocada pela condensacao
do vapor.
A inj ecao direta de vapor pode, em alguns casos, provocar a formacao de es
puma em grande quantidade no reator . Se 0 problema for critico, a esterilizacao
deve ser levada a cabo apenas atraves da camisa ou serpentina.'
, Esteriltzacao em autoclaves
A es terilizacao por calor iimido de reatores de pequeno porte (ate cerca de
30 L) e de vidrarias e outros materiai s, inclusive meio de cultura, e em geral feita
em autoclaves. A Figura 3.5 apresenta simplificadamente urn reator sendoesterili
zado em uma autoclave.
/
28 Esterilizacao do equipamento
o
o
o
o
o
o
o
o
CURVA DE AQUECIMENTO
fermentador de 2.000 L
140
120
E
100
~
.a 80
~
(l)
60 a.
E
(l)
40

20
0
0 30 60 90 120 150 180
Tempo (min)
Figura 3.4 - Formatodotanquede2.000 Luteis (1,8m
2
serpentina/m' demeiode cultura), ecurva deaquecimento
Existem autoclaves das mais diversas dimensoes, e em geral sao verticais
ou horizontais. Nas verticais (como na figura), a porta de acesso localiza-se na
parte superior. As horizontais podem ter uma ou duas portas de acesso. 0
aquecimento para geracao de vapor pode ser eletrico (mais comum) ou a gas. 0
vapor pode tambem ser gerado externamentenuma caldeira e em seguida inje
tado na autoclave. Algumas autoclaves de grande porte podem ter sistemas in
ternos para circulacao do vapor e operarem continuamente, em vez da
operacao tradicional por ciclos.
A operacao e simples. Se 0 vapor e gerado internamente, a primeira providen
cia e completar 0 nivel de agua ate a marca indicada pelo fabricante. Em seguida, 0
material ou equipamento a ser esterilizado e colocado na autoclave e a porta e fe
chada. o vapor gerado ocupa todo 0 e s p a ~ o interno e deve fluir para 0 exterior, por
uma valvula de descarga,expulsando assim todo 0 ar contido na autoclave e nbs
materiais e equipamentos presentes. Ap6s a expulsao do ar (10 a 20 minutos, em
geral) a valvula de descarga e fechada e a pressao e temperatura internas devem
Esteriliza o por agentes fisicos 29
subir ate a temperatura e pressac de esterilizacao (geralmente, 121C e 1 atm).
Atingida a condicao de esterilizacao, 0 sistema de aquecimento ou a entrada de
vapor devem ser controlados para manter estaveis a pressao e temperatura. A eta
pa de resfriamento inicia-se com 0 desligamento do aquecimento ou fechamento
da entrada de vapor. A autoclave so deve ser aberta apos a temperatura chegar
proxima da ambiente, ja que uma despressurizacao brusca pode provocar danos
aos sensores colocados no interior dos reatores, como sondas de pH e de oxigenio
dissolvido.
Valvula de
MANOMETRO
seguranc;:a
VAPOR
Autoclave
Fermentador
AQUECIMENTO
III AGUA
Figura 3.5 - Esterilizacao de reator em autoclave
Erlenmeyers com meio de cultura, pipetas graduadas, tubos de ensaio, etc., em
geral sao esterilizados por 15 a 30 minutos. Reatores necessitam uma esterilizacao por
mais tempo (40 minutos a 1 hora), ja que nao sao agitados durante a esterilizacao e 0
seu centro demora para atingir a temperatura adequada. A Figura 3.6 apresenta a
curva de aquecimento em autoclave de urn rea tor com volume util de 10 litros. a sen
sor de temperatura foi colocado proximo ao centro geometrico do reator. Pode-se no
tar que cerca de uma hora apos 0 termometro da autoclave indicar a temperatura de
121C, 0 centro do reator ainda nao haviaatingido esta temperatura.
A esterilizacao em autoclave nao altera significativamente 0 volume dos li
quidos presentes nos frascos ou reatores.
3.3.2 - Alguns detalhesde projeto de reatores esterilizaveis por
calor urnido
A Figura 3.7 apresenta alguns pontos a serem considerados quando se proje
ta urn reator a ser esterilizado por calor umido (vapor saturado).
A entrada de ar para 0 reator (1) deve conter urn filtro esterilizante adequado
(2). Toda a linha, incluindo 0 filtro, deve ser esterilizada por vapor saturado (V).
/
30 Esterilizacao do equipamerito
a reator deve ser dotado de uma valvula de e uma quebra-vacuo
(3), paraevitar pressurizacao ou despressurizacao (vacuo) excessivasque possam
danificar 0 equiparnento durante 0 processo de esterilizacao ou de fermentacao.
Curva de aquecimento em autoclave
o
o 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tempo (min)
Figura 3.6 - Curva de aquecimento em autoclave vertical de um reator com volume util de I0 litros. 0 ponto a indi
ca 0 momenta em que 0 terrnornetro da autoclave marcou I 21C. 0 ponto b indica 0 momenta em que atempera
turada autoclave passou a ser controlada em 121C.
120
U
e......
100
ro
L
::3
ro
80
L
a>
c.
E

60
40
20
l--'"

- I--
l---'

a
b


.",

V
Y
V

V
Figura 3.7 - Alguns detalhes a serem considerados no projeto de reatores esterilizaveis por calor umido,
por agentes fsicos 3I
A linha de exaustao de gases tarnbem deve conter urn filtro esterilizante
adequado (4), que evite tanto a contaminacao do reator por microrganismos do
ambiente como a contaminacao do ambiente por microrganismos e aerossois origi
nados no reator.
o sistema de agitacao do liquido deve preferencialmente ser colocado na
parte superior do reator. Dessa maneira, 0 selo que permitira a vedacao do oriffcio
por onde penetra 0 eixo (5) devera ser projetado para reter apenas gases. Quando
for mais conveniente a colocacao do eixo pelo fundo do reator, 0 sistema de se
lagem devera ser capaz de reter liquidos. Ern geral, selos para gases sao rna is
eficientes e de manutencao mais simples.
As linhas de inoculacao (6), amostragem (7), e esgotamento (9) devem tam
bern ser esterilizadas pela passagem de vapor saturado. A de amostragem deve
seresterilizada apes cada retirada de amostra.
Urn procedimento comum para esterilizacao descontinua do reator e 0 se
guinte: (a) 0 reator recebe 0 meio de cultura e aplica-se uma agitacao baixa; (b)
aquece-se 0 meio atraves da serpentina ou camisa (8, 10) ate cerca de 96 a 97C; (c)
simultaneamente ao item b, injeta-se vapor pelas linhas de entrada superior de ar
(11) e de inoculacao (6), deixando 0 vaporfluir pela linha de exaustao (4) e se pos
sivel pela valvula de seguranca (3); (d) inicia-se a aplicacao de vapor vivo ao tan
que pela linha de entrada inferior de ar (12) e, se necessario, pelas linhas de esgo
tamento do tanque (9) e de amostragem (7); (e) quando 0 meio de cultura atingir
100C, as valvulas de exaustao, de seguranc;a, de entrada superior de ar (12) e de
inoculacao (6) sao fechadas; (f) quando a temperatura e pressao internas atingirem
as indicadas para esterilizacao (ern geral, 121C e 1 atm), as valvulas de entrada
inferior (12), de esgotamento do tanque (9) e de amostragem (7) devem ser fecha
das; (g) manter a pressao e temperatura de esterilizacao pelo tempo necessario
atraves da aplicacao de calor pela serpentina ou camisa; (h) atingido 0 tempo ne
cessario, iniciar 0 resfriamento pela aplicacao de agua fria atraves da serpentina
ou camisa; (i) quando a temperatura do meio de cultura atingir 100C, iniciar a
pressurizacao do tanque corn ar esteril (1, 11),0 suficiente para evitar formacao de
vacuo no reator; (j) quando a temperatura atingir .cerca de 85C, abrir a valvula de
exaustaode gases (4); (k) continuar 0 resfriamento do tanque ate a temperatura
desejada.
A manutencao periodica do reator deve incluir a limpeza e eventual substi
tuicao de todas as valvulas que tenham contato direto corn 0 reator ou corn as li
nhas esterilizadas (ar, inoculo, amostragem, exaustao, descarga, etc.). Outros pon
tos sensiveis sao 0 sistema de selagem do eixo do agitador e as soldas e conex6es
do reator. Pequenos vazamentos ern valvulas, selos, conex6es e soldas podem ser
detectados, fechando-se todas as saidas do reator e pressurizando-o corn ar ate
cerca de 1 atm. Fecha-se 0 ar e verifica-se se a pressao e mantidapor periodos lon
gos (24 h). Caso haja perda de pressao, deve-se buscar e corrigir os vazamentos.
Vazamentos na serpentina ou camisa podem ser detectados, secando-se to
talmente 0 reator e circulando-se agua sob pressao no sistema de aquecimen
to/resfriamento por urn perfodo Iongo (24 h). Se houver vazamento, aparecera
agua no interior do reator.
. .. .... ... .._..__
/
32 Esteriliza9io do equipamento
3.3.3 - Esterilizacao porcalor seco
A esterilizacao por calor seco e empregada para vidrarias, ;metais e s6lidos
resistentes ao calor. Elevada a efeito em fornos ou estufas que atingem temperatu
ras superiores a IS0C.
Na ausencia de umidade, a transferencia de calor e rnais lenta e os microrga
nismos apresentam maior resistencia ainativacao. Dessa forma, os tempos de ex
posicao ao calor devem ser muito maiores (cerca de 3 a 4 horas), para garantir a
eficiencia da operacao de assepsia. '
3.3.4 - Esterilizacao por radiacao ultravioleta
Radiacao ultravioleta e utilizada para esterilizar materiais s6lidos, como vi
drarias, utensilios metalicos, embalagens, etc.
Os raios ultravioleta agem diretamente sobre 0 DNA e RNA, alterando a es
trutura dessas moleculas e provocando danos ao processo de manutencao e divi
sao celular. Em funcao do tempo de exposicao, esses danos normalmente levam os
microrganismos amorte.
Ultravioleta jamais deve ser usado na presenca de pessoas ou animais.
A Fonte de ultravioleta e normalmente uma lampada emissora dessa radia
~ a o A ernissao diminui com 0 tempo, exigindo urn controle sobre 0 tempo de vida
util dessas Iampadas.
A esterilizacao e feita simplesmente expondo os materiais aradiacao em am
biente fechado, pelo tempo adequado (varias horas). Como a capacidade de pene
tracao da radiacao ultravioleta e muito baixa, apenas a superffcie do material
exposto e 0 ar ao redor sao esterilizados.
3.3.5 - Esterilizacao por radiacao gama
Radiacaogama, em geral produzida por cobalto 60 ou cesio 137, tern poder
de penetracao extremamente alto. 0 bombardeio de microrganismos por gama
gera grande quantidade de alteracoes nas moleculas de DNA, danificando-as, em
geral irreversivelmente. Adicionalmente, iruimeras moleculas internas aos micror
ganismos.sao ionizadas (a agua, por exemplo), dando origem a especies t6xicas al
tamente reativas, como os per6xidos e varies radicais livres.' Essas moleculas
desestruturam oequilibrio bioquimico dos microrganismos, mesmo esporulados.
Os materiais expostos a radiacao gama nao guardam resquicios radiativos,
dai ser urn metoda seguro de esterilizacao.
a bombardeio com radiacao gama deve ser feito em camaras especiais, em
geral muito grandes. Uma vez posta em operacao, nao e mais possivel impedir a
emissao da radiacao, de forma que essas camaras operam continuamente.
A esterilizacao e feita .colocando-se 0 material a ser esterilizado em urn con
teiner, que por sua vez e colocado em uma esteira que circula pelo interior da ca
mara de irradiacao. 0 material pode entrar e sair da camara varias vezes, ate
atingir 0 nivel de irradiacao adequado.
- - - - - --- - ----- -- - ------------------- - --- - ---- ---- --"- - --- ------- --- - - -- _. ------ --- - -------- -------- -_ ._----_._- --- - - -. -- - - . ._-
Esleriliza9io e desinfec9io por agentes qornicos 33
Dada a complexidade do metoda, apenas materiais como vidrarias, metais, e
materiais s6lidos como pos, solo, alimentos, sementes, embalagens, etc. sao sub
metidos a esse processo de esterilizacao.
A unidade de medida da irradiacao no SI e 0 gray. Materiais pouco conta
minados sao submetidos a doses de 10 a 30 quilograys. Materiais mais
contaminados requerem doses maiores, como 50 a 75 quilograys. a microrganis
mo mais resistente a radiacao chama-se Deinococcus radiodurans e exige cerca de 60
quilograys para ser inativado. Esporos de Clostridium botulinum demandam 5 a 22
quilograys para serem inativados. a gray substituiu a unidade rad, muito utiliza
da. Na conversao, 1 gray corresponde a 100 rad.
3.4 - e deslnfeccao por agentes quimicos
3.4.1 - Germicidas qufmicos
A utilizacao do calor umido e, de longe, a tecnica rnais utilizada para pro
porcionar a esterilizacao e a desinfeccao de equipamentos dentro de uma indus
tria de ferrnentacao.
as agentes quimicos de esterilizacao e desinfeccao sao utilizados quando
equipamentos de operacoes unitarias ou componentes de uma instalacao industrial
nao admitem esterilizacao pelo vapor de agua saturado. Isso pode ocorrer em vir
tude da incompatibilidadedos materiais de construcao desses componentes com
temperaturas elevadas (por exemplo, filtros, bombas, centrifugas, secadores, val
vulas, linhas de transferencias de fluidos e equipamentos de medicao, etc.).
Nesses cas os, para atingir 0 grau de sanitizacao necessario a urn dado pro
cesso, faz-se uso de agentes sanitizantes liquidos denominados germicidas quimi
cos. Diferentemente da esterilizacao pelo calor, essas substancias agem a
temperatura ambiente, necessitando entretanto tempos maiores de contato para
produzir oefeito _desejado. AMm disso, sua capacidade sanitizante esta fortemente
relacionada a fatores ligados as propriedades fisicas do material a ser tratado (ma
terial plastico ou metalico, superficie lisa ou rugosa, porosidade do material, au
senoia ou de locais de dificil acesso) e as caracteristicas qufrnicas do
ambiente (pH, de materia organica contaminante, formacao de filmes e
dep6sitos no material, dureza da agua utilizada na diluicao do principio ativo,
de residues de sabao). Todos esses fatores podem afetar negativamenteo
processo de esterilizacao ou desinfeccao, e somente a pratica pode dar ensejo a urn
procedimento padronizado que conduza a urn nivel de sanitizacao adequado a
urn determinado processo industrial.
Em razao dos grandes problemas advindos das infeccoes em ambientes hos
pitalares, especialmente pelo fato do surgimento de linhagens bacterianas patoge
nicas resistentes, responsaveis por doencas como a tuberculose, meningite e
pneumonia e de virus como 0 da hepatite B e 0 HIV, promotor da SIDA/ AIDS
(Sindrome da Imunodeficiencia Adquirida), urn grande trabalho de pesquisa e de
regulamentacao vern sendo dedicado ao usa de germicidas quimicos no controle
dessas infeccoes. Como consequencia; 0 uso desses compostos tern se transforma
__ conveniente e efetivo de esterilizacao e
I
I
!
, I
';
L . . _
/
34 do equipamento
um grande ruimero de forrnulacoes comerciais surgiram no mercado. Ate 0 inicio
dos anos 90, havia nos Estados Unidos,registrados na EPA (Environmental Pro
tection Agency), uma das agencies americanas responsaveis pelo registro e legisla
sobre 0 uso desses produtos, cerca de 14.000 formulacoes comerciais com acao
germicida.
Baseado na experiencia pratica, e possivel estabelecer-se uma ordem de re
sistencia dos microrganismos aexposicao aos germicidas quimicos (Tabela 3.2).
Tabela 3.2 - Ordem descendente de resistencia agermicidas qufmicos e nfvel de atividade requerido
paraesterilizacao (adaptado de Favero; Bond7).
TIPO DE MICRORGANISMO
MICOBACTERIA
Mycobacterium tuberculosis
var. bovis
BACTERIA ESPORULANTE
Bacillus subtilis
Clostridium sporogenes
ViRUS PEQUENOS au NAo LIPiDICOS
poliovirus
rhinovirus
I
BACTERIA VEGETATIVA
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Salmonella choleraesuis
FUNGaS
Trichophyton spp.
Cryptococcus spp.
Candida spp.
ViRUS MEDIaS au LIPiDIcas
virus da Herpes simplex


. R
. !i ;.
Alto
Baixo
Baixo
NfvEL DE ATIVIDADE
REQUERIDO
Alto a intermediario
Alto a interrnediario
Intermediario a baixo

- . 1

Esterilizac;ao e desinfecc;ao por agentesqufmicos 35
Essa tabela mostra que as bacterias formadoras deesporos, exemplificadas
aqui por Bacillus subtilis e Clostridium sporogenes, sao as mais resistentes aos germi
cidas, enquanto que, ern ordem descendente de resistencia, os virus de tamanho
medic ou que possuem componentes lipidicos ern sua composicao tendem geral
mente a possuir a mais baixa resistencia aos germicidas.
Esporos bacterianos necessitam alto nivel deatividade germicida para se
rem destruidos. Essa condicao pode ser conseguida corn a utilizacao de solucoes
aquosas de glutaraldeido, per6xido de hidrogenio de 6 a 30% eprodutos que con
tern mistura a baixas concentracoes de acido peroxiacetico e per6xido de hidroge
nio (0,1% e 1,0%, respectivamente).
di6xido de cloro (Cl0
2
) pode ser usado a concentracoes variadas. Porem,
por ser forternente oxidante, seu usa e limitado, devido ao efeito altamente corro
sivo ern superficies de metal ou de plastico. uso de formaldeido ern solucoes
aquosas de 6 a 8% e efetivo, embora haja controversias devido ao seu possivel efei
to carcinogenico.
Germicidas de nivel intermediario nao necessariamente causam a destruicao
de esporos bacterianos, mas devem possuir a caracteristica de inativar Mycobacte
rium tuberculosis var. bovis, assim como fungos, virus lipidicos ou nao lipidicos e
bacterias vegetativas.
Exemplos desses germicidas sao solucoes hidroalcoolicas 70 a 90% de etanol
ou isopropanol, compostos clorados corn cerca de 500 a 5.000 ppm de cloro livre,
solucao aquosa de per6xido de hidrogenio 3a 6%, algumas preparacoes fen6licas
e os iodophors (preparacoes que conseguem carrear 1
2
aconcentracao de 40 a 50
ppm de iodo livre).
as germicidas quimicos de nivel baixo sao capazes de destruir formas vege
tativas de bacterias, a maioria dos fungos (mas nao todos), assim como virus que
contern lipidios ern sua composicao,
Esses germicidas nao conseguem inativar Mycobacterium tuberculosis var. bo
vis nem tampouco bacterias esporuladas. Exemplos desses desinfetantes sao as
formulacoes de compostos quaternaries de amonio a concentracao de 0,1 a 0,2%.
Como foi dito, a pratica de desinfeccao/ esterilizacao industrial utilizan
do-se germicidas quimicos depende de uma serie de fatores ambientais, que de
vern ser levados ern conta quando do estabelecimento do protocolo de sanitizacao
de urn determinado equipamento. De uma maneira geral, urn ciclo de desinfeccao
/ esterilizacao quimica de urn equipamento contem as seguintes etapas:
a) desmontagem do equipamento (se for 0 caso);
b) limpeza dos componentes, procedendo-se aremocao de todo tipo de resi
duos de meio de cultura, biomassa e produtos, fazendo uso de detergentes, se ne
cessario:
c) lavagem dos componentes corn agua corn baixo teor de dureza para remo
<;ao dos detergentes utilizados;
d) montagem do equipamento e introducao da solucao aquosa do germici ~
lo.......,
da, propiciando 0 tempo de exposicao preestabelecido para a acao germicida re
querida;
. e) drenagem da solucao germicida do sistema; 0___
~
Lor
I _ ~ ..
/
36 Esterilizao do equipamento
f) remocao dos resfduos do germicida atraves de circulacao cuidadosa de
.i : agua ou outro fluido esteril,
' I
A Tabela 3.3 descreve algumas utilizacoes tipicas de germicidas quimicos.
Existem disporuveis no comercio varias preparacoes com caracterfsticas semelhan
tes as .descritas nessa tabela. No Brasil, a regulamentacao e recomendacao do uso
de urn germicida particular erealizada por organismos como 0 INCQS (Institute
Nacional de Controle de Qualidade em Saude). A Tabela 3.3, pretende, dessa ma
neira, ser meramente didatica.
Tabela 3.3 - Utilizacaotfpicade germicidas qufmicos
(N.A.=nfvel de atividade, sol.aq.vsolucao aquosa)
GERMICIDA
QUfMICO
ATIVIDADE E
CARACTERfsTICAS
UTILlZAyA,O
T[PICA
Compostos quaternaries de
amonio sol. aq . ate 0,2%
Bacterias vegetativas, gram
negativas, podem ser resis
tentes, N.A. bai xo
Limpeza geral e manutencao
Compostos fenolicos, sol.
aq. ate 5%
Pode ser ati vo ate contra vi
rus nao liptdicos, N.A. baixo
a intermediario
Desinfeccao de areas de la
boratorio e producao
Sol. aq . etanol ou isopropa
nol a 70%
Bacterias vegetativas, fun
gos e amplo espectro de vi
rus, N.A. intermediario
Desinfeccao de materiais
por irnersao na solucao
Sol. aq. 0,5% cloro livre
Amplo espectro, pode inati
var bacterias esporuladas, li
mitacao de uso pela ativida
de corrosiva, N.A.
intermediario
Desinfeccao de equipamen
tos , areas de Iaboratorio e
producao
Sol. aq. Formaldefdo 4 a 8%
Amplo espectro, pode inati
var bacterias esporuladas,
potencial carcinogenico,
irritante, N.A. intermediario
a alto
Desinfeccao de equipamen
tos
Sol.aq. Formaldefdo 8% e
etanol ou isopropanol a 70%
Amplo espectro, acao contra
micobacterias e bacterias es
poruladas, potencial carci
nogenico, irritante, N.A. alto
Esterilizacao de equipamen
tos, dependendo do tempo
de exposicao
Sol. aq. glutaraldefdo 2% e
surfactante
Amplo espectro, acao contra
micobacterias e bacterias es
poruladas, iritante, N.A. alto
Esterilizacao de equipamen
tos, dependendo do tempo
de exposicao
Formulacoes contendo pero
xido de hidrogenio 6 a 10%
Amplo espectro, acao contra
micobacterias e bacterias es
poruladas, N.A. alto
Esterilizacao de equipamen
tos, dependendo do tempo
de exposicao
- - - - ~ - - ~ - _ .._.-.,...
----- ---- _._._-----._-------------
Esterilizao e desiofeccao por agentes quimicos 37
Assim, recomenda-se fortemente utilizar as formulacoes comerciais disponi
veis no mercado, segundo a orientacao do fabricante, de acordo com seu registro
nos orgaos governamentais competentes.
Desde que as operacoes preliminares de limpeza das partes a serem desinfeta
das ou esterilizadas tenham sido feitas cuidadosamente, 0 tempo de exposicao para
se atingir urn determinado nivel de destruicao microbiana em urn dado equipamento
vai depender fundamentalmente do germicida escolhido e das caracteristicas da po
pulacao microbiana remanescente, ou seja, tipo e ruimero de microrganismos presen
tes. Embora a temperatura seja urn fator relevante nos processos de destruicao
microbiana, nao estamos levando isto em conta, pois supoe-se que 0 procedimento de
desinfeccao/ esterilizacao seja realizado atemperatura ambiente.
o tempo necessario para seatingir urn determinado nivel de sanitizacao,
dessa forma, varia bastante. Uma simples desinfeccao, com a qual se pretenda des
truir a populacao ativa de bacterias vegetativas, a maioria dos fungos e os virus li
pidicos, fode ser conseguida utilizando-se etanol 70% em agua em cerca de 10
minutos. Uma populacao de esporos de bacterias aer6bias bastante elevada (10
8
esporos) pode ser destruida em 60 minutos com exposicao a uma solucao de pero
xido de hidrogenio a 10%.8Por outro lado, uma solucao de formaldeido 8% e iso
propanol 70% pode levar ate cerca de 18 h para a eliminacao de uma alta
populacao de esporos bacterianos.'
A escolha de urn germicida quimico particular vai se basear, dessa maneira,
no nivel de desinfeccao requerido pelo processo e em aspectos economicos.
3.4.2 - Agentes gasosos
Agentes gasosos nao e 0 metodo de escolha em industrias de fermentacao,
sendo rara, para nao dizer inexistente, sua utilizacao para esterilizacao e desinfec
<;ao de equipamentos. A assepsia de salas e laboratorios, porern, cornumente e rea
lizada com vapores de formaldeido. .
Os agentes de esterilizacao gasosos mais importantes sao os seguintes: oxide
de etileno, 6xido de propileno, formaldeido e betapropiolactona.
o primeiro e utilizado principalmente na esterilizacao dos mais diversos
itens hospitalares, artigos plasticos de laborat6rio e outros materiais. 0 processo
se da em camaras especiais semelhantes a autoclaves de esterilizacao por vapor. A
camara e carregada com os itens a serem esterilizados, onde a seguir e insuflada
uma mistura gasosa do agente ativo e urn gas inerte como C0
20u
freon (fluoroclo
rocarbono). Apos urn determinado tempo de exposicao, a mistura gasosa e drena
da da autoclave e esta e cuidadosamente limpa pela passagem de ar, para
eliminacao total de residuos do 6xido de etileno."
o oxide de propileno e utilizado na esterilizacao de alimentos."
Vapores de formaldeido e betapropiolactona sao utilizados principalmente
para desinfeccao de camaras, salas e ambientes onde assepsia e desejavel.
A resistencia de bacterias vegetativas e esporuladas, virus e fungos aos me
todos de esterilizacao por gases e bastante variavel, e depende do agente utiliza
do, sua concentracao, umidade relativa do ambiente e temperatura do processo.
Por exemplo, uma populacao de 10
6
esporos de Bacillus subtilis var. niger pode ser
38 Esterilizaodo equipamento
inativada -a 50% de umidade, 47,5C e 500 ppm de oxide de etileno, em cerca de 50
minutos. Outros microrganismos possuem resistencias menoresao oxide de etileno.
Detalhes a respeito da utilizacao de gases como agentes desinfetantes e este
rilizantes podem ser encontrados em literatura sobre 0 assunto.":"
Referencias bibliograficas
(1) BAILEY, J.E.; OLLIS,D.F. Biochem. Engineering Fundamentals. McGraw-Hill Book
Company, Nova York. 1986.965 p.
(2) SCRAGG, A.H. Bioreactors in Biotechnology. A Practical Approach. Ellis Horwo
od, Nova York. 1991.328 p.
(3) RICHARDS, J.W. Introduction to Industrial Sterilization. Academic Press, Londres.
1968.173 p.
(4) BLOCK, S.S. Disinfection, Sterilization, and Preservation. Lea and Febiger, 2nd
edition, 1991. 1162 p. -
(5) REDDISH, G.F. Antiseptics, Disinfectants, Fungicides, and Chemical and Physical
Sterilization. Lea and Febiger, 2nd edition, Filadelfia. 1957.953 p.
(6) QUESNEL, L.B. Sterilization and Sterility. In: Bullock, J.; Kristiansen, B. Basic Bio
technology. Academic Press, Londres. (1987).545 p.
(7) FAVERO, M.S.; BOND, W.W. Chemical Disinfection of Medical and Surgical Materi
als. In: Block,S.S. Disinfection, Sterilization, and Preservation. Lea and Fabiger, 2nd edition,
Filadelfia. 1991. Chapter 35, pp.617-641
(8) WARDLE, -M.D.; RENNINGER, G.M. Biocidal effect of hydrogen peroxide -in space
craft bacterial isolates. Appl. Microbiol.,30, 710-711, 1975.
(9) PARISI, A.P.; YOUNG, W.E. Sterilization with Ethylene Oxide and other Gases, In:
Block,S.S. Disinfection, Sterilization, and Preservation. Lea and Febiger, 2nd edition, Filadel
fia.1991. Chapter 33, p. 580-595.
- (10) ALGUIRE, D.E. Effective sterilization with 100% ethylene oxide. Bul. Par. Drug

. (11) CHAIGNEAU, M. Sterilisation et Desinfection par les Gaz. Maisonneuve Editeur,
Saint-Ruffine, 1977.329 p.
39
- - --- -_ ._ - _ ...-..
--r---r-==ESTERIllZ
A
--...
Walter Borzani
4.1 -
Ern muitos processos fermentativos, a presen<;a de microrganismos estra
nhos (e, as vezes, de virus) denominados, genericamente, "contaminantes", pode
levar a prejuizos consideraveis. ..
No caso da producao de penicilina, por exemplo, os contaminantes podem
produzir penicilinase, enzima que decomp6e a penicilina, resultando meios fer
mentados corn baixa ou mesmo nula concentracao do antibi6tico.
Outroexemplo que merece citacao e 0 da ferrnentacao acetona-butan6lica. A
bacteria responsavel por esse processo pode ser rapidamente destruida por virus
bacteri6fagos, paEalisando completamente a fermentacao,
Outras vezes os contaminantes afetam negativamente 0 processo, principal
mente pelo fato de consumirem nutrientes do meio, competindo assim corn os mi
crorganismos responsaveis pela fermentacao desejada. E 0 queacontece, por
exemplo, na producao de enzimas, vitaminas, antibioticos, etanol, etc.
Ha, porem, casos ern que a presen<;a de contaminantes pouco ou nada inter
fere no processo. Assim, por exemplo, na fermentacao latica de hortalicas, no tra
tamento biol6gico de residuos, na producao de vinagres, na lixiviacao bacteriana
de minerios, a boa marcha do processo e assegurada pelas pr6prias condicoes de
trabalho, sendo dispensavel eliminar eventuais contaminantes.
Entre os dois casos extremos, isto e, aqueles processos ern que a presence de
contaminantes compromete seriamente 0 resultado, e aqueles ern que os contami
nantes praticamente nao interferem no born andamento da fermentacao, ha urn
grande ruimero de situacoes intermediarias.
Ern resumo, 0 grau de eliminacao de contaminantes corn 0 objetivo de obter
bons resultados depende de cada caso. Informacoes pormenorizadas a respeito
desse assunto serao fornecidas, quando necessario, no Volume 3 desta Colecao, ao
se estudar varies processos fermentativos industriais.
--...
40 de meiosde fermentacaoper aquecimento com vapor
Nao podemos deixar de lembrar que, as vezes, a operacao de eliminacao to
tal de contaminantes pode inviabilizar economicamente 0 processo, como e0 caso
da fermentacao para producao de etanol a partir de caldo de cana-de-acucar.
No presente capitulo examinaremos apenas os processos de destruicao de
contaminantes por aquecimento corn vapor, tambem chamados "esterilizacao por
calor umido".
4.2 - sumarla dos processos de
por calor umldo
Consideraremos aqui apenas os dois processos rnais importantes de esterili
zacao de meios ern escala industrial, utilizando-se vapor como fluido de aqueci
mento: 0 processo descontinuo (tarnbem chamado processo de batelada) e 0
processo continuo.
No processo descontinuo, 0 meio e quase sempre colocado no fermenta
dor e, a seguir, aquecido corn vapor. Nessas condicoes, esterilizam-se simulta
neamente 0 meio e 0 fermentador. a aquecimento do sistema pode ser
efetuado, quer borbulhando-se diretamente vapor no meio (e 0 chamado aque
cimento corn "vapor direto"), quer passando-se vapor por uma serpentina mer
gulhada no meio ou por uma camisa que envolve 0 fermentador (e 0
aquecimento corn "vapor indireto") . Ern qualquer dos casos, 0 meio e agitado
mecanicamente, a fim de assegurar, tanto quanta possivel, a mesma temperatu
ra ern todos os pontos do sistema.
I
a aquecimento corn vapor direto acarreta, obviamente, diluicao do meio (da
ordem de 10 a15%), como consequencia da condensacao do vapor injetado.
Na esterilizacao descontinua distinguem-se nitidamente tres fases (ver Figs.
4.1,4.9 e 4.10):
1:
j;
a) aquecimento, que eleva a temperatura inicial do meio (sempre proxi
t
ma da temperatura de preparo do meio) ate a temperatura de esterili
I
zacao (geralmente da ordem de 120C);
!
I
,
b) esierilizaciio, na qual a temperatura e mantida aproximadamente
constante durante urn intervalo de tempo adequado, chamado tempo
de eeterilizaciio; .
c) resfriam ento, quando, corn auxilio de agua fria passando pela serpen
tina ou pela camisa, a temperatura e reduzida ate se atingir a tempera
tura de fermentacao.
A rigor, a destruicao terrnica dos microrganismos nao se da apenas na fase
chamada "esterilizacao". No aquecimento, e tambem durante 0 resfriamento, en
quanta a temperatura for superior a denominada "temperatura minima letal" (da
ordem de 80 a 100C), tarnbem ha destruicao de microrganismos (ver Fig. 4.1).
Voltaremos a examinar esse assunto mais adiante.
- - _ _- -_ _ .---_ _
Descricao sumaria dos processos de esterilizacio por calorurnido 4 I
____________
Tj
e
I..
- - - - - - - - - - - - - - - - - ~
II
III
Algumas horas
Tempo
Figura 4.1 - Representacao esquernatica davariacao detemperaturado meio durantesuaesterilizacao por proces
sodescontfnuo. I: Aquecimento. II: Esterilizao. III: Resfriamento. T
e
: temperatura de esterilizacao, T
i
: temperatura
. inicial. T f: temperatura final do meio esterilizado = temperatura de ferrnentacao, Tm: temperatura minima leta.1. 8:
tempo de esterilizacao,
Se, por urn lado, a' esterilizacao descontinua apresenta a vantagem de esteri
lizar simultaneamente 0 meio e 0 fermentador, reduzindo assim os perigos de con
taminacao nas operacoes de transferencia do meio para adorna, ela apresenta, por
outro lado, algumas serias desvantagens, a saber:
a) manutencao do 1?eio em temperaturas relativamente altas (acima de
100C), por periodos bastantes longos (da ordem de algumas horas), favorecendo
odesenvolvimento de reacoes quimicas ~ o meio com possiveis alteracoes indese
javeis em sua composicao (decomposicao de nutrientes, por exemplo);
b) elevados consumos de vapor (no aquecimento) e de.agua (no resfriamen
to), conseqiientes da eficiencia relativamente baixa do sistema de troca de calor;
c) problemas de corrosao ocasionados pelo contato prolongado do fermenta
dor com 0 meio aquecido;
d) tempo "nao produtivo" relativamente elevado, uma vez que.o fermenta
dor e utilizado apenas como urn tanque de esterilizacao durante 0 processo de
destruicao dos contaminantes.
Passernos agora ao exame da esterilizacao por processo continuo, represen
tado esquematicamente na Figura 4.2.: 0 meio recentemente preparado e enviado,
pela bomba B, ao trocador de calor TCI (de tubos, ou de placas), ondeatua como
fluido de resfriamento do meio ja esterilizado e ainda quente; desse trocador de
calor, 0 meio, agora preaquecido, mistura-se com vapor enviado ao injetor I onde
a temperatura sobe quase instantaneamente, ate alcancar a temperatura de esteri
Iizacao: a essa temperatura, praticamente constante, 0 meio percorre 0 tuba de re
: , j' ' -,
42 Esterilizaylo de meiosde fennentaylo por aquecimento comvapor
tencao ou de espera TE (quase sempre termicamente isolado), dimensionado de
modo a que 0 tempo de residencia do meio no tuba seja igual ao tempo de esterili
zacao: 0 meio ja esterilizado, mas ainda a uma temperatura muito alta, passa pela
valvula de reducao de pressao V e vai, em seguida, ao trocador de calor TCI ja ci
tado; deste ultimo, 0 meio esterilizado e encaminhado a urn segundo trocador de
calor (TC2), onde sua temperatura e reduzida ate alcancar 0 valor desejado; 0 flui
do de resfriamento no trocador TC2 e agua fria. Tratando-se, pelo que foi descrito,
de aquecimento com vapor direto, havera diluicao do meio, da ordem de 10 a 15%.
o mosto esterilizado, e ja na temperatura de ferrnentacao, e entao enviado
ao fermentador.
Vapor
p
TE
- - - ------ - ---- -- - ---------- -- - ---- ,
i
------
I
I
.
I
I
.
,
,
,
,
,
I
,
,
- -- --- - - - - - ----- - -- - - -- - - - - - -- -- ----- - - .
,
,
,
,
,
,
,
,

Fermentador

. p
TC1 TC2

L- .__------+--- --------------
Agua
Meio
B
Figura 4.2 - Represerrtacao esquematicade umesterilizador continuo. B:.bomba. TCI e TC2: trocadores de calor.
I: injetor de vapor. T: terrnometro. P: rnanornetro. TE: tuba de ret encao ou de espera. V: valvula de reducao de pres
sao.
A Figura 4.3 mostra, esquematicamente, a variacao da temperatura do meio
durante a esterilizacao continua. Nesse caso, a de struicaode microrganismos du
rante 0 aquecimento e durante 0 resfriamento pode ser desprezada.
--.-.--.- -- . - - ...._- - .--_._- ' __-. --.._ __.._-- ........- _
Descricao sumaria dos processos de esterilizacao por calorurnido 43
Alguns minutos
Tempo
Figura 4.3 - Representacao esquernaticadavariacao de temperaturado meiodurante suaesterilizacao por proces
so continuo. Ti : temperatura inicial. Tf : temperatura final do meio esterilizado = temperatura de fermentacao, Te:
temperatura de esterilizacao, T
m
: temperatura minima letal. 8: tempo de esteril izaci o.
Na esterilizacao continua, 0 aquecimento do meio ate a temperatura de este
rilizacao tambern pode ser efetuado com vapor indireto, substituindo-se 0 injetor
de vapor I (Figura 4.2) por urn trocador de calor. Neste caso, nao havera diluicao
do meio.
A Figura 4.4 representa, de maneira esquernatica, urn tuba de espera.
Urn tuba de espera como 0 representado na Figura 4.4, desde que adequada
mente projetado (0 ruimero de ramos em U deve ser sempre maior que 0 necessa
rio, para assegurar a esterilizacao do meio), permite,por urn lado, a execucao de
eventuais reparos sem interromper 0 processo e, por outro, alterar, dentro de cer
tos limites, 0 tempo de perrnanencia do meio na t e ~ p e r a t u r a de esterilizacao sem
variar a vazao.
Seguem alguns valores numericos relativos as condicoes de operacao dos es
terilizadores continuos:
a) vapor de aquecimento: vapor saturado com pressao de 6,8 a 8,5 atm;
b) bomba de recalque do mosto nao esterilizado: podem ser utilizadas born
bas centrifugas, rotativas ou de pistao:
c) diametro do tuba de espera: 4 a 12 polegadas (10 a 30 em, aproximada
mente);
d) tempo de enchimento do fermentador: nao superior a 8 h;
e) velocidade do meio no tuba de espera: 3 a 60 cm/s, sendo rnais utilizado 0
intervale de 6 a 12 cm/ s;
f) ruirnero de Reynolds no tuba de espera: 36.000 a 80.000;
g) temperatura de esterilizacao: 130 a 165C.
44 ' Esterilizac;ao de meiosde fermentacao por aquecimento com vapor

..,.----
..,.-- --
-----.
-----. C
/

Figura 4.4 - Representacaoesquernaticade um tuba de espera. A: meio atemperaturade esterilizacao. B: tubas
verticais. C: tubasem U dispostos em pianoshorizontais. D: meio esterilizado. Assetasindicam0 percurso do meio
no tuba de.esperacom osr egistros I , 2 e 3 fechados. .
Para se colocar em funcionamento urn aparelho de esterilizacao continua, pro
cede-se do seguinte modo: em primeiro lugar injeta-se em todo 0 sistema, incluindo 0
fermentador, vapor a 1 atm (aproximadamente 121C) durante 2 horas; a seguir, inje
ta-se ar esterilizado no fermentador de modo a nele se ter uma sobrepressao de 0,3
aim; regulam-se entao as condicoes de trabalho utilizando-se agua em vez do mosto;
quando as condicoes estiverem ajustadas, comeca-se a bombear 0 meio a ser esterili
zado; uma vez eliminada toda a agua existente no aparelho, abre-se 0 registro para 0
fermentador, que eentao carregado com meio esterilizado.
o processo continuo de esterilizacao apresenta, em relacao ao descontinuo,
algumas vantagens, a saber:
a) por se trabalhar a temperaturas mais elevadas, e tambem por serem muito
rapidas as operacoes de aquecimento e resfriamento do mosto, 0 tempo de perma
nencia do meio em alta temperatura erelativamente pequeno (da ordem de 5 a 15
min), 0 que acarreta menor destruicao de nutrientes (como veremos mais adiante);
como consequencia deste fato, a pratica tern mostrado, em varioscasos, que a fer
mentacao de urn meio esterilizado por processo continuo apresenta rendimento
substancialmente maior do que 0 obtido na ferrnentacao do meio esterilizado por
processo descontinuo (5 a 6 vezes maior na producao de riboflavina, e cerca de 10
vezes maior na producao de vitamina B12, por exemplo);
b) pelo fato de ser de dimens6es relativamente pequenas, 0 tuba de espera
pode ser construido com ligas especiais, evitando a contaminacao metalica (mui
tas vezes prejudicial a fermentacao) do mosto que poderia resultar do ataque da
parede do tuba pelo meio;
L-.. . .__ ._. . _ _.__ __--.__ ...__ , .__... .__... .. __.. ... _
1
tadores da instalacao industrial.
I
I
4.3 - Cinetica da termica de microrganismos
I
A velocidade de destruicao pelo "calor umido" de microrganismos presen I
tes em urn dado meio depende de varies fatores, a saber:
,I
il
a) do microrganismo (genero, especie, linhagem; idade da cultura, existencia
ou nao de esporos):
I
b) do meio (composicao, pH, presen<;a de s6lidos em suspensao):
c) da temperatura.
I
Imaginemos urn experimento em que urn determinado microrganismo, em
suspensao em urn dado meio, emantido a uma temperatura constante e superior a
temperatura minima letal. Se durante 0 ensaio determinarmos 0 ruirnero de mi I
crorganismos vivos existentes no sistema, como a temperatura e superior a mini I
i
I ma letal esseruimero de microrganismos vivos sera uma funcao descrescente do
!
tempo. A experiencia mostra que, com boa aproximacao, os resultados podem ser
representados como indica ,a Figura 4.5,
I
.--- In No
I
I
"!
,I
i
' I
: 1
ii
!I
t l
II
II
II
;1
Figura 4.5 - Represent acao esquernat icada variacao do nurnero de mi crorganismos vivos (N) ap6s um tempo t de Ii
manutencao do mei o a umatemperatura letal constante T No = nurnero de mi crorganismosvivos no instante t = O. I
..
Cineticada destruicao terrnicade microrganismos 4S
c) quando 0 meio apresenta densidade ou viscosidade relativamente alta,
como no caso de mostos de cereais, 0 processo continuo dispensa os motores de
potencia elevada que seriam necessaries para 0 acionamento dos agitadores no
processo descontinuo de esterilizacao:
d) economia de vapor, e de agua de resfriamento, em relacao ao processo
descontinuo, desde que os trocadores de calor e 0 isolamento termico da tubula
<;ao sejam adequadamente dimensionados:
e) os esterilizadores continuos podem ser tambem utilizados nos processos
de cozimento e sacarificacao de materias-primas amilaceas.
Importa, contudo, nao esquecer que as viabilidades tecnica e economica do
processo continuo dependem das dimens6es e do regime de trabalho dos fermen
z
c
i
46 Est erilizagio de meiosde fermentagi o por aquecimento comvapor
Isso nos mostra que, do ponto de vista cinetico, a destruicao do microrganis
mo se comporta como se fosse uma reacao de primeira ordem, isto e:
dN (4.1)
-=-kN
dt
sendo N 0 ruimero de microrganismos vivos existentes no meio ap6s urn tempo t
de aquecimento do sistema a uma dada temperatura constante. A constante k ede
nominada constante de velocidade de destruicao termica do microrganismo.
o valor de k depende dos fatores citados no inicio deste item. Para urn dado
I'
microrganismo ern urn dado meio, k dependera apenas da temperatura.
Sendo No0 mimero de microrganismos vivos no instante t = 0, a eq. (4.1) nos
da:
InN=lnN
o
<k>! (4.2)
equacao esta que nos permite, a partir de valores experimentais resultantes de me
didas de N para diferentes valores de t, calcular a constante k do microrganismo
ern estudo, no meio considerado, na temperatura ensaiada.
A titulo de exemplo, consideremos os valores da Tabela 4.1, obtidos de expe
rimentos realizados corn esporos de Bacillus stearothermophilus, suspensos ern solu
<;ao tampao de pH = 7,0, atemperatura de 105C. "
Tabela 4.1 - Destf}Jic;ao termicade esporos de Bacillus steamrhermophilus a Iosee.
t (minutos) N
25
8,5' 10
4
50
3,5' 10
4
100
6,0 '10
3
200
2,0 10
2
A partir dos valores da Tabela 4.1, por regressao linear obtemos (ver Fig.
4.6), no intervalo de tempo 25 min a 250 min:
In N = 12,1626 - 0,0341 t
(r = -0,9998)
sendo r 0 coeficiente de correlacao. Nesse caso, 0 valor de k e0,0341 min" .
Se 0 experime nto tivesse sido realizado nao a 105C, mas a 121C, valores de
k pr6ximos de 3 min-1 poderiam ser obtidos, dependendo da variedade do Bacillus
. - . ' ~ - - - - - - ' - - - - ' - - - - ' - - - - - - - - - - - - - ' - - - - - - . _ ._-------_.__._._ - - - - _ ..-- --- -- - - .......---- ---_..__...__..
_______
Gneticada destruio termicade microrganismos 47
stearothermophilus utilizada (ver Fig. 4.8). A influencia da temperatura no valor de
k sera considerada mais adiante.
12
8
z
..5
4
o
o 100 200 300
t (min)
Figura 4.6 - Representacaogratica dos resultados da Tabela4.1.
Mostra a experiencia que os esporos sao bastante mais resistentes adestrui
<;ao termica do que as celulas vegetativas.
Alem disso, observa-se que nao ha, nesse caso, obediencia aeq. 4.2 no inter
valo de tempo inicial de exposicao da suspensao de esporos atemperatura consi
derada, como indica a Figura 4.7. Nao cabe, neste livro, 0 exame desse problema.
Considerando-se, porem, que a destruicao terrnica de esporos e, na pratica, sem
pre realizada emtemperaturas elevadas (pelo menos 120C), e considerando-se
que, nessas temperaturas, 0 desvio da curva experimental em relacao aeq. 4.2. e
geralmerite pequeno, pode-se, para fins de calculos de interesse industrial, consi
derar aplicavel a expressao 4.2.
No estudo da destruicao terrnica de microrganismos, costuma-se definir urn
outro parametro: 0 tempo de reducao decimal, indicado por D. E0 tempo necessa
rio para reduzir 0 ruimero de microrganismos a 1/10 do valor inicial (em outras
palavras, para destruir 90% dos microrganismos vivos existentes). Se na equacao
4.2 fizermos N =0,1 No, teremos, de acordo com a definicao de tempo de reducao
decimal, t =D. Logo:
In (0,1. No) = In No - k- D
e, portanto:
D= 2,303
(4.3)
k
,I
__ _.L ~ _
48 de meiosde fermentacaoper aquecimento comvapor
z
c
Figura 4.7 - Representacao esquernatica de curvas de destrukao terrnica de esporos a diferentes temperaturas
(Tl' T
z
e T
3
)
No caso do exemplo indicado na Tabela 4.1, teremos:
D=67,5min
isto e, atemperatura de 105C, 90% dos microrganismos presentes no meio consi
derado serao destruidos em 67,S min.
A eq. 4.3 mostra, ainda, que os fatores que afetam 0 valor de k afetam tam
bemD.
Uma vez fixados 0 microrganismo e 0 meio, vejamos de que maneira a tem
peratura afeta 0 valor de k. Duas equacoes foram propostas com 0 objetivo de cor
relacionar k e a temperatura, a saber:
a) Equacao de Arrhenius
k=Aexp(-a / RT) (4.4)
onde A e uma constante ernpfrica, Rea constante universal dos gases perfeitos, T
e a temperatura absoluta e a e a denominada energia aparente de ativacao de des
truicao termica do microrganismo (ou simplesmente energia de ativacao de des
truicao do microrganismo).
b) Equacao de Bigelow
k =A' exp ([3 . T') (4.5)
onde A'e [3 sao constantes empiricas e T' e a temperatura medida em C ou em "F.
....-_-..L. ..__.. _
--- - -- - - - ---- --.---- ...... - -. __,. . 0 _
Cinetica da destruicao termicade microrganismos 49
As eqs. 4.4 e 4.5 conduzem, respectivamente, a:
a 1
lnk=lnA--- (4.6)
R T
lnk=lnA'+pT' (4.7)
Conhecendo-se os valores de k para diferentes temperaturas, as eqs. (4.6) e
(4.7) permitem calcular, por regressao linear, os valores das constantes nelas indi
cadas. Em particular, a equacao 4.6 nos dara 0 valor da energia de ativacao a .
A Figura 4.8 mostra a influencia da temperatura no valor da constante de
velocidade de destruicao termica de esporos de Bacillus stearothermophilus. Obser
ve-se a obediencia aeq. 4.4. Neste exemplo, os valores experimentais representa
dos na Figura 4.8 conduzem a urn valor de a igual a 68,7 kcal/mol. Para muitos
microrganismos encontram-se valores de a entre 65 e 85 kcal/mol.
3

-
c 0,5
~
~

0,1
0,05
255 260 265
105/T (K-
1
) .
Figura 4.8 - Influenciadatemperatura (T)naconstante develocidadede destruicaotermica (k)de esporosde Bacil
lus stearothermophilus.
Se aplicarmos as. equacoes de Arrhenius e de Bigelow a urn mesmo micror
ganismo, no mesmo meio e amesma temperatura, teremos:
. Aexp(-a / RT) =A' exp(p T')
Logo:
, 1 A a 1
T =-In---- (4.8)
p A' pR T
L.__._._
:. .
. . ..
50 Esterilizac;ao de meiosde fermentic;ao par aquecimento com vapor
Lembrando que A, A', (J." e R sao constantes, a eq. 4.8 nos diz que T' varia
linearmente com liT, 0 que e urn absurdo, uma vez que T' (expressa em "C) e
igual a T-273. Acontece, porem, que a equacao 4.8 permite, com boa aproximacao,
calcular T' em funcao de T, desde que nao se considerem intervalos de temperatu
I
ra muito amplos. Assim, por exemplo, no intervalo de 100 a 160C, a seguinte
!
equacao pode ser obtida por regressao linear:
T' = 532,9 -1,620(10
5
IT)
(4.9)
(r = -0,9992)
onde T' ea temperatura em C, Tea temperatura absoluta ere 0 coeficiente de
correlacao.
Se considerarmos apenas 0 intervale de 120 a 160C, que do ponto de vista
de aplicacoes praticas e0 mais importante, teremos:
T' = 552,4 -1,701 (10
5
I T)
(4.10)
(r = - 0,9995)
A Tabela 4.2 mostra, para varios valores de T, 'os valores de T' calculados
por T-273 e pelas eqs. (4.9) e (4.10).
Tabela 4.2 - das equacoes 4.9 e 4.1 O.
T (K)
373
383
393
T-273
100
110
120
T ' (0C)
Eq.4.9
98,6
109,9
120,7
Eq.4.10
-
-
119,6
;;.;

."
)
..
,1:
,
:i'

' .
/.
403 130 130,9 130,3

413
423
140
150
140,6
149,9
140,5
150,3
.}t

9
433
"
"
..
-
160
..
..
158,8
lW'..a;lJl ..* . '.',:;.;iit:"
159,6
'.'''''''
quanto pela 4.5.
Explica-se, portanto, levando-se em conta os erros experimentais que afetam
os valores de k (principalmente os inerentes as medidas dos ruimeros de celulas
vivas), a possibilidade de .correlacionar k com a temperatura, tanto pela eq. 4.4
_ __.-:. - - -- - --- _.- "-"-" ' " ..- . ._.,- -- _..... " -_..__._, .._. ._-_ .- ---:-:----- "._'- -.-- _. .. ....." ,-.- .,---..
Destruicao de nutrientes do meiocomo consequenda da 5I
4.4 - de nutrientes do meio como consequencia
da
o aquecimento de urn meio com 0 objetivo de destruir microrganismos nele
existentes acarreta, simultaneamente, alteracoes em sua composicao, Reacoes in
desejaveis (como por exemplo, decomposicao de vitaminas e reacoes entre glicose
e aminoacidos), cujas velocidades aumentam com a temperatura, podem prejudi
car a posterior atividade dos microrganismos da fermentacao, conduzindo a ren
dimentos ou produtividades menores do que os esperados.
A temperatura escolhida para a esterilizacao do meio desempenha, nesse
particular, papel relevante. A experiencia mostra que, quanta mais elevada for a
temperatura escolhida para se conseguir a destruicao de uma dada quantidade de
microrganismos do meio, menor sera a destruicao de nutrientes existentes nesse
meio e, conseqiientemente, melhores serao os resultados obtidos na fermentacao
posterior. Isso euma consequencia do fato de ser a energia de ativacao da destrui
terrnica dos microrganismos (65 a 85 kcal/mol) maior que a da destruicao ter
mica de nutrientes. A Tabela 4.3 mostra valores da energia de ativacao de
destruicao termica de alguns nutrientes.
Tabela 4.3 - Energia de de destruicao terrnicade alguns nutrientes.
Energiade ativacao
'.
Substancia
.
(kcal/m ol)
..
Vitamina C 23,1
r

Acido f61ico 16,8


Vitamina B12 23,1
,
-;;::
. ..
Vitamina A 14,6


,-,
Vitamina Bl 26,0
..
. ,
- " ' .
-
.. .

-
...
'-':''''' - ,
__ .,
. 'r. ...... ...-
Por sua impor tancia pratica, tanto na esterilizacao de meios de fermentacao
como na esterilizacao de alimentos, essa afirmativa deve ser demonstrada.
Consideremos urn dado volume de meio contendo No microrganismos vi
vos, mimero esse que deve ser reduzido a N, < No. Seja So a concentracao de urn
nutriente termolabil no meio, antes do tratamento termico, Suponhamos que esse
tratamento terrnico seja realizado a duas temperaturas constantes T
1
e T
2
, com T
2
>
T
1
Sejam:
t, = tempo para reduzir.o ruimero de microrganismos vivos de Noa N; quan
do a temperatura eT
1
; .
t
2
=tempo para reduzir 0 ruimero de microrganismos vivos de Noa N; quan
do a temperatura eT
2
;
k
1
= constante de velocidade de destruicao dos microrganismos atemperatu
ra T
1
;
52 de meiosde fermentacao por aquedmento com vapor
k
2
= constante de velocidade de destruicao dos microrganismos atemperatu
ra T
2
;
0.= energia de ativacao de destruicao dos microrganismos;
51 =concentracao final do nutriente ap6s 0 tratamento do meio atemperatu
ra T
I
;
52 = concentracao final do nutriente ap6s 0 tratamento do meio atemperatu
ra T
2
;
k
l
' =constante de velocidade de destruicao .do nutriente atemperatura T
I
;
kz' =constante de velocidade de destruicao do nutriente atemperatura T
2
;
a' = energia de ativacao de destruicao do nutriente.
A eq. 4.2 nos permite calcular t
l
e t
2
:
1 No
tz=- ln
kz N t
Logo:
(4.11)
Mas, pela eq. 4.4, temos:
(4.12)
k
z
=Aexp(-a / RT
z
) (4.13)
Substituindo-se, na eq. 4.11, os valores de k, e k
2
dados pelas eq. 4.12 e 4.13,
teremos:
(4.14)
Vejamos, agora, 0 que aconteceu com a concentracao do nutriente. Admitin
do, apenas para simplificar a dernonstracao, que a destruicao termica do nutrien
te seja de primeira ordem, teremos:
IlIIIA:-.JI _
Consideracoesgerais a respeito do cakulodo tempo de esterilizacao 53
1 50
t
2
=-In
ki 52
(4.15)
Pela equacao de Arrhenius:
ki - T1 ) I (a' T2
- = exp -' --=----=
k
1
R T
1
T
2
.
Logo, a eq. 4.15 nos da:
!L =ln (50 15
1)
T
2
-T
1
') (4.16)
t
2
(50 15
2)
R T
1
T
2
As expressoes 4.14 e 4.16 permitem, entao, escrever: -,
a T2-T1) In(50151) (at T2 -T1)
exp -' = .exp - ' ---=----=
(
R T
1
T
2
(50 15
2)
R T
1
T
2
.t '
que a >a', teremos:


Ficando assim demonstrado que a concentracao final do nutriente no trata
mento t ermico do meio, atemperatura T
2
, emaior do que a concentracao final do
nutriente no tratamento termico do meio atemperatura T
1
< T
2
, isto e, a destrui
<;ao do nutriente e menor quando 0 meio e termicamente tratado a temperatura
. mais alta.
4.5 Conslderacees gerais a respeito do calculo do tempo
de
Ja vimos que a eq. 4.2 nos da:
1 No (4.17)
t=_ln-
k N
,
j
:;
' L
I
~ ~ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~ _ . -
54 Esterilizacao de meiosde fermentacao par aquecimento comvapor
expressao esta que nos permite, conhecido 0 valor de k, calcular 0 temponecessa
rio para reduzir 0 ruimero de microrganismos vivos de No ate N.
A aplicacao dessa equacao a calculos de tempos de esterilizacao nao e tao
simples como pode parecer aprimeira vista.
a primeiro problema que se apresenta, decorre do fato que os meios de fer
mentacao a esterilizar nao possuem uma unica especie de microrganismo a ser
destruida. Nos meios utilizados na pratica encontramos microrganismos vivos
pertencentes a diferentes generos e especies, alguns esporulados e outros nao, que
devem ser eliminados para assegurar a inexistencia de contaminantes na fermen
tacao posterior. Lembrando que 0 valor de k depende do microrganismo, a aplica
~ a o da eq. 4.17 torna-se praticamente impossivel. Contorna-se esse problema esco
lhendo-se urn microrganismo de referencia conhecido, altamente resistente ao ca
lor, e admitindo-se que todos os microrganismos existentes no meio a ser esterili
zado apresentem uma resistencia a destruicao termica igual a do microrganismo
de referencia, Ebastante freqiiente a escolha do Bacillus stearothermophilus esporu
lado como microrganismo de referencia,
a segundo problema que surge ao tentarmos aplicar a eq. 4.17 a casos reais
reside no fato de a constante de velocidade k depender, tambem, do meio e da
temperatura. Uma .vez escolhido 0 microrganismo de referencia, e preciso, portan
to, conhecer os valores de k desse microrganismo em suspensao no meio a ser este
rilizado e a diversas temperaturas, 0 que pode, com frequencia, implicar na reali
zacao de experimentos preliminares de determinacao de k. Como primeira aproxi
macae, quando nao se conhecem valores de k, pode-se admitir k 1 min" (a 121C)
e a ~ 75 kcal/ mol.
a terceiro problema a ser considerado econseqiiente do fato de, nos meios a
esterilizar, as celulas microbianas a serem destruidas poderem se encontrar na for
ma de aglomerados, ou ainda protegidas por particulas solidas em suspensao no
meio. Isso acarreta urn verdadeiro aumento da resistencia dos microrganismos a
destruicao termica, aumento esse de quantificacao muito dificil.
Finalmente, outro problema na aplicacao da eq. 4.17 ao calculo do tempo de
esterilizacao decorre da propria definicaode esterilizacao, De fato, lembrando que
a esterilizacao ea operacao que tern por finalidade destruir todos os microrganis
mos vivos existentes no meio, 0 ruimero final de microrganismos vivos devera ser
N =oe, neste caso, a eq. 4.17 deixa de ser aplicavel,
Esse ultimo problema pode, porem, ser resolvido a partir da definicao de
probabilidade defalha de uma esterilizacao, Sendo:
E, =ruimero total de operacoes de esterilizacao realizadas .nas mesmas con
dicoes:
E, =ruimero de operacoes de esterilizacao que falharam, isto e, que nao con
duziram a urn meio esterilizado. .
Define-se probabilidade de falha (P) dessa esterilizacao pela relacao:
.(4.18)
Consideracoesgeraisarespeito do cakulo do tempode esterilizac;ao 55
Multiplicando-se por 100 essa ultima fracao, a probabilidade de falha sera
expressa em porcentagem.
Suponhamos, para facilitar a exposicao, que uma dada esterilizacao apresen
te probabilidade de falha igual a 0,03 (ou 3%). Isso significa que, de 100 partidas
de meio tratadas termicamente nas mesmas condicoes, serao obtidas, em media,
97 partidas esterilizadas e 3 partidas nao esterilizadas. Se indicarmos por No 0 mi
mero de microrganismos vivos em cada partida de meio a esterilizar, 0 mimero de
microrganismos nas 100 partidas de meio a esterilizar sera 100 No. Acontece, nesse
caso, que 3 partidas nao se encontravam esterilizadas ap6s 0 tratamento termico
do meio. Se considerarmos que a condicao necessaria e suficiente para que falhe a
esterilizacao de uma partida de meio e que nele exista, ap6s 0 tratamento terrnico,
urn microrganismo vivo, 0 mimero final de microrganismos vivos nas 100 partidas
sera, no minimo, igual a 3 (urn .em cada partida em que a esterilizacao falhou).
Aplicando-se a eq. 4.17 ao conjunto das 100 partidas, teremos:
1 1 100 No 1 In No
t=-n =- .--
k 3 k 0,03
De urn modo geral, sendo P a probabilidade de falha, podemos escrever:
1 No
(4.19)
k P
Para fixar ideias, consideremos 0 seguinte exemplo numerico: urn dado vo
lume de meio a esterilizar contem 2,5.10
10
microrganismos vivos; 0 valor de k e 3,4
min" : calcular os tempos .de esterilizacao para que as probabilidades de falha se
jam iguais a 0,1 (ou 10%),0,01 (ou 1%) e 0,001 (ou 0,1%). Aplicando-se a equacao
4.19, teremos:
a) para P =0,1 (10%)
= 7,7 min
3,4 0,1
b) para P = 0,01 (1%)
84 .
- - - - = , mm
3,4 0,01
c) para P = 0,001 (0,1%)
1O
t =_1_.
ln2,5
.10 =9,1 min
3,4 0,001
t ___,.,
56 de meios de fermentacao par aquecimento com vapor
4.6 - Calculo do tempo de por processo
descontinuo
Suponhamos que na esterilizacao descontinua de urn dado volume de meio,
a curva da Figura 4.9 represente a variacao da temperatura do meio com 0 tempo.
-e-
I
I
I
I I P
____ .1 L_
I
"
N I
I I
I I
I 1 I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
-
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
I I I I
Tempo
Figura 4.9 - Variacao de temperatura do meio com 0 tempo, durante sua esterilizacao pqr processo descontlnuo.
Te:temperatura de esterilizacao, Tm: temperatura minima letal, Tf: temperatura final do meio esterilizado = tempera
tura de ferrnentacao, T0: temperatura inicial do meio aesterilizar. N 1: numero de celulas vivas no instante t
1
. P: proba
bilidade de falha.
Para calcularmos 0 tempo de esterilizacao (8) precisamos conhecer:
a) 0 mimero inicial de celulas vivas no meio (N
1
J;
b) a probabilidade de falha (P);
c) as curvas de aquecimento e de resfriamento do meio;
d) a temperatura minima letal (Tm);
e) a temperatura de esterilizacao (T
e
) ;
f) a variacao de k corn a temperatura.
Na Figura 4.9, N
2
e N
3
sao, respectivamente, os ruimeros de microrganismos
vivos no fimda fase de aquecimento e no inicio da fase de resfriamento. Como ve- .
remos logo mais, N
2
e N
3
nao precisam ser conhecidos.
Tanto' no aquecimento como no resfriamento, 0 valor de k varia como conse
quencia da variacao da temperatura. Nesses casos, a eq. 4.1 nos dara:
Z6 f)
<:alculo do tempo de esterilizao por processo descontinuo 57
a) no aquecimento:
N t
2
1 (4.20)
In_=fk .dt
N 2 t
I
b) no resfriamento:
N t,
3=f
k .dt
(4.21)
In-
P t
3
Essas integrais podem, por exemplo, ser calculadas do seguinte modo: esco
lhem-se diversos valores de t na fase de aquecimento (ou de resfriamento); para
cada valor escolhido de t, a curva de aquecimento (ou de resfriamento) nos da a
temperatura correspondente; mas para cada valor da temperatura, lembrando que
a variacao de k com a temperatura econhecida, calcula-se 0 correspondente valor
de k; teremos, deste modo, a variacao de k com 0 tempo no aquecimento (ou no
resfriamento); tendo-se k = !(t), podemos calcular as integrais das eqs. 4.20 e 4.21.
Sendo k, 0 valor de k na temperatura de esterilizacao, podemos entao escre
ver:
N
t 2
1
In-=
f -
k -dt
N 2 t
1
N t,
3=fk.dt
In-
P t
3
Logo:
(4.22)
A eq. 4.22 nos permite calcular e.
A titulo de exemplo numerico, consideremos 0 calculo do tempo de esterili
zacao de urn mosto, sendo dados:
a) volume do mosto = 100 m" (10Slitros);
b) concentracao de microrganismos vivos no mosto = 7,2 .10
9
celulaa/Iitro:
58 Esteriliza o de meiosde fermenta o por aquecimento comvapor
c) temperatura de esterilizacao = 120C;
d) temperatura minima letal = 80C;
e) probabilidade de falha =0,001 (ou 0,1%);
f) curvas de aquecimento e de resfriamento = ver Fig. 4.10;
g) variacao de k (em min") com a temperatura T' (em 0C):
k =6,04 . 10-
11
. eO,200 'T'(equa<;ao de Bigelow) (4.23)
T'
120 / e Resfriamento 120
..... ...................... 80 0
~
~
40 40 Aquecimento
o
o 40 80 o 40 80
t(min)
Figura4.10 - Curvas de aqueciment o e de resfriamento do meio (exemplo numer ico).
A partir das curvas da Figura 4.10 e da equacao que relaciona k com a tem
peratura T', montamos as Tabelas 4.4 e 4.5, que nos permitem representar grafica
mente a variacao de k com 0 tempo (ver Fig. 4.11)
Tabela 4.4 - Valores de k durante 0 aquecimento do meio (exemplo nurneri co).
-
t (min) T ' (0C) k (minJ)
..
20 75 0,0002
30 87 0,0022
40 97 0,016
~ f t 1
50 105 0,080
Ij
60 112 0,32
f ' ~
70 116 0,72
F ~
80 120 1,60
~ - . -
: - -
_.
.
CAlculo do tempo de por processo descont fnuo 59
Tabela 4.5 - Valores de k durante 0 resfriamento do meio (exemplo nurnerlco),
t (min) T' (oq k (mirrl)
q;,
0 120 1,60


2 114 0,48


:';....
4 109 0,18

6 105 0,080
k
8
10
101
97
0,036
0,016
f:
he
.

fI,"
15 88 0,0026

20 80 0,0005

: ;
If '
,,: '
> ; .(. ". .: ". :\.:: -: ...' ... :
.' l :.... . , ...
...
:L,.,
1,6
Resfriamenlo Aquecimento
1,2

i::
g
0,8

0,4
o
80
fk.dl
24
20
!ak.dl
1,6
1,2

i::
'E
0,8

0,4
o
1
20 40 60 80 o 4 8 . 12 J
I (min) I (min)
Figura 4.11 - Variacao de k durante 0 aquecimento e 0 resfriamento do meio (exemplo nurnerico).
Teremos entao:
N
1
=10
5
. 7,2 .10
9
=7,2 .10
14
P = 0,001'
In (N 1 / P) = 41,12
k .
60 de meios de por aquecimento com vapor
80
(ver Fig. 4.11; fase de aquecimento)
24
20
Jk (ver Fig. 4.11; fase de resfriamento)
o
Substituindo esses valores na equacao 4.22, calculamos 8:
41,12 =1,608 +19,40 + 3,23
8 =11,6 min 12 min
Suponhamos, agora, que tivessemos:
a) concentracao de microrganismos vivos no mosto = 4,3 10
2
celulas /Iitro:
b) probabilidade de falha = 0,1 (10%).
Nesse ultimo caso:
P = 0,1
In(N} / P)=19,88
A equacao 4.22 nos daria, entao:
19,88 = 1,608 + 19,40 + 3,23
e=-1,7 min
Esse resultado indica que, nesse ultimo exemplo numerico, 0 aquecimen
to e 0 resfriamento sao mais que suficientes para conseguirmos a esterilizacao
desejada.
rtn _ _ _ _ ___ _ _

Ii 4.7 - Ccilculo do tempo de por processo


II continuo
I
: Lembrando que, no processo continuo, tanto 0 aquecimento quanta 0 resfri
1 amento do meio sao muito rapidos, as integrais representadas nas eqs. 4.20 e 4.21
l
ser e 0 calculo do tempo de esterilizacao ose resume na apli
. " cacao da equa<;ao:
0i0... s_srl - ----- --- - - - - - ._ . ... . . .__. --Ji
Cllculo do tempo de por processo continuo 6 I
N
1
In-=k 8
p e
Voltemos ao exemplo numerico citado no item anterior, mas com tempera
tura de esterilizacao igual a 130C. Teremos, pela eq. 4.23:
k, = 11,8 min"
i
Logo, 0 valor de 8 sera:
41,12 = 11,88 :. 8 = 3,5 min
Resta-nos, finalmente, considerar 0 dimensionamento do tuba de espera.
Sejam:
V =volume de meio necessario para encher urn fermentador;
t, = tempo de carga do fermentador:
p =massa especffica do meio atemperatura de esterilizacao:
J.l =viscosidade do meio atemperatura de esterilizacao:
8 = tempo de esterilizacao = tempo de residencia do meio no tuba de espera;
Re = ruimero de Reynolds no tuba de espera;
D =diametro interno do tuba de espera;
v = velocidade de meio no tuba de espera;
L =comprimento do tuba de espera.
as valores de V, tel p, J.l, 8, sao conhecidos e, alem disso, sabemos que Re e v
devem estar compreendidos nos intervalos 36.000 a 80.000 e 3 a 60 cm/ s, respecti
vamente.
Interessa-nos calcular DeL, lembrando que 0 valor de D deve estar contido,
aproximadamenie, no intervale 10 a 30 em.
Sendo F = V/ t
e
a vazao do meio no tuba de espera, podemos escrever:
4F rt D
2
2
(4.24)
F=--v : .D v = -
4 rt
Por outro lado:
Re = D v .p : .D. v= J.lRe
(4.25)
J.l p
As equacoes 4.24 e 4.25 nos dao:
D = 4F (4.26)
rtJ.l Re
Para cada valor de Re, a eq. 4.26 permite calcular D e, entao, a eq. 4.24 nos
da 0 correspondente valor de v. Considerando que L ,,;, v 8, calculamos 0 corres
pondente valor de L.
1
l
1
1
1
L _..
.
. .__
.
..,_
-
j
!.
i
62 Esteriliza o de meiosde ferrnentacao por aquecimento com vapor
A titulo de exemplo numerico, imaginemos urn caso no qual:
V = 100 m' = l,OO.10
8
cm
3
t
e
= 4 h = 1,44.10
4
S
P = 1,06 g/cm
3
J.L =0,55 cp =5,5.1O-
3p
e=3,5 min =2,1.10
2s
A partir dos valores de Ve t
e
calculamos a vazao do meio:
F=V It
e
=6,94 .10
3
cm' Is
Com esses valores numericos, poderemos calcular D, veL para cada valor
de Re (ver Tab. 4.6).
A escolha do valor de D (e do correspondente L) dependera, obviarnente,
dos diametros de tubos existentes no mercado, dos precos desses tubos, de algu
rna caracteristica peculiar do meio, e de outros requisitos ou limitacoes inerentes
ao projeto global. Por scguranca. 0 projeto podera prever, no tuba de espera, urn
"tubo em U" (ver Figura 4.4) suplementar.
Tabela 4.6 - Valores do diarnetro (D) e do comprimento (L) do tubo de espera, e da velocidade (v) do meio no
tubo de espera para diferentes valores do numero de Reynolds (Re), no exemplo numerico considerado.
Re
40000
50000
60000
70000
o (ern)
42,6
34,1
28,4
24,3
v (cm/s)
4,87
7,60
10,96
14,97
L (m)
10,2
16,0
23,0
31,4
_ ---- --lIIiIIIlIiiiiiillllliiiiiIAL ._
Literatura recomendada
(1) AIBA, S., HUMPHREY, A.E. & MILLIS, N.F. Biochemical Engineering. Univer
sity of Tokyo Press, T6quio, 1973.
(2) BAILEY, J.E. & OLLIS, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill
Book Company, Nova York, 1986.
(3) BLAKEBROUGH, N. Biochemical and Biological Engineering Science. Academic
Press, Nova York, 1967 e 1968.
(4) SIMON, P. & MEUNIER, R. Microbiologie Industrielle et Genie Biochimique. Mas
son et Cie., Editeurs, Paris, 1970.
(5) SOLOMONS, C.L.Materials and Methods in Fermentation. Academic Press, Lon
dres,1969.
. ._.. .. . ..__ .._. . .._ . . ._ ._ .. .__ _. . __
------- - --- --- ------- - -
63
Willibaldo Schmidell
5.1-
Como se sabe, os processos quimicos industriais podem ser divididos, de
uma forma simples e global, em processos inorganicos, organicos e biol6gicos.
Assim, urn processo quimico industrial biol6gico e aquele no qual 0 processo de
conversao da materia-prima em produto repousa basicamente em urn fenomeno
biol6gico.
Esse tipo de industria apresenta uma serie de caracteristicas pr6prias,
pois freqiientemente trata-se de fazer crescer urn certo microrganismoou, de
forma mais geral, uma dada celula, seja microbiana, animal ou vegetal. Esse
fato exige a presen<;a, desdeo projeto da planta ate sua operacao em regime, de
uma mentalidade pr6pria e particular em relacao a existente na industria qui
mica n13.O biol6gica.
Etarnbem fato conhecido, que ate a Segunda Guerra Mundial n13.O dispu
nha de tecnologias adequadas para a conducao de processos fermentativos em
grande escala e em condicoes de assepsia, motivo pelo qual n13.O havia a possibili
dade de se fabricar produtos tais como antibi6ticos, vitaminas, enzimas, etc.
Os produtos elaborados por processos fermentativos eram aqueles cuja ge
racao, no caldo em ferrnentacao, tornassem 0 meio n13.O adequado para a prolifera
<;13.0 de possiveis contaminantes, determinando, desta forma, uma protecao natural
ao meio (etanol, acetona, acidos organicos, etc.).
o grande avanco observado durante a Segunda Guerra Mundial foi exata
mente 0 desenvolvimento dessas estrategias que permitiram a conducao de pro
cessos em larga escala em condicoes de assepsia, em particular a possibilidade
de se efetuar a esterilizacao de grandes volumes de ar, necessario aos processos
biol6gicos aer6bios.
Apenas para se ter uma ideia da importancia da esterilizacao do ar, imagi
ne-se a necessidade de fornecer ar esterilizado para urn rea tor de 100 m
3
a uma va
64 de ar
zao espedfica de 0,5 min" (ou, como freqiientemente mencionado, 0,5 v.v.m., ou
seja, volume de ar por volume de meio por minuto). Esse problema, que nada tern
de extraordinario, sendo mesmo bastante frequente, pode ser resumido anecessi
dade de se esterilizar 50 m''ar Zmin.
Admitindo-se uma contaminacao do ar ambiente da ordem de 10
3
partfcu
Ias/m" (vide item seguinte), caso nao houvesse a esterilizacao do ar, introdu
zir-se-iam no reator 5xl0
4
particulas/min. Lembrando que urn processo
fermentativo pode freqiientemente ocorrer durante 50 ou 100 horas, isto significa
ria introduzir urn total de 3xl0
8
particulas contendo microrganismos, ao longo de
100 horas de fermentacao.
Esse exemplo torna claro que nao se podera obter sucesso nesse processo,
caso 0 acumulo do produto desejado dependa da acao isolada do microrganismo
responsavel pela sintese deste produto.
Na verdade, caso se trate de urn processo descontinuo de fermentacao, os
instantes rnais problematicos sao os instantes iniciais do processo, pois ai se tern
baixa concentracao do microrganismo produtor e alta concentracao de substratos,
o que significa alta potencialidade de contaminacao do sistema. Ja nos instantes
rnais avancados tem-se uma alta concentracao do microrganismo responsavel pelo
processo produtivo e uma baixa concentracao de substratos, 0 que toma 0 caldo
em fermentacao menos suscetivel a contaminacoes. Isso nao significa que se possa
conduzir 0 process<;> de forma menos atenta, pois a ocorrencia de contaminacoes
que produzam substancias que destruam 0 produto gerado podesomprometer o
processo, como e 0 caso de contaminacoes com celulas produtoras de proteases
em urn processo de producao de uma dada enzima.
Claro esta que 0 nivel de preocupacao com a esterilizacao do ar depende da
maior ou inenor suscetibilidade do processo quanto a contaminantes. Caso 0 meio
de cultivo, ouas condicoes impostas ao reator (pH, temperatura), sejam extrema
mente seletivos, os cuidados podem ser atenuados, mas ainda assim a ocorrencia
de contarninacoes pode interferir negativamente no que se refere aobtencao de al
tos rendimentos, 0 que geralmente nao compensa a economia que se tenha feito, e
que nao mais permita uma operacao asseptica eficiente.
No presente capitulo pretende-se descrever certas particularidades sobre os
aeross6is microbianos, indicar formas para se estimar a concentracao de microrga
nismos suspensos no ar, apresentar as formas mais freqiientes e disponiveis para
::;
se executar a esterilizacao do ar, sempre com a principal preocupacao no fomeci
:;1
mento de ar esterilizado para processos fermentativos aer6bios.

11

5.2 - Aerossois microbianos


.1
f As especies microbianas suspensas no ar atmosferico, assim como sua con-
Ii centracao, podem ser extremamente variaveis, dependendo de uma serie de fato
l
i res. Pode-se encontrar microrganismos de maiores dimensoes, como bolores
(fragmentos de hifas) e leveduras, assim como especies de menores dimens6es
: como bacterias ou seus esporos. Esses microrganismos sao provenientes do solo,
I ou de plantas, ou ainda de cursos de agua, sendo postos em suspensao pela
,I .. . " ._"__ ..- - ...-.----" .._. .__.__._... . __._.. _
t
Amostradores 65
movimentacao do ar ambiente, sendo os de menores dirnens6es freqiientemente asso
ciados a particulas de poeira.
A simples mencao desses fatos ja indica que, dependendo do c1ima de uma
dada localidade, ou mesmo de urn dia para outro ern uma mesma localidade, po- ,
dem-se encontrar diferentes concentracoes de microrganismos suspensos no ar,
assim como distintas especies de microrganismos suspensos. De fate, ao se efetuar
a contagem de microrganismos no ar ern urn ambiente livre de radiacoes solares e
corn umidade relativa elevada, muito provavelmente obtem-se concentracoes ele
vadas de celulas vegetativas. Ao contrario, uma determinacao feita ap6s longa ex
posicao a luz solar fomeceria uma contagem preferencial de especies mais
resistentes, como os esporos de bacterias. Analogamente, a concentracao de mi
crorganismos suspensos no ar e drasticamente reduzida ap6s urn perlodo de chu
vas e extremamente elevada apos urn penodo de ventos fortes.
Essas informacoes permitem refletir sobre 0 local de onde se deve proceder
a captacao de ar para processo. Esse local de captacao nao deve ser entendido
como aleat6rio, pois podemos estar captando ar de locais muito contaminados,
como seria 0 caso de se localizar a entrada dear do sistema de compressao muito
proxima do solo, ou ainda voltada para locais particulares e sujeitos a urn maior
nivel de contaminacao.
No pr6ximo item se buscara descrever sistemas para a determinacao da con
centracao de microrganismos suspensos no ar, mas ja se pode afirmar que, apesar
das possiveis variacoes ern uma mesma localidade, ao se efetuar estas determina
coes por longos periodos (urn ano por exemplo), obtem-se valores medics relativa
mente pr6ximos. Assim, AlBA et al? indicam, para a atmosfera de T6quio, uma
concentracao media de microrganismos de 12x10
3
partfculaa/m", enquanto que
GADEN;HUMPHREy
2
indicam, para Londres, urn valor de 3 a 9x10
3
partfculas /m".
PARIS et al.
3
chegararn a uma concentracao media de 1 a 3x10
3
particulas Zm",
no que se refere a atmosfera da capital de Sao Paulo, ap6s realizarem amostragens
durante 0 periodo de urn ano e ern diversas localidades.
Deve-se salientar que as diferencas observadasentre esses diversos dados
disponfveis na literatura sao devidas as pr6prias caracteristicas do fenomeno, con
forme discutido anteriormente, mas tambem ern virtude do emprego de diferentes
metodologias na quantificacao.
Quanto as dimensoes dos microrganismos suspensos no ar, pode-se conside
rar como representativos valores da ordem de 0,5 a 1,0 urn, ou seja, dimens6es de
bacterias ou seus esporos. Por outro lade, as particulas de poeira, que frequente
\; mente transportam os microrganismos, apresentam diametros freqiientemente su
periores a 4 urn, sendo que os esporos normalmente nao estao associados a estas
particulas de poeira."
','
5.3 - Amostradores
A determinacao da concentracao de microrganismos suspensos no ar atmos
ferico e realizada atraves do uso de dispositivos designados genericamente por
arnostradores. Esses instrumentos nao sao apenas importantes por realizarem essa
(
66 Esterilizaode ar
tarefa, como tambem sao empregados para a verificacao da efetiva esterilizacao
do ar destinado ao processo, ou na quantificacao de eventuais contaminantes em
areas ditas estereis (salas de cirurgia).
Essas sao as raz5es pelas quais reveste-se de importancia 0 conhecimento de
alguns detalhes sobreos tipos de amostradores que podem ser empregados, assim
como sua forma deoperacao e limitacoes. ,
De uma forma geral, todos os amostradores operam de maneira semelhante,
pois 0 princlpio basico deles consiste em reter, de alguma forma, os mierorganis
mos suspensos em urn determinado volume de ar, dando-se, a seguir, condicoes
para que estas celulas proliferem, de maneira a tornar possivel a contagem de co
Ionias, para a quantificacao dos contaminantes no volume de ar amostrado.
Tendo em vista essa descricao geral, pode-se concluir que:
a) dependendo da forma empregada para reter os mierorganismos, nao se
pode assegurar que esta retencao seja total, podendo-se inclusive imaginar que
haja distintas eficiencias de coleta para diferentes amostradores;
b) ainda na dependencia da forma de reter os mierorganismos, pode-se tam
bern imaginar a possibilidade da ocorrencia de destruicao de certas especies:
c) lembrando que celulas mierobianas suspensas no ar podem estar associa
das a particulas de poeira, podendo ocorrer a existencia de mais que uma celula
por particula, por mais que se busque desagregar estes conjuntos, esempre dificil
afirmar que uma colonia tenha tido, obrigatoriamente, origem em uma unica celu
laoEssa e, inclusive, a razao pela qual os resultados sao freqiientemente expressos
em mimero de particulas, ou de ruimero de colonies por unidade de volume de ar
amostrado;
d) conforme indicado, a etapa final da determinacao consiste em contar co
lonias que se desenvolveram em urn dado meio de cultura e, tendo em vista a
grande variedade de mierorganismos suspensos no ar, torna-se dificil eleger urn
meio no qual se possa afirmar que todas as especies se desenvolvam e:rn urn dado
intervalo de tempo. .
Uma primeira consequencia dos fatos acima apontados/reside nedificulda
de em comparar resultados obtidos pelo uso de diferentes amostradores, ou com
urn mesmo amostrador, porem operado de formas distintas.
Outra consequencia clara e a impossibilidade de se obter a concentracao, to
tal ou absoluta, de mierorganismos suspensos no ar atrnosferico.
Uma forma de minorar esses problemas, especialmentequando se deseja
efetuar testes de efetividade de esterilizacao de urn dado sistema, por exemplo de
urn dado filtro, consiste em preparar uma suspensao de urn dado mierorganismo
em ar, previamente submetidoa esterilizacao. Esse ar, artificialmente contamina
do com 0 microrganismo usado como marcador, epassado atraves do filtro, deter
minando-se a concentracao (ou 0 mimero) de microrganismos no ar antes e ap6s 0
elemento filtrante, desde que tambem se conheca 0 volume de ar amostrado, me
dindo-se a vazao de ar e 0 tempo do ensaio. Pode-se assim quantifiear a eficiencia
de retencao (11) do filtro em teste:
, 11 =:: N1 ~ N2 X 100
(5.1)
N
1
Amostradores 67
onde: N, =concentracao de microrganismos no ar antes da passagem pelo filtro
.(particulas ou colonias por unidade de volume) e
N
2
= concentracao de microrganismos no ar ap6s a passagem pelo filtro,
(particulas ou colonias .por unidade de volume).
o fato de se conhecer 0 microrganismo empregado para essetipo de deter
minacao, significa que se conhece perfeitamente 0 aspecto das colonias que se
quer contar (formato, aparencia, cor), alem de se conhecer 0 meio de cultura e as
condicoes mais adequadas para a sua proliferacao.
Varies microrganismos tern sido empregados para a realizacao desses testes,
tais como Serratia marcescens.' Pseudomonas diminuta
6
,7 e esporos de Bacillus subtilis
var. niger,' Obviamente esses microrganismos sao de pequenas dimensoes, como e
o casodo Pseudomonas diminuta, que apresenta diametros de 0,3 por 0,8 um."
-Pretende-se, a seguir, apresentar algumas caracteristicas de alguns amostra
dores mais freqiientemente empregados. Convem salientar que na literatura ha a
descricao de urn ruimero elevado de amostradores, sendo freqiiente que urn pes
quisador, ao trabalhar sobre.o tema, acabe por desenvolver 0 seu pr6prio sistema,
ou propondo variacoes sobre os existentes. Isso resulta na geracao de dados que
sao de dificil comparacao, a nao ser que seempregue sistema identico.
5.3.1 - Impinger
o impinger eurn dos amostradores mais conhecidos e sobre 0 qual ha mui
tas referencias. Existem, inclusive, iruimeras vers5es desse amostrador, sendo urn
exemplo tipico 0 indicado na Figura 5.1, extraida do trabalho de TYLER; SHIPE,s
sendo conhecido como"all-glass impinger" (AGI).
'r
I,
I
2
13cm
Figura 5.1 - "All-glass impinger" (AGI). (I) Entrada do ar; (2) Safda do ar (bombade vacuo).
8
_. . _ - - - - - _ . _ - - - - - - . ~ . _ - ' - ..---_.---- . _ . _ - - - - _ . _ . - . _ - - _ . _ . ~ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
(
- - ----- - - - - - - - - - - -
; .
> :
68 de ar
Esse amostrador consta de urn recipiente de vidro que contem 10 ml.do li
quido coletor, que pode ser agua destilada, ou determinadas solucoes como a so
lucao gelatina-fosfato, constituida de gelatina (2 giL) e Na
2HP04
(4 giL), aqual se
adiciona 0,01 mL de 6leo de oliva esterilizado, a fim de evitar a formacao de espu
rna. Antes do inicio da amostragem, todo 0 conjunto deve ser esterilizado.
Ao se iniciar a amostragem do ar, liga-se a abertura 2, indicada na Figura
5.1, a uma bomba de vacuo, de forma a reduzir a pressao no interior do recipiente.
Dessa forma, 0 ar entrara no amostrador atraves da abertura 1, borbulhando no Ii
quido coletor atraves do tube de vidro, 0 qual e capilar ern sua parte final para
gerar bolhas de pequeno diametro. Espera-se, portanto, que os microrganismos
existentes no ar fiquem retidos no liquido.
Terminada a tomada de amostra, 0 frasco eagitado, a fim de promover a de
sagregacao dos eventuais aglomerados de celulas, determinando-se, entao, a con
centracao de microrganismos no liquido coletor, atraves dos metodos usuais de
diluicoes e contagem de colonies ern placas.
Conhecendo-se a vazao de ar e 0 tempo de amostragem, conhece-se 0 volu
me de ar amostrado, tendo-se, portanto, todos os dados necessaries para 0 calculo
da concentracao de microrganismos neste ar.
Uma das vantagens desse amostrador consiste no fato de nao ser necessario
o uso de medidor de vazao de ar, uma vez executada a calibracao do aparelho,
pois 0 tube capilar funciona como urn "orificio critico". Essa expressao "orificio
critico" significa uma condicao de trabalho na qual a relacao entre as pressoes rei
nantes nas extremidades do tube capilar esuficiente para produzir velocidade do
ar igual ado som. Essa velocidade nao ernais ultrapassada, mesmo que a pressao
do lado do vacuo diminua ou oscile abaixo desse valor critico. Para 0 ar, a relacao
de pressoes ede 0,53, significando que se a amostragem for efetuada de urn ambi
ente apressao de 1 atm, a pressao do lado do vacuo devera ser inferior a 0,53 atm,
podendo inclusive oscilar entre valores abaixo deste e, mesmo assim. ia vazao per
manecera constante." Assim, uma vez construido 0 instrumento,ele deve ser sub
metido a uma calibracao, para se conhecer a vazao de ar que ele permite, corn a
devida precisao.
No caso do AGI utilizado por TYLER; SHIPE,s a vazao de ar era de 12,5 L/min
e a distancia da extremidade livre do capilar ao fundo do frasco era de 4 mm. Esse
impinger apresentou uma eficiencia de retencao de esporos de Bacillus subtilis su
perior a 99%, ern comparacao corn os dados obtidos corn urn amostrador de algo
, ' , ' ,
dao (vide a seguir) considerado como absoluto, apesar de se saber que ocorre
destruicao de celulas neste tipo de amostrador.
Ern vista desses fatos, os mesmos autores puderam imaginar que haveria re
tencao de microrganismos no tube de admissao de ar, assim como poderia ocorrer
adestruicao de celulas, ern virtude da excessiva velocidade corn que as particulas
.sao lancadas no meio, podendo, inclusive, haver choque contra 0 fundo do frasco.
Para demonstrar a ocorrencia de retencao no tube de admissao'do ar, TYLER
et al.
10
empregaram aerossol contendo cristal violeta, sendo que apos certo tempo
de amostragem efetuavam uma lavagem no tube de admissao, determinando a
concentracao daquele corante atraves de urn colorimetro. Demonstraram que nao
...... .
Amostradores 69
apenas ocorre essa retencao, como tambem que ela depende do tamanho da parti
cula, observando que para particulas de 20 urn ocorre praticamente retencao total.
Urn dos metodos empregados pelos autores para a determinacao da des
truicao de celulas vegetativas durante a amostragem, consistiu no uso de celulas
marcadas radiativamente. Para tanto, usaram uma suspensao de Serratia marces
cens previamente cultivada ern meio glicosado contendo f6sforo ou enxofre radio
ativos. Ap6s a amostragem,
I
determinavam 0 mimero de particulas no lfquido
coletor atraves de urn contador Geiger e as celulas viaveis pela tecnica usual de
contagem de colonies ern placas.
Uma vezconstatados esses problemas corn 0 AGI, SHIPE et ai." desenvolve
ram urn outro tipo de amostrador, que recebeu a designacao de amostrador Shipe,
indicado na Figura 5.2.
2
Figura 5.2 - Amostrador Shipe, (I) Orificio crftico (entrada do ar);(2)safda do ar (bombade vacuo) ,11
Esse outro tipo de instrumento consiste ern urn erlenmeyer de 125 mL, sendo
a entrada do ar feita atraves de urn "oriffcio critico". Ele opera de forma similar ao
AGI, colocando-se no erlenmeyer 25 mL do Iiquido coletor e ligando-se a saida de
ar a uma bomba de vacuo. Devido aentrada do 'ar ern alta velocidade ser efetuada
na superffcie do liquido, isto provoca urn movimento circular do liquido coletor,
sendo importante a localizacao do orificio de entrada, a fim de evitar uma excessi
va umidificacao das paredes do frasco.
io.....--"". ,.. ,,, '. ..,..' __.. ' _ _ _- _.. ~ ~ _ -., .., _"_. ~ . .__..
70 Esteriliza.;ao dear
Como se pode observar,o amostrador Shipe nao conta com 0 tuba de entra
da, e ainda lanca as particulas contra a superffcie do liquido coletor que esta em
movimento. Isso evita a mencionada retencao e tambem reduz a possibilidade de
destruicao de celulas vegetativas, sendo que testes comparativos indicaram cerca
de 23% a rnais de celulas viaveis no amostrador Shipe, em relacao ao valor obtido
no AGI.
as detalhes expostos acima servem para ilustrar os cuidados na constru
c;ao e operacao desses amostradores, para se poder obter resultados satisfat6
rios ereprodutiveis, mesmo no caso de se utilizar aeross6is contendo celulas
conhecidas.
5.3.2 - Amastragem par filtracao
Existem varies amostradores cujo principio basico da amostragem ea filtra
c;ao, sendo, portanto, distintos dos amostradores mencionados. Consistem em fazer
passar 0 ar atraves de urn elemento filtrante, 0 qual devera reter os microrganismos
suspensos. Posteriormente, pode-se colocar esse material filtrante em suspensao em
urn volume conhecido de urn liquido adequado, procedendo-se a uma agitacao vi
gorosa, a fim de propiciar a passagem dos microrganismos retidos para 0 liquido.
Finalmente, efetua-se a determinacao da concentracao de microrganismos no liqui
do, pelas tecnicas usuais de diluicoes e contagem em placas. Conhecendo-se 0 volu
me de liquido sabe-se 0 mimero total de microrganismos retidos e, novamente,
conhecendo-se a vazao do ar amostrado e 0 tempo de amostragem, tem-se todos os
elementos para 0 calculo da concentracao de celulas no ar.
Altemativamente, pode-se ap6s a passagem do ar atraves do elemento filtran
te dar condicoes para que as celulas proliferem no pr6prio coletor; efetuando-se en
tao a contagem de colonies. Esse procedimento, quando possivel, evita 0 trabalho
adicional de suspender as celulas em urn liquido para posterior contagem.
Urn amostrador tipico dessa categoria e0 amostrador de algodao, esquema
tizado na Figura 5.3. Ap6s a sua montagem ele deve ser submetido a esterilizacao,
preferencialmente por meio de calor seco (estufa), a fim de evitar 0 umedecimento
das .fibras e a conseqiiente perda de eficiencia de retencao de microrganismos.
A amostragem e realizada conectando-se a extrernidade 2 (Fig. 5.3) a uma
bomba de vacuo, intercalando-se urn sistema para a medida da vazao de ar. Ap6s 0
tempo de amostragem, 0 chumaco de algodao eretirado do amostrador e asseptica
mente transferido para urn recipiente contendo urn volume conhecido de agua este
rilizada. Procede-se, entao, a uma vigorosa agitacao, objetivando a passagem dos
microrganismos retidos nas fibras para 0 liquido, efetuando-se a determinacao da
concentracao de microrganismos no liquido por coritagem de colonias em placas.
Esse amostrador apresenta uma serie de inconvenientes, como a dificuldade
em suspender os microrganismos retidos, alem de provocar a destruicao de celu
las vegetativas, conforme apontado por TYLER; SHIPE.
s
Altemativamente pode-se
empregarla de vidro, mas dequalquer maneira a obtencao de altas eficiencias de
coleta depende de se ter 0 material filtrante muito bemcompactado, de forma a se
observar uma perda de carga, no leito filtrante, relativarnenteelevada e da ordem
de 0,5 kg*/cm . .
II
Iitt
Amostradores 71
2
13 em
Figura 5.3- Amostrador de algodao, (I) Entrada do ar; (2) do ar (bornba de vacuo).8
Uma forma rna is conveniente de se efetuar amostragens por filtracao con
siste no emprego do amostrador proposto pela Millipore Ind. e Com. Ltda. Esse
amostrador consiste em urn suporte em aco inoxidavel, 0 qual abriga membranas
Millipore de de diametro e poros de 0,22 urn ou 0,8 urn, devendo ser pre
viamente esterilizado. 0 sistema dispoe de uma bomba de vacuo, que succiona 0
arvobrigando-o a passar atraves da membrana e tambem atraves de urn orificio
critico,a.fim de se ter umavazao constante e conhecida. Terminada a arnostra
gem, a membrana deve ser retirada assepticamente e colocada sobre asuperficie
de urn meio de ctiltura em pequenas placas de Petri. Ap6s tempo adequado de in
cubacao, contam-se as colonias que aparecem sobre a membrana, obtendo-se, as
sim, a concentracao de microrganismos no ar amostrado. PARIS et al.,3 cujos
resultados foramrnencionados anteriormente, efetuaram determinacoes com 0
emprego desse tipo de amostrador.
Ao que tudo indica, 0 desenvolvimento de amostradores que operam por fil
tracao atraves ide membranas, teve seu inicio com 0 trabalho de TORLONI;
BORZANI/
z
empregando urn sistema cujo elemento filtrante consistia em papel
filtro Whatman 40 e 42. Esse original sistema, esquematizado na Figura 5.4, era
constituido de urn funil de aluminio, ao qual se adapta uma folha de papel-filtro
apoiado em uma grade de aco inoxidavel. Entre a grade e a folhade papel colo
ca-se uma camada de algodao hidr6filo. .
72 .Esterilizao de ar
e ~ ~ ~ ~ a _ l l l l
'--LL..Lr7T-:7TO
arruela
de borracha
grade de
.roo----.- avo lnoxldavel
20mm
Figura 5.4 - Amostrador de papel filtro.
12
Apos a esterilizacao do sistema, ao se efetuar a passagem de ar atraves da
folha de papel-filtro, 0 que poderia ser feito acoplando-se urn segundo cone apos
o elemento filtrante e este ligado a urn orificio critico e a uma bomba de vacuo, os
microrganismos devem ficar retidos sobre esta folha. Terminada a amostragem, 0
sistema pode ser desmontado, adicionando-se a seguir urn meio decultura ao al
godao hidrofilo, de forma a permitir, apos urn certo periodo deincubacao, a con
tagem de colonies surgidas na superficie do papel-filtro.
A partir dos resultados obtidos pelos mencionados pesquisadores," com 0
amostrador proposto pode-se estimar a concentracao de microrganismos no ar at
mosferico da cidade de Sao Paulo como estando entre 4 a 6xl0
3
particnlaa/m", va
lor este perfeitamente de acordo com os dados anteriormente mencionados.
5.3.3 - Amostradores de fenda ou oriffcio
o principio basico de funcionamento desses amostradores consiste em se fa- .:
zer com que 0 ar amostrado incida, a uma dada velocidade, sobre asuperficie de
urn meio de cultura solido, havendo, em virtude de uma brusca mudanca de dire
<;ao do ar, 0 choque das particulas suspensas que nao acompanham as linhas de
corrente, ocasionando a retencao destas particulas nesta superficie.
A Figura 5.5 mostra esquematicamente 0 amostrador de fenda desenvolvido
por Bourdillon e descrito por TORLONI.
9
Como se nota, consta de umaplaca de Pe
tri, contendo urn meio de culturasolido preso a urn disco horizontal giratorio, es
tando todo este conjunto no interior de uma caixa metalica, provida de uma janela
que permite fechamento hermetico. 0 ar entrapor urn tuba vertical que possui, na
extremidade inferior, uma fenda atraves da qual as particulas em suspensao no ar
Amostradores 73
sao lancadas contra a superficie coletora. Uma vez esterilizado todo 0 conjunto, a
saida de ar e conectada a uma bomba de vacuo, intercalando-se urn sistema para a
medida da vazao de ar.
1
L
3
-
4
5
Figura 5.5 - Amostrador de fenda. (I) Placa de Petri; (2) Disco girat6rio; (3)Tubo e fenda(entradado ar); (4)Safda
do ar para0 medidorde vazaoe bombade vacuo; (5) Caixa metalica,
Durante 0 periodo de amostragem, 0 disco gira com velocidade angular re
gulavel, em funcao da contaminacao do ar que se esta tomando como amostra, po
dendo-se imaginar valores desde 0,1 rpm ate cerca de 2 rpm.
Aposa amostragem, a placa de Petri e retirada do amostrador, fechada em
condicoes de assepsia e incubada. Decorrido urn intervalo de tempo adequado,
conta-seo ruimero de colonies que aparecem sobre '0 meio de cultura. Conhecen
do-se a velocidade de rotacao da placa, a vazao de ar e 0 ruimero de colonias sobre
o meio, ou parte de sua superficie, tem-se todosos elementos para quantificar a
contaminacao do ar amostrado.
Note-se que nao ha como proceder adesagregacao dos aglomerados de celu
las, 0 que tambem ocorre com os sistemas, anteriormente descritos, nos quais se
efetua a contagem diretamente sobre a superficie coletora. Isso significa que cui
dados devem ser observados, especialmente quando se trabalha com aerossois de
microrganismos definidos, a fim de evitar a presenca de aglomerados, que podem
ser aleatoriamente desfeitos sobre a superficie coletora durante a amostragem, ge
rando contagens igualmente aleatorias,
as autores tambem indicaram que a eficiencia de .retencao de aerossois de
pende da vazao do ar, assim como da distancia da fenda ao meio de cultura. De
terminaram urn valor maximo de 95% de retencao, quando empregavam vazoes
superiores a 28 L/min e 2 mm de distancia da fenda ao meio. Essa retencao dimi
~ _ __ _.-- ..
\
74 Esterilizao dear
nuia sensivelmente quando se reduzia a vazao do ar, sendo que obtiveram reten
inferiores a' 70%, operando corn uma vazao da ordem de 56 L/min e uma
distancia de 6 mm entre a fenda e 0 meio solido. '
Para amostragens muito prolongadas pode ocorrer ainda 0 inconveniente da
perda de agua do meio de cultura solido, corn a consequente abertura de fendas
no meio, 0 que inutilizaria 0 ensaio efetuado.
Apesar dos Inconvenientes e cuidados apontados no que se refere a esse tipo
de amostrador, ele apresenta certas vantagens sobre os demais. De fate, pode-se
imaginar a realizacao de teste de urn determinado sistema para a esterilizacao do
ar, como por exemplo 0 teste de urn determinado material filtrante, deterrninando
de forma continua a eficiencia de esterilizacao ao longo do tempo de operacao do
sistema. Pelo emprego de uma suspensao de urn dado microrganismo conhecido,
marca-se no meio de cultura a posicao da fenda no instante inicial. Apos a .incuba
pode-se proceder acontagem do mimero de colonias existentes ern determina
dos setores da placa, os quais corresponderao a certos intervalos de tempo
conhecidos, desde que se conheca a velocidade de rotacao da placa. Como se conhe
;

ce a vazao, sabe-se 0 volume de ar amostrado ern cada setor da placa e, portanto, a
I, .
!!
correspondente concentracao de microrganismos no ar que passou pelo elemento
filtrante ern teste. Pode-se, assim, determinar a variacao da .eficiencia de retencao
ern funcao do tempo de amostragem, ou de operacao do sistema de esterilizacao.
Eevidente que outros amostradores tambem permitem esse tipo de determi
nacao, porem executada de forma intermitente, pois a cada amostragem ha a ne
cessidade de substituicao do sistema de coleta do amostrador, para a realizacao da
contagemde particulas. No caso do amostrador ern questao, isso.nao e necessario,
bastando providenciar a substituicao da placa, apos urn giro cornpleto, por outra
esterilizada.
Na verdade, esses testes de sistemas de esterilizacao de ar, destinados a pro
cessos fermentativos, sao de grandeimportancia, tendo ern vista a necessidade de
alta confiabilidade.
Urn sistema desse tipo foi empregado por AIBAet al . , 5,13,14 para a realizacao
de testes ern filtros de materiais fibrosos e filtrosde placas porosas, empregando
porem urn oriffcio no lugar de uma fenda. Na Figura 5.6 encontra-se esquematiza
doc sistema empregado pelos mencionados pesquisadores, observando-se que 0
ar passa por medidores de vazao e, apos a nebulizacao de uma suspensao do mi
crorganismo utilizado como marcador (no caso Serratia marcescens), ele vai para os
amostradores. Quando a valvula A estiver aberta,a Bdeve estar fechada, efetuan
do-se, nestas condicoes, a determinacao da concentracao de microrganismos no ar
a ser filtrado.Feito isso fecha-se 0 registro A e abre-se oB, permitindo-se que 0 ar
atravesse 0 filtro.
Encontram-se naliteratura varies outros esquemas imaginados para a reali
zacao de testes de efetividade de sistemas para a esterilizacao do ary,15 Deve-se,
no entanto, acrescentar que testes ern linha deveriam serexecutados, efetuando-se
amostragens periodicas, ou ate mesmo continuas, de ar esterilizado ao lange do
. __... .....
.:....
Metodos paraa esterilizacao de ar 75
tempo em que 0 processo fermentativo esteja ocorrendo, a fim de verificar a efi
ciencia da esterilizacao do ar, tendo em vista os altos custos envolvidos na perda
. de partidas em virtude de contaminacoes, Isso normalmente nao erealizado, as
sim como outras medidas nessa direcao, 0 que torna sempre muito dificil a desco
berta das causas de contaminacoes em processos.
Derivacao
para ensaio
Camara
Manornetro
Agar nutritivo
-
Placa de Petri
em branco
de vidro
esterilizada
t
Camara
de ar
Rotarnetro
Termornetro de
Rotametro
bulbo sew
e umido
t
--'__---''--_-'
-
de ar
Figura 5.6 - Sistema de teste de materiaisfiltrantes , empregando urnamostradorde fenda.
s
5.4 - Metodos para a de ar
A esterilizacao de ar pode ser realizada por diversos processos. No entanto,
a filtracao e, sem duvida, a solucao rnais conveniente, motivo pelo qual se dara a
ela maior enfase. .
5.4.1 - Esterilizacao por aquecimento
Sabe-se que a resistencia adestruicao de microrganismos, quando submeti
dos ao calor seco, ebern superior quando comparada aresistencia ao calorumido.
Por esse motivo, a esterilizacao do ar pelo calor seco exige temperaturas relativa
mente elevadas, assiin como tempos de permanencia nestas temperaturas tambem
elevados. Ainda, 0 transporte de microrganismos por partfculas solidas de poeira,
em virtude da possibilidadede alguma protecao termica, acaba contribuindo para
a necessidade de condicoes de esterilizacao mais drasticas.
I
\
76 Esterilizao de ar
Quando se raciocina em termos de aplicacao industrial, constituida de reato
res de grande porte, ha a necessidade de vaz6es de ar bastante elevadas (observe 0
que foi descrito na IntroducaojvIsso dificulta imaginar 0 aqu.ecimento de todo
esse ar para atingir essas elevadas temperaturas, assim como e impossivel projetar
tubos de retencao ou de espera suficientemente longos, a fim de se contar com os
tempos de residencia prolongados a essas temperaturas.
Devido a esses problemas, a esterilizacao de ar por calor seco encontra ape
nas aplicacao para pequenas instalacoes, como e 0 caso da esterilizacao do ar para
equipamentos de laborat6rio ou escala piloto. Acrescente-se, ainda, que com 0
surgimento de sistemas de esterilizacao muito confiaveis, como e 0 caso das mem
branas filtrantes (vide adiante), a esterilizacao por aquecimento tornou-se alterna
tiva muito pouco utilizada.
Para se ter uma ideia mais concreta a respeito da possibilidade do uso dessa
tecnica, pode-se citar 0 trabalho de DECKER et al.,t6 que determinaram as condi
de esterilizacao, trabalhando com esporos de Bacillus globigii e usando urn es
terilizador de ar por resistores eletricos. Os resultados obtidos pelos citados
) pesquisadores encontram-se na Tabela 5.l.
t
II
Tabela 5.1 - Esterilizacao de ar por calorseco, Ensaioscom esporos de Bacillus giobigii,I6
r

i..:
;Ii

iii

Iii

Temperatura Cc) Tempo de perrnanencia" (s)
' f!

218 24



246 10
274 5
300 3
li
"
.'
-
, .
:.;, .
, .

'"Paradestruicao superiora 99.9999%

Conforme pode ser observado, apenas temperaturas relativamente elevadas
permitem tempos de exposicao da ordem de alguns segundos, 0 que c1aramente li
mita a utilizacao dessa tecnica, em se tratando de elevadas vaz6es de ar .
Em virtude da facilidade de construcao ede controle, a esterilizacao de ar
por aquecimento atraves de resistores eletricos ainda encontra possiveis aplica
coes, para 0 caso de ar de exaustao de camaras assepticas, especialmente quando
se trabalha com microrganismos patogenicos, ou para 0 fornecimento de ar esteri
lizado para instalacoes de laborat6rioou plantas piloto de pequenas dimensoes.
o processo consiste em forcar a passagem do ar atraves de resistores eletri
cos,onde 0 ar e aquecido e, atraves de sistema adequado, obriga-lo a permanecer
o tempo necessario a altas temperaturas. Urn exemplo desse tipo de equipamento
e 0 proposto pela New Brunswick Sci. CO.,t7que permite vaz6es de ate 200 litros
de ar/min, 0 que pO,deria satisfazer a necessidade de urn reator de 100 litros aera
do com ate 2 min". E tambem possivel esterilizar 0 ar que sai do reator, fazendo-o
passar por urn segundo sistema, 0 que pode ser de interesse quando se trabalha
com patogenicos.
----- --_._..- .- -.. -- - -
Metodos paraa esterilizacaode ar 77
Na Figura 5.7 encontra-se urn desenho esquematico de urn equipamento desse
tipo, observando-se que 0 ar ao entrar no sistema e preaquecido pelo ar que deixa 0
equipamento, sendo, a seguir, conduzido para 0 contato direto com os resistores,
atingindo temperaturas da ordem de 370C. 0 ar esterilizado, alem de trocar calor
com 0 ar que entra, ainda e resfriado por agua em uma serpentina adicional.
Centrale de
Reslstenclas temperatura
Resfriamente
Safda de ar
205C
01('
U
~

r::
~
M
,th
/JfJ:::
~
(j\ "'
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0
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0
I 1
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0
0)
0
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0
0
0
0
0
0
7
Figura 5.7 - Equipamento para a esterilizacao de ar por aquecimento atraves de resistoreseletricos./
Todo 0 trajeto do ar deve ser inicialmente esterilizado por vapor. Quando
em operacao, 0 sistema e controlado por pares termeletricos que comandam val
vulas solen6ides, que apenas permitem a passagem do ar para 0 tanque, ou a des
carga de gases para a atmosfera, caso a temperatura das camaras de esterilizacao
. se mantenha em valores adequados.
Urn aspecto interessante a ser abordado neste momento, em se tratando de
reatores de gr ande porte, diz respeito anecessidade de se comprimir 0 ar que e en
viado aos reatores, ate pressoes efetivas da ordem de 3 kg*/cm
2
, a fimde veneer
uma serie de perdas de carga como a existente nos filtros para a esterilizacao do
ar, no dispersor do ar no fundo do reator, altura da coluna liquida de 'meio de cul
tivo e a sobrepressao mantida na "cabeca" do reator (da ordem de 0,2 a 0,5
kg*/cm\ a fim de evitar a entrada do ar ambiente que proporcionaria contamina
coes (entende-se por "cabeca" do reator 0 volume interno acima do liquido) .
---_.- -_.._- -_ .."._ _-_ .
- .----_.._-- _._-,..-,.. - ...~ ...~ _ ..-- ...--.. - -;-- --..- ._ --_.. - ~ . _ - .. ~ ..-_. -. -,-_ .----- --_.
78 Esterilizao de ar
Essa compressao obrigat6ria do ar provoca inevitavelmente urn aquecimen
to do ar, atingindo-se valores que nao sao desprezfveis. Assim, urn compressor es
tacionario, tipo helicoidal, provoca, para uma vazao de ar de 170 m
3/min
e
descarga a 3 kg Zcm", urn aquecimento do ar de 20C a cerca de 180C, alem de ser
necessaria uma certa filtracao do ar, na entrada do compressor, para evitar urn
maior desgaste de suas partes m6veis.
Justamente por esse motivo enecessaria a instalacao de urn sistema de res
friamento db ar ap6s a compressao, para evitar a circulacao do ar aquecido, assim
como evitar a introducao de ar quente nos reatores, 0 que complicaria 0 controle
de temperatura, alem de possivelmente causar gradientes de temperatura ao lon
go da altura da coluna liquida em fermentacao. Esse resfriamento e efetuado logo
a saida do compressor, de forma que 0 ar permanece aquecido por urn pequeno
intervalo de tempo (frequentemente inferior a 1 segundo).
Conforme ja mencionado, temperaturas inferiores a 200C sao pouco efeti
vas para a obtencao de ar esterilizado. Sabe-se, no entanto, que as temperaturas ci
tadas sao suficientes para inativar celulas vegetativas, apesar do baixo tempo de
permanencia, restando desta maneira os esporos e as celulas que possam estar
protegidas de alguma forma. Por outro lade, caso se imaginasseatingir tempera
turasda ordem de 300C, a fim de obter ar esterilizado em poucos segundos de
permanencia (vide Tab. 5.1), significaria, dependendo do tipo de compressor e da
vazao de ar necessaria, comprimir 0 ar a press5es bern rnais elevadas (da ordem
de 10 a 12 kg*/ em"), 0 que traria urn encarecimento excessivo tanto do equipamen
to, quanto no que se refere ao consumo de energia, nao sendo portanto uma solu
c;ao de interesse. .
PARIS et al.,3 efetuaram a determinacao da concentracao demicrorganismos
ap6sa compressao e 0 resfriamento do ar, determinacoes estas efetuadas em uma
instalacao industrial dotada de urn compressor helicoidal, operandoa vazao de
145 m
3/min
e pressao de descarga de 2,5 kg*/ em", 0 que permitia atingir cerca de
160C. Esses autores obtiveram valores medics da ordem de 1 a 2 partfculas/m".
Assim sendo, a reducao observada e extremamente significativa, quando
comparada ao valor da concentracao de microrganismos suspensos no ar (vide
item 5.2), 0 que sugere que 0 ar, ap6s acompressao em instalacoes de grande por
te, deve ser manuseado com certos cuidados, tendo em vista sua razoavel desin
feccao, evitando-se que novamente venha a ser contaminado pelo ar atmosferico.
Outra sugestao seria efetuar, quandopossfvel, 0 resfriamento do ar em local mais
pr6ximo de sua utilizacao final e nao imediatamente ap6s a compressao, aumen
tando-se 0 tempo de residencia a altas temperaturas.
Existe, inclusive, mencao na literatura a respeito da conducao de processos
fermentativos com sucesso, sem a presenc;a de sistemas para a esterilizacao do ar,
contando-se apenas com essa destruicao de contaminantes durante a compres
sao." Isso, de forma alguma, deve significar que essa ideia deva ser generalizada e
que seriam dispensaveis os sistemas adicionais para a esterilizacao do ar, especial
mente quando se esta diante de processos de Ionga duracao e empregando condi
coes e meios de cultivo pouco seletivos. .
.__. ----- -_._ - - _ ~
Metodos paraa de ar 79
5.4.2 - Esterilizacao par radiacoes
Teoricamente, muitos tip os de radiacoes podem ser utilizadas para a esteri
lizacao do ar. Entretanto, 0 emprego de uma determinada radiacao deve levar ern
conta uma serie de importantes fatores, tais como: a eficiencia na destruicao de
microrganismos, 0 custo envolvido na obtencao da radiacao, a periculosidade ou
os efeitos colaterais de sua }ltiliza<;ao. Assim excluem-se para esse tipo de aplica
<;ao as particulas a, pr6tons e neutrons, por serem excessivamente dispendiosos
quanta a sua obtencao e aplicacao pratica, 0 mesmo ocorrendo corn as radiacoes y.
Quando se visa a esterilizacao de ar, apenas as radiacoes ultravioleta encon
tram aplicacao pratica. Ern virtude de seu baixo poder de penetracao, os raios ul
travioleta necessitam de tempos de exposicao relativamente longos, fato este que,
novamente, impede 0 uso deste tipo de radiacao para a esterilizacao de ar para urn
processo fermentativo. .
Ern se tratando do fornecimento de ar esterilizado para camaras assepticas,
imaginou-se instalar Iampadaaultravioleta ern certos trechos do duto que leva 0
ar para a camara. No entanto, mesmo para esse caso, dependendo das dimens6es
dessa camara, as vaz6es de ar ja podem ser muito elevadas, nao permitindo tempo
suficiente de exposicao ao ultravioleta, havendo, assim, a necessidade da instala
<;ao de sistemas adicionais (filtros) para a efetiva esterilizacao do ar .
Corn frequencia observa-se a instalacaode Iampadas ultravioleta no interior
de salas assepticas, especialmente sobre os locais de trabalho, visando a esteriliza
<;ao do ar circundante e das superficies das mesas e instrumentos empregados (por
exemplo, no preenchimento asseptico de medicamentos). Como 0 ar que se intro
duz nessas camaras e previamente esterilizado e como se procura manter 0 ar 0
menos movimentado possivel, 0 emprego da radiacao ultravioleta, para este caso,
e mais efetivo.
5.4.3 .; Esterilizacao par filtracao
A esterilizacao do ar por filtracao e, sem duvida, a solucao mais adequada
para a obtencao de altas vaz6es de ar esterilizado, ern virtude dos baixos custos
envolvidos nesta operacao, alem de se dispor, presentemente, de filtros bastante
confiaveis. Por esses motivos, a filtracao e encontrada ern praticamente todas as
instalacoes industriais, tendo tambem dominado as aplicacoes ern instalacoes de
pequeno porte, como e 0 caso de instalacoes piloto ou de laborat6rio.
Historicamente, muitos materiais filtrantes foram empregados, tais como
carvao, algodao ou papel. Posteriormente esses materiais foram substituidos por
outros materiais fibrosos, como e 0 caso de filtros de la de vidro. Estes ultimos en
contraram enorme aplicacao, constituindo-se na solucao mais adequada ate mea
dosou 0 final da decada de 70.
Mesrno no inicio dos anos 70 surgiram os filtros de materiais sinterizados,
. como 0 vidro, metais (bronze, aco .inoxidavel) e materiais ceramicos, aparecendo
tambem os filtros de membranas ou placas porosas de materiais polimericos, tais
como 0 nailon, 0 teflon ou esteres de celulose.
\
80 Esteriliza o de ar
De fato, era possivel preyer, ern meados da decada de 70, que os filtros de
membranas polimericas porosas poderiam dominar essa operacao," 0 que de fato
acabou ocorrendo, havendo uma gradual substituicao dos filtros de la de vidro
pelos filtros de membranas hidrof6bicas, especialmente a partir de meados da de
cada de 80.
Mencionando-se 0 passado e 0 presente, poder-se-ia tambem imaginar que,
no futuro, possivelmente se passe a empregar membranas seletivas, ou seja, mem
branas que alem de esteriIizar 0 gas a ser introduzido no reator, tambem possam
provocar urn enriquecimento do gas ern oxigenio." Na verdade, 0 principal objeti
vo da aeracao, ern reatores aerados e agitados, consiste na transferencia do oxige
nio da fase gasosa para a fase liquida, nao tendo sentido a Introducao no reator de
enormes quantidades de nitrogenio. Assim, 0 uso de membranas polimericas
(como 0 polietileno ou 0 silicone), alem do possfvel emprego de membranas liqui
das, podera significar urn enorme avanco nesse campo, como ja ocorre presente
mente no cultivo de celulas animais.
Antes de se passar ao detalhamento dos filtros disponiveis, convem alertar
qualquer que seja 0 sistema de esterilizacao do ar que se pretenda empregar,
deve-se preyer urn filtro para cada reator, nao se devendo optar, no projeto da ins
talacao, por urn sistema centralizado de esterilizacao, seguido da distribuicao do
ar para os varies reatores. Esse procedimento centralizado nao e conveniente, in
dependentemente das dimens6es dos reatores e, portanto, das vaz6es de ar neces
sarias, pois coloca-se ern risco todo 0 conjunto de reatores, caso ocorra a falha do
sistema de filtracao. A eventual economia que se possa fazer, quanto ao investi
mento inicial, nao justifica 0 risco que se ira correr ao longo da operacao da planta.
5.4.3.1 - Filtros de materiais fibrosos
Apesar de se observar uma aplicacao industrial menos intensa, os filtros de
materiais fibrosos, particularmente os filtros de la de vidro, ainda saoencontrados
ern algumas instalacoes, razao pela qual serao descritos no presente item.
Nesses filtros observa-se que os poros ou intersticios entre as atraves
dos quais ocorre a passagem do ar, sao de dimens6es maioresdo que 0 diametro
das fibras, empregando-se normalmente fibras corn diametro medic da ordem de
3 urn, ou ate mesmo fibras de 19 urn.
Por esse motivo a retencao dos microrganismos suspensos no ar nao ocorre
apenas por impacto direto, ou retencao mecanica, havendo a participacao de diver- .
sos outros mecanismos para a observada eficiencia global da camada fibrosa filtran
te.
19
Tambem por essa razao a operacao e designada como filtracao ern profundida
de, pois as particulas sao retidas ao longo de toda a altura da camada filtrante.
Na Figura 5.8 encontra-se 0 desenho esquematico de urn filtro de la de vi
dro, assim como alguns detalhes necessaries para sua instalacao.
Como se observa, consiste simplesmente num recipiente, normalmente ern
aco inoxidavel, corn dimensoes da ordem de 2 a 3 m de altura e 1 a 1,5 m de dia
metro, dimens6es estas que sao variaveis, dependendo da quantidade de Hi de vi
dro que deve acomodar. Na parte inferior conecta-se a tubulacao de entrada do ar
e, na partesuperior, a de saida para 0 fermentador.
-- - . . " " - _. . . ..---
Metodos paraa esterilizac;ao de ar 8I
Vapor
~
,
,
~
---=-=---- ----- - --=--- - - - Ar
esterilizado
Entrada
do ar
-
~
Salda de
condensados
Figura 5.8 - Esquemade umfiltro tradicional de lade vidro para aesterilizac;ao do ar.
A camada filtrante ocupa a parte central do recipiente, apresentando dimen
s6es variaveis dependendo de uma serie de fatores, tais como vazao de ar e dia
metro do recipiente (a eficiencia de coleta de aeross6is depende da velocidade de
passagem do ar atraves do leito filtrante e, portanto, depende da vazao do ar e do
diametro do recipiente), compactacao da camada filtrante (massa de fibras no vo
lume de filtracao), diametro da fibra e eficiencia de retencao desejada." Apenas
para se ter uma ideia a respeito da espessura de urn leito filtrante desse tipo, po
dem-se mencionar alturas da ordem de 1,3 a 1,8 m.
A camada de la de vidro esustentada por uma grade de ferro ecomprimida
por uma segunda grade, colocada na parte superior da camada filtrante. Ap6s 0
preenchimento do recipiente com a la de vidro, coloca-se a tampa que veda perfei
tamente 0 sistema. Nessa tampa existem hastes que servem para fixar a grade su
perior, impedindo que ocorra a movimentacao da camada filtrante, quando
submetida a elevadas vazoes de ar.
o preenchimento do filtro com a la de vidro deve ser feito de forma muito
cuidadosa, procurando-se distribui-la uniformemente em todo 0 volume disponi
vel, buscando evitar a ocorrencia de zonas contendo menos fibras, 0 que propicia
ra a formacao de caminhos preferenciais para a passagem do ar. Obviamente esses
caminhos preferenciais, com menor perda de carga, poderao comprometer a efi
ciencia do filtro. Nesse sentido, urn cuidado todo especial deve ser dedicado a
zona pr6xima as paredes do recipiente, local especialmente propicio para a forma
~ a o destes caminhos preferenciais. .
Justamente para diminuir a possibilidade de formacao de caminhos preferen
ciais, busca-se trabalhar com camadas filtrantes bastante compactadas e, por isso
mesmo, de menor espessura (menor altura da camada filtrante). Ainda, no caso de
serem necessarias camadas filtrantes muitoespessas, pode-se providenciar a colo
cacao de grades intermediarias ao longo da altura do leito filtrante.
lio......-._ _. ' ' ~ _ ~ " ' _ ' ~ ' _ ' ' '__ ' ~ ' ' . _
\
82 Esterilizao dear
A fim de evitar 0 deslocamento de fibras, ha a possibilidade do uso de la de
vidro embebida em resinas e compactada em mantas de pequena espessura (por
exemplo, mantas de cerca de 0,5 cm de espessura). 0 emprego dessas mantas tor
na 0 leito filtrante bern menos espesso, em virtude da maior compactacao, obten
do-se umacamada filtrante bern mais regular.
Essas mantas sao colocadas em recipientes como 0 esquematizado na Figura
5.8, se bern que de menores dimensoes, sendo tambem comprimidas como no caso
anterior. Para evitar 0 problema da zona periferica, existem sistemas de vedacao
atraves de flanges, de forma a impedir a passagem do ar.
Quando se trabalha com filtros de la de vidro, sempre se busca fazer com
que 0 ar passe atraves da camada filtrante a uma temperatura superior a ambien
te, de forma a manter a camada aquecida e evitar a condensacao de umidade. Sa
be-se que uma camada fibrosa umedecida apresenta uma menor eficiencia de
retencao de aeross6is, provavelmente em virtude de uma menor contribuicao do
mecanismo de retencao devido a atracao eletrostatica (cargas eletricas distintas
entre aeross6is e as fibras, causando atracao que contribui para 0 choque daspar
ticulas contra as fibras e sua retencao) .
Por esse motivo, 0 ar aquecido pela compressao normalmente eresfriado de
forma a passarpelo leito filtrante a 40 ou 50C. Alternativamente pode existir na
parte inferior do recipiente, que contem 0 leito filtrante, urn conjunto de resistores
eletricos, com a finalidade de aquecer 0 ar . Esses resistores podem tambem ser
empregados para a esterilizacao do filtro por calor seco, empregando-se, para esta
finalidade, temperaturas da ordem de 180 a 200C durante 2 horas.
Como seria de se esperar, antes de iniciar 0 fornecimento de ar para 0 reator,
o filtro deve ser submetido a uma esterilizacao, a fim de evitar que microrganis
mos aderidos as fibras possam ser arrastados para 0 tanque.
Apesar de existir a possibilidade de executar essa esterilizacao por calor
seco, conforme mencionado acima, 0 que evita 0 umedecimento das fibras, na
maioriadas instalacoes esta operacao e executada atraves de vapor saturado,
empregando-se vapor a uma pressao efetiva de 1 kg*/ em" durante 2 h, ou vapor
a 3 kg*/ em" durante 1 h. Nesse caso; fecha-se a comunicacao entre 0 filtro e 0 re
ator e 0 registro de entrada do ar, introduzindo-se 0 vapor pela parte superior do
recipiente (vide Fig. 5.8), deixando-se 0 registro de saida de condensados inicial
mente aberto. Ap6s a completa expulsao do ar, operacao esta de fundamental
importancia para 0 sucesso daesterilizacao, fecha-se esse ultimo registro, permi
tindo que ascondicoes mencionadas sejam atingidas.
Terminada a esterilizacao, passa:..se ar aquecido atraves da camada filtrante,
a fim de secar completamente 0 leito fibroso, obtendo-se desta forma 0 filtro em
condicoes de operacao.
A esterilizacao pelo vapor pode causar uma certa contracao do leito filtran
te,especialmente no caso de filtros que tenham sido pouco compactados. Para
esse caso, antes de iniciar 0 fornecimento de ar esteril para 0 processo, convem
proceder-se a abertura do recipiente e observacao da camada, completando-se
com quantidade adicional de la devidro, caso seja necessario. Obviamente 0 filtro
deve ser submetido a umanovaesterilizacao.
'.'." .
Metodos paraa esterilzacao de ar 83
Alem desse problema, existem outros associados ao uso de vapor. Normal
mente 0 filtro deve ser esterilizado ao final de cada processo fermentativo, de for
ma a se iniciar 0 processo seguinte em perfeitas condicoes de seguran\a. Com isso
os filtros sao esterilizados com muita frequencia (da ordem de uma vez por sema
na), ocorrendo uma deterioracao da la de vidro, a qual vai se tornando opaca e
quebradica, havendo urn nitido aumento da perda de carga e diminuicao da efi
ciencia de coleta da camada filtrante (formacao de canais preferenciais). Esses fa
tos tarnbem ocorrem com as fibras impregnadas com resinas.
A ocorrencia de fibras quebradicas causa tambem 0 arraste de pequenos pe
dacos de fibras, juntamente com a corrente de ar. A perda de eficiencia, 0 aumento
da perda de carga e esse arraste, obrigam a se providenciar a troca completa da ca
mada filtrante ap6s algum tempo de operacao. Esse tempo depende das condicoes
de utilizacao do filtro, mas pode-se citar, como intervalo razoavel, a troca do leito
filtrante a cada 4 meses, quando se executa uma esterilizacao do filtro por semana.
Essa operacao de troca do material filtrante esempre complicada na indus
tria, pois, como se deve contar com urn filtro para cada reator e freqiientemente
dispoe-se de varies reatores, se estara manuseando la de vidro com muita fre
quencia, 0 que nao e apreciado pelos operarios incumbidos desta tarefa, aumen
tando as possibilidades de uma operacao nao adequada, 0 que coloca em risco a
conducao asseptica do processo.
Todos esses problemas permitiram 0 surgimento de filtros mais adequados,
no caso os filtros de membranas polimericasporosas, que serao abordados no item
seguinte. Tais filtros encontram hoje grande aplicacao, conforme ja salientado an
teriormente.
Por essa razao nao se pretende, no presente texto, apresentar mais detalhes
sobre os varies mecanismos de coleta de aeross6is por materiais fibrosos, assim
como nao serao detalhados os procedimentos para 0 dimensionamento dos filtros
de la devidro. Tais detalhes podem ser encontrados, caso 0 leitor tenha necessida
de, no texto anterior a respeito desse tema.
19
,
5.4.3.2 - Filtros de membranas
as filtros de membranas microporosas, elaboradasa partir de materiais po
limericos, em geral apresentando caracteristicas hidrof6bicas, proporcionam a re
tencao dos aeross6is microbianos na superficie do elemento filtrante, havendo
portanto a retencao apenas por impacto direto das particulas contra 0 filtro, 0 qual
apresenta poros de dimens6es menores do que os microrganismos a serem reti
dos. Normalmenteutilizam-se membranas com poros de 0,2 ou 0,22 urn, ou ainda
membranas de 0,45 urn. Essa earazao pela qual esses filtros sao tambem chama
dos de filtros absolutos.
Na realidade, no inicio do surgimento de altemativas aos filtros de materiais
fibrosos, uma serie de outros materiais foram empregados, como e0 caso de metais
sinterizados (como 0 bronzee 0 aco inoxidavel), materiais ceramicos e vidro sinte
rizado. No entanto, com 0 decorrer do tempo, praticamente os materiais polimeri
cos dominaram esse tipo de aplicacao, encontrando-se especialmente filtros
esterilizantes elaborados a partir do politetrafluoretileno (PTFE -'- "teflon" )."
""" " ' " '' . ' '''' ''
, I
I
"
",," ' ''' " _ - - ~ - - - ~ ~ ...
\
84 Esterilizao de ar
o emprego de materiais polimericos hidrof6bicos easpecto de importancia,
pois estes filtros tambem devem ser esterilizados por vapor, antes do inicio da
operacao de esterilizacao do ar, havendo ainda a possibilidade da presen\a de
umidade no ar a ser esterilizado. Assim, essa agua nao deve permanecer no filtro,
pois isto poderia causar 0 crescimento de microrganismos na superficie do ele
mento filtrante, colocando em risco a obtencao de ar esterilizado, alem de provo
car urn certo bloqueio a passagem do ar pelos poros, 0 que significaria urn
aumento inconveniente da perda de carga."
Normalmente, esses filtros sao fornecidos na forma de discos, ou, rnais fre
quentemente, para 0 caso de filtros para a esterilizacao do ar para instalacoes de
grande porte, na forma de cartuchos contendo a membrana filtrante montada so
bre uma estruturade polipropileno. A Figura 5.9 ilustra a proposta desses filtros
na forma de discos ou cartuchos.

Figura 5.9 - Filtros de membranas polirnericas rnkroporosas(gentileza de CUNO INC. - Com. Intertech do Brasil
Ltda.)
, .
re.r.
" ' .
Metodos paraa esterilizao de ar 85
Conforme se pode observar, os elementos filtrantes sao acomodados no inte
rior de recipientes em aco inoxidavel, sendo que estes recipientes sao construidos
a fim de abrigar urn mimero variavel de elementos esterilizantes e, ainda, de di
mensoes distintas. Como se nota na Figura 5.9, 0 recipiente maior e destinado a
abrigar varies cartuchos, cada urn deles montados unindo-se tres cartuchos de
25,4 em (10") de comprimento. 0 ar entra e sai pela parte inferior do recipiente,
sendo que a entrada efeita pela parte externa dos cartuchos, sendo 0 ar forcado a
atravessar 0 elemento filtrante, saindo pela parte interna dos cartuchos.
Tratando-se de filtros absolutos, em principio, a retencao dos microrganis
mos independe da velocidade de passagem do ar, ao contrario dos filtros de ca
madas fibrosas, mas 0 aumento da velocidade superficial do ar acarreta urn
aumento da perda de carga no elemento filtrante. Alem disso, velocidades exces
sivas podem provocar vibracoes inconvenientes, comprometendo os sistemas de
vedacao.
o dimensionamento de urn sistema: de filtracao etarefa bastante simplifica
da, pois sabendo-se a vazao maxima de ar a ser empregada no processo (lembran
do sempre a necessidade de se preyer urn filtro para cada reator), pode-se
especificar urn mimero adequado de elementos filtrantes (cartuchos), que deverao
ser acomodados no filtro, definindo desta forma uma area adequada de passagem
deste ar, a fim de se ter baixa velocidade superficial e, portanto, baixa perda de
carga no filtro (lembrando, tambem, que a pressao do ar , na descarga do compres
sor, deve ser suficiente para veneer a coluna.Iiquida no interior do reator, a sobre
pressao na cabeca do rea tor e, ainda, as perdas de carga distribuidas nas valvulas
e tubulacoes) . Dessa forma, essa perda de pressao no filtro deve ser a minima pos
sivel, atraves da manutencao de velocidades relativamente baixas (Q = Vs.S, onde:
Q=vazao de ar, Vs=velocidade superficial do ar e S=area do(s) elemento(s) filtran
te(s) para a passagem do ar).
As varias -empresas capacitadas para fornecerem esse tipo de filtro ja dis
poem de propostas adequadas para as necessidades de uma determinada planta,
indicando-se nas Figuras 5.10 e 5.11 alguns dados a respeito desta perda de pres
sao, em funcao da vazao dear, para elementos filtrantes de 25 em (10") ou 100 em
(40") de comprimento, respectivamente." .
Conforme fica evidente nessas figuras, as perdas de carga sao realmente re
duzidas, e 0 aumento do comprimento do elemento filtrante, 0 que significa au
mentar a area de passagem do ar, permite 0 emprego de vazoes mais elevadas
com menores perdas de carga. Observa-se, tambem, em ambas as figuras, que urn
aumento da pressao de entrada do ar para uma mesma vazao, acarreta uma menor
perda de pressao, 0 que edevido a urn aumento da densidade do gas com 0 au
mento da pressao.
A Figura 5.12 permite uma ideia simplificada a respeito da forma de instalar
urn filtro de membrana emuma linha de fornecimento de ar esterilizado para .um
biorreator. Normalmente, com afinalidade de aumentar a vida util do filtro, suge
re-se a instalacao de pre-filtros, construidos com materiais mais grosseiros e de
baixo custo, a fim de retirar do ar particulas de poeira de maiores dimensoes.
I I
I
,
I
I
I'
\
86 de ar
Perda de carga (mbar)
600 ,...-----=--'---------------------,
, ,
;' ,
500
400
300
200
, :
100
o
o 50
Figura 5.10 - Perda decarga emfun<;aodavazao dear (expressa emmetroscobicosdear, nascondicoes normais,
por hora), para filtro tipo cartuchode 10". da Millipore Co.
2
100 150 200 250 300 350 400
Vaz30 de ar (Nm%)
400
300
200
100
o
Perda de carga (mbar)
o 100 200 300 400 500 600 700 800
Vaz30 de ar (Nm%)
Figura 5.11 - Perda decarga emfun<;ao davazao dear, parafiltrotipo cartucho de 40" decomprimento,daMillipo
re CO?2
Como se pode observar, deve-se prever a entrada de vapor a fim de esterili
zar 0 filtro, devendo este vapor ser devidamentefiltrado, para evitar 0 acumulo
de s6lidosna superficie do elemento filtrante. Nos instantes iniciais, a valvula de
dreno do recipiente que contern 0 filtro (detalhe 1 na Fig. 5.12), deve ser mantida
aberta paraa expulsao doar, para que se possa atingir a temperatura adequada de
esterilizacao. Tambem, ap6s a esterilizacao, passa-se ar pelo sistema, permitindo
que este ar saia pelo dreno de linha (detalhe 2 na Fig. 5.12), a fim de drenar a agua
que tenha ficado retida. Finalmente, pode-se fechar esse dreno e abrir a valvula
que comunica 0 filtro com 0 reator.
r'
Metodos paraa esterilizacao de ar 87
Filtro
absoluto
(1 )
----' *-__---'-__--'
Vapor
Reator
Ar
Figura 5.12 - Esquema geral paraa instalacao de umfiltro de membranapoirnerica(absoluto).
Nao se procede aesterilizacao de pre-filtros.
as filtros existentes no mercado sao bastante resistentes aesterilizacao, ha
venda mencoes da possibilidade de efetuaralgo como 150 esterilizacoes a 145C
por 30 min. Novamente, supondo-se a execucao de uma esterilizacao por semana,
isto significaria algo como 3 anos de operacao. No entanto, encontram-se suges
toes na literah.i.ra
6
,15,23 segundo as quais se deve providenciar a troca dos elementos
filtrantes uma vez por ano, 0 que significaria algo como 50 esterilizacoes. Clara
mente ha a possibilidade de operacoes mais prolongadas, mas deve ocorrer urn
aumento da perda de pressao nos elementos filtrantes, aumento este que depende
da qualidade do ar que chega amembrana esterilizante.
A troca dos elementos esterilizantes e muito simples, requerendo pouco
tempo para a sua realizacao, No entanto, tal operacao deve ser efetuada com todo
cuidado, a fim de nao se .danificar a membrana filtrante, alem de posicionar ade
quadamenteos aneis de vedacao do sistema. Ap6s a operacao de troca de cartu
chos, deve-seefetuar testes de manutencao de pressao interna, a fim de verificar a
existencia de vazamentos, assim como e recomendavel a realizacao de testes de
efetiva obtencao de ar esterilizado, atraves do uso deamostradores.
As diversas empresas fornecedoras desse tipo de filtros, normalmente ga
rantem a integridade dos seus produtos, pois efetuam testes antes da entrega do
material, de forma que falhas eventuais, mais frequenternente, sao atribuidas aum
manuseio nao adequado dos elementos filtrantes.
5.4.3.3 - Filtros HEPA
as filtros HEPA ("High Efficiency Particulate Air") sao os filtros especial
mente empregados em camaras assepticas, ou areas limpas. Sao placas de acetato
de celulose, apresentando'" uma eficiencia de 99,97% na remocao de particulas de
diametro medic 0,3 urn, ou ainda elaborados a partir de fibra de vidro, apresen
tando" eficiencia superior a 99,97% na remocao de particulas superiores a 0,5 urn.
Normalmente esses filtros sao montados com varies elementos filtrantes se
parados por folhas de aluminio, de forma a se obter uma grande area para a passa
1
I
I.
1
\
88 de ar
gem do ar e, desta forma, possibilitar 0 uso de ventiladores, evitando a necessidade
de compressores, em virtude da baixa perda de pressao atraves do leito filtrante.
, !
Conforme salientado, esses filtros sao empregados especialmente em ca
maras assepticas, registrando-se que presentemente predominam as chamadas
camaras de luxo laminar, ou seja, camaras nas quais a velocidade de circulacao
do ar ebaixa, de forma a se contar com urn luxo em regime laminar. Dessa forma,
imagina-se que os contaminantes gerados no interior da camara possam ser retira
dos deste ambiente pelo proprio fluxo de ar, impedindo que urn luxo turbulento
possa causar urn acumulo de contaminantes,
Urn exemplo de uma camara desse tipo esta indicado na Figura 5.13, a
qual ilustra urn sistema com circulacao vertical de ar. 0 ar penetra pelo teto da
camara, saindo pelo piso da mesma, circulando a uma velocidade da ordem de
50 cm/s.
24
flltro HEPA
ventilador grade pre-filtro ventilador
Figura 5.13 - Camaraasseptica comf1uxo laminar vertical de ar.
24

Existem muitas outras ideias a respeito do assunto, conforme 0 tipo de tra
; 1
balho a ser executado. Assim, existem camaras de luxo horizontal, nas quais 0 ar
J
entra por uma das paredes e sai pelo lado oposto.
h
n
Em uma camara de luxo laminar, naose deve contar com a de urn
11
ruimero exagerado de equipamentos, ou mesmo de pessoas circulando, pois efacil
compreender que qualquer obstaculo provoca turbilhoes no ar, nao se obtendo urn
luxo em uma determinada direcao.

Por esse motivo, nas camaras onde se executa a embalagem de produtos
com assepsia, nao se pode.imaginar urn luxo laminar em toda a camara, em virtu
de de suas dimensoes. Em alguns casos, tanto quanta possivel, introduz-se no in
terior de uma camara convencional, no local onde se executa uma determinada
operacao mais delicada, urn gabinete ou capela de luxo laminar, 0 que torna a
operacao mais segura.
Tais capelas de luxo laminar dear, sao presentemente muito comuns em la
boratorios que manuseiam culturas puras de microrganismos, ou mesmo para a
,--- _._- - - - - - - - - . --,--'--- - - -- - --- - . _ - -- . -. __
~ -
Metodos paraa esterilizacao de ar 89
execucao de transferencias de meios de cultura previamente submetidos aesterili
zacao. Na Figura 5.14 indica-se urn esquema geral de uma capela desse tipo."
Em instantes anteriores a utilizacao da capela, recomenda-se efetuar uma
desinfeccao das superficies, empregando-se etanol ou outras solucoes desinfetan
tes, permitindo-se ainda que a capela permaneca fechada durante algum tempo e,
adicionalmente, ligando-se uma Iampada ultravioleta para a desinfeccao do seu
interior. Ao iniciar a operacao asseptica, desliga-se a Iampada ultravioleta, acio
na-se a circulacao do ar, tomando-se sempre a precaucao de evitar urn excesso de
movimentacao no interior da capela.
o conceito de luxe laminar encontrou varias aplicacoes, havendo diferentes
sistemas operando em distintas condicoes, como e 0 caso de operar com velocida
des de circulacao do ar muito baixas, da ordem de 0,1 m/s e ate 0,075 m/s.
25
ventilador
vidraca
corredica
filtro
HEPA
superflcle
de
trabalho
Figura 5.14 - Capela de f1uxo laminar.
24
Pode-se, inclusive, contar com camaras de luxe laminar portateis, ou seja,
que podem ser facilmente deslocadas para locais da industria onde seja necessaria
uma dada operacao asseptica. Essas camaras sao fechadas por uma cortina de ma
terial plastico, havendo no teto urn sistema de distribuicao do ar. Esse ar e forneci
do por uma unidade colocada ao lado da cabine, unidade esta que contern 0 filtro
HEPA. Dessa forma 0 ar circula verticalmente, saindo pela parte de baixo das cor
tinas. Quando adequadamente operados, esses sistemas portateis permitem a ob
tencao de ambientes protegidos, em.principio em qualquer lugar da industria. .
. . .. -- . ..--_. . . . . - - - - _ - - - - - - - - - - - - - - - - - . _ ~ - - - - - - _ ...-.------.--_ ._- ------._. - -----_...---_._---._ - - - - - - - - -
I

i
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,
I
"I
II
90 ar
:1
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5.5 - finais I 1
: )
'I
Conforme descrito anteriormente, a esterilizacao do ar para processos fer
i
mentativos que exigem uma rigorosa conducao em condicoesde assepsia, sem du
i
vida encontrou solucao mais adequada com 0 surgimento dos filtros de
:1
membranas polimericas hidrof6bicas, que substituiram os filtros de la de vidro
, :i
, ' I
anteriormente empregados.
' ;1
No entanto. .deve-se lembrar que esses filtros devem ser adequadamente
'
.. !
' .' .' i !
projetados, evitando-se 0 emprego de velocidades excessivas de ar atraves da
: I
!I membrana esterilizante, a fim de se contar com baixas perdas de pressao. Igual
:-1
.1 r:!
' ; I
mente, deve haver todo 0 cuidado com a instalacao, buscando uma efetiva veda
c;ao do sistema, para que nao ocorra contato entre 0 ar esterilizado e 0 ar
atmosferico (perfeita vedacao do recipiente que contem os cartuchos, perfeita ins
talacao dos cartuchos no recipiente, empregar cartuchos integros, utilizar regis
tros apropriados no trajeto do ar esterilizado, etc.) . E sempre titil 0 emprego de
pre-filtros, os quais deverao ser substituidos com uma maior frequencia, a fim de
ampliar 0 tempo de operacao da membrana esterilizante.
Deve-se, inclusive, lembrar que tanto os pre-filtros como os filtros deverao
ser substituidos, havendo anecessidade de urn facil acesso ao sistema, a fim de
que esta operacao possa ser rapida e efetuada com seguranca.
,
No caso dos processos fermentativos continuos, nos quais espera-se opera
c;ao ininterrupta por varias semanas, e interessante a instalacao de dois filtros em
!i
paralelo para cada reator. Dessa forma, pode-se providenciar a esterilizacao de
,I

urn filtro ap6s certo tempo de operacao (uma ou duas semanas, por exemplo), sem
j '
i!
[1
I
i
interromper 0 processo.
Finalmente, cumpre destacar a expectativa do surgimento de novos materiais
que permitam a operacao de separacao dos contaminantes do at atmosferico, mas
tambem proporcionem urn enriquecimento desse gas, permitindo a passagem pre
ferencial do oxigenio, 0 que ja e possivel conforme salientado no textb: seria po
rem desejavel que pudessem ser aplicaveis em instalacoes de grande porte.
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- - - - - - - - ----- --- - - - - ---
93
Haralda Hiss
6.1 -
o estudo cinetico de urn processo fermentativo consiste inicialmente na ami
lise da evolucao dos valores de concentracao de urn ou mais componentes do sis
tema de cultiv:o, em funcao do tempo de fermentacao. Entende-se como compo
nentes, 0 microrganisrrio (ou a biomassa), os produtos do metabolismo (ou meta
bolitos) e os nutrientes ou substratos que compoem 0 meio de cultura.
Tais valores experimentais de concentracao (X, PeS respectivamente),
quando representados em funcao do tempo, permitirao os tracados das curvas de
ajuste, conforme ilustrado na Figura 6.1 e indicados por X=X(t ), P=P(t) e S=S(t).
/ " x;
Tempo
Figura 6.1 - Curvas de ajuste dos resultados de uma experiencia idea lizada de fermentacao. X, PeS sao as con
centracoes do microrganismo, do produto e do substrato residual no meio, respectivamente.
L .. .. . ..__._--- _ .. ----- - ------ ---- --- - -- ----.-----,------ ..- ..._.. - -_.. _.. . ... -.._ ..- _... - ._-_. _._- ._ ..__.. _._-..
\
94 Cinetica de processos fermentativos
I
!
. . ; , ., . .
Dentre OS produtos formados, escolhe-se para 0 estudo cinetico, 0 produto
de interesse economico. Quanto aos substratos, adota-se 0 denominado substrato
limitante (comentado no subitem 6.2.3).
Quando as conclus6es sobre urn cultivo forem baseadas unicamente em dois
valores de X, 5 ou P (como e comum, por exemplo, sobre valores finais e iniciais),
nao se pode afirrnar que urn estudo cinetico do processo tenha side realizado; e
necessario, outrossim, 0 conhecimento dos valores intermediaries, que permitain
definir os perfis das curvas ou a forma matematica destas, para uma analise ade
quada do fenomeno sob 0 ponto de vista: cinetico,
Assim, tais perfis representam 0 ponto de partida para a descricao quantita- '
tiva de uma fermentacao como, por exemplo, a identificacao daduracao do pro
cesso, geralmente baseada no instante em que X e P apresentam valores maximos
rx, e r.; na Fig . 6.1).
Uma vez que esses valores representam parte de urn conjunto de dados, ne
cessarios ao dimensionamento de uma instalacao produtiva, fica evidente que sem
o conhecimento da cinetica torna-se inviavel a transposicao de urn experimento de
laborat6rio para a escala industrial.
Alem desse aspecto, cabe mencionar que a cinetica possibilita tambem uma
comparacao quantitativa entre as diferentes condicoes de cultivo (pH, temperatu
ra, etc .), por intermedio de variaveis, como: as velocidades de transformacao (su
bitem 6.2.1) e os fatores de conversao (subitem 6.2.3), obtidos tambem a partir das
curvas de ajuste X = X (t) , P = P(t) e 5 = 5(t).
Afirmar que urn determinado valor de pH, por exemplo, e melhor que um
outro, equivale a dizer que 0 fator de conversao (substrato em produto, por exem
plo) e maior no primeiro que no segundo caso. 0 mesmo pode ser afirmado quan.,.
do se comparam os desempenhos de cultivos sob diferentes temperaturas,
diferentes variedades de uma dada especie de microrganisrrio, diferentes compo
sicoes de meio, etc. ,
Convem frisar, entretanto, que os criterios de comparacao entre diferentes
condicoes sao relativos, isto e, dependem do que se espera obter de um determina
do processo fermentative. Assim, quando 0 tempo de duracao da fermentacao for
de primordial importancia por raz6es economicas, as produtividades (subitem
6.2.1) devem ser empregadas como referencias numericas, em vez de algum fator
de conversao,
Outro aspecto que merece atencao e que os metodos comumente utilizados
,
para a medida da concentracao celular X, a saber: turbidimetria ou espectrofoto
metria, biomassa seca, ruimero total de celulas, mimero de celulas viaveis ou uni
dades formadoras de colonies, volume do sedimento obtido por centrifugacao,
teor de urn componente celular etc., representam uma informacao muito simples
do que ocorre em urn fenomeno biol6gico.
o microrganismo ou agente ativo promove a transforrnacao dos componen
tes do meio em produtos, gra<;as as atividades de milhares de enzimas que, por
sua vez, sao sintetizadas pelo pr6prio microrganismo. Sendo essas sinteses coritro
i I
ladas pelo meio externo (fenomenos de inducao e repressao), torna-se.assim muito
diffcil, senao impossfvel, identificar qual medida ou medidas sao realmente repre
sentativas da transformacao em estudo.
- - - ~ - - - - - ' - - _ . __.-.._....:.- .. .. _. _ ,..:...
Parametros de transforma<;ao 95
Essa dificuldade ocorre mesmo nos sistemas mais homogeneos, quando 0
meio de fermentacao for lfrnpido, com as celulas isoladas umas das outras e quan
do so uma dada especie de microrganismo estiver suspensa no meio aquoso.
A questao se complica ainda mais quando 0 sistema for constituido por uma
cultura mista e, alem disto, contiver solidos em suspensao (alem do microrganis
mo), como nos processos biologicos de tratamento de residuos domesticos e in
dustriais. Nesse caso, medidas de solidos suspensos volateis, durante tal processo,
sao adotadas como uma avaliacao indireta da biomassa presente. Os substratos a
serem decompostos sao simplesmente avaliados pelas determinacoes conhecidas
como demandas qufrnica e biologica de oxigenio (OQO e OBO, respectivamente).
Outros sistemas de ferrnentacao, onde as medidas de biomassa sao proble
maticas, compreendem: celulas suspensas em meio aquoso, porem sob forma de
flocos ou celulas filamentosas; celulas imobiIizadas na superficie de materiais
inertes ou biodegradaveis contidas no biorreator; celulas na presenca de meio, co
nhecido como semi-solido, onde a materia-prima e constituida por material amila
ceo, por exemplo. Neste ultimo caso, a presenca do microrganismo, traduzida pela
concentracao de algum componente do mesmo (como protefna total), nao pode ser
interpretada como se a celula estivesse suspensa no meio aquoso.
Finalmente, se 0 material a ser transformado pelo microrganismo (substrato)
for parcialmente insohivel no meio aquoso, como hidrocarbonetos liquidos ou so
lidos, poltmeros.mlnerios, etc., a concentracao do substrato nao possui significa
do. Juntamente com essa variavel sera necessario avaliar a area de interface do
material insohivel com 0 meio aquoso, bern como a sua variacao, amedida que 0
microrganismo promove a degradacao do mesmo. Trata-se de urn aspecto ate ago
ra nao resolvido satisfatoriamente, a despeito de alguns metodos propostos.'
6.2 ":"" de transformacao
6.2.1 .; As velocidades instantaneas de transformacao
A Figura 6.1 iIustra as definicoes das velocidades instantaneas de crescimen
to ou reproducao do microrganismo, consumo de substrato e formacao de produ
to, traduzidas respectivamente pelas seguintes expressoes, para urn tempo t:
dX
f
X
= - (6.1)
dt
(6.2)
\
' .
dP
fp =- (6.3)
dt
.. _._._.._._ _ __ _.., " .' .__.' _ _ _... .. .. .......... .... _._
i"
, I '
_ .ILIIiM"'--.,--
\
' ", . ' .
96 Cineticade processos fennentativos
Tais velocidades, traduzidas pelos valores das inclinacoes das tangentes as
respectivas curvas (Fig. 6.1) sao tambem conhecidas como velocidades volumetri
cas de transformacao, cujas unidades correspondem a (massa) x (comprimento)" x
(tempo)",
No item 6.3 eapresentado urn exemplo de calculo dessas velocidades.
Uma definicao especial de velocidade, cujo interesse pratico esta na avalia
~ a o do desempenho de urn processo fermentativo, ea produtividade em biomas
sa, definida por:
Px = X
m
- X
o
(6.4)
t
f
as termos dessa equacao, definidos na Figura 6.1, mostram que a produtivi
dade representa a velocidade media de crescimento referente ao tempo.total ou fi
nal de fermentacao, t
f

A mesma definicaopode ser aplicada a concentracao do produto, denomina
da produtividade do produto:
Pp=Pm-P
o
(6.5)
t
f P
onde t
fP
nao e necessariamente igual a tf. A concentracao inicial do produto ege
ralmente desprezivel frente ao valor final OU maximo, Pm'
6.2.2 - As velocidades especfficas de transformacao
Devido ao fato de que a concentracao microbiana X aumenta durante urn
cultivo descontinuo, aumentarido conseqiientemente a concentracao do complexo
enzimatico responsavel pela transformacao do substrato S no produto P, emais
l6gico analisar os valores das velocidades instantaneas (eqs. 6.6, 6.7 e 6.8) com re
lacao a referida concentracao microbiana, ou seja, especificarido-as com respeito
aovalor de X em urn dado instante, conforme indicam as express6es:
(6.6)
(6.7)
(6.8)
Essas sao denominadas velocidades especificas de crescimento, consumo de
substrato e formacao de produto respectivamente, tendo side GADEN
2
0 autor
destas definicoes.
-.. _. __. ...- _._---'"
Parametres de transforma o 97 . !
6.2.3 - as fatores de conversao e os coeficientes especfficos
de rnanutencao
Com referencia aFigura 6.1, considerando urn determinado tempo t de fer
mentacao, os correspondentes valores de X, 5 e P podem ser relacionados entre si,
atraves dos fatores de conversao definidos por:
.'
X-X
. 0 (69)
-5 .
"'- 0 .
\ !
i
(6.10)
,I
\ .
p-p
-, .... \
Yfjf; =__0 (6.11)
' ,," < . 5
0-5
Se tais fatores permanecerem constantes duranteo cultivo, 0 que nao ocorre
com frequencia, as tres express6es anteriores podem ser aplicadas tambem no
tempo final de fermentacao, onda l!;)5 dO, resultando:
(6.12)
Y _ X
m
- X
o
(6.13)
X/P - P _p
m 0
Y
p
/ = Pm-Po (6.14)
s
50
Eliminando-se a grandeza X ' pela combinacao das eqs. (6.9) e (6.12), ob
o
tem-se:
X
Y
x
"" = m . (6.15)
' f '" 5
como uma forma alternativa para a definicao deste fator. A'eq: (6.15) podera ser
.. ,mais conveniente para a avaliacao de YXIS' tendo em vista que as medidas de
-'>J
Xo
apresentam, na maioria dos casos, erros experimentais mais elevados do
que X
m
:
Entretanto, nem sempre 0 substrato se esgota completamente quando a con
centracao celular apresentar seu valor maximo, podendo ainda existir uma
Iir..-.c...__. __. ._.... -----.. --- -.. -.__" - __....:.. ._.__.. ... .. .. _......... _. _
\
98 Cineticade processesfennentativos
concentracao residual daquela substancia no meio de cultura, ao termino da fer
mentacao. Isso ocorre porque a medida que 0 microrganismo se reproduz, sao
formados produtos do metabolismo que inibem 0 crescimento celular, sem men
cionar 0 pr6prio substrato, que pode dificultar a atividade microbiana (item 6.6).
o fator de conversao YXIS foi originalmente definido por MONOD,3 tendo
sido util na analise de alguns processes.como, por exemplo, na producao de pro
teinas unicelulares a partir de carboidratos ou hidrocarbonetos. Desde que seu
valor seja conhecido, epossivel calcular 0 valor de X, a partir de urn valor conhe
cido de 5 e vice-versa.
Igualmente iitil e0 emprego do referido fator na definicao do substrato, de
nominado limitante.
Como 0 pr6prio nome indica, e 0 valor da sua concentracao inicial 50 que
definira a concentracao maxima X
m
da populacao microbiana. Em outras palavras,
em uma outra experiencia de urn cultivo descontinuo, onde a concentracao 50 seja
inferior aprecedente, porem com concentracoes identicas dos demais componen
tes (incluindo a concentracao inicial da biomassa, X )' resultara urn valor de X
o m
proporcionalmente menor, no final do cultivo. .
Isso equivale a colocar a expressao (6.12) sob a forma:
> " -...,,
-, ,, } (

(
Y
x
/
s
.5
0
+ x; 6.16)
No decurso de urn cultivo descontinuo, sob condicoes especiais (meio tam
i
ponado, concentracao de 5 nao muito elevada, agitacao perfeita do meio), epossi
I
I vel verificar experimentalmente a constancia do valor de YXIS com 0 auxilio da
i
expressao (6.15) sob a forma: '
i
' ,f .>
\ x; ,-t YXIS ')(6.17)
Uma representacao dos de X, em funcao dos valores
experimentais de 5, devera resultar em uma reta, com coeficiente angular igual a
YXIS e a ordenada na origem igual aX
m
.
As mesmas consideracoes se aplicam aos demais fatores (eqs. 6.10 e 6.11).
Contudo, se YXIS' YX/P ou YPIS nao forem constantes, entao somente seus
valores instantaneos deverao ser levados em conta, ou seja:
dX
Y
x
/
s
=-'-' (6.18)
-<i5
dX
Y
x
/
P
=
(6.19)
dP
dP
Yp /
s
=- (6.20)
-<i5
-,
... :" -:
Parametros de transformacao 99
Considerando as definicoes de velocidades (eqs. 6.1, 6.2 e 6.3) e velocidades
especificas (eqs. 6.6, 6.7 e 6.8), resultam as seguintes relacoes:
. r
x
Jlx
Y
x
/
s
=- , =-
(6.21)
rs Jls
r
x
Jlx
=-=-
(6.22)
Y
x/ P
rp Jlp
rp Jlp
Yp/
s
=-=-,
(6.23)
rs Jls
Ainda, dessas express6es ou das igualdades (6.9),(6.10) e (6.11), tem-se:
YXIS = YX/P . YP/5
(6.24)
Em fermentacoes industriais, dificilmente sao observados valores constantes
desses fatores de conversao. Embora dependam da especie do microrganismo,
com relacao a urn determinado substrato, nao dependem somente da natureza
deste; osdemais componentes do meio tambem exercem influencia sobre tais con
vers6es, bern como 0 tempo de mistura e a transferencia de oxigenio do sistema de
agitacao do biorreator.f
Alem dessas influencias, ha de se considerar 0 fenomeno em que as celulas
utilizam a energia de oxidacao do substrato, nao somente para 0 crescimento, mas
tambem para finalidades de manutencao.
Em outras palavras,' urn determinado consumo de substrato (5 nao pro
0-5),
duzira sempre urn aumento proporcional na biomassa (X-X ), sendo que uma
o
parcela da energia, proveniente daquele consumo, e destinada a manutencao das
funcoes vitais do microrganismo.
Essas funcoes vitais compreendem: 0 trabalho osm6tico para manter os gra
dientes de concentracao de substancias entre 0 interior da celula e 0 seu meio am
biente, as modificacoes de componentes celulares que requeiram energia e a mobi
lidade celular.
Esse conceito, introduzido por PIRT/ atraves do consumo especifico para
manutencao m:
m =(rs)m (6.25)
X
onde (rS)m ea velocidade de consumo de substrato devida a manutencao, permite
combina-lo com 0 balance material '
(6.26)
no que resulta
. _._-' _.- -- _._ -.__ _._ - - - .. -._ .-.:'.---_...,......._- .,.,........-,. .. -_- ~ - - ' - - ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' - ' - - ' ' _--_._.__..- - - - '- - :'.. - - _ ..,, _._._-- - - '- __ .".._---- - - - ' _ _ -_.
I:
\
"I :.j:.:LQ.'.
I 00 Cinetica de processos fermentativos
rs =(rS>C +mX (6.27)
onde (rsk se refere ao consumo do substrato, destinado somente ao crescimento
ou reproducao microbiana. r
s
e0 consumo global observado, tal como edefinido
pela expressao (6.2).
Com a definicao de urn novo fator de conversao:
Y
' rx
. x/ s =--
(6.28)
(rs)c
e sua introducao na eq. (6.27), tem-se
r
x
's =-,-+mX
(6.29)
. Yx/s
ou, de acordo com as eqs. (6.6) e (6.7):
Ilx
Ils =--+m
(6.30)
Yx/s
Note que se m=O, Y'XIS coincide com a definicao de YXIS da eq. (6.21). Esse
fator, definido pela eq. (6.28) e algumas vezes denominado fator de conversao
"verdadeiro".
Se Y'x/s em forem constantes, a relacao entre Ils e Ilx devera ser linear. Esta
. nova definicao do fator de conversao, aliada ao coeficiente especifico de manuten
<;ao, emaisgeral do que a eq. (6.21), possibilitando assim que urn maior mimero
de processos fermentativos apresentem valores constantes de Y'x/s e m.
Uma generalizacao mais ampla ainda," pode ser introduzida no balance da
eq. (6.26), ao ser considerada mais uma parcela de consumode substrate, ou seja,
na formacao de produto, (rs)p: .
(6.31)
onde (rs>Cp e (rs)mP sao as velocidades de consumo de substrato para 0 crescimen
to e manutencao , respectivamente levando em conta a formacao de produto.
Introduzindo:
_ rp ,
(6.32)
Y
'
PIS --
(rs)p
e urn novo coeficiente especifico de manutencao
, (rs)mP (6.33)
mp ="':""=:'X':""::":::""
bern como urn novo fator de conversao para 0 crescimento
. _ ~ - . ---"- -...,.... -:.._ - - -----_._.......:. -_ _..-_.. - -
Calculos dasvelocidades 101
(6.34)
" rX
Y
XIS =--
(rS>Cp d1
III
I
resulta, com a (6.31):
I
. r
x
rp
(6.35)
' rs =--+--+mp'X
yx/s Yp/s
ou, com as equacoes 6.6, 6.7 e 6.8:
Ilx IIp
(6.36)
Ils =--+--+mp
Yx/s Y
p/
s
Uma regressao linear rmiltipla com tres variaveis (Ils , Ilx e IIp) podera ser
verificada, se os fatores e 0 novo coeficiente mp forem constantes ou se este ultimo
for desprezivel. .
Pode-se, enfim, estender 0 balance com a inclusao de termos adicionais,
referentes a outros produtos do metabolismo (incluindo aqueles presentes nos
gases de saida do biorreator), cujos valores experimentais sejam conhecidos, re
sultando com isto novos valores dos fatores de conversao e do coeficiente de
manutencao.
Do exposto, verifica-se assim que as conclusoes a respeito de urn determina
do cultivo dependem muito da quantidade de dados experimentais disponiveis
sobre o sistema. .
6.3 - Calculos das velocidades
Pelas definicoes apresentadas nos subitens 6.2.1 e 6.2.2, conclui-se que os
calculos das velocidades e velocidades espedficas ' de transformacao necessitam,
em primeiro lugar, dos tracados das curvas a partir dos pontos experimentais (Fig.
6.1).
Esses tracados ou ajustes podem ser realizados manualmente, com progra
mas de computador ou atraves de curvas representadas por equacoes conhecidas.
Iniciaremos pelas consideracoes referentes aos tracados manuais, ficando os
comentarios dos ajustes com equacoes para 0 final deste item.
o tracado manual exige urn born conhecimento do processo em estudo.
Como uma experiencia inicial, deve-se ter em mente que para urn grande ruimero
de casos os perfis apresentados na Figura 6.1 sao caracteristicos, isto e, as curvas
de formacao do microrganismo (X =X(t e do produto (P =P(t exibem a forma
"5" ou sigmoidal crescente, enquanto a do substrato residual no meio (5 = 5(t se
caracteriza pelo perfil em "5" decrescente.
as instantes em que P e X sao maximos poderao nao coincidir, isto e, ambas
as curvas nao serao necessariamente sempre semelhantes.
\
I 02 Gnetica de processos ferrnentativos
100-1-'---_
s
80

40
20
40
20 :J'
S'
0..
0
X
4
3
2
O'----,-----,--,---,---t--,----.----.--,-----'
' 0 2 4 56 8 10
Tempo (h)
Figura 6.2 - Resultados obtidos em umafermentacao akoolica. S, coricentracao de ac;ucar; P, concentracao de
etanol; X, concentracaode levedura (expressa emgramas de materia seca por litro), segundoBORZANI.6
Para exemplificar 0 calculo das velocidades (eqs. 6.1, 6.2 e 6.3) e velocidades
espedficas (expressoes 6.6, 6.7 e 6.8), estao representadosna Figura 6.2 os resulta
dos experimentais obtidos em uma fermentacao alcoolica descontinua.v
Para t = 5 horas, por exemplo, a velocidade de consumo de acucar ecalcula
da pela inclinacao da reta tangente AB a curva 5 = S(t), a saber:
_ dS = 100-70 = 30g /L = 7,9g /L. h
dt 7,1- 3,3 3,8h

onde os valores numericos de cada parcela correspondem as coordenadas dos
pontes arbitrarios A e B, escolhidos sobre a reta.
De modo semelhante, para as velocidades de producao de etanol e cresci
mento da levedura, no instante t = 5 h tem-se, respectivamente:
dP = 20-0,0 =20g/L =4,Og/L.h
ili .
dX
4,0-2,0:::&2,Og/L =045 /L.h
dt
6,2 -1,8 4,4 h ' g
calculadas com as coordenadas dos pontos arbitrarios sobre as retas C,D e E,F res
pectivamente.
A curvade cresornento microbiano I 03
Por outro lado, para t =5,0 h tem-se X =3,5 giL (Figura 6.2). Assim, os valo
. res das velocidades especificas de consumo de acucar, producao de etanol e cresci
mento da levedura, no instante t =5 h, serao, respectivamente:
=7,9 =2 3h-
1 _4,0_11h-1
- 0,45 -0 3 h ~ 1
J.l S 3,5 ' i
J.lp - 3,5 - , e J.lx - 3,5 - ,
Esses calculos, aplicados em cada instante de fermentacao, permitem deter
minar as formas das funcoes J.ls = J.l s (t), J.lp = J.lp (t) e J.lx = J.lx (t), cuja utilidade sera
comentada no item 6.5.
Cumpre frisar que 0 calculo das mesmas depende nao somente dos ajustes
manuais efetuados (Fig. 6.2), mas tambem do tracado das retas tangentes, em urn
dado instante t do cultivo.
Essa ultima operacao, t ~ o subjetiva quanta os ajustes manuais, pode ser efe
tuada por outros metodos, que devem atenuar as discrepancias entre os resulta
dos de calculo de urn mesmo conjunto de dados experimentais, provenientes de
operadores diferentes.
o leitorinteressado podera consultar a bibliografia especifica a respeito dos
metodos graficos para 0 tracado das tangentes/o metoda geometrico" e os ajustes
baseados em equacoes, cujas derivadas possibilitam tambem os calculos das velo
cidades de transformacao e velocidades especificas.":" Os criterios estatisticos
. para a escolha dessas equa<;6es,11.12.13 bern como os erros que afetam as medidas
dessas velocidades.l':":" sao encontrados na literatura.
No final deste capitulo, encontra-se no Apendice urn exemplo de calculo
atravesdo metoda geometrico," com auxflio de uma planilha eletronica.
6.4 - A curva de crescimento microbiano
Ap6s a inoculacao de urn meio de cultura, favoravel ao desenvolvimento do
microrganismo em estudo, sob temperatura controlada e agitacao adequada, ob
serva-se urn comportamento nos valores da concentracao celular, conforme indica
a Figura 6.3.
As seguintes fases no crescimento sao observadas:
Fase 1 - Conhecida como fase "lag" ou de latencia, que se segue imediata
mente ap6s a inoculacao do meio com 0 microrganismo em questao. Trata-se de
urn periodo de adaptacao durante 0 qual a celula sintetiza as enzimas necessarias
ao metabolismo dos componentes presentes no meio.
Durante essa primeira fase, nao ha reproducao celular e, assim, X = X =
o
constante.
A duracao dessa fase varia principalmente com a concentracao do in6culo (e .
portanto com 0 valor de X )' com a idade do microrganismo (tempo de pre-cul
o
tivo) e com 0 seu estado fisioI6gico. .
\
:1

! .
104 Cineticade processes fennentatives
X
d
Xc .
A
B
7 6
c
t, o
,
j
.
1 j 2- i 3 i 4 . 5
....----
[ ..
Xi
X
o
o
.
Xi
X
o
Figura6.3 - Curvade crescimentodo microrganismo em cultivo descontinuo, representadaemordenadaslineares
(A) e semil ogaritmica (8). Assete fases estao descritas no texto.
Com efeito, se as celulas forem pre-cultivadas em urn meio de' composicao
diferente, 0 tempo referente ao fenomeno de inducao pode ser apreciavel: caso
contrario, epossivel que tal fase nao exista.
Fase 2 -:- Essa ea fase de transicao (Fig. 6.3) em que se observa 0 inicio da re
producao microbiana propriamente dita.
Ha urn aumento gradual, tanto da velocidade de reproducao (eq. 6.1) como
da velocidade espedfica de crescimento (eq. 6.6), onde nem todos os microrganis
mos completam a fase anterior simultaneamente. No fim dessa fase, a populacao
inteira comeca a se dividir em urn intervalo regular medic de tempo (eq. 6.41).
Fase 3 - E denominada fase logaritmica ou exponencial onde a velocidade
especifica de crescimento (J.l x =J.lm) econstante e maxima. Nessas circunstancias, a
eq. 6.6 permite concluir que a velocidade de crescimento ediretamente proporcio
nal aconcentracao X, isto e: .
dX
- =J.l X (6.37)
dt m
_ _ :.. _ _._, ..-----"'Ii
Acurva de crescimentomicrobiano I 05
Uma integracao da equacao 6.37, entre 0 inicio dessa fase (de coordenadas
(ti' Xi)' Fig. 6.3) e urn instante arbitrario ': compreendido entre t
i
e t
c
resulta em:
(6.38)
ou
(6.39)
Desse modo, pela expressao 6.38, uma representacao semilogaritmica da
concentracao celular com 0 tempo de cultivo devera resultar em uma reta (Fig.
6.3':B), valida ate t
c
' tambem denominado tempo critico.
Ao lado da velocidade espedfica 11 , a fase exponencial tambem e caracteri
m
z ~ ~ a frequentemente pelo tempo de ge:a<;ao t
g
, que e 0 intervalo de tempo neces
sano para dobrar 0 valor da concentracao celular. -
Aplicando esta definicao na eq. 6.38, tem-se:
2X
In __=11 .t
(6.40)
'
X . rr m g
I
ou
In 2 0,693
11
m
=--=-- (6.41)
t t
g g
Da equacao (6.41), conclui-se que 0 tempo de geracao e constante, pelofato
de 11 serconstante nesta fase.
m
Para certas bacterias 0 tempo de geracao e relativamente curto, como no
caso da Escherichia coli, que podeapresentar urn valor da ordem de 20 minutos na
temperatura de cultivo em 37C. Outras bacterias, do tipo term6filas, cultivadas a
55C, chegam a apresentar urn tempo de geracao de cerca de 15 minutos,
Para as leveduras, 0 valor minimo esta compreendido entre 1,5 e 2 horas.
Uma interpretacao para a existencia da fase logaritmica ou exponencial de
crescimento, e apresentada no subitem 6.6.1.
Fase 4 - Conhecida como fase linear de crescimento, por apresentar a veloci-
dade de reproducao constantetry = rk' na eq. 6.1). Essa fase pode ocorrer sem a pre
via existencia da fase logaritmica, como e 0 caso de microrganismos filamentosos,
onde ha limitacao no transporte de nutrientes do meiopara 0 interior da celula.
Integrando a referida equacao a partir do inicio dessa fase (de coordenadas
(tc' Xc), Fig. 6.3) e urn instante arbitrario t, compreendido entre t
c
e t
d
, tem-se:
X t
(6.42)
fdX =rk' fdt
x, t,
L ___ __ _ .._--- :__ ~ - - ___'_ . ~ ~ -.-----;-, -- ------ .
!
~ I
II
,i
!:
"
11
I
,
\
I 06 ' Gneticade processos fermentativos
ou
(6.43)
Da equacao 6.43, deduz-se que a concentracao celular X e uma funcao linear
do tempo de cultivo t (Fig. 6.3-A), justificando-se assim a denominacao de cresci
mento linear para esta fase.
Contrariamente a fase exponencial antes comentada, a velocidade espedfica
'l
'i de crescimento nao e constante na fase linear, conforme se pode deduzir das equa
1
coes 6.6 e 6.43:
J
:1
1 ~ d X = ~ = rk
. (6.44)
.. ~ ~
X dt X rk t +X
e
-rk t
e
De acordo corn essa equacao, a velocidade especifica decresce corn 0 aumen
to da concentracao celular e, portanto, corn 0 tempo t de cultivo. .
A existencia do crescimento linear indica, conforme mencionado, a presenca
de certas limitacoes no transporte de nutrientes a interface microrganismo-meio
como, por exemplo, corn respeito ao oxigenio dissolvido no meio.
REUSS e WAGNERIO verificaram que urn aumento no coeficiente volumetri
co de transferencia do oxigenio dissolvido, entre 0 meio e a citadainterface, pro
vocava 0 desaparecimento do crescimento linear.
Outro caso de limitacao do transporte de nutrientes ao microrganismo ocor
re quando este se desenvolve na forma de urn biofilme, imobilizado na superficie
da parede do rea tor, ou sobre particulas s6lidas ern suspensao, empregadas como
suporte.
Modelos que interpretam 0 crescimento celular nesses ,s istemas sao encon
trados na literatura."
" .
Fase 5 - Desaceleracao. Devido ao esgotamento de umou mais componentes
domeio de cultura, necessaries ao crescimento e, tambem, devido ao acumulo de
metab6litos inibidores, ambas as velocidades (de crescimento, eq. 6.1 e especifica,
eq. 6.6) diminuem ate se anularem, no tempo t
f
.
Durante essa fase, 0 tempo de geracao aumenta no decurso do cultivo, pois
nem todos os microrganismos se reproduzem ern intervalos regulares de tempo.
Fase 6 - Estacionaria. Nessa fase, X atinge 0 valor maximo e constante X
m
(Fig. 63), onde ha urn balance entre a velocidade de crescimento e a velocidade de
morte do microrganismo, ocorrendo tambem modificacoes na estrutura bioqufrni
ca da celula.
Fase 7 - Declinio ou lise. 0 valor da concentracao celular diminui a uma ve
locidade que excede a velocidade de producao de celulas novas. '
Pode-se observar, as vezes, entre a fase anterior e a de declinio, urn periodo
de transicao apresentando uma diminuicao logaritmica na referida concentracao.
Ocorre, durante 0 declinio, uma "lise" celular, aut6lise ou rompimento dos
microrganismos, provocado pela acao de enzimas intracelulares.
- - ~ - ~ , ------- --. - --- - -- ,...
Classificao dos processos fennentativos 107
I,
6.5 - dos processos fermentativos
Os comportamentos relativos das funcoes fl = flU), fornecem a base para
uma importante classificacao dos processos fermentativos proposta por GADEN2
(subitem 6.2.2).
As Figuras 6.4, 6.5 e 6.6 representam, esquematicamente, a variacao das ve
locidades especificas para tres tipos caracteristicos de fermentacoes.
No primeiro caso (Fig. 6.4), as velocidades espedficas de consumo de acucar
(fls) a producao de etanol (flp), apresentam perfis senielhantes, correlacionando-se
assim muito bern. A velocidade espedfica de crescimento (flx) do microrganismo
apresenta, aproximadamente, 0 andamento das outras duas curvas. Diz-se entao que
a formacao de produto (0 metab6lito primario) esta associada ao crescimento.
Essa configuracao representa 0 caso em que 0 produto formado (0 metab6li
toprimario) esta diretamente ligado as reacoes do catabolismo ou decomposicao
do substrato (os acucares).
Tempo
Figura 6.4 - das velocidades espedficas em uma fermentacao alc06lica.
As producoes de certas vitaminase aminoacidos tambem se enquadram nes
se tipo de cinetica de ferrnentacao.
No segundo caso (Fig. 6.5), observam-se duas fases distintas: uma Ii! fase,
onde a velocidade espedfica de consumo do acucar esta diretamente relacionada a
de crescimento do microrganismo, nao havendo praticamente formacao do produ
to (acido dtrico); uma segunda fase, em que ha uma boa sernelhanca entre os per
ffs das tres velocidades espedficas e que portanto se correlacionam bern. Esse e0
caso conhecido como formacao do produto parcialmente associada ao crescimen
to; sua formacao nao esta diretamente ligada ao caminho metab6lico produtor de
. energia. . .
_ L ... ._. . .._.. ._.. c . . .._ .- . . _ _ : .. ._ ._ .. _. ...._ .. _ ...._ .. __ .. ... _ .. .. __ .. _ .. ... l..U.o..._ ..,.........--'
Consumo de
ayucar
<,
l'll
o
I;:
'0
CIl
ft
CIl
CIl
"C
l'll
"C
'0
o

Crescimento
\
- - -- --- - - - - - - - - - - - - - -
I 08 Gneticade processos fermentativos
~
l+=
U
Q)
a.
l/l
Q)
Q)
"0
CO
"0
T5
o
~
Producao
de acida
/
Tempo
' ] : ~ Figura 6.5 - Variacao das velocidades espedficasem uma ferrnentacaocltrica.

.1
.1
Tempo
Figura 6.6- Variac;ao dasvelocidades especificas emumaferrnentacao penicilfnica. Curva I - producaodeantibi6
tico; curva2 - consumo de acucar: curva 3 - consumode oxigenio: curva 4 - crescimento do microrgani smo.
Alem da producao do acido dtrico por ferrnentacao, pode-se incluir a do aci
do latico comopertencente a este grupo.
Neste particular foi obtida uma expressao empirica por LUEDEKING; PI
RET/
7
querelaeionaram a velocidade especffica de formacao -do acido latico (/lp),
- ;,;;:.... "-'
dos processosfermentativos I 09
. . : .'.
com a velocidade especifica de crescimento do microrganismo naproducao
descontinua desta substancia pelo Lactobacillus delbrueckii em pH constante, a sa
ber: ... ..

(6.45)
Essa equacao, onde e p sao constantes empiricas funcoes do pH, indica a
existencia de dois mecanismos de producao de acido latico: urn deles associado a
reproducao de bacterias (representado pela parcela a . x) e outro independente
do crescimento do microrganismo (representado pelo termo P).
Finalmente, no terceiro caso, se enquadram as fermentacoes complexas, aqui
exemplificadas pela producao de penicilina (Fig. 6.6). A maxima velocidade espe
dfica de producao do antibi6tico ocorre quando as demais velocidades especifi
cas, indicadas na Figura 6.6, sofreram uma reducao significativa. No comeco da
fermentacao predominam transforrnacoes produtoras de energia com formacao de
biomassa, sendo que 0 antibi6tico e formado quando 0 metabolismo oxidativo se
encontra atenuado.
Obviamente, nesse grupo de ferrnentacoes nao ha uma associacao clara en
tre as referidas velocidades que permita estabelecer alguma relacao cinetica defi
nida, como no caso da eq. (6.45).0 produto formado e historicamente denomina
do como metab6lito secundario.
Alem dos antibi6ticos, as toxinas microbianas pertencem a esse grupo.
Eimportante frisar que esta classificacao nao enquadra, de urn modo abso
luto, urn determinado processo fermentativo em urn dos tres grupos citados.
Como exemplo, merece ser comentado novamente 0 caso da fermentacao al
co6lica onde, dependendo das condicoes de operacao, a producao do etanol pode
ra nao estar inteiramente associada areproducao do microrganismo e ao consumo
de acucar, enquadrando-se' assim no segundo case" (Fig. 6.5) em vez de no prime
iro (Fig. 6.4). ..
Caso semelhante e observado na producao do butanodiol por Klebsiella pneu
moniae, em cultivo continuo" a partir da glicose onde, dependendo do valor da ve
locidade espedfica de crescimento (abaixo ou acima de 0,18 h-1),o processo e do
tipo inteiramente associado ao crescimento ou independente do mesmo, respecti
vamente.
, Dutra classificacao, baseada nas associacoes entre formacao do produtocom
microrganismos em reproducao ou nao, e devida a KaNa; ASAI,z,21,22 que apre
sentam tr es grupos caracteristicos:
processos em que a formacao de produto esta associada apenas aativida
de de celulas em reproducao como, por exemplo, na producao de sorbose.
processos em que a formacao de produto esta associada aatividade de to
das as celulas, em reproducao ou nao, citando-se como exemplo a produ
<;ao d e acido Iatico.
processos em que a formacao de produto esta associada apenas aativida
de das celulas que nao se reproduzem, como no caso da producao de aci
do citrico e riovobiocina.
1...-... _.. ._...
__ __.. , ..-..- ---. . o.o.-.- .--.-- ----- _ ._. _ _ .__..__. _ _. ._ .. _ C ,-"-""--_ ,
\
-- - --- - --- - - - - - - -- -- -- -- - - -- - -- -- - - - ------ -
I I 0 Cineticade processesfermentativos .
6.6 - Influencia da concentracao do substrato sobre
a velocidade especifica de crescimento
6.6.1 - A equacao de Monod: interpretacao dafase exponencial
de crescimento
A seguinte equacao empirica, proposta por MONOD/
3
tern sido comumente
empregada para explicar a relacao entre a concentracao 5 do substrato limitante
no meio, com a velocidade especifica flxde reproducao do microrganismo:
fl 5
. (6.46)
flX=K;+5
onde fl
m
representa a maxima velocidade especifica de crescimento ou reprodu
e K
s
a constante de saturacao, cujo significado sera comentado a seguir.
Na Figura 6.7 esta representada a eq. de Monod. 0 significado deK
s
pode
ser deduzido fazendo-se 5 = K
s
na eq. (6.46). Resulta imediatamente que: flx =
isto e, a referida constante representa a concentracao do substrato na qual a
velocidade especifica de crescimento ea metade do seu valor maximo.

0,10
11m
2
o--"'----.----.----r----r----,.--+--.----.----.----r-
o 0,50 1,00
S(mg/L) .
. Figura 6.7 - 6.46 para11 = 0,14 h-
I
e K
s
= 0,60 mg/l. (valores hipoteticos).
m
Esta condicao esta assinalada na Figura 6.7 onde, para K
S
= 0,60 mg/L,
tem-se flx =fl
m
/2 =0,07
A expressao de Monod e formalmente . igual a expressao de Michae
lis-Menten (capitulo 7, volume I).
No inicio do cultivo, onde 5 ealto, 0 microrganismo apresenta uma velo
cidade especifica proxima a maxima, podendo a mesma situar-se nesta regiao
durante uma boa parte do processo, mesmo que 0 metabolismo celular provoque .
uma diminuicao apreciavel no valor de 5.
. . .._. ._c_ _ _._ _ _
Influenciadaconcentracao do substrato sobre avelocidade espedficade cresdrnento I I I
"' C. -': "
. Quanto menor for 0 valor da constantede saturacao K
s
, tanto mais amplo
sera este "patamar" quase horizontal da curva e que se encontrara mais pr6ximo
do valor de J.l , conforme ilustra a Figura 6.8 (curva A) .
m
Embora, a rigor, pela equacao 6.46, nunca seja atingido 0 valor de J.l
m
, por
mais alta que seja a concentracao inicial S, na pratica, os valores experimentais po
dem ser considerados como tal, tendo em vista os erros que afetam os valores cal
. cul ados da velocidade especffica de crescimento.P'" . .
Nessas circunstancias, a curva apresentada pela velocidade especifica de
crescimento em funcao do tempo (Figura 6.9), podera apresentar urn trecho maxi
mo constante (AB) , ap6s urn curto periodo inicial de transicao ou adaptacao do
microrganismo ao meio.
Essa fase inicial do crescimento (0 a. 4 horas, Fig. 6.9), corresponde a fase 1
("lag") e afase 2 (de transicao) da Figura 6.3, nao previstas pela expressao de Monod.
A citada expressao (6.46) considera J.lx elevado e pr6ximo do valor maximo,
logo que 0 microrganismo ecolocado na de urn meio, com uma concen
inicial de substrato relativamente elevada. 0 microrganismo e, nessas cir
cunstancias, considerado adaptado.
Uma baixa constante de saturacao K
s
implica em umamaior duracao da fase
exponencial, conforme ilustra a Figura 6.8: para K
s
=0,60 mg/L, os valores de J.lx
logo se distanciam de J.l
m
, amedida que a substrata vai sendo consumido; para K
s
=0,030 mg/L, J.lx epraticamente igual a J.l para uma mesma variacao de S (entre
m
1,20 e 0,50 mg/l).
Assim, a duracao do "patamar" AB (Fig. -6.9), dependera da magnitude desta
constante de saturacao.

A
0,10
--- - ------ --- - - - -- - -- --:
,
,
,
,
,
,
,
KSA i KsB
a 0,50 1,00
S(mg/L)
. Figura 6.8 - Equacao 6.46 paraosvalores hipoteticosde: 11 = 0, 14 h-
I
, K
S
= 0,60 mgIL(curvaB), K
S
=' 0,030
m
mgIL(curvaA). .
__.._-_._- -_. . ...,-,_ .. ..-.... .._-- ...,......, .. ....... ..' ... - .-- -- .._---,._._----.--_._.._- ... ._-_.._..._- --.
_ _ .........
\
112 - Cinetica de processos fermentativos
.
t
g
A B
(h)
50 0,10
4 8
t (h)
Figura 6.9 - Variacao da velocidade espedfica de crescimento (Jl ) e do terrlpo de geracao (t
g
),
x
no cultivo descontfnuo.
6.6.2 - Outros modelos
A expressao de Monod (eq. 6.46) eurn modelo que nao leva em conta 0 efei
to inibidor, tanto pelo substrato como pelo produto formado. Essa, porem, nao e
a unica interpretacao referente a uma tal condicao ideal de cultivo.
Outras equacoes foram propostas'" e que merecem ser citadas:
(6.47) equacao de Teissier
(6.48)
Moser
S
Contois e Fujimoto (6.48)
Ilx =Ilm Kg .X+5
S
.Powell J.lx =J.l
m
-
(6.50)
, (K
s
+KD)+S
Ha pelo menos mais seis outras express6es, propostas por outros autores,
tambem citadas na mesma referencia'" e que nao levam em: conta 0 -fenomeno da
inibicao,
A ausencia da inibicao e, na verdade, uma situacao pouco comum na prati
ca, principalmentedurante urn cultivo descontinuo, onde ha urn crescente aciimu
10 de metab6litos que acabam interferindo desfavoravelmente sobre 0 metabolis
mo e crescimento microbianos.
o problema poderia ser atenuado se fosse, por exemplo, utilizado urn valor
inicial relativamente baixo da concentracao de substrato e que assim resultasse em
baixas concentracoes de produtos inibidores.
Influenda daconcentracaodo substrato sobrea velocidade especffica de crescimento 113
Essa e, entretanto, uma alternativa pouco interessante do ponto de vista in
dustrial, onde baixas concentracoes de produtos acarretariam custos elevados, na
fase posterior de separacao e purificacao da substancia de interesse.
Nessas circunstancias, a inibicao pelo substrato e urn fenomeno que nao
pode ser ignorado.
a efeito do substrato se manifesta quando urn valor alto da concentracao
inicial 5 pode, ao inves de aproximar Ilx de 11 (como nas Figs . 6.7 e 6.8 ), provocar
m
urn efeito contrario, ocasionando uma inibicao no crescimento celular.
Este fenomeno esta ilustrado na Figura 6.10, onde se pode verificarque a ex
pressao de Monod (eq. 6.46) somente se aplica para valores relativamente baixos
de 5, menores ou iguais a K
s.
Acima deste, onde a inibicao pelo substrato se mani
festa, a curva tende para 11 ate urn certo valor de 5, para depois se afastar, a par-
m
./
tir .deste valor.
I-lx
""m - - - - - :..;...; - --
,
,
o
- -
o
,
:
o
,
o
A
kS '" ks' kl,s ki,s S
Figura 6.10 - Cinetica de pelo substrato (curva A)e sem (- - - ; eq. 6.46).
Corn 0 objetivo de explicar essa reducao na velocidade especifica de cresci
mento (Ilx), provocada pelos altos valores iniciais da concentracao de substrato
(5), uma modificacao na expressao de Monod (eq. 6.46), foi proposta." .
5 K1,s'
(6.51)
Ilx = 11
m
. K +5 K1,S +5
s
Nessa nova expressao, que traduz 0 andamento da curva A (Fig. 6.10), K
s
e a
constante de saturacao definida pela eq. (6.46).
K
1
S' por outro lado, e a constante de inibicao pelo substrato que se refere,
como ao valor de 5 para 0 qual uy = Ilm/2, porem para urn valor de 5 que pro
voque a inibicao.jsendo assim superior aocorrespondente 5 da equacao de Monod.
Para uma melho; compreensao da influencia do valor de K1,s sobre 0 efeito
inibidor do substrato, e oportuno analisar 0 fator K
1
sl (K
1
s + 5), da equacao 6.51
sob a forma: ' ,
1
(6.52)
5
1+-
K1,s
- ---- - - - ----- -- --- --- -- ----- -- - ----- - ------ - --- - --- ------- - _ ....
\
II
H
114 .Cinetica de processesfermentativos
Se K1,S 5, entao: 5/ KI,s == 0 e a equacao anterior se reduz aunidade. Con
seqiientemente a eq. 6.51 se transforma na 6.46, nao existindo assim 0 efeito inibi
dor do substrato sobre 0 crescimento. .
Em outras palavras, urn valor relativamente alto dessa constante (K1,S) re
quer igualmente valores muito altos de 5 para que 0 efeito inibidor se manifeste
(eq. 6.52, menor do que urn), ou seja, a inibicao pelo substrato podera serpouco
pronunciada. Inversamente, valores baixos de K1,S' representam urn substrato
muito inibidor perante uma dada especie de microrganismo.
Quanto ainibicao pelo produto, urn equacionamento semelhante foi realiza
do por JERUSALIMSKY e NERONOVA:
lO
5 KI,p
(6.53)
Jlx = Jlm KS + 5 Ki.r + P
sendo que as consideracoes previas, referentes a eq. (6.52), tambem se aplicam
nesta expressao, mas levando em conta unicamente 0 efeito inibidor pelo produto,
representado pela sua concentracao P, no meio. Mais informacoes sobre as expres
soes (6.51) e (6.53), assim como outros modelos de inibicao, poderao ser encontra
dos na literatura.'"
Agradecimentos
o autor agradece ao Engenheiro (Mestre em Engenharia Quimica) Andreas
Karoly Gombert pela elaboracao do Apendice e a Engenheira (Mestre em Enge
nharia Quimica) Julia Baruque Ramos, pelo trabalho de datilografia. '

Apendice
Andreas Karoly Gombert
Para ilustrar uma forma bastante pratica e simples de calcular velocidades
especificas a partir de dados experimentais de cultivos de celulas, sera apresen
tada uma planilha em Microsoft Excel que contem as equacoes do metodo geo
metrico de calculo de derivadas proposto por LE DUY; ZAJIC.
B
0 objetivo nao e
apresentar detalhes sobre esse metoda, mas apenas ilustrar como 0 mesmo pode
ser utilizado; para obter detalhes do metoda, sugere-se consultar a referencia
.' ' , . : ...
original.
AJiendice 115
A) Apresentacao da planilha
No artigo original escrito por LE DUY; ZAJIC,s eapresentada uma sub-rotina
em Fortran para 0 calculo de velocidades especificas. No entanto, em funcao da fa
cilidade e praticidade no uso de planilhas eletronicas, como e0 caso do Microsoft
Excel, torna-se bern rna is simples calcular velocidades espedficas lancando mao
- :' deste tipo de planilha. No Quadro 6.1, sao apresentadas as equacoes de uma plani
. ' Iha que executa 0 calculo de velocidades especificas.
Alguns cuidados devem ser tornados para 0 born funcionamento da planilha:
1) A primeira linha de equacoes ediferente das outras. A partir da segunda linha
de equacoes, existe repeticao das mesmas. Portanto, basta copiar a segunda li
nha de equacoes para 0 ruimero de linhas que forem necessarias ao mimero de
dados de entrada disponiveis,
2) Deve-se manter uma linha em branco ap6s a ultima linha de entrada de dados,
sendo esta a forma utilizada pela planilha para que possa ser calculada a deri
vada no ultimo ponto. .
3) A coluna B devera conter sempre dados de concentracao celular. A col una C
podera conter dados de concentracao celular, caso se deseje calculara veloci
dade espedfica de crescimento; dados de concentracao de substrato, casose
deseje calcular a velocidade espedfica de consumo de substrato; dados de con
centracao de produto, caso se deseje calcular a velocidade espedfica de forma
c;aodeste produto.
4) Ap6s a entrada das equacoes (conforme Quadro 6.1), pode-se iniciar a utiliza
c;aoda planilha, devendo-se utilizar apenas as colunas A, Bee para entrada de
dados numericos, A velocidade especifica para cada instante aparecera auto
maticamente na coluna E.
5) Os dados de Ils aparecerao com sinal negativo na planilha, por causa do sinal
negativo da derivada dS / dt. No entanto, como Ils deve assumir valores positi
vos, deve-se fazer a correcao necessaria, multiplicando-se os valores obtidos
na planilha por -1.
Sugere-se acompanhar 0 seguinte exemplo de caso para verificar 0 born fun
cionamento da planilha.
B) Exemplo de caso: dados de urn cultivo descontinuo de Saccharomyces cerevisiae
Na Tabela 6.1 sao apresentados os dados de concentracao celular, de subs
trato e de produto obtidos num cultivo descontinuo de Saccharomyces cereoisiae"
Esses dados, obtidos ao longo do cultivo a cada 4 horas e sujeitos a alguma flutua
c;ao experimental, devem ser ajustados a uma tendencia que represente bern 0 fe
nomeno em questao, ajuste este que pode ser denomiriado "alisamento". 0
alisamento dos pontos experimentais, que pode ser realizado por ajuste manual
em papel milimetrado ou pelo ajuste por uma ou mais equacoes polinomiais, deve
ser feito anteriormente ao calculo das velocidades especificas de crescimento, de
consumo de substrato e de formacao de produto. as dados resultantes do alisa
mento dos pontos apresentados na Tabela 6.1 encontram-se na.Tabela 6.2 (no caso,
foi feito urn ajuste por polinomios de 4. grau) .
_ _ _ _ ~ O M" . _ ~ __ --_ - - - - - ~ . - . - . - - - - - - ,.. - - -., - - - - . -- -- .- - - - - - - - : - - - - - - - . - - - - - ~ - - - . - ' - - - . - . - - . , _ _ . _ _ .. . . _ - ._.,
I
i
I
.j
:1
i
j
i
I
;
\
I I 6 Cinetica de processos fennentativos
Tabela 6.1 - Dadosexperimentais de umcultivo descontfnuo de S. cerevisiae.
24
Tempo (h)
0
4
X (giL)
0,91
0,91
S (gIL)
106,9
106,9
P (g/p
0,0
0,0
ii i
t il

8
12
16
20
1,61
2,42
3,59
4,71
96,8
83,6
59,9
31,6
6,2
15,0
23,5
34,3
'

' "' -j


"

S


24 5,51 10,6 42,2

ti,j
28 5,56 7,0
',',,' . ;. ... '?1: ;:<11 '.J; I' s.: ....- , ,r,;-{". . ""j '.'l ..... 1t.;, ..... ... :--> .. ':' ;'i
. " ; "1<-:-' r.' . ' .".... t. ;I' ". ... . " ,) .'\ -
Tabela 6.2 - Dados resultantes do alisamento de dados experimentais de um cultivo descontfnuo
de S. cerevisiae (ver Tabela 6.1).
Tempo (h) X (gIL) S (gIL) ,P (gIL) Tempo (h) X (gIL) S (gIL) P (gIL)
0 0,89 106,9 0,00 15 3,31 65,7 21,8
;
24,4
27,0
1 0,89 106,9 0,00 16 3,60 59,2
2 0,89 106,9 0,00 17 3,89 52,5
3 0,91 106,3 0,04 18 4,18 45,7 29,6
4 0,97 105,6 0,68 19 4,45 38,9

32,1
5 1,07 104,6 1,59 20 4,71 32,2 34,4
6 1,19 103,1 2,76 21 4,95 25,9 36,6
7 1,35 101,1 4,17 22 5,17 20,0 38,6
40,3 8 1,52 98,6 5,80 23 5,35 14,8
9 1,73 95,6 7,65 24 5,49 10,5 41,7
10 1,95 91,9 9,68 25 5,57 7,4 42,7 .
11 2,20 87,7 11,9 26 5,57 7,0 42,8
12 2,46 82,9 14,2 27 5,57 7,0 42,8
42,8 13 2,73 77,6 16,7 28 5,57 7,0
14 3,01 71,9 19,2
__ __ __ ._. .---c--_ _ ..._ _ . .__ .__ ..__:. .._..
Apendice 117

/ '
Eimportante observar que 0 intervalo de tempo entre dois pontos consecuti
vos resultantes do alisamento, os quais serao utilizados no calculo das velocida
des especificas, deve ser adequado ao caso em estudo. No presente exemplo,
foram utilizados dados de 1 em 1 hora, pois verificou-se que este intervalo esufi
ciente para que fossem obtidas boas curvas de velocidades espedficas.
Utilizando os dados da Tabela 6.2 para 0 calculo de velocidades espedficas,
obtem-se os dados constantes da Tabela 6.3. Para ilustrar 0 aspecto da planilha no
momenta de sua utilizacao, eapresentado no Quadro 6.2 0 calculo das velocida
des espedficas de crescimento (dados de concentracao celular na coluna C).
Tabela 6.3 - Velocidades espedficas de urn cultivodescontfnuo de S. cerevisiae .
Tempo (h)
Ilx (h-
1
) Ils (h-
1
) flp (h-
1
)
Tempo (h)
Ilx (h-
1
) Ils (h-
1
) IIp (h-
1
)

0,00 0,00 0,00 15 0,09 1,92 0,79
ItH
1 0,00 0,11 0,00 16 0,08 1,83 0,72
2 0,01 0,33 0,02 17 0,07 1,74 0,67
3 0,04 0,58 0,32 18 0,07 1,63 0,61 i ;:
4 0,08 0,85 0,78 19 0,06 1,52 0,54
"
I
5 0,10 1,11 0,96 20 0,05 , 1,38 0,48
-
v.."
6 0,12 1,43 1,07 21 0,05 1,23 0,42 .,
7 0,12 1,63 1,12 22 0,04 1,07 0,35


8 0,12 1,78 1,14 23 0,03 0,87 0,29

'
9 0,12 1,90 1,12 24 0,02 0,64 0,21

10 0,12 2,01 1,09 25 0,01 0,12 0,07
,;I,
11 0,12 2,03 1,03 26 0,00 0,03 0,01

12 0,11 2,04 0,97 27 0,00 0,00 0,00
j

13 0,10 2,01 0,92 28 0,00 0,00 0,00

,
14 0,10 1,97 0,85
I:' ,
I:'i
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________...sLL
118 Clnetica de processos ferrnentativos
Quadro 6.1 - da planilha paracalculo de uma determinada veloddade espedfica
(observe tambern 0 Quadro 6.2).
A) Para deixar um espaco razoavel para a caracterizacao dos cakulosque serao efetuados, imagina-sea entrada
de dados a partir da linha 8 da planilha: .
. Cel ula da Planilha Dados de entrada Tipo
A8 tempo (h) texto
k

:M:
B8 X (giL) texto

.;...,"1
C8 M (gIL)
:fl[
texto
";.. .,.f
...
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08 dMldt texto

E8
JlM
texto
If

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F8 i texto
' ''.


G8 mAB texto

H8 mBC texto
:.;,'
:t,
18 dCX ' texto
....":'

J8 mNO texto
;.11

t1
K8 nNO texto
.'/>.

L8 mMO texto
kl'l1
,f
...
M8 nMO texto

N8 t (c) texto


08 cxcr texto


..
,.' P8 dXldt texto

".--:-
,.
..

B) Para os cakulos relativos ao primeiro ponte, 0 rnetodo obtern a derivada tracando uma reta entre 0 segundo
eo primeiro ponto, devendo-se, portanto, entrar com osseguintes dados naIinha 9:
Celula da
Planilha
Dados de entrada Tipo
A9 tempo inicial ruimero
B9 concentracao celular inicial ruimero
C9 concentracao inicial do composto M ruimero
09 = +(ClO -C9) I (AIO - A9) equacao
E9 =+09/B9 equacao
F9 I ruimero
--- -- --.- .. . ...
Apendice 119
C) Paraos demais pontos, 0 cakuloe feito atraves das equacoes abaixo (estao indicadas as entradasda linha 10).
Quando da util iza<;ao da planilha, ap6sa entradados dados numericos (resultantes do alisamento) nascolunas
I ; A, Bee, deve-se preencheras colunas Da Pcopiando as celulas da linha 10ate a ultima linha de entradade
dados:
Celula da
Planilha
Dados de entrada Tipo
A10 segundo dado'de tempo numero
B10 segundo dado de cone . celular rnimero
C10 se gundo dado de cone . do composto M ruimero
D10 =SE (ABS (G10-H10) <=0,001 ; 110;P10) equacao
E10 =+010/B10 equaca o
FlO =+F9+1 equacao
G10 =+ (C10-C9) / (A10-A9) equacao
H10 =+ (Cll-C10) / (All-A10) equacao
110 =SE (All <>0;0,5* (G10+H10); (C10-C9) / (A10-A9) ) equacao
J10 =SE ( (Cll-C10)<>0; (A10-All) / (Cll-C10) ;99000000000) equacao
K10 =0,5* (C10+Cll) (J10*0,5* (A10+All) ) equacao
LlO =SE ( (C10-C 9) <>0; (A9-A10) / (C10-C9) ; 99000000000) equacao
M10 =0,5* (C9+C10) - (LlO*0,5* (A9+A10) ) equacao
N10 = (K10-M10) / (LlO-J10) equac;ao
010 =+LlO*N10+MlO equacao
P10 =SE (All<>O; (NlO-A10) / (C10-D10 ) ; (C10-C9) / (A10-A9) ) equacao
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Quadro 6.2 - Exernplo de cakulo de velocidade espedfica de crescirnento paradados de urn cultivo
de S. cerevisiae.
A B C I D I E F G H I I L K L M I N 0 I P
1 Planilha para 0 calculo de vel ocidades especificas pelo metodo pr oposto por LEDUY; ZAJIC'
2
3 Exemplo de aplicacso: dados de urn cul tivo desconttnuo de S. cereoisiae
4 I I I I I I
5 Entrar soment e com os dados de tempo (coluna A), de concentracao celular (coluna B) e de concentracao do compos to M'
6 (celul as, substrato ou pr oduto), cuia velocidade especifica de consumo ou de pr oducao se desei a determinar (coluna C):
7
8 tempo (h) mAB mBC dCX t(c) X (giL) M(g/L) dM /dt i mNO nNO mMO nMO cxcr dX/dt
9
11m
0,89 0,89 0,00 0,00 1
10

0,89 0,89 0,00 0,00 0,00 0,00 1 2 0,00 1E+11 -lE+11 1E+11 - 5E+10 #DIV I O! #DIV I O! #DIV I O!
11 0,89 0,89 0,01 0,01 0,00 0,02 0,01 -50 ,00 125,90 1,50 50,90 2 3 1E+11 - lE +11 0,01
12 0,91 0,91 0,04 0,04 0,02 0,06 0,04 -16,67 3 4 59,27 -50,00 125,90 2,00 25,96 0,04
13 0,97 0,08 0,08 4 0,97 5 0,06 0,10 0,08 -10,00 46,02 - 16,67 59,27 1,99 26,14 0,08
14 1,07 1,07 0,11 0,10 0,10 0,12 0,11 -8,33 46,96 -10,00 46,02 5 6 51,68 0,11
15 1,19 1,19 0,14 0,12 0,12 0,16 6 7 0,14 -6,25 41,90 -8,33 46,96 2,43 26,69 0,14
16 1,35 1,35 0,12 7 0,16 8 0,16 0,17 0,17 -5,88 45,55 -6,25 41,90 -9,95 104,08 0,16
17 1,52 1,52 0,19 0,12 0,17 0,21 0,19 -4 ,76 8 9 42,10 - 5,88 45,55 3,08 27,43 0,19
18 9 1,73 1,73 0,21 0,12 0,21 0,22 0,22 -4,55 45,02 -4,76 42,10 -13,49 10 106,36 0,21
19 1,95 1,95 0,23 0,25 0,24 10 0,12 11 0,22 -4,00 44,08 -4,55 45,02 1,74 37,13 0,23
20 2,20 2,20 0,25 0,12 0,25 0,26 0,26 11 12 -3,85 46,56 -4,00 44,08 -16,16 108,71 0,25
21 . 2,46 12 2,46 0,26 0,11 13 0,26 0,27 0,27 -3,70 48,89 -3,85 46,56 -16,36 109,48 0,26
22 2,73 2,73 0,27 0,10 0,27 13 14 0,28 0,28 - 3,57 51,08 -3,70 48,89 -1 6,58 110,30 0,27
23 3,01 3,01 0,29 0,10 0;28 0,30 0,29 - 3,33 14 15 51,49 -3,57 51,08 -1,72 57,22 0,29
24 3,31 3,31 15 0,29 0,09 16 0,30 0,29 0,30 - 3,45 56,90 - 3,33 51,49 47,07 -105,39 0,29
25 3,60 16 3,60 0,29 0,08 0,29 0,29 0,29 17 -3,45 60,64 -3,45 56,90 #DIV 101 #DIV 101 #DIV 101
26 17 3,89 3,89 0,29 0,07 18 0,29 0,29 0,29 - 3,45 64,38 - 3,45 60,64 0,29
27 4,18 4,18 18 0,28 0,07 19 0,29 0,27 0,28 - 3,70 72,83 -3,45 64,38 -33,10 --49 ,75 0,28
28 4,45 4,45 0,26 0,06 19 20 0,27 0,26 0,27 -3,85 79,58 72,83 - 3,70 47,36 -102,57 0,26
29 21 , 20 4,71 4,71 0,25 0,05 0,26 0,24 0,25 -4,17 90,25 - 3,85 79,58 33,28 -48,42 0,25
30 4,95 4,95 0,23 21 0,05 22 0,24 0,22 0,23 102,79 -4,55 -4,17 90,25 33,11 -47,70 0,23
31 22 5,17 0,202 5,17 0,04 0,22 0,18 0,20 -5,56 130,26 102,79 23 -4,55 27,20 -20,84 0,20
32 .
23 5,35 5,35 0,16 0,03 0,18 0,16 24 0,14 -7,14 173,28 -5,56 130,26 27,10 -20,30 0,16
33 5,49 5,49 24 0,11 0,14 0,08 0,11 -12,50 311,78 25 -7,14 173,28 25,85 -11,39 0,11
34
0,02
25 5,57 5,57 0,04 0,01 0,00 26 0,08 0,04 1E+11 -3E+12 - 12,50 311,78 25,50 -6,97 0,04
35 0,00 _DIV / 01 _DIY /O! _DIY /O I
36
5,57 5,57 0,00 0,00 27 0,00 0,00 lE+ll -3E+12 lE+ll -3E+12 26
0,00 0,00 0,00 27 5,57 5,57 0,00 28 0,00 1E+11 -3E+12 1E+11 -3E+12 #DIV101 #DIV 101 #DIV/OI
37 5,57 5,57 0,00 0,00 0,00 0,20 0,00 - 5,03 73,16 1E+11 - 3E+12 27,50 -65,08 0,00 28 29
!
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I
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Referendasbibliogr.\ficas 121
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II
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\
122 Cinetica de processos fennentativos
I ;
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I :
i
, ~
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d
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the production of 2/3-butanediol in continuous bioreactor by Klebsiella pneumoniae.Enzyrne Mi
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123
I _
"

Antonio Bonomi
Willibaldo Schmidell
7.1 -
Apesar de a engenharia bioquimica compreender diferentes tipos de proces
sos, englobando transporte de calor e massa e recuperacao de produtos, incluindo
varies constituintes e fen6menos dominantes.a.pesquisa em modelagem materna
tica reportada na literatura tecnica especializada refere-se basicamente as reacoes
biologicas e, recentemente, as reacoes que ocorrem no interior das celulas. Dessa
forma, a modelagem matematica de processos fermentativos pode ser definida
como a tentativa de representar, atraves de equacoes matematicas, os balances de
massa para cada componente no biorreator, associados as complexas transforma
<;5es bioquimicasque ocorrem no processo e as velocidades com que essas trans
formacoes se processam. Em razao da complexidade do processo real (que envolve
leis ffsico-quimicas, bioquimicas e geneticas), somada as limitacoes matematicas, os
modelos sao baseados, geralmente, na idealidade e, em geral, fomecem uma repre
sentacao fiel de apenas algumas das propriedades do processo.' A formulacao de
urn modelo matematico deve, segundo os autores, possuir urn comprometimento
entre grau de complexidade razoavel e solucao (esforco computacional) economi
camente desejavel. Por sua vez, a simulacao do processo corresponde a sua ana
lise (por exemplo, s':la otimizacao) atraves da utilizacao do modelo matematico
proposto.
Do ponto de vista da engenharia bioquimica, 0 desenvolvimento da mo
delagem matematica dos processos fermentativos permite atingir, entre ou
tros, os seguintes objetivos: organizar informacoes desconexas a respeito dos
fen6menos biologicos num conjunto coerente; pensar (e calcular) logicamente
a respeito de quais componentes e interacoes sao importantes num sistema
, complexo; descobrir novas estrategias para explicar 0 comportamento das ce
::" .
lulas submetidas a determinados ambientes; corrigir falhas eventualmente
.....
I
i,
)
1,; 1, 1
ii
, 'j
j
J
ii
I
I I '
i
,
\
124 Modelagem maternaticae de processesfermentativos
existentes no entendimento convencionado de determinados fenomenos e, fi
nalmente, entender as caracteristicas qualitativamente essenciais de determi
nados processes.'
a objetivo principal da modelagem maternatica e simulacao, como ferra
menta do desenvolvimento tecno16gico de processos fermentativos, e preyer 0
comportamento dinamico e estacionario do processo, inclusive em condicoes nao
testadas empiricamente, possibilitando a determinacao das condicoes operacio
nais economicamente 6timas do sistema, auxiliando no projeto e ajuste de algorit
mos de controle, no qual 0 modelo matematico formulado passa a ser parte
integrante do mesmo."
as processos fermentativos incorporam uma serie de caracteristicas que os
diferenciam dos processos quimicos, 0 que pode explicar as dificuldades encontra
das na formulacao de modelos matematicos que representem adequadamente es
tes processos, ao contrario do que ocorre com os processos quimicos
convencionais. Entre essas caracteristicas podem ser citadas as seguintes: baixas
concentracoese baixas velocidades de reacao, como resultado da utilizacao de urn
meio diluido; complexidade da mistura reagente e capacidade do sistema (celulas
microbianas) de sintetizar seu pr6prio catalisador; conhecimento insuficiente de
varies dos fenomenos limitantes das velocidades de producao e falta de sensores
para automacao on-line; problemas de esterilidade, seguranca e eventualmente da
toxicidade dos processos fermentativos."
Neste capitulo serao apresentados os principais tipos de modelos empre
gados para representar os processos fermentativos, destacando as estrategias
empregadas na formulacao dos modelos maternaticos conhecidos como feno
menol6gicos, nao estruturados, bern como as metodologias utilizadas no ajuste
desses modelos a urn conjunto de experimentos realizados. Posteriormente, se
rao introduzidas e aplicadas tecnicas estatisticas, que permitem discriminar di
versos modelos ajustados, definindo sua validade. Finalmente, ser1 discutida
brevemente a utilizacao dos modelos maternaticos visandootimizarum proces
so, atraves da definicao de uma funcao objetivo e 0 emprego de diversas tecni
cas de otimizacao.
7.2 - dos modelos matematicos de processos
fermentativos
Inicialmente, deve-se reconhecer que, num processo fermentativo, estao en
volvidos dois sistemas que interagem continuamente: a fase biol6gica (ou bi6tica)
composta pela populacao microbiana ou pela cultura de celulas animais ou vege
tais e a fase ambiental (ou abi6tica) ou 0 meio de cultura, como ecomumente co
nhecido e que contem os substratos e produtos do processo. A Figura 7.1 resume
os principais parametres, fenomenos e interacoes que influenciamo comporta
mento cinetico de uma populacao microbiana ou de celulas na presenca do seu
meio de cultura." .
.. ..._.- : ... - . .__ ..
dos modelosrnaternaticos de processos fennentativos
AMBIENTE
(meio de cultura)
Multicomponentes
Reacoes ern solucao
Equilibrio ionico
pH, T, . .. variaveis
Propriedades reol6gicas
variaveis (viscosidade)
Sistema multifase (G-L;
L-L; G-L-L; G-L-S)
Nao uniformidade
Nutrientes/Substratos

Produtos
Calor
Interacoes Medinicas
...
POPULAy\O
(celulas)
Multicomponentes
Heterogeneidade entre'
celulas
Multirreacoes
Controle interne
Adaptabilidade
Sistema estocastico
Variacoes geneticas
125
11
I
Figura7.1 - Esquema das principaiscaraeteristicasda interacio populacao rnkrobiana/celulas animaisou vegetais
e 0 meiode cultura.
As celulas consomem nutrientes e convertem substratos do ambiente em
produtos. As celulas geram calor, que edissipado para 0 meio e, em contraparti
da, a temperatura do meio define a temperatura das celulas. Interacoes mecanicas
ocorrem atraves de pressao hidrostatica, de efeitos do fluxo do meio para as celu
las, de chequeentre particulas (celulas ancoradas em suportes) e de mudancas na
viscosidade do meio em funcao do acumulo de celulas e de produtos metab6licos.
Ha que se considerar ainda que as caracteristicas de operacao do processo
l
fermentativo empregado, tais como:
1
I
I, Ii
batelada, continuo, batelada alimentada, etc.; , I
submerso e semi-solido:
alta densidade celular (recielo, imobilizacao de celulas, etc.);
entre' outras, permitem interferir na relacao populacao microbiana - ambiente, no
sentido de controlar e, se possivel, aumentar as velocidades e os rendimentos des
ta interacao.
Pelo exposto, fica claro que num desenvolvimento de processo, quando se
utilizam as tecnicas de modelagem matematica e simulacao para 0 projeto e di
mensionamento de biorreatores otimizados, de ver-se-a analisar, da forma mais
abrangente e integrada possivel, os principais fenomenos que caracterizam as in
teracoes populacao microbiana- meio ambiente - tipo deprocesso fermentati
vo. A seguir listamos alguns desses fenomenos caracteristicos:
__, "_,_,_, . _ _ , ,. --Ill.-__-......
.. .. , ...
\
126 Modelagem matematica e simula<;ao de processosfermentativos
!
l'
influencia da "hist6ria" da populacao microbiana no processo (fase lag e
de adaptacao, mutacoes, perda de viabilidade, etc.) ; .
fl
Li
influencia da composicao do meio de cultivo nas velocidades de cresci
fi
mento ou de producao da populacao microbiana (urn unico ou multiples
II
substratos limitantes, substratos inibit6rios, substratos que provocam os
ii fenomenos de inducao e repressao, etc.);
consumo de substratos para crescimento e tambem, na maioria dos casos,
para manutencao da viabilidade celular;
geracao de produtos associada ou nao ao crescimento celular;
transferencia de substratos do meio para 0 interior das celulas e de produ
tos da celula para 0 meio;
velocidades de respiracao em processos aer6bios (transferencia de oxi
genic da fase gasosa para a fase liquida atraves da agitacao e aeracao
do biorreator);
tipo de processo (submerso ou semi-s6lido, batelada ou bateladaalimen
tada ou continuo, com e sem recielo, celulas imobilizadas ou livres, uma
ou rmiltiplas fases de processo, etc.);
influencia de variaveis fisico-quimicas no processo (temperatura, pH,
pressao interna do biorreator, viscosidade, densidade, umidade do meio
de cultivo, umidade relativa do ar, etc.);
influencia das variacoes na sintese dos componentes celulares - necessida
de de ineluir "estrutura" nos modelos matematicos dos processos;
homogeneidade ou heterogeneidade do processo;
influencia das condicoes operacionais na morfologia da populacao micro
biana.
Admite-se, idealmente, que a modelagem de uma fermentacao deveria pre
dizer 0 resultado das milhares de transformacoes quimicas que ocorrem pela
ac;ao de uma populacao microbiana, ou de uma cultura de celulas animais ou ve
getais. Sem diivida, uma descricao completa de todas as vias e interaeoes meta
b6licas pertinentes ao desenvolvimento microbiano seria extremamente comple
xa e mesmo impossivel. Felizmente, sabe-se que, ao menos na area das ciencias
exatas, muitos problemas podem ser estudados usando uma media das varias
propriedades das diversas entidades em questao. Nesse sentido, e importante
lembrar que 0 modele ainda pode ser valido se somente urn ruimero limitado de
mecanismos governantes sao considerados em detalhe. Portanto, na elaboracao .
de modelos de processos fermentativos sao, geralmente, introduzidas simplifica
c;6es, de maneira a se obter modelos passiveis de serem manuseados e generali
zados." .
7.2./- Classificacao dos modelos rnaternaticos de processos
fermentativos
'.'. ' ,

11

Fonnula\ ao dos modelos maternatkos de processos fermentativos 127
I!
t; j
II
Modelos fenomenol6gicos : baseiam-se na formulacao de hip6teses e correla

coes te6ricas ou empiricas para explicar os fenomenos e 0 comportamento das va
riaveis do processo observados experimentalmente; .
11
jl
Modelos entrada-saida: estabelecem relacoes empiricas para correlacionar 0
efeito de variacoes nas variaveis de entrada ou manipulaveis (caso, por exemplo,
II
das concentracoes iniciais em sistemas operados em batelada ou das concentra
II
e vaz6es de alimentacao nos sistemas operados de forma continua) nos valo
II
res das variaveis de saida ou medidas do processo (caso do perfil de
concentracoes possiveis de serem medidas no interior do biorreator, ou no seu
Ii
efluente, ao longo do tempo). I
I
:1'
7.2.1.1 . Modelos fenomenol6gicos
Urn modelo fenomeno16gico e constituido por urn conjunto de relacoes ma
ternaticas entre as variaveis de interesse do sistema em estudo.
Edesejavel os modelos sejam, na medida do possivel, fundamentais, ou
seja, baseados nas equacoes de conservacao de massa, energia e quantidade de mo
vimento e em principios fisico-quimicos, uma vez que isto confere maior confianca
em interpolacoes e extrapolacoes, quando comparado com modelos puramente
empiricos. Entretanto, mesmo em modelos fundamentais, e freqiiente que 0 calcu
10de urn ou mais parametres seja baseado em equacoes empiricas. .
Na formulacao de urn modelo matematico fenomeno16gico convencional
sao, normalmente, utilizadas equacoes que podem ser classificadas em:
equacoes de balance ou de conservacao (de massa, energia,quantidade de
movimento), baseadas em principios ffsico-qufmicos fundamentals:
equacoes de velocidade, que podem ser: (a) equacoes de velocidade de
transporte de massa, energia e componentes ou especies quimicas, atraves
das fronteiras do 'sistema considerado ou (b) equacoes de velocidade de
geracao ou consumo de especies dentro do sistema; as equacoes de veloci
dade sao normalmente equacoes empiricas, construidas a partir do conhe
cimento advindo de ensaios realizados no laborat6rio;
equacoes termodinamicas, que relacionam propriedades termodinamicas
. do sistema (pressao, temperatura, densidade, concentracao), por exemplo,
equacoes de estado e relacoes de equilibrio termodinarnico (como eo caso
da lei de Henry para transferencia de oxigenio da fase gasosa para a fase
liquida).
Enquanto as equacoes de balance, de velocidade de transporte e termodina- ' , ,I:! ','
micas sao passiveis de padronizacao atraves de estudos te6ricos de fenomenos de .
transporte e termodinamica aplicados ha decadas na engenharia quimica, as equa.;. ' j
coes de velocidade de transformacao, ou equacoes cineticas, sao especificas para il
os processos fermentativos e constituem os chamados modelos cineticos, '
Freqiientemente, em processos com celulas livres, as informacoes sobre a ci- ' !
netica de fermentacao sao obtidasa partir de ensaios em laborat6rio realizados em ii
reatores operados de forma descontinua, descontinua alimentada ou continua. Na I':
: proposicao de urn modele cinetico para urn processo fermentativo, diversos niveis i II
L _..... .._...." .. ._._ .___ . .__ .. ___ .. ...__.. .. __ ..... _.. ... .__'-... ...._..__..... .. _.. .... .:_. .. .. .__..... .. _.. .. .. _.. __....__._.__ ...
\
128 Modelagem maternatica e simulac;ao de processosfermentativos
de detalhamento podem ser adotados. Algumas das aproximacoes, permitem sim
plificar a representacao da cinetica dos processos fermentativos:
considerando-se que, na formulacao do meio de cultura, todos os com
ponentes, menos urn ruimero preestabelecido, estao ern concentracoes
suficientemente elevadas (mas nao inibit6rias), de modo que apenas as
concentracoes destes outros componentes, previamente escolhidos, sejam
limitantes e/ou inibit6rias para a velocidade do processo; eventualmente,
enecessario incluir no equacionamento outros componentes do meio, por
exemplo, urn produto inibidor que se acumula no meio de cultura ao Ion
go do processo;
considerando-se, em geral, que alteracoes ern outras variaveis detectadas
num experimento de urn processo tipico nao afetam significativamente a
cinetica no intervalo de tempo escolhido para a modelagem; alem disso,
controles do biorreator podem regular e manter constantes alguns para
metros do ambiente, por exemplo, pH, temperatura e concentracao de oxi
genic dissolvido:
introduzindo-se no modelo, se necessario, uma descricao multicomponen
te e multivariavel da populacao microbiana ou de celulas, para represen
tar adequadamente 0 comportamento cinetico desejado.
as modelos cineticos de processos fermentativos podem ser classificados,
quanta ao ruimero de componentes us ados na representacao celular, ern dois ti
pos, conforme se detalha a seguir.
Modelos niio estruturados: 0 material celular erepresentado por uma iinica va
riavel, por exemplo, a massa celular ou 0 mimero de celulas, sem considerar varia
coes .de componentes intracelulares, ou usar tais variacoes ria previsao do
comportamento cinetico do processo;
Modelos estruturados: as celulas sao descritas corn maiores detalhes, conside
rando, por exemplo, componentes intracelulares, permitindodescrever 0 estado
das celulas e sua adaptacao as mudancas do meio ambiente. '
Quanto a heterogeneidade da populacao microbiana, os modelos cineticos
tambem sao classificados em duas categorias, descritas a seguir.
Modelos niio segregados: a populacao celular econsiderada homogenea, isto e,
todas as celulas apresentam 0 mesmo comportamento:
Modelos segregados: as celulas sao consideradas discretas, como individuos
de uma populacao heterogenea, corn distribuicao de idade, de tamanho e de pro- .
priedades celulares.
Obviamente; os modelos segregados e estruturados oferecern uma descricao
mais detalhada do comportamento cinetico do processo fermentative que os nao
segregados e os nao estruturados, mas a custa de maior complexidade e maior es
force computacional requerido ern muitos casos a qualidade e a reprodutibili
dade dos resultados obtidos nao justificam a complexidade e a perda de
generalidade introduzida.
Epossivel encontrar na literatura algumas tentativas de generalizar a mode
lagem matematica de processos fermentativos, utilizando proposicoes nao estru
_ i I I i i i I i l ~ " ' ' ' ' ' ' AJL . . ~ ~ .
. '.'.:. .
Formulao dos modelos matematicos de processosfermentativos 129
turadas de modelos, visando a utilizacao em m6dulos da etapa de fermentacao em
simuladores de processo." Verifica-se, entretanto, que essas proposicoes, por nao
acoplarem etapas de ajuste de parametres e de otimizacao de processo, sao extre
mamente limitadas, uma vez que exigem do usuario urn conhecimento aprofunda
do do processo 0 que, geralmente, nao ocorre.
7.2.1.2 - Modelos entrada-salda
Denomina-se modelo entrada-saida de urn processo acorrelacao que permi
te calcular uma ou mais respostas do sistema (suas saidas), a partir de urn ruimero
definido de variaveis de entrada medidas. 0 principal exemplo de modelos entra
da-saida, muito estudado hoje para representar sistemas complexos (caso dos pro
cessos fermentativos), sao as redes neurais. Essas redes foram concebidas a partir
de uma analogia com 0 funcionamento do cerebro humano. Neste, a informacao e
processada em unidades chamadas neuronios, Cada neuronic recebe a informa
c;ao proveniente de iruimeros outros neuronios atraves de terminais de entrada
chamados dendritos. Essas inforrnacoes sao sintetizadas no ruicleo e, se forem
suficientemente fortes, produzirao urn sinal que se propaga atraves do axonio ate
seus terminais de saida, chamados de sinapses. Finalmente, estas se ligarao a uma
nova camada de neuronios.
As redes neurais artificiais tern uma estrutura analoga adescrita, sendo que
a sintese das inforrnacoes de entrada e feita por uma ponderacao dos diversos si
nais, atraves de ajustes de coeficientes e uma posterior transformacao nao linear,
comumente do tipo sigm6ide. Ha diversas proposicoes de como interconectar os
diversos neuronios, cada uma definindo uma arquitetura de rede. A escolha de
qual arquitetura, bern como 0 mimero de neuronios e de camadas intermediarias,
sera feita sempre empiricamente a partir dos resultados fornecidos pela rede."
A rede passa a descrever o sistema corretamente quando 0 erro entre 0 re
sultado medidoe 0 _calculado por ela, a partir dos mesmos dados de entrada, es
tiver dentro do especificado. Para uma predicao correta e' necessario que se
forneca .antes arede urn conjuntocasado entrada-saida, onde se farao ajuste dos
coeficientes descritos anteriormente. Esse ajuste, que tern como criterio a rninimi
zacao do erro medida-predicao, e tambern designado por fase de treinamento. Fin
da essa etapa, faz-sesua validacao submetendo-se aanalise urn conjunto de dados
ainda nao apresentados arede.
Devido ao escopo introdut6rio do presente capitulo, nao se pretende
apresentar em detalhe a aplicacao de redes neurais a modelagem de processos
fermentativos. 0 leitor interessado podera encontrar na literatura varias aplica
coes: SYU; TSAO,10 na modelagem do crescimento de celulas em processo batela
da; WILLIS et al.," na modelagem da producao de penicilina via fermentacao:
BHAT et al., 12 no controle de uma torre de destilacao: ZORZETTO, 13 na utilizacao
de redes neurais hibridas para modelar a: etapa fermentativa do processode
producao de vitamina C e SIMUTIS et al.,14 na utilizacao de diferentes redes neu-
I rais para representar fases distintas da ferrnentacao alcoolica na producao de
(,.. "
~ cerveja.
L ~ .. _._.__.. ~ "_'''_''--- -_-----__.,.__ , .... ..,__.. , __
, ~
"
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-- - ~ . ...
130 Modelagem rnaternatica e de processesfermentativos
I
t
i
[.
i
I
I'
I
I
I
I
I
I
_______
7.2.2 - Formulacao dos modelos fenomenol6gicos nao estruturados
o primeiro passo na formulacao de urn modele matematico fenomenol6gico
e0 estabelecimento das variaveis de estado do processo, isto e, aquelas variaveis
que definem ern cada instante 0 estado do sistema (por exemplo, concentracoes de
substratos e produtos). Inclui-se tarnbem na definicao do estado de urn processo
fermentativo a capacidade (velocidade) das celulas presentes de executar suas
funcoes vitais, quais sejam: 0 crescimento ou morte celular, a geracao de produtos
e 0 consumo de substratos. Ern sistemas mais complexes 0 estado de processos
fermentativos pode incluir a fracao de celulas que preservam a capacidade de ge
rar urn determinado produto (capacidade esta introduzida, por exemplo, atraves
de tecnicas de engenharia genetica e que pode ser perdida ern funcao da instabili
dade do microrganismo gerado), a concentracao de urn substrato necessario ao
crescimento celular e que egerado pela acao de uma enzima introduzida no pro
cesso, a acao de populacoes mistas de celulas, entre outros fenomenos.
Para estudar a dinamica de urn processo fermentativo, deve-se buscar:
. identificar os processos que alteram 0 estado das populacoes envolvidas
(crescimento celular, reproducao celular, manutencao da viabilidade celu
lar, morte celular, lise celular, motilidade celular, alteracoes morfol6gicas
das celulas, como e0 caso da formacao de esporos e finalmente os proces
sos fisicos que incluem entre outros a aderencia das celulas a superficies
s6lidas);
identificar os fenomenos ambientais que afetam as velocidades de altera
do estado das populacoes:
identificar como as velocidades de alteracao do estado das populacoes sao
afetadas;
identificar como 0 ambiente eafetado pelos processos de alteracao do es
tado das populacoes.
7.2.2.1 - Equacoes de balance
As equacoes de balance do processo devem ser formuladas para cada varia
vel de estado e para 0 volume de controle do sistema ern estudo. Para os processos
fermentativos realizados ern biorreatores homogeneos, 0 volume de controle cor
responde ao pr6prio volume uti! do biorreator.
Como a formulacao e detalhamento das equacoes de balance sera vista nos
capitulos que tratam dos biorreatores, seraapresentada apenas a equacao geral do
balance a titulo de revisao:
Velocidade de
__....._.. ..
Velocidade de
entrada no volume
de controle
.-.. ..
Velocidade de
saida do volume
de controle
....__.---. --._.... _
Formulacaodos modelosmatematicos de processes fermentativos I 3I
H
I
i
.'j
;
If
II
r
I'
Termos de entrada:
'it
fluxo global atraves das fronteiras geometricas:

difusao atraves das fronteiras geometricas (importante apenas para bior
i
reatores heterogeneos, onde os volumes de controle sao infinitesimais);
f;-i
Ii
transporte atraves das fronteiras entre fases (caso do transporte de oxige
nio da fase gasosa para a fase Iiquida):
I
geracao dentro do volume de controle (geralmente crescimento celular e
producao de produtos metab6licos).
Termos de saida:
fluxo global atraves das fronteiras geometricas:
difusao atraves das fronteiras geometricas:
transporte atraves das fronteiras entre fases;
consumo dentro do volume de controle (geralmente morte celular ou con
sumo de substratos).
Dessa forma, para urn processo fermentativo homoeneo, as equacoes de ba
lance podem ser escritas na seguinte forma generalizada: 5
1 d (Vy)
- --= Lr
ger
- Lr
cons
+ DYe - "1Dy
(7.1)
V dt
onde: V volume de controle;
y concentracao da variavel de estado no biorreator;
rger ... velocidades de geracao do componente representado pela variavel de
estado;
r
cons
... velocidades de consumo do componente representado pela variavel
de estado;
D vazao espedfica de alimentacao:
Ye concentracao na alimentacao:
"1 relacao entre a vazao de alimentacao e de retirada do biorreator.
Em funcao dos balances de conservacao de massa, os modelos matematicos
fenomenol6gicos de processos fermentativos podem ser constituidos pelos seguin
tes tipos de equacoes:
equactiee algebricas: neste caso, os modelos representam apenas os estados
estacionarios de sistemas homogeneos;
equadies diferenciais ordindrias: neste caso, os modelos representam 0 compor
tamento dinamico de sistemas homogeneos ou os estados estacionarios de
sistemas heterogeneos numa unica direcao do
equacoee diferenciais parciais: neste caso, os modelos representam 0 compor
tamento dinamico de sistemas heterogeneos,
... .., ' ...
I 32 Modelagem matematica e simulao de processos fermentativos
7.2.2.2 - Identificacao do sistema de reacoes metab6licas
Inicialmente, para a construcao das equacoes de balance de massa do pro
cesso e posteriormente na elaboracao das equacoes cineticas, que representam a
influencia das variaveis de estado nas suas velocidades de geracao e de consumo,
efundamental identificar 0 sistema de reacoes metab6licas inerente ao processo
em estudo.":" Por sistema de reacoes metab6licas entende-se 0 conjunto simplifi
cado de reacoes que permite correlacionar os substratos consumidos aos produtos
gerados (entre os quais esta incluida a populacao microbiana) .
Considere-se, a titulo de exemplo, urn processo fermentativo no qual foram
identificadas, a partir de urn conjunto de experimentos realizados, 6 variaveis de
estado: a concentracao celular (X), as concentracoes de 3 substratos (51' 52 e 53) e
as concentracoes de 2 produtos (PI e P
2).
Pode-se formular 3 proposicoes de mo
delo de reacoes metab6licas, conforme indicado a seguir.
Proposta 1
Nesta proposta assume-se que 0 substrato 51 e consumido pela populacao
microbiana para crescer e, juntamente com 0 substrato 52' produzir 0 produto me
tab6lico PI; 0 substrate 53econsumido pela populacao microbiana para produzir 0
produto P
2
Os parametres k
l
a k, representam os coeficientes estequiometricos
desse sistema de reacoes metab6licas, que eilustrado a seguir:
k
I5I

k
z5I
+ k
35z
PI

Nas propostas 2 e 3, detalhadas a seguir, sao apresentadas outras duas alter
nativas para 0 sistema de reacoes metab6licas representativas do processo.
Proposta 2
X k
I5I
+k
z5z
k
351
+ k
45z
+ k
s53
PI

Proposta 3
X k
I5I
+ k
z5z
+ k
353

k
45 1
+ k
s5z
PI

Para as 3 propostas de modelo de reacoes metab6licas elaboram-se os balan
cos para os 3 substratos.
. _.. _-_. .._. _..._ - - - -.-... - .- .- - ._. . _. ..-.-- -_. .. --
Proposta 2:
dS
1
1 dX 1 dP
1
(7.8)
-=--------
dt Y x/51 dt Y Pl/51 dt
dS
2
1 dX 1 dP
1
(7.9)
-=--------
dt Y
x
/
52
dt Ypl/
52
dt
dS
3
1 dP
1
1 dP
2
(7.10)
- = - - - - - - -
dt Y
P1
/
S3
dt Yp2/ S3 dt
e integrando, novamente,as eqs . (7.8) a (7.10) do instante "0" ate 0 instante " i" ' ll!.: ' I "" ., I
correspondente a urn ponto experimental, obtem-se:
(7.11)
~ _ . ~ - - -- - - --,."
" ~ i
Fonnula o dos modelosmaterratkos de processosfennentativos 133
Proposta 1:
dS
1
1 dX 1 dP
1
(7.2)
-=--------
dt Y x/51 dt Y Pl/51 dt
dS
2
1 dP
1
(7.3)
-=---
dt Ypl/
52
dt
dS
3
1 dP
2
(7.4)
dt Y P2/S3 dt
e integrando as eqs. (7.2) a (7.4) do instante "0" ate 0 instante "i" correspondente a
urn ponto experimental, obtem-se:
- = ---
134 Modelagemmatematicae de processos fermentativos
(7.12)
(7.13)
Proposta 3:
dS
1
1 dX 1 dP
1
-=:-------- (7.14)
dt y x/51 dt YPl/51 dt
dS
2
' 1 dX 1 dP
1
- =:-------- (7.15)
dt Yx/ 52 dt YPl/52 dt
dS
3
1 dX 1 dP
2
--=:-------- (7.16)
dt YX/53 dt YP2/53 dt
e integrando, mais uma vez, as eqs. (7.14) a (7.16) do instante "0" ate 0 instante "i"
correspondente a urn ponto experimental, obtern-se:
(7.17)
(7.18)
(7.19)
Para cada proposta e para cada uma das 9 eqs. lineares (7.5) a (7.7), (7.11) a
(7.13) e (7.17) a (7.19), obtidas para as 3 propostas de modelometab6lico formu
ladas, calcula-se a regressao linear ou multilinear, dependendo do caso, obten
do-seos coeficientes de correlacao para cada ensaio e para 0 conjunto de ensaios
disponiveis, Escolhe-se, como a mais apropriada, a proposta que apresenta 0 me
lhor conjunto de coeficientes de correlacao, analisando as duas situacoes (por en
saio e global).
--- -- - - - - _._- -- ------ --
dos modelosrnaternaticosde processos fermentativos I35
EXEMPLO NUMERICO
Sera desenvolvido ao longo deste capitulo, como estudo da modelagem ma
ternatica de processos fermentativos, a modelagem do processo de producao de
etanol a partir de hidrolisado de mandioca.Y'"
Nesse processo foram identificadas 3 variaveis de estado: a concentracao de
leveduras (X), a concentracao de etanol (P) e a concentracao de substrato limitan
te, a glicose de hidrolisado doarnido de mandioca (5). Sao apresentados na Tabela
7.1 os dados experimentais obtidos em 4 ensaios realizados no laborat6rio, num
biorreator operado em batelada, partindo de diferentes concentracoes iniciais de
acucares redutores.Dbserve-se que esses dados experimentais foram ligeiramente
modificados, em relacao aos originais (reportados nos trabalhos referenciados),
com 0 intuito de tornar mais didaticos alguns aspectos dos exemplos apresentados
ao longo deste capitulo.
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 1
Considerem-se duas propostas de modelo de reacoes metab6licas para re
presentar 0 processo em estudo:
Proposta 1: X

Nessa primeira proposta, considera-se que a glicose e consumida pela leve
dura para crescer e para produzir etanol.
Proposta 2: P k
35

Nessa segunda proposta, as leveduras nao consomem glicose para 0 seu
crescimento (crescem a partir de outra fonte de carbono nao limitante no processo
e portanto nao incluida como variavel de estado caso, por exemplo, do extrato de
levedura).
Elaborando os balances de massa do substrato 5 para as 2 propostas de mo
delo metab6lico, obtem-se:
Proposta 1: .1.5 =-a.1.X - MP
Proposta 2: .1.5 = -c.1.P
Realizando a regressao multilinear para 6 balance de massa obtido com a
Proposta 1 ea regressao linear para a Proposta 2 com os dados experimentais
apresentados (Tab. 7.1), obtem-se 0 resultado sintetizado na Tabela 7.2. Essas
regressoes sao realizadas considerando, em cada instante de tempo "i", 0 subs
trato consumido e as celulas e produto produzidas desde 0 instante "0" ate 0
instante "i" .
........ .. - __ .,.. - _ ._ '
I
, ,
I
,
: I
136 Modelagem rnaternatica e m u a ~ o de processesfermentativos
Tabela 7.1 - Dadosexperimentais<'Jdo processo de producio de etanol a partir de hidrolisado de mandioca
Exemplo nurnerico.
Ensaio 1 Ensaio 2
t (h) X (giL) P (g\L) 5 (giL) t (h) X (giL) P (giL) 5 (giL)
0,0 0,378 1,92 20,8 0,0 0,845 2,44 85,1
1,0 0,652 2,54 17,6 1,0 1,08 2,88 76,8
2,0 1,17 3,54 14,8 2,0 ' 1,88 3,54 76,3
3,0 1,54 4,65 10,3 3,0 2,98 5,34 74,8
4,0 1,84 5,96 5,80 4,0 3,92 7,52 56,9
5,0 2,36 6,64 2,34 5,0 5,77 10,5 42,2
6,0 2,20 7,19 0,512 6,0 7,14 17,6 28,8
7,0 2,23 6,74 0,088 7,0 10,6 22,8 7,65
8,0 10,3 24,7 0,198
9,0 7,70 24,4 0,002
Ensaio 3 Ensai o 4
t (h) X (giL) P (giL) 5 (giL) t (h) X (giL) P (giL) 5 (giL)
0,0 0,410 2,71 136 0,0 1,12 _ 2,02 227
1,0 0,819 2,78 pO 1,0 1,29 2,56 236
2,0 1,14 3,06 131 2,0 2,29 2,90 221
3,0 1,72 3,43 134 3,0 2,68 3,82 213
4,0 2,57 4,78 130 4,0 4,36 4,44 198
5,0 4,01 6,78 120 5,0 6,18 6,69 198
6,0 4,68 8,34 106 6,0 7,70 9,31 195
7,0 6,60 11,7 100 7,0 11,1 11,3 178
8,0 9,51 15,4 69,8 8,0 13,6 15,2 160
9,0 12,6 23,0 47,S 9,0 18,3 21,0 123
10,0 12,3 28,1 18,3 10,0 18,6 31,2 76,4
11,0 14,2 38,2 0,812 11,0 22,3 39,4 46,2
12,0 15,2 37,7 0,003 12,0 29,9 53,8 11,9
13,0 25,2 54,4 0,054
(*) Dados experimentais foram gerados considerando umerro experimental aleatoric obedecendo uma
distribuicao normal (media = 0,0 e desvio padrao = I,0) de 10% para as med idas de X e 5% para as me
didas de S e P.
...iiIiiIi -lIL _ _._.__. _..__ _- - _ _._._. _
.... _-------.. --- _._- ...... - .._---- -- -------_._- -
dos modelos matematicos de processesfennentativos 137
Pelos resultados obtidos, verifica-se que a Proposta 1 e a mais adequada,
pois todos os coeficientes de correlacao obtidos para cada ensaio sao melhores ou
iguais (caso do Ens aio I), 0 mesmo ocorrendo com 0 coefi ciente de correlacao obti
do quando econsiderado 0 conjunto dos 4 ensaios. A discrepancia dos valores de
a e b obtidos para 0 Ensaio 1 (estimativas de I/Y
x
/
s
e I/Yp/
s
respectivamente) em
relacao aos outros: 3 ensaios e explicada pelo erro experimental introduzido nos
dados. Uma possivel estimativa preliminar dos valores de Y
x
/
s
e Yp /
s
num futuro
ajuste de urn modelo matematico aos dados apresentados na Tabela 7.1, serao os
valores de a e b ajustados na regressao obtida com 0 conjunto de 4 ensaios. De
ve-se destacar que, na presente analise, considerou-se que 0 erro experimental e as
ineficiencias do processo estao distribuidas entre X e P, 0 que explica porque 0 va
lor de Yp/
s
obtido nao e0 valor estequiometrico 0,511.
Tabela 7.2 .- Resultado das regress6es multilinear e li near para as 2 propostasdo Exemplo nurneri co - Etapa I.
....,
yo:
la,
:..i-.
.. fi
-.'):
{l ....
Y"; ;
:,.j'
,
ENSAIO PROPOSTA I PROPOSTA 2
!l.S=-a!l.X - b tlP !l.S=-c!l.P
1
a = 0,745; b = 3,66 c = 3,95
R = 0,992 R = 0,992
a = 2,31; b = 2,94 c = 3,90
2
R = 0,987 R = 0,983
a = 2,73; b =' 2,84 c = 4,11
3
R = 0,994 R = 0,989
,
a = 2,39; b = 3,19 c = 4,53
4
R = 0,993 R = 0,988
.. .
a = 2,81; b = 2,88 c = 4,33
Global
R = 0,993 R = 0,987
..
I,
,
iri

;i)i

'!f
. 'p .
'\, f 1":
..
"
--. Y' ,

.' .. ')t, .,, '.'i
. ; .) .. :,,: t:..
-
:';"t
7.2.2.3 - Equacoes cineticas
Conforme ja indieado anteriormente, ena construcao das equacoes cineticas
que reside toda a difieuldade e, portanto, toda a arte da formulacao dos modelos
fenomenol6gieos dos processos fermentativos. Sao as equacoes cineticas que indi
cam como as variaveis de estado do processo em estudo interferem nas velocida
des de crescimento e morte celular, de geracao de produtos metab6licos e de
consumo de substrato.
Para formular os modelos cineticos, a partir de dados experimentais, e ne
cessario executar tres etapas basicas, descritas a seguir.
Tratamento dos dados experimentais
Entende-se por tratamento dos dados experimentais, medidos em laborat6
rio, a correcao ou tr ansforrnacao dos mesmos buscando adequa-los aanalise dese-
I
I
! ,
I
tibe xt'.. bt :
138 Modelagem rnaternatca e simulagiode processos fennentativos
jada. Quando os ensaios sao conduzidos ern processos batelada e continuo, a
volume constante, deve-se trata-los, por exemplo, desprezando pontos experimen
tais que apresentem erros grosseiros, podendo-se, geralmente, t;rabalhar na anali
se dos dados experimentais corn base nas concentracoes dos componentes (ou
seja, as pr6prias variaveis de estado medidas). Ern processos fermentativos, onde
se obtem altas concentracoes celulares de microrganismos ern biorreatores, sao
empregados processos operados ern bateladas sucessivas ou bateladas alimenta
das (volume variavel) e, neste segundo caso, costuma-se tratar os dados, medidos
ern concentracao, transformando-os ern massa. Para 0 calculo das velocidades es
pedficas e dos fatores de conversao, utiliza-se, efetivamente, a massa consumida
ou produzida ao longo do processo. Normalmente, quando erealizada uma corre
~ a o dos valores medidos, corrige-se apenas 0 volume do rea tor considerando 0 vo
lume evaporado, alimentado, da amostragem e da adicao de acido ou base para 0
controle de pH. Contudo, nao e considerado que, corn a retirada de meio para
amostragem, ocorram modificacoes no estado do processo, pois as massas de to
dos os componentes do biorreator (substratos, produtos e celulas) sao alteradas.
Para tanto, necessita-se corrigir os valores experimentais das variaveis de
estado, reproduzindo uma situacao de ausencia de perturbacoes, ou seja, a situa
ao na qual nenhuma massa de produto, substrato e celula estivesse sendo retira
da . Por meio de balances de massa, aplicados a cada variavel de estado inerente
ao processo, obtem-se os valores ern massa destas variaveis, ja devidamente corri
gidos. TAKANO et a1.
20
mostram ern seu trabalho que, quando ocorrem grandes
perturbacoes do sistema, deve-se corrigir os dados experimentais antes de proce
der ao calculo das velocidades especificas e dos fatores de conversao, pois 0 erro
destes parametres do processo torna-se significativo, podendo causar problemas
quando da formulacao e do ajuste dos parametres do modelo matematico, ou
quando estes parametres do processo forem utilizados para 0 projeto do biorrea
;" tor ern escala industrial.
Uma vez tratados os dados experimentais, procede-se aidentificacao do sis
I::
tema de reacoes metab6licas, obtendo-se uma primeira estimativa d o ~ fatores de
conversao, conforme ilustrado na Etapa 1 do exemplo numerico.
l
11
Ii
I
II
I
. 7.
Fonnula"ao dos modelos rnaternatkos de processos fennentativos 139
Dessa forma, caracteriza-se a importancia do calculo cuidadoso das veloci
dades espedficas de crescimento e de producao de produtos metab6licos a partir
dos dados experimentais, calculo este que e dificultado pela forte influencia que
pequenas alteracoes das variaveis exercem sobre 0 calculo da sua velocidade. A
seguir sao listadas as etapas de uma metodologia que pode ser empregada para 0
calculo da velocidade espedfica de crescimento."
(a) Deiecciio dalase de crescimenio exponencial. Traca-se 0 grafico (In X) vs. (t)
para diferentes limites iniciais e finais de tempo, determinando-se, atraves do melhor
coeficiente de correlacao, 0 inicio e a duracao da fase exponencial de crescimento; 0
coeficiente angular da melhor correlacao fornecera 0 valor de 11m - velocidade especi
fica maxima de crescimento.
(b) Aprimoramento da curva de (X)vs. (t). Recuperando-se os valores de X que
satisfazem a regressao linear escolhida na etapa anterior, aprimora-se a curva de
(X) vs. (t) durante a fase exponencial.
(c) Cdlculo da velocidade especifica de crescimento. Com a nova curva (X) vs. (t)
obtem-se a curva da velocidade espedfica de crescimento, utilizando-se urn dos
tres metodos descritos a seguir:
Metodo de ajuste polinomial. Ajusta-se urn polinomio de grau n no tempo aos
valores de X disponiveis, obtendo-se, desta forma, a funcao .de X com 0 tem
po. Analises visuais e quantitativas (atraves do coeficiente de correlacao) de
finem 0 grau do polinomio a ser ajustado. Obtido 0 polinomio, sua derivada
fornece os valores da velocidade de crescimento, permitindo 0 calculo das
velocidades espedficas no instante.f
Metodo "spline". Existem diferentes metodos ditos "spline" na literatura tee
nica. Urn dos metodos "spline" que pode ser empregado ajusta urn polino
mio de grau n a urn intervalo de dois pontos de X, incorporando urn ruimero
de pontos "a frente" do intervalo a ser definido; alem disto, 0 metoda obriga
a que a derivada do polinomioajustado no intervalo anterior seja igual ade
rivadado polinomio ajustado no novo intervalo, no ponto de interseccao
(caracteristica dos metodos "spline"). Atraves de testes visuais define-se 0
grau do polinomio a ser ajustado, bern como 0 mimero de pontos /fa frente"
incluidos no ajuste."
Metodo geomeirico, Esse metoda ca1cula a circunferencia que passa por tres
pontos (0 valor de X correspondente ao instante de tempo no qual se quer
ca1cular a velocidade de crescimento, 0 anterior e o posterior). A derivada e
ca1culada pela tangente acircunferencia no ponte" - vide; neste mesmo vo
lume, 0 Adendo ao Capitulo 6: Cinetica de Processos Fermentativos .
Para 0 calculo das velocidades espedficas de geracao de produtos meta
b6licos, utiliza-se urn procedimento semelhante ao descrito para 0 calculo da
velocidade espedfica de crescimento. E.evidente que, quando a geracao do
produto nao e totalmente associada ao crescimento, nao e possivel realizar as
etapas (a) e (b) descritas para 0 crescimento, na medida em que nao existe
uma fase de producao exponencial.
) '
I
" i
!
- - -------- - ------------ -- ----- -------- ------ -----'--"""- -
-.



I
I
r
140 Modelagemmatematicae simula.;ao de processosfermentati vos
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 2
Sera exemplificado 0 calculo da velocidade especifica de crescimento para 0
Ensaio I, cujos dados foram fornecidos na Tabela 7.1. Sendo que 'o Ensaio 1 e, dos
quatro ensaios fornecidos, aquele ern que a quantidade de produto formada eme
nor, sera tambem 0 ensaio corn possibilidade de apresentar 0 mais proximo de
uma fase exponencial de crescimento. A seguir, serao aplicadas as tres etapas des
critas anteriormente para 0 calculoda velocidade especifica de crescimento.
(1) Determinacao da fase exponencial de crescimento - regressao linear dos
dados de (In X) vs. (t) - Figura 7.2.
Ensaio 1
0,5

0
><
0 4 6 8
.
-0,5
Y= 0,5649 x - 0,9795
-1
R2 = 0,9996
-1,5
Tempo (h)
Figura 7.2 - Definicaoda fase exponencial de crescimento para0 Ensaio I (X = concentracaocelular em gIL). ,
Para a definicao da fase exponencial de crescimento assumiu-se que ela tern
inicio no instante t =0 h, na medida ern que 0 Ensaio 1 foi realizado corn Sobaixo,
portanto, sem inibicao pelo substrato. Assumiu-se tambem como desprezivel a fase
de adaptacao.
A Tabela 7.3 apresenta 0 resultado da deterrninacao da fase exponencial de
crescimento.


Tabela 7.3 - Resultados dadeterrninacaodafase exponencial de crescimento para0 Ensaio I (Tabela 7.1).
I;
I
"
\
Duracao da fase exponencial
(h)
2
3
4
5
,
/lm (h-1)
0,565
0,480
OA02
0,358
. . ':;:; -,. .
R
0,9998
0,989
0,975
0,973









..,
" ;
Pelos resultados apresentados na Tabela 7.3, e evidente que uma possivel
fase exponencial para 0 Ensaio 1 tern a duracao de 2 h e uma estimativa preliminar
de /l me0,565 h-
1
. '
Formulacao dos modelos maternaticos de processos fermentativos 14I
(2) Determinacao da curva de (X) VS . (t), obtendo-se urn melhor detalhamen
to ao longo da fase exponencial, utilizando sua definicao (regressao linear) obtida
na etapa anterior. 0 grafico de (X) VS . (t) e apresentado na Figura 7.3.
3
2,5
2
::J'
:9 1,5
><
1
0,5
0
0 2 4 6 8
Tempo (h)
Figura 7.3 - Grafico de X em do tempo, onde (.) representa, alemdosvalores experimentais, osvalores
obtidos da dafase exponencial (Fig. 7.2) e (-) representa a curva tracada visualmente.
(3) A partir dos dados de (X) VS. (t) obtidos com base na curva tracada na Fi
gura 7.3, e obtido 0 grafico de (u) VS. (t), utilizando 0 metoda geometrico, descrito
anteriormente, utilizando a planilha apresentada no Adendo ao Capitulo 6 deste
volume. A Figura 7.4 apresenta 0 resultado dos valores de calculados, verifi
cando-se a concordancia da fase exponencial previamente definida, com 0 valor
de = (patamar da Fig. 7.4).
0,7
0,6
0,5
;g
......
0,4
.
.
0,3
0,2
0,1


2 4 6 8
Tempo (h)
Figura 7.4 - Grafico davelocidade espedficade crescimento calculadaa partir dacurvadeX (Fig. 7.3) utilizando 0
Metodo Ceometrico.>.
ldentificacdo doe [enomenos.
Nessa etapa busca-se definir os principais fenomenos que interferem no pro
cesso produtivo em analise: limitacoes e inibicoes por substratos, principalmente
no que se refere aexistencia e ao ruimero de substratos limitantes e/ou inibidores,
tipo de produto gerado - existencia ou nao de associacao com 0 crescimento, entre
outros,

r
I
142 Modelagem matematica e simulagio de processos fermentativos
I
I
Uma vez obtidos graficos que permitem analisar 0 comportamento das velo
cidades especificas de crescimento, de geracao de produto metab6lico e de consu
mo de substratos, epossivel identificar os principais fenomenos a serem incluidos
na construcao de urn modelo matematico nao estruturado de processos fermenta
tivos. 0 Quadro 7.1 sintetiza os modelos cineticos mais empregados para repre
sentar os fenomenos comumente identificados em processos fermentativos, alguns
dos quais ja foram abordados em detalhe no Capitulo 6: Cinetica de Processos Fer
mentativos.
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 3
Com 0 intuito de exemplificar a identificacao dos fenomenos, necessaria a
construcao do modelo matematico, sera identificado qual tipo de inibicao do cres
cimento celular pelo produto (etanol) ocorre na fermentacao alcoolica utilizada
como caso estudo neste Capitulo. A Tabela 7.4 apresenta os dados de u, e P obti
dos (por interpolacao) para os ensaios definidos na Tabela 7.1, no instante em que
a quantidade de 5 residual no biorreator eigual para todos os 4 ensaios - foram
consideradas duas situacoes 5 = 20,Og/L e 10,0 giL.
!,
I'
I
I'
Quadro 7.1 - Modelos cineticos naoestruturados, descritos na literatura, pararepresentacao
de diversos fenornenos identificados em processos fermentativos.
I
(1) Crescimento num unico substrato limitante:
F
(MONOD)26
(7.20)
(MOSER)27 (7.21)

(CONTOIS)28 (7.22)
(2) Morte celular:
Ild = -K
d
(SINCLAIR; KRISTIANSEN)15 (7.23)
(3) Crescimento num tinico substrato limitante e inibidor:
r
I
(ANDREWS)29 (7.24)
v
-....................---............."""""'-.....L. . - . . .__. _._-_ _--. __. . .... ..... _ . _. --_._,.-. _------_.__.. - - - _ . _ - ~ - - - - " , .._- -- -. - . - - . - .--- --'.
Fonnulao dos modelos rnatematicos de processes fennentativos 143
Quadro 7.1 - (continuacao)
= Jl
a
(WU et al.)30 (7.25)
Jl
x l + & + ( ~ J n
5 K
j
(4) Crescimento com multiple substrato limitante (uso preferencial de 51):
51 52
1
Jl = Jlm1 + Jlm2 (DUNN ET et all (7.26)
x K 5 52
s l + 1 1
K
s2
+5
2
+
K
j
(5) Crescimento com multiple substrato limitante (uso simultaneo de 51 e
(MEGEE et al .)32 (7.27)
Jl
5
(TSAO; HANSON)33 (7.28)
Jl = Jlo + 1 1 +
Jl 5 5
2 2
J(
3
J
(
+5
3
x K
s1
+5
1
K
s2
+5
2
K
s3
(6) Consumo do substrato limitante para manutencao:
(PIRT) 34
(7.29)
1 A m ~ 5-5* (ZENG; DECKWER)35 (7.30)
Jl
=--Jl + m + tiJl
S Yxis x s s K * +5 - 5 *
(7) Producao de produto metab6lico associado e nao associado
ao crescimento:
(LUEDEKING; PIRET modificado}" (7.31)
i i
: I
144 Modelagem maternaticae simula,aode processesfermentativos
Quadro 7.1 - (continuaZao)
(8) Producao de produto metab6lico inibit6rio:
(7.32)
, 5 K'
(AIBA; SHODA)37 (7.33)
fl = ~ p
P K'+5K'+P
s p
. flm5 -K P
fl
x
=--- e P (7.34)
K
s+5
f
I
f l ~ 5 - K ' P
I,: fl - e P (AIBA et al .)38 (7.35)
p - K' +5
s
l.
!
1...
,

(7.36)
- f l ~ 5 (1 P J
(CHOSE; TYACI)39 (7.37)
fl p - K +5 - p:n
onde: u, velocidade especifica de crescimento

fld velocidade especifica de morte
flp velocidade especifica de producao
fls velocidade especifica de consumo de substrato
5,5
1,52,53
. concentracoes de substratos limitantes
5* concentracao de 5 para manter u,
X concentracao celular
P concentracao de produto
Y
x
/
s
fator de conversao de substrato em celulas
m, ..... consumo de substrato para manutencao
flm' r; n, ; fl a' r; flmlt flm2, KsI , Ks2, Ks3,
flo, fll, fl2, Llfl a x , K*, a, 13m' K
ps
, K
p
, fl~ ,
K
' K' P P' ~ t . ' t'
er p' mz m parame ros CIne lCOS
._,.-.-.- ----- -.-_.._- _....,..- .- ..---- - _ _. . .....-Ji
i I
1 1
I
Formula<;Ao dos modelos rnaternatkosde processosfermentativos 145
Tabela 7.4 - Valores de u, e P quandoSresiduaJ = 20 e 10gil
Sresidual = 20,0 giL Sresidual =10,0 giL
Ensaios
P (giL) Ilx(h-1) P (giL) Ilx(h-1)
,
2,12 1 0,565 4,78 0,255
'.
':
'. ;
0,219 21,2 2 tao 0,161
30,0 0,129 33;7 3 0,0901
0,0523 54,7 4 50,5 0,0364
.. ..
..'
"' ,: ,"
...... l , ~ " '1 . .. . " ~
".
As Piguras 7.5 a 7.7 apresentam a representacao das formas linearizadas das .j
3 diferentes alternativas de modelo para a inibicao do crescimento celular pelo
produto consideradas neste Capit ulo (vide Quadro 7.1).
(1) Inibicao hiperbolica:"
1 1 1
- =- +- - p (7.38)
, 'K
f.l x f.l s f.l s p
onde
(2) Inibicao exponencialr"
(7.39)
(3) Inibicao linear:"
. ,i
II =I "_f.l: p
r- x r- s p
m
(7.40)
' I
._.__ . . . _. . _ . .. . ..
Pelos resultados apresentados nas Piguras 7.5 a 7.7, eevidente que 0 modelo
cinetico de inibicao do crescimento microbiano pelo produto, que representa ade
quadamente os dados experimentais de ferrnentacao alcoolica, e0 modelo de ini
bicao exponencial" (Pig. 7.6).
.
ir..-.,. _ ... . _. . __
.. . _ . .....JJII..A-.-,
'I'
"
"
. _
146 Modelagem rnatematicae de processes fermentativos
i
I.
I ,
!
11
I
i!
II
u
I!
I'
II
11
'I
-,
'I
,,;
d
:1
iI
;1
;I!
ii
<,I
30
25
20
5:'
15
.!
10
5
0
(A) S = 10 gIL

Y= 0,4773x - 1,4723
R
2=
0,8937

0 20 40 60
P (gIL)
(B) S = 20 gIL
25

20
g 15
x
< 10

5

o 0
Y= 0,3597x - 0,745
R2 = 0,9277
60 20 40
P (gIL )
Figura 7.5 - Tentativa de representacao da pelo produto at raves do modelo hiperb6lico. 37
(A)Sresidual = 10,0 gil
(A)S=10g/L
3,5
3
2,5
2
c
I
1,5
1
0,5
Y= O,0397x + 1,094
R2= 0,9897
00
20 40 60
P (gIL)
e (8) Sresidual = 20,0 gil.
(B) S = 20 gIL
3,5
3
2,5

2
.E:
1,5
1
Y= O,0486x + 0,5484
R2 = 0,9933 0,5
00
20 40 60
P (giL)
:1
'I
1
' i
-,I Figura 7.6 - Tentat iva de representacao da pelo produto at raves do modelo exponencial.
38
(A)Sresidual = 10, 0 giL e (8) Sresidual = 20,0 gil.
(B) S = 20 gIL
60

40 20
y = -0,0101X + 0,496
R2 = 0,8325
0,6
0,5
0,4

0,3
x 0,2
:::l.
0,1
0
-0 ,1
0
P (gIL )
(A) S =10 gIL
0,3
0,25
y =-O,0044x + 0,2615

0,2

0,15
x
:::l.
0,1
0,05
R2= 0,9612
20 40 60


P (gIL)
39
Figura 7.7 - Tentat iva de representacao da pelo produto atraves do modele linear.
(A) Sresidual = 10,0 gil e (8) Sresidual = 20,0 gil.
-.. --.. .. -- --- . . ... . .---liI -- _
Fonnula<;ao dos modelosrnatematicos de processos fennentativos 147
7.2.2.4 - Modelos fenomenol6gicos nao estruturados com culturas mistas
A existencia de rruiltiplas populacoes de microrganismos num processo fer
mentativo provocara 0 aparecimento de interacoes, nas quais uma populacao
exercera algum efeito sobre as outras. Considerando duas especies microbianas A
e B, tres tipos de interacoes poderao ocorrer entre elas: urn efeito positivo (+) (be
nefico), urn efeito negativo (-) ou urn efeito neutro (0). 0 Quadro 7.2 ilustra as di
ferentes alternativas de interacoes entre as diversas populacoes microbianas
presentes num processo fermentativo.
A formulacao dos modelos nao estruturados com culturas mistas segue a
mesma estrategia ja apresentada para os modelos com culturas puras, sendo a ob
via e unica dificuldade adicional a necessidade de medir e identificar os fenome
nos inerentes a cada populacao integrante do sistema. 0 leitor interessado podera
encontrar mais detalhes sobre modelos nao estruturados com culturas mistas em
FREDRICKSON; TSUCHIYA.
7
7.2.3 - Modelos fenomenol6gicos estruturados
Entende-se por crescimento balanceado 0 crescimento microbiano no qual a
velocidade de producao de urn componente da biomassa por unidade de biomassa
econstante, igual para todos os componentes da biomassa e igual avelocidade es
pedfica de crescimento da pr6pria biomassa. Somente nessa condicao de cresci
mento e que a forrnulacao de modelos nao estruturados e perfeitamente
justificada. Na pratica 0 crescimento balanceado s6 ocorre no estado estacionario
em ferrnentacoes continuas e durante a fase exponencial de crescimento em fer
~ - - - - , . _ ....
148 Modelagem rnatematicae de processosfennentativos
mentacoes em batelada. Dessa forma, na maioria dos casos, a caracterizacao da
atividade bio16gica simplesmente pela concentracao total debiomassa einsufici
ente para uma representacao adequada de dados experimentais .pelo modelo ma
tematico formulado.
4o
,41,42 Varies experimentos tern mostrado que a composicao da
biomassa de uma populacao microbiana varia em resposta a alteracoes nas condi
\oes do ambiente. Variacoes na composicao da biomassa sao acompanhadas por
alteracoes na natureza de processos subcelulares. Essas variacoes naatividade da
biomassa por unidade de concentracao de biomassa podem ser causadas por:
perda de plasmideos;
inducao e repressao de genes;
variacao no conteudo de RNA da celula microbiana;
variacao no conteudo enzimatico da celula microbiana;
acumulo de materiais de reserva da celula microbiana;
alteracoes morfo16gicas, por exemplo ramificacao de organismos filamen
tosos, relacao volume/superficie de celulas de leveduras e bacterias, etc .
Essas variacoes na atividade e composicao da biomassa microbiana reque
rem uma descricao mais complexa do metabolismo celular e uma estrategia mais
estruturada para modelar a cinetica microbiana. Em geral, emuito dificil obter ex
perimentalmente urn conhecimento mecanistico, a respeito do metabolismo celu
lar, para 0 desenvolvimento de urn modelo estruturado "realista". A estimativa de
parametres pode ser muito dificil e a aplicacao de rnetodos numericos complexos
pode facilmente levar a resultados sem significado fisico. Por esse motivo, mode
los estruturados de processos fermentativos raramente sao utilizados com vistas a
utilizacao no projeto de biorreatores e na implernentacao de uma estrategia de
controle.
Alem das dificuldades acima expostas, urn cuidado adicional deve ser torna
do na formulacao dos modelos estruturados, quando da montagem das equacoes
de balance para os componentes intracelulares - deve ser considerado urn termo
de diluicao do componente provocado pelo crescimento celular."
Nao serao apresentados mais detalhes dos modelos estruturados de proces
sos fermentativos, em funcao da sua complexidade e das questoes praticas ja
apontadas, que dificultam sua utilizacao. 0 leitor interessado podera encontrar na
literatura especializada excelentes revisoes e textos que the permitirao aprofundar
seus conhecimentos nessa categoria de modelos."
.,
'I
I
7.3 - Ajuste de parametres do modelo formulado
Em urn processo fermentativo, conduzido num biorreator homogeneo, 0
modelo formulado, conforme detalhado no item anterior, e representado por
equacoes matematicas do tipo equacoes diferenciais ordinarias de condicao inicial
(EOO). 0 ajuste do modelo aos dados efeito pelo calculo do melhor conjunto de
parametres, que tornam minima a diferenca entre os dados previstos pelo modelo
e os dados experimentais.
o problema de estimacao de parametres em EOO pode ser resolvido, em
principio, por duas abordagens distintas:" .
-_. .. _ _ _ _ _ . - '--" - - - _.__ -- .. __ __ . __ .4 . _ . ' __ . _,_. '
Ajustede parametresdo modelo formulado 149
diferenciacao dos dados experimentais, para obtencao direta dos valores
das velocidades de reacao: neste caso, transforma-se 0 problema em urn de
estimacao com equacoes algebricas - e0 chamado "metodo diferencial";
dependendo do modelo, as equacoes podem ser linearizadas, facilitando a
obtencao dos parametres (vide item 7.3.1);
integracao analitica (quando 0 modelo esimples) ou numerica das EOO
do modelo, ajustando-se 0 modelo aos dados diretamente medidos - e 0
chamado "metodo integral indireto" (vide itens 7.3.2 e 7.3.3).
A primeira tecnica econceitualmente simples, mas apresenta urn inconveni
ente bastante serio na operacao de diferenciacao de dados experimentais. Essa
operacao costuma ampliar drasticamente os erros experimentais, levando a valo
res pouco confiaveis das derivadas, especialmente se 0 conjunto de dados nao for
denso e se a dispersao dos dados nao for pequena. A segunda tecnica econceitual
mente mais adequada, mas requer maior esforco computacional.
7.3.1 - l.inearizacao do modelo
Essa tecnica, conceitualmente simples, de ajuste de parametres de urn mode
10 matematico de urn processo fermentativo, exige a diferenciacao dos dados ex
perimentais, obtendo-se valores das velocidades especificas de crescimento e/ou
producao. Se for tornado como exemplo urn crescimento microbiano num biorrea
tor operado em batelada e que obedece a cinetica de Monod, obtern-se 0 seguinte
modelo matematico:
dX
(7.41)
dt
d51 dX
(7.42)
dt = :Yx/s dt
Nesse modelo existem 3 parametres a serem ajustados a urn conjunto de da
dos experimentais: ~ m ' K
s
e Y
x
/
s
' Esse ajuste pode ser obtido atraves de 2 regres
soes lineares. A primeira correlaciona 0 inverso da velocidade especifica de
crescimento ( 1 / ~ ) 0 com 0 inverso da concentracao de substrato (1/5)0 no instante
inicial, conhecido como 0 grafico de Lineweaver-Burk, onde 0 coeficiente angular
eigual a (K
s
/ ~ m ) e 0 coeficiente linear a (1/ ~ m ) (Fig. 7.8).
Geralmente, sugere-se construir 0 grafico de Lineweaver-Burk a partir de
valores iniciais de 1 / ~ e 1/5 obtidos para diferentes ensaios (nos quais edetermi
nada a velocidade especifica de crescimento inicial para diferentes valores de 5 no
instante inicial), visando reduzir possiveis efeitos inibit6rios de produtos metabo
licos gerados durante 0 crescimento microbiano, na velocidade especifica calcula
da. E claro que, se 0 intuito for determinar a existencia ou nao desses efeitos, e
interessante tracar 0 grafico de Lineweaver-Burk a partir de urn ou mais ensaios,
mas considerando relacoes entre 1 / ~ e 1/5 emdiferentes tempos de crescimento.
L _
j i
!
I ~
!
I
; .
,I
I
: i

I:
Ii
II
Ii
i ,J
U
!;
i !
,
' I
:1
II
:1
:1
II
t
I
il
11
I'
I
I
. . "., :. : ./._ . ..
I 50 Modelagem rnaternatica e simulao de processos fermentativos
A partir do grafico da Figura 7.8, epossivel obter a estimativa dos valores de
11m e K
s
.
25 ,-----------------,
20
15
.? 10
....
y = 1,7112x + 3,3244
5
R2 = 0,992

o 5 10 15
1/S (Ug)
Figura 7.8 - Grati co de Lineweaver-Burk para0 cakul o de Ilm e K
s
para0 crescimento em batelada segundo 0 rno
delocinetico de Monod, Osdadosdo grafico saoapenasilustrativos. naorefletindo valoresobtidosexperimentalmente.
= 1 = 0301 h-
1
11
m
33244 '
, .
K
s
=1,7112 *Ilm =0,515g/L
A segunda regressao linear para ajuste dos parametres do modelo proposto
correlaciona os dados disponiveis de X produzido em relacao ao consumo de 5
para diferentes intervalos de tempo. 0 coeficiente angular dessa correlacao eigual
ao parametro Y
x
/
s
(Fig. 7.9).
A regressao linear representada no grafico da Figura 7.9 permite obter 0 va
lor de Y
x
/
s:
Y
x
/
s
=0,545g/g

sendo que 0 coeficiente linear da regressao deveria ser nulo; 0 valor 0,076 obtido
reflete imprecisoes do modelo e erro experimental inerente a dados obtidos em la
boratorio,
120
100
::J
:
80
0
60
x
,
X 40
Y =0,545x + 0,076
20
R2=0,991
0
0 100 200 300
SO- Si (gIL)
Figura 7.9 - Grafico paraobtencao de YXIS' OS dadosdo grafico sao apenasilustrativos, nao refletindo
val oresobtidosexperimentalmente.
.._.. . . _.- - ,. .. ,.,- _._--- -_., -- . .__.. .-_.._.. ..., ,,.,, .._ ._- ---- -_ .-
... ' " ..-- '--- - - - - _.._...__.." ...... _--_ ..__. . _-_. __.
ijl j'
Ajuste de parametres de modelefermulade 151
II
f
f
DOWD; RIGGS
4S
avaliaram estatisticamente qual a melhor forma de lineari
zar a equacao de Michaelis-Menten para a cinetica enzimatica, aplicavel, por ana
logia, ao ajuste do modelo de crescimento segundo Monod. Propuseram 3 formas
diferentes de Iinearizacao:
(7.43)
(7.44)
(7.45)
Nesse estudo estimativas de K
s
e l!m' obtidas a partir de "dados experimentais"
(construidos introduzindo urn erro aleatoric em dados simulados), sao compara
das em cada caso com os seus valores verdadeiros (utilizados na simulacao para
obtencao dos dados sem erro), de modo que 0 comportamento das transformacoes
(7.43) a (7.45) foi avaliado. 0 resultado dessa analise pode ser assim sintetizado:
obter estimativas de l!m e K
s
pelo metoda de Lineweaver-Burk (3." transfor
macae) eram destacadamente as menos confiaveis, qualquer que fosse 0 erro
na deterrninacao de l!i
plotar (5/ u) contra (5) eligeiramente melhor do que plotar (u) contra (l!/5),
quando 0 erro nos valores de l! e pequeno, mas 0 inverso ocorre quando 0
erro de l! egrande (situacao que geralmente ocorre nos processos fermentati
vos);
plotar (l!) contra (l!/5) tern a vantagem adicional de avisar 0 pesquisador
[1
quando os seus dados desviam da relacao teorica visto que, normalmente,
~
este ajuste exagera esse desvio;
utilizar a transformacao de Lineweaver-Burk leva a obtencao de urn born
ajuste, mesmo com pontos nao confiaveis - esta pode ser a justificativa
para a popularidade desta transformacao.
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 4
Ajuste para 0 modele de fermentacao alcoolica' v" a partir de hidrolisado de
mandioca em urn sistema batelada. 0 modelo matematico nao estruturado, pro
posta apos a identificacao dos principais fenomenos envolvidos no processo (vide
discussoes nas etapas 2 e 3), e composto pelas eqs. (7.46) a (7.50).
(7.46)
j
i
, I
,
' t
J
'
:
"
~
.i... ...
J I 52 Modelagem rnaternatica e si mulac;ao de processosfermentativos
(7.47)
dS{l 1)
-= --fl xX +--flpX
dt Y
x
/
s
Yp/
s
dP
-=flpX
(7.48)
dt
ii onde:
(7.49)
flPa
5
-K' P
P
(7.50)
flp = 52 e
K'
s
+5+
K ~
1
A seguir sera exemplificada a obtencao da estimativa preliminar dos para
metros atraves da Iinearizacao e simplificacao do modele, e seu ajuste aos dados
experimentais (Tab. 7.1).
(1) Estimativa de ,e ~
A partir das equacoes (7.49) e (7.50), obtem-se:

(7.51)
::.
"1
(7.52)
I
:1
onde: fl: e f l ~ ' sao os termos funcoes de 5 em flxe fl
p
' quando 5 econstante.
,I
Para urn valor de 5 constante, por exemplo, 5 = 10g/L (utilizando 0 mes
mo procedimento exemplificado na Etapa 3 para identificacao do tipo de inibi
<;ao peloproduto) sao tracados os graficos de In(fl x) VS. P (Fig. 7.6(A) - Etapa 3)
e In(fl p) vs. P (Fig. 7.10) com os dados de fl x, flpe P correspondentes a esse valor
de 5 nos 4 ensaios disponiveis. as coeficientes angulares das retas ajustadas
sao as estimativas de K
p
e K ~ . Pela metodologia proposta, torna-se evidente
que a estimativa obtida sera tao mais precisa quanto maior for 0 ruimero de en
saios disponiveis.
If
nI
ii,
':
Ajuste de parametresdo modelo formulado 153
0,8 ...---------------,
0,7
0,6
0,5
.E 04
, '
0,3
C,2

y = 0,0142 X + 0,0219
0,1
R2= 0,9674

0-1------,-.:....:..-----=--'-1-'--'---'-----1
20 40 60
P (giL)
Figura 7.10 - Grafico para obtencao da estimativa de
(2) Estimativa de Il XQ' K
s
' Il pQe K
Para urn ensaio com valores de S suficientemente baixos (Ensaio 1, por
exemplo), epossivel desconsiderar a existencia dos termos de inibicao das veloci
dades especfficas de crescimento e producao pelo substrato (eqs. 7.49 e 7.50, ter
mos S2I K, e S2I Ki). Dessa forma, epossivel linearizar essas equacoes.
KpP
e - K 1 1
s (7.53)
- - = - - - + --
Il x Il Xa S Il Xa
K;' 1 1
(7.54)
- - = - - - + --
Il P Il Pa S Il Pa
Com os val ores de K
p
e estimados no item anterior, epossivel tracar os gra
ficos de (e-
KpP
Ill x) VB. (l/S) - Fig. 7.11(A) e /Ilp) VB. (liS) - Fig. 7.11(B),
com os dados de P, S, Il x e Il P disponiveis para 0 Ensaio 1. as coeficientes lineares e
angulares das retas ajustadas fornecerao as estimativas de Il Xa' K
s
' Il Pa e
160
g
140
x
120
100
a.
c..
80

60
c..
x
40
20
0
Ql
(A)
Y=8,3514x + 2,2624
R2=0,9975
70
n.
60

50

c..Cl
40


30
c..
x 20
Ql
10
0
(B)
Y=3,3837x + 0,9144
R2=0,9978
0 10 20 0 10
1/8 (Ltg) 1/8 (Ltg)
Figura 7.1 1 - Grafi cos para obtencaodas estimativas de (A): e K
s
e (B): e
20
'

,:1
"1
il;

11
11
id
1
'I" h
I
l
I','
I'

,l
,Iril'
:. , I.!I! ,'I

\11:1 11
Ii
"'"'--
"
II
" I
.
- '----
154 Modelagemmaternaticae de processosfermentativos
(3) Estimativa de K;e Ki
Para urn ensaio com valores de 5 suficientemente elevados (inicio do Ensaio
4, por exemplo), epossfvel desprezar os valores de K
s
e nas equacoes das velo
cidades especificas (eqs. 7.49 e 7.50). Dessa forma, epossivel linearizar essas equa
<;5es.
- K P
e p
1 1
(7.55)
--- 5+
J.lx KiJ.lxa J.lxa
e 1 1
(7.56)
--=--5+
J.lp KiJ.lPa J.lPa
Com os valores de Kp e estimados anteri9rmente, epossivel tracar os gra
ficos de (e- KpP / J.lx) vs. 5 - Figura 7.12(A) e (e-KpP / J.l
p)
vs. 5 - Fig. 7.12(B) com
os dados de P, 5, J.lx e J.lp disponiveis para valores elevados de 5 no inicio do Ensaio
4. as coeficientes angulares das retas ajustadas fornecerao as estimativas de K; e
Ki, considerando os valores de J.lx. e J.lP. estimados novamente atraves dos coefici
entes lineares das retas ajustadas.
3
5 2,5
se
2
n,

1,5
-.!.
a. 1
x
Ql
0,5
0
(A)

y = 0,0037 x + 1,6498
R2= 0,9541
0 100 200 300
S (gIL)
(B)
4
3,5
a.
3
:so
_ 0) -
2,5
0.- 2

10) 1,5 /
a.
1
x y = 0,0123x + 0,6599
Ql
0,5 -
R2= 0,9151
0
0 100 200 300
S (gIL)
Figura 7.12 - Grcificos paraobtencao das estimativasde (A): K; e (B): Ki.
(4) Estimativa de YXIS e YPIS
Na .construcao do modelo assumiu-se que Yp/
s
eurn parametro fixo e igual a
0,511 (conversao estequiornetrica de glicose em etanol). Dessa forma, todas as
"ineficiencias" do sistema estarao incluidas no valor de Y
x
/
s
estimado. A estimati
va de Y
x
/
s
eobtida correlacionando 0 L1X produzido com 0 L1S
x
consumido (subs
trato consumido para produzir X, obtido descontando do total de substrato
consumido 0 substrato consumido para produzir P) para os 4 ensaios disponiveis.
-- -- - _..... ....._- -_ _-_
, .
AJuste de parametres de modele fermulade 155
A Figura 7.13 apresenta 0 grafico de (LlX) VB. (LlS
x
) , cujo coeficiente angular da reta
que passa pela origem, fornece a estimativa de YXI S'
A Tabela 7.5 apresenta 0 resultado da estimativa dos parametres para 0 mode
10 matematico da fermentacao alcoolica do hidrolisado de mandioca operada em ba
telada, ajustado preliminarmente aos dados experimentais disponiveis (Tab. 7.1).
! 35
30
::::J
25

20
'0
x
, 15
8- 10
Y= 0,2158 x
5
R2 = 0,9399

0
0 50 100 150
(So - Sj)x(g/L)
Figura 7.13 - Grafko para obtencao da estimativade YXJS'
7.3.2 - lntegracao analftica do modelo
Essa tecnica para estimativa de parametres s6 eaplicavel para casos em que
o modelo matematico ebastante simples, permitindo uma integracao analitica do
seu sistema de equacoes diferenciais ordinarias. ONG46 desenvolveu 0 ajuste de
parametres para urn crescimento microbiano num biorreator operado em batelada
e que obedece acinetica de Monod (eqs . 7.41 e 7.42) .
Integrando a eq. (7.42) obtern-se:
x=X
o
+ Y
x
/
s
(50 -5) (7.57)
Substituindo as eqs. (7.41) e (7.57) na eq. (7.42), rearranjando e integrando,
obtem-se:
J K
s+5
d5=_J.l m Jdt
(7.58)
5 5[X
o
+Y
x
/
s
(5
0
-5)] Y
x
/
s
0
o
-5)]}_d
(7.59)
t 50 t
onde:
Yx/ s
a=--
(7.60)
X
o
156 Modelagem rnaternatka e simulaylode processosfermentativos
(7.61)
b = 1+_( X--,O=--+_YX:...:::. /-=-S5--,o=--)
Yx/sK
S
d=Jlm(Xo +Yx/S50 )
(7.62)
Yx/sK
S
Portanto, bed podem ser obtidos por regressao linear (da eq. 7.59) des de que
se conheca a.
Tabela 7.5 - Estimativa preliminar dos parametres do modeloobtidos par linearizacao e simplifica<;ao do modelo.
I:;
I : ~
e
'" ';.\ =
... i
. '.
I', r
I ~ ~
0,216
Y x/ s
(gig)
0,511 (fixo)
Y
p
/ s
(gig)
,,,!
(a) Media dos valores estimados quando da estimativa
....
,
de K
s
, K ~ e r; Kj .
Parametro Valor estimado
Il xa
(h-
1
)
0,524 (a)
11 Pa
(h-
1
)
1,305 (a)
K
s
(giL) 3,69
K' (giL) 3,70
s
K
i
(giL) 446
Kr (giL) 53,7
1
K
p
(L Ig) 0,0442
K' (L Ig) 0,0142
p
...... . ,;
..
. ., ... . ~ .
.. .
Estatisticamente, uma regressao linear pode ser avaliada pelo valor do coefi
ciente de correlacao r, dado por:
(7.63)
i ..
onde: n ... ruimero de pares de pontos (x, y) a serem ajustados
In [1+ a(5
0
- 5)] (7.64)
x = - - - ---'--
t
... .. .... ... _ --_.. .. --_......-_._...__._.. _--------...... . - ~ - - _ .
ii
n
.,
Ajuste de parametresdo modelo formulado I 57
In (5 - 50)
Y = ------'-
(7.65)
t
A solucao do ajuste de parametres do modelo ( ~ f f i I K
s
e Y
x
/
s)
reduz-se, entao,
a solucao do seguinte problema de otimizacao: "Minimizar a funcao objetivo: _r
2
=
j(a), sujeita as condicoes a > ae eq. (7.64) e (7.65)".
as valores de bed sab obtidos pelas equacoes:
b = (n'L.xy - 'L.x'L.y)
(7.66)
n'L.x
2
_('L.X)2
d = ('L.y - b'L.x)
(7.67)
n
Assim como 0 metodo de ajuste do modelo por linearizacao, esse metoda
por integracao tambem deve ser utilizado com muito cuidado, pois tambern resu
me 0 problema de estimativa de parametres numa linearizacao por transforma
c;ao de variaveis. Ha alguns series inconvenientes em usar transformacoes de va
riaveis, entre os quais podemos destacar:
as faixas de variacoes de logaritmos (por exemplo, utilizados na transfor
macae de variaveis) podem ser muito diferentes das faixas de variacoes
das variaveis de origem (no caso dos logaritmos, muito menores);
ao utilizar a equacao linearizada, 0 que estara sendo minimizado ea dife
renca quadratica (quando esta for a forma de calculo dos residuos) entre a
forma transformada "experimental" e a calculada; os parametres assim
obtidos nao serao .necessariamente 6timos em relacao aos desvios da va
riavel original;
as variaveis transformadas podern nao preservar as propriedades da dis
tribuicao de erros das variaveis originais do problema, 0 que pode consti
tuir uma objecao muito seria sobre a validade do procedimento.
AUGUSTO et al.
47
tentaram utilizar 0 ajuste de parametres por regressao linear
a partir da integracao do modelo, aplicado ao crescimento microbiano obedecendo
a cinetica de Andrews, sem conseguir bons resultados pelos motivos expostos aci
rna.
7.3.3 - lntegracao numerica e ajuste por regressao nao-linear
A estimacao de parametres recai, na grande maioria dos casos, em problema _.
de regressao nao-linear, envolvendo 0 uso de metodos numericos de minimizacao
da funcao objetivo atraves de procedimentos iterativos." No caso do ajuste de pa
rametros, a funcao objetivo a ser minimizada reflete 0 residuo calculado entre os
valores experimentais e os valores simulados das variaveis de estado. as proble
mas frequenternente encontrados ao efetuar regressoes nao-lineares sao:
aproximacao numerica de derivadas parciais;
158 Modelagem rnaternatica e simulac;ao de processos fermentativos
obtencao de uma estimativa inicial adequada dos parametres:
existencia de minimos locais na funcao objetivo, isto e, a funcao residue
apresenta diversos valores minimos, que atraem a solucao do metodo
de regressao empregado, dificultando a convergencia para 0 minimo
absoluto;
a pr6pria escolha da funcao objetivo mais adequada (minimos quadrados,
maxima verossimilhanca, etc .);
interacao entre parametres, 0 que pode levar a grandes intervalos de con
fianca dos parametres.
Este ultimo problema e ainda rnais acentuado quando 0 modelo contem ex
press6es hiperbolicas, e este e freqiientemente 0 caso em processos fermentativos
- por exemplo, modelos derivados da expressao de MONOD.
49
Entre os metodos disponlveis para resolver problemas de ajuste de parame
tros por regressao nao-linear podem ser citados:
5
0,51
Metodos de ordem "0". Metodos que nao exigem 0 calculo das derivadas
das EDO em relacao aos parametres do modelo. 0 metodo de ordem "0"
mais utilizado e 0 de Nelder & Mead ou metoda dos poliedros flexiveis.
Metodos de 1: ordem. Metodos que necessitam do calculo das derivadas das
EDO em relacao aos parametres do modelo. Os metodos de La ordem
mais conhecidos sao os de Gauss-Seidel, Gradiente e Marquardt," sendo
este ultimo 0 mais empregado no ajuste de parametres de modelos mate
maticos pela sua alta eficiencia computacional.
Entretanto, 0 metodo de Nelder & Mead tern se mostrado mais efetivo em
l
comparacao ao metodo de Marquardt, quando 0 mimero de parametres a serem
d
estimados e muito grande, caso dos modelos matematicos de processos fermenta
II
tivos. Por esse motivo, sera detalhado apenas 0 metodo de Nelder & Mead de oti-
II
! mizacao para estimativa de parametres por regressao nao linear.
I .
r ,
i'
7.3.3.1 - Metodos dos poliedros f1exfveis (NELDER& MEAD?'
Ha muito tempo sabe-se que determinar 0 minimo de funcoes de n variaveis
pelo conceito mais simples - caso do estabelecimento de uma rede de pontos em
E" e valorando-se a funcao em cada ponto desta rede, ou a busca de urn rnfnimo
atraves de movimentos randomicos -e extremamente ineficiente. 0 metoda de
Nelder & Mead e urn metoda simplex geometrico flexivel, conhecido como 0 me
todo dos poliedros flexiveis. 0 metoda dos poliedros flexiveis minimiza uma fun
<;ao de n variaveis independentes, usando (n+1) vertices de urn poliedro no espaco
E", Cada vertice e definido por urn vetor x (neste caso, por urn conjunto de para
metros). 0 vertice em En que fornece 0 maior valor da funcao objetivo (neste caso
o maior residuo entre as variaveis calculadas e as variaveis experimentais) e proje
tado atraves do centro de gravidade dos vertices remanescentes. Melhores (meno
res) valores da funcao objetivo sao obtidos, substituindo, sucessivamente, 0 ponto
com maior valor de f(x) por pontos melhores, ate se obter 0 minimo de f(x).
Ajuste deparametres do modeloformulado 159
Sejam:
= , , , ... , ] i =1, ... , n+1
i-esimo vertice em E"no k-esimo estagio da busca
f ] valor da funcao objetivo no vertice <k)
centro de gravidade de todos os vertices excluido
X(k) . j = 1, ... , n
(7.68)
-n+2,j n LJ 11 hI
i=l
onde 0 Indice "j" designa cada coordenada do vertice.
o procedimento para obter urn vertice em En no qualf(x) tern urn valor "me
lhor", envolve 4 operacoes descritas a seguir.
(1) Reflexiio: Refletir atraves do centro de gravidade
X(k) =X(k) +a(x(k) _ x(k) (7.69)
-n+3 - n+2 -n+2-h
onde a > 0 ... e 0 coeficiente de reflexao.
X(k) =x(k) +y(x(k) _x(k) (7.70)
-n+4 - n+2 -n+3 -n+2
onde y > 1 ... e 0 coeficiente de expansao.
Se f f 1substituir por e continuar do passo (1) com k =
k+l. Caso contrario, substituir por e continuar do passo (1) com k = k+l.
io...-..:...... _ _ ...,_.. -0- __ _ _ . _, _, . _ ..
I 60 Modelagem maternanca e simulagio de processosfermentativos
,.
r
1.
(3) Coniraciio: Se f ]>f 1para todo i =l=h, contrair 0 vetor - cal
I
culando:
X(k) = X( k ) + A(X(k) _ X(k) ) (7.71)
-n+5 -n+2 I-' -h -n+2
onde 0 < P< 1 ... e 0 coeficiente de contracao.
Substituir por e continuar do passo (1) com k = k+l.
(4) Reducao: Se os vetores i = 1,2, ...,
n+I, por urn fator de meio, a partir de ), calculando:
X\k)=X(k)+05(X\k)-X(k) i=l, ,n+1 (7.72)
-1 -1 ' - 1 -1
e continuar do passo (1) com k = k+l.
o criterio usado por Nelder & Mead para termino da busca, consiste em ve
rificar se:
X(k)
(7.73)
)-f( -n+2
isto e, a convergencia ocorre se a raiz quadrada da media dos quadrados das dife
rencas entre a funcao objetivo calculada em cada vertice e a funcao objetivo calcula
da no centro de gravidade for menor que urn determinado valor E. A Figura 7.14
apresenta urn fluxograma que ilustra a aplicacao do metodo dos poliedros flexiveis
para a solucao de urn problema de otimizacao.
Osvalores de a, pe'Y recomendados por Nelder & Mead sao: a =I, P=0,5 e
'Y = 2. Na pratica observa-se, entretanto, que seria necessario ajusta-los caso a caso.
iii
PICCOLI et aI.
53
estabeleceram os seguintes valores ao ajustar modelos com 9, 13 e
24 parametres: a =1,0, P=0,8 e'Y =1,5.
!
n

f
Trabalho recente de AUGUSTO et aI.
47
buscou comparar a aplicacao do meto
I
'i
i;
do de regressao nao-linear sem calculo de derivadas (poliedros flexiveis de Nelder
& Mead), e com calculo de derivadas (Marquardt), ao ajuste dos parametros de
Ii
dois modelos de processos fermentativos. Para urn processo descontinuo de cres
1
cimento microbiano com urn iinico substrato limitante e inibit6rio (modelo com 4
parametres), a metodologia de Marquardt levou a urn ajuste satisfat6rio para urn
maior ruimero de casos (por "caso" entendern-se diferentes formas de calculo do
residue e diferentes estimativas iniciais dos parametres) em relacao ao metoda
dos poliedros flexiveis; no que se refere ao tempo de processamento, 0 metodo de
Marquardt, como era de se esperar, mostrou ser muito mais eficiente na grande
maioria dos casos testados. Para urn processo que, alem dos fenomenos descritos
no .caso anterior, apresenta tambem a formacao de urn produto metabolico asso
ciado e nao associado ao crescimento, e que inibe 0 processo (modelo com 8 para
Ajustede parametres do modele formulado 161
metros), quando a mesma forma de calculo dos residuos for empregada, 0 metodo
dos poliedros flexiveis produziu urn maior ruimero de ajustes satisfat6rios em re
lacao ao metodo de Marquardt. Como os modelos matematicos de processos fer
mentativos tern, geralmente, urn mimero de parametres maior do que 8, a metodo
logia apresentada para ajuste, por regressao nao linear, dos parametres (poliedros
flexiveis), esta de acordo com este resultado.
maior F.O. = Pior vertice
menor F.O.= Melhorvertice
N
Figura 7.14 - Fluxograma ilustrativo do metoda dos poliedrosflexiveis
Urn aspecto que -se tern mostrado crucial no ajuste de parametres por dife
rentes metodos de regressao nao linear e0 da definicao da funcao objetivo, isto e,
I
162 Modelagem maternaticae de processos fermentati vos
a forma de ca1cular 0 residue entre os valores ca1culados pelo modelo e os valores
experimentats." A Tabela 7.6 apresenta varias formas possiveis para 0 calculo dos
residuos entre os valores ca1culados e os valores experimentais indicando, quando
for 0 caso, os problemas observados quando da sua utilizacao. Na Tabela 7.6 sao
indicadas as formulas para calculo dos residuos que apresentaram melhores resul
tados. Sabe-se, entretanto, que a melhor formula para calculo do residuo depende
do metodo de ajuste e tambem da estimativa inicial dos parametres empregada.
Tabela 7.6 - Diferentes formulas paracakulodos residuos.
Numero Formula de calculo Problemas na utilizacao
Variaveis com elevado valor ab-
R = L(Yi -yd
1
soluto privilegiadas no ajuste .
Tendencia a ajustar melhor as va-

i
(- r
2 riaveis proximas aos valores rna
i (Yi)m (Yi)m
ximos.
Residues muito elevados para va
R=L(Yi :Yir
3 lores muito pequenos da variavel
i Yi
calculada
Residuos muito elevados para va
R=L(Yi-Yi r
lores muito pequenos da variavel 4
i Yi
experimental.
,
Resfduos elevados para valores
R=
muito pequenos e diferentes das
5
(y't)
[ J
variaveis calculada e experimen
tal.
Idem formula "5", R so ecalculada
- 6
quando Yi > E(Yi)m
R -11
7 -
(r e a sao calculados para cada va
riavel e para cada ensaio)
R =Ir -11+la-
1
1
(r e a sao calculados com todas as
8 -
variaveis normalizadas e todos os
ensaios ajustados por uma unica
reta.)
R.. .resfduo
Yi ... valor experimental da variavel
Yi ... valor calculado da variavel
(Yi)m... maximo valor da variavel experimental
r ... coeficiente de regressao linear entre as variaveis experimentais e calculadas
a ... coeficiente angular combinado entre as variaveis experimentais e calculadas.
._._---- - -- --.._---- -.---- - -.__._. _-- _. ._. - _..__..
Ajuste de parametros do modeloformulado 163
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 5
Nessa etapa do exemplo e apresentado 0 ajuste, por regressao nao-linear.
utilizando 0 metoda dos poliedros flexiveis, do modelo matematico (eqs. 7.46 a
7.50 - etapa 4 do exemplo numerico) da fermentacao alcoolica de hidrolisado de
mandioca em urn sistema batelada. 0 modelo e ajustado simultaneamente ao con
junto de 4 ensaios experimentais, ilustrados na Tabela 7.1.
o ajuste global dos ehsaios 1 a 4 (Tabela 7.1) sera realizado pelo metodo de
regressao nao-Iinear de ordem "0" - metodo dos poliedros flexiveis, utilizando
urn software desenvolvido em linguagem Fortran. As principais caracteristicas do
ajuste realizado e 0 resultado obtido sao listados a seguir.
(1) Parametres do metodo:
a = I,D
P= 0,8
y =1,5
E < 10-
5
(convergencia).
(2) Parametres ajustados: 9 (Jlxa, JlPa' ; ~ , r; Ki, K
p
, K ~ , Yx/s)'
(3) Parametres fixos do modelo: 1 (Yp/
s).
(4) Estimativa inicial dos parametres empregada: resultado do ajuste preliminar
dos parametres (Tab. 7.5). .
(5) F6rmula de calculo do residuo empregada: "f6rmula 6" (Tab. 7.6).
(6) Valor do residuo com a estimativa preliminar dos parametres - condicao
inicial do programa de ajuste:
Residue =24,1
Coeficiente angular da regressao linear entre todos os valores ca1culados e
experimentais =0,923
Coeficiente de correlacao da regressao linear entre todos os valores ca1cu
lados e experimentais = 0,928.
(7) Resultado do ajuste obtido:
Niimero de iteracoes = 971
Residuo =1,43
Coeficiente angular da regressao linear entre todos os valores calculados e
experimentais = 1,00
Coeficiente de correlacao da regressao linear entre todos os valores calcu
lados e experimentais =0,990.
Valores dos parametres (Tab. 7.7)
A Figura 7.15 ilustra a qualidade de ajuste obtido para 0 Ensaio 4. Para os
outros 3ensaios 0 resultado e semelhante, como pode ser atestado pelo valor do
residue obtido. .
164 Modelagem maternatica e simulao de processos fennentativos
Tabela 7.7 - Valores dos parametres do modelo obtidospor regressao nao -linear aplicando 0 rnetodo
dos poliedrosflexfveis.
Pararnetro Valor est imado
:;;
Il x. (h
1
) 0,672
;l

IlP. (h
1
)
2,08

K
s
(giL)
6,16
,
K
s
(giL)
7,88 fI
x, (giL)
347, f
Ki (giL)
37,4
I,:;
K
p
(l/g)
0,0436
(l/g)
0,0153
),
Y
x
/
s
(gig)
0,215
XP/s (gi g)
-' ',", ',''' ''. ""r',
"c,,
' .
0,511 (fixo) J,
"" ," ,'"
" '; ",-< '.: " :",,', ,- ' .. ; '!
7.4 - do modelo matematico
A ultima etapa do processo de formulacao e ajuste de urn modelo matemati
co fenomenologico consiste na realizacao de uma analise estatistica que visa vali
dar 0 modelo, seguida da identificacao da necessidade de realizar novos
experimentos no laboratorio, para aprimorar 0 conhecimento do processo, visan
do melhorar a qualidade do modelo.
Ensaio4
70 250
60 *
200
50
::::J
150
::::J
40

n,

30
100 en
20
50
X
10
0 '
0
0 5 10 15
Tempo(h)
Figura7.15 - Resultado do ajuste global dosensaios(Tab. 7. I) utilizando 0 metodo dospoliedrosflexfveisilustrado
para0 Ensaio 4. Ospontesindicadossao ospontesexperimentais (+ X, '" P,*5) e ascurvas foramtracadas utilizan
do 0 modele (equacoes7.46 a7.50) com osparametres indicados naTab. 7.7.
7.4.1 - Analise estatfstica
o ajuste dos parametres do(s) modelo(s) proposto(s) a urn conjunto de ensaios
experimentais e normalmente avaliado e considerado satisfatorio ou nao, por
simples inspecao visual do conjunto de ensaios, alern da analise do residuo mini
mo obtido (conforme descrito no item anterior deste capitulo). Essa avaliacao e
,. -.- --.----------.-- -- ---c----- -- -.-- ---...--.. ......-----oIIIil
.j
do modelornatematico 165
!
'.
tanto mais valida, na medida em que for levada em conta a falta de reprodutibili
dade e 0 grande erro experimental inerente aos processos biol6gicos. Apesar dessa
constatacao, eimportante submeter os ajustes obtidos a uma analise estatistica es
pedfica, com dois objetivos basicos:
verificar se epossivel discriminar urn ou mais modelos propostos em rela
<;ao aos outros, nos cas os em que foi possivel ajustar mais de urn modelo
matematico ao conjunto de dados experimentais disponiveis (teste do X
2
de Bartlett);
verificar se o(s) modelo(s) remanescente(s) representam adequadamente 0
conjunto de dados experimentais disponiveis (teste F e teste de randomici
dade).
7.4.1 .1 - Teste do X
2
de BARTLEn
55
Para saber se ha modelos nao adequados, entre urn conjunto de modelos
ajustados, testa-se a homogeneidade das estimativas do erro experimental, ou
seja, testa-se se 0 valor da variancia de algum modelo eestatisticamente diferente
dos demais. Isso efeito usando 0 teste do X
2
, calculando 0 atraves da f6rmula
de Bartlett:
m m
In(S2) - (s t)
2 i=1 i=1
(7.74)
Xcalc = [ ]
1+ 1 ! _1_ m 1
3(m - 1) i=1 (d.f.),
1=1
onde: st ... estimativa da variancia do Modelo "i"
y(k) valor experimental
valor calculado (Mod."i")
52 estimativa combinada da variancia
J
c
m
"
" st

52 = _ ;1
I'
m
I]

I!
i=1
II
(d.f.), =n - Pi ... graus de liberdade Modelo "i" I:
n ..... ruimero de pontos experimentais
n
"
IlL _
166 Modelagem matematicae processosfermentativos
Pi mimero de parametres Modelo "i"
'
} m ruimero de modelos ajustados.
i
I
r!:
Se (a, m -1) ... 0 modelo ao qual corresponde 0 maior valor de
, 1
e descartado, e assim sucessivamente, ate restar apenas 1 modele; 0 valor de
II
u m-1) e obtido em tabelas estatisticas'" onde e 0 nivel de significancia esco
ii'
lhido (geralmente 5%).
it
Se X < X (a, m -1) ... nenhum dos modelos pode ser descartado; faz-se
ill,
! :
novos experimentos, ate ser possivel definir a nao adequacao de algum modele
I
pelo criterio do x
2

I
I
7.4.1.2 - Teste F
S1
I
A analise estatistica realizada no item anterior nao garante que o(s) mode
lo(s) aprovados representem satisfatoriamente 0 conjunto de ensaios ajustados.
Para obter esse resultado utiliza-se 0 Teste F, que se baseia na obtencao do chama
i
! do "erro experimental", obtido a partir de uma serie de repeticoes do mesmo en
.
saio (ensaio padrao), Essa estimativa do "erro experimental" deve levar em conta,
I
,
,
entre outros, a falta de reprodutibilidade de processos fermentativos (devida prin
I;
cipalmente ainfluencia da "hist6ria" da populacao microbiana), a dificuldade em
I !
manter condicoes homogeneas dentro do biorreator e os pr6prios erros analiticos
, , e de amostragem comuns na atividade laboratorial. Para a avaliacao do erro expe
rimental, deve ser feito urn certo ruimero de experimentos repetidos, em pelo me
nos uma condicao experimental.
Assim, definindo-se F
eale
como a relacao entre 0 erro obtido pela falta de
ajuste e a estimativa do erro experimental, obtem-se para a formulacao do Teste F:
F -
52
c (7.75)
calc -2
5
e
onde: .. . estimativa da variancia do erro do Modelo
n ruimero de pontos por variavel
v mimero de variaveis (concentracoes de celulas, produtos e substratos)
(nv) e... ruimero de pontos ajustados (para todos os ensaiose variaveis)
P mimero de parametres do Modelo
Yij valor da variavel calculado pelo Modelo
Yij valor experimental da variavel.
A v a l i a ~ a o do modelomaternatico 167
s; ... estimativa da variancia do erro experimental
v n
LL(Yij - Yi)2
2 i=l j=l
S =-----
e (nv)e- V
(nv)e ... ruimero de pontos experimentais (para todos os ensaios repetidos
e variaveis)
Yi ... media da variavel para os ensaios repetidos.
Como 0 valor da distribuicao F, Ftab[a,(nv)c -p,(nv)e -v]=l (quando a =
5%, (nv)c 00 e (nv)e (0)56 uma vez que (nv)c e (nv)e sao, normalmente elevados,
entao para que 0 modele represente adequadamente os dados experimentais ajus
tados (ou, em outras palavras, nao apresente falta de" ajuste), e necessario que:
ou F
calc
< 1
7.4.1.3 - Teste de randorniddade"
a teste de randomicidade e util na verificacao de eventuais tendencias no
ajuste de urn modele matematico a urn conjunto de dados experimentais. as resi
duos verificados entre os dados experimentais e os dados do modele podem ser
positivos ou negativos, mas se eles sao verdadeiramente aleat6rios, 0 sinal dos
mesmos deve mudar de maneira randomica. Essa randomicidade, ou ausencia da
mesma, pode ser detectada visualmente plotando, por exemplo, os residuos versus
a variavel independente (tempo), ou versus as variaveis dependentes (variaveis de
estado). A seguir,revisaremos alguns conceitos estatfsticos necessaries para 0 en
tendimento do teste.
Disiribuicdo normal: distribuicao continua de probabilidades, tambem cha
mada de distribuicao gaussiana; e dada por:
- 1 _(y_y)2 /2(i
f( Y) ---e
(7.76)
(j.f2it
onde: Y media da distribuicao
c desvio padrao da distribuicao.
Variaoe! Z: variavel padronizada correspondente a y; que possui media 0 e
desvio padrao 1 e, portanto, e dada por:
Y-Y
(7.77)
Z=-
c
I 68 Modelagem matematica e simulac;ao de processos ferrnentativos
Nivel de significancia: ao testar uma hip6tese, a probabilidade maxima com
que desejamos arriscar urn erro do tipo 1 (rejeitamos a hip6tese quando ela deve
ria ser aceita) e chamada nivel de significancia do teste; na pratica costuma-se
adotar urn nivel de significancia de 0,05 ou de 0,01, embora outros valores possam
tambem ser usados; no caso do teste de randomicidade sera adotado urn valor de
0,05 para 0 nivel de confianca.
Regiao crftica: conjunto de valores de 2 exteriores ao intervalo de -1,96 a
1,96.
Regiiio de aceiiaciio: conjunto de valores de 2 interiores ao intervalo de -1,96 a
1,96.
A randomicidade dos residuos entre os valores das variaveis calculadas, uti
lizando 0 modelo ajustado e os valores experimentais e quantificada, medida e
testada segundo 0 procedimento descrito a seguir.
Definindo: N
1
. mimero de residuos positivos (Yc_1e > Yexp);
N, ruimero de residuos negativos (Yc_1e < Yexp);
R ruimero de vezes que a sequencia de residuos muda de sinal.
A distribuicao de R e entao aproximada pela distribuicao normal. A media e
o desvio padrao desta distribuicao sao calculados atraves das eqs. (7.78) e (7.79),
apresentadas a seguir.
(7.78)
(7.79)
2N
lNZ(2NlNz
-N
l
-N
z
)
(N
l
+Nz)z (N
l
+N
z
-1)

A forma padronizada (2) da variavel (R) e dada entao pela eq. (7.80)
(7.80)
2=R-R
O"R
sendo distribuida com media 0 e desvio padrao 1.
Para testar a hip6tese de que os desvios sao randomicos, 2 e comparada com
a distribuicao normal padrao, Se 0 valor de 2 e muito baixo, 0 modelo e inadequa
do; por outro lade, se 0 valor de 2 emuito alto, os dados experimentais content os
cilacoes que precisam ser consideradas pelo modelo. Se 0 valor de 2 cair na regiao
de aceitacao, entao a hip6tese de randomicidade pode ser aceita. Dessa forma,
existem 3 casos possiveis exemplificados a seguir.
Caso Randbmico: N
1
= 21; N, = 30;R = 29; R = 25,7; O"R = 3,42
2 = 0,965 (dentro da regiao de aceitacao) - ajuste satisfat6rio.
. .. .._ . . . -_. -.. - ._.- .... . - - _ . _ . _ - - - - - - - - - - - - - . - _ - -_.. . _ - - , . _ - - - - - ~ ........_- -- - _.. ~ ~ ~ - ~ _ .. ---- _
do modelematernatico 169
Caso Oscilante: N
1
= 26; N
2
= 25; R = 50; R=26,5; O"R = 3,5
Z = 6,7 (fora da regiao de aceitacao) .
A primeira vista, esse seria urn born ajuste. Entretanto, urn exame mais crite
rioso detectaria uma oscilacao padrao do residuo em relacao a zero. A adi
de urn termo que introduza comportamento oscilat6rio ao modelo em
questao, poderia melhorar consideravelmente 0 ajuste do modelo aos dados
experimentais. I
Caso positivo/negativo: N
1
= 32; N
2
= 19; R = 3; R = 24,8; O"R = 3,3
Z = -6,6 (fora da regiao de aceitacao).
Clara tendencia dos residues de positivo para negativo ou vice-versa, detec
tada pelo fato de R ser baixo. Por exemplo, para baixos valores da variavel
independente, 0 residuo epositivo e para altos val ores da variavel indepen
dente, 0 residuo e negativo. 0 modelo deve ser corrigido para minimizar
essa distorcao.
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 6
Nessa etapa eapresentada a analise estatistica do modelo ajustado (Etapa 5)
para a fermentacao alcoolica de hidrolisado de mandioca em urn sistema batelada
ao conjunto de 4 ensaios (Tab. 7.1).
Na medida em que existe urn iinico modelo ajustado aos dados experimen
tais, serao aplicados apenas os testes estatisticos para verificar a adequacao deste
modelo.
(1) Teste F. Para aplicar 0 Teste F ecalculada a estimativa do erro do modelo
ajustado na Etapa 5 deste exemplo numerico (Tab. 7.7 e Fig. 7.15). Calcula-se a es
timativa da variancia do erro do modelo comparando os valores das variaveis
de estado obtidas pelo modelo ajustado em relacao aos dados experimentais dis
poniveis:
v n
LL(Yij - Y ij)2 = 3023,74
i=l j=l
(nv)c = 135 (ruimero total de variaveis de estado medidas nos 4 ensaios)
p = 9 (parametres ajustados do modelo)
S2 = 3023,74 = 24 0
c 135 - 9 '
Na medida em que nao se dispoe de uma medida precisa da estimativa do
erro experimental, uma vez que nao foram fornecidas repeticoes de urn mesmo en
saio, a partir das quais esta estimativa seria obtida, a aplicacao do testeF sera mo
dificada,' calculando-se 0 erro experimental que, se existente, garante que 0
modelo ajustado representa adequadamente os dados experimentais disponiveis.
170 Modelagemrnaternatka e simula<;ao de processesfermentativos
Para tanto obtern-se, a partir dos valores das variaveis de estado medidas experi
mentalmente, a somat6ria do quadrado de todas elas:
(nv)e =135
V= 3 (ruimero de variaveis de estado)
e a estimativa da variancia do erro experimental s ~ ) edada entao, por:
2 58155&2
S =---
e 135- 3
onde E .. estimativa do erro experimental.
Como enecessario para que 0 modelo seja adequado para representar os da
dos experimentais disponiveis, que ~ < s ~ , entao:
24,0 * (135- 3) > 0 074
E>
581555 '
Avaliao do modelo rnatematico 17I
Tabela 7.8 - Resultados do testede randomicidade.
Teste por variavel de estado
Teste conjunto
p
X 5
::J
N
1
=24 N
1
= 26 N
1
= 14 N
1
=64 .-
..:
N
2
= 16 N
2
={14 N
2
= 25 N
2
= 55
.
j

,
"0" = 5 "0" = 5 "0" = 6 "0" = 16
R = 18 R = 16 R = 17 R = 53

R = 20,2 R =19,2 R =18 ,9 R = 60,2
O"R = 2,99 O"R = 2,83 O"R= 2,83 O"R = 5,4

Z = -0,736 Z = - 1,13 Z = -0,67 Z = -1,33
"
......: ....: ' :' ",
....- ;

. t .. -. :; . ,'C" ', 0" :.1' ,.", :{i;t. ;.,,..:;
7.4.2 - Projeto de experimentos
Esta tecnica relaciona 0 procedimento para estimar parametres eo trabalho
experimental de obtencao das medidas a serem usadas naquele procedimento,
bern como na propria proposicao e principalmente confirmacao dos modelos ma
tematicos.
"Projetar" urn experimento significa escolher, de forma organizada e siste
matica, as condicoes experimentais que serao usadas nos experimentos, visando
urn dado objetivo.
Esse planejamento de experimentos pode ser feito a priori, como no projeto
fatorial, ou sequencialmente (e iterativamente) com os experimentos, como no
projeto sequencial,
No projeto de experimentos, 0 que se procura fazer e otimizar 0 trabalho ex
perimental, ou seja, minimizar 0 ruimero de experimentos necessaries para se ob
ter uma dada informacao. Portanto, procura-se diminuir 0 esforco de
experimentacao e os custos envolvidos na sua execucao (sejam estes realizados em
laboratorio, em pl anta piloto ou no equipamento industrial). A tecnica permite
tambem planejar experimentos sob condicoes tais que levem a uma melhora na in
formacao procurada.
o mais utilizado dentre esses projetos e 0 planejamento fatorial, seja como
urn planejamento fatorial completo, quando 0 ruimero de variaveis do processoa
serem testadas e relativamente pequeno, ou como urn planejamento fatorial fracio
nal, quando 0 ruimero de variaveis e maior.
58
,59,60 Essa tecnica nao sera detalhada
neste texto, pois existem varias publicacoes especializadas que tratam esse assun
to em grande profundidade, e a sua utilizacao nao apresenta qualquer especifici
dade para 0 caso dos processos fermentativos."
o projeto sequencial efeito iterativamente com a experimentacao, ou seja, a
escolha das condicoes do proximo experimento e feita a partir da analise de todos
os ensaios ate entao realizados e das primeiras versoes do modelo elaboradas
(uma vez que esta tecnica exige a existencia de urn modele matematico). A infor- I
I
....-.-.-. .-.-- - 1L_
I 72 Modelagemmaternaticae simula<;ao de processos fennentativos
macae obtida em cada ensaio eadicionada as informacoes anteriores e toda a ana
lise erefeita, para projetar 0 novo experimento. 0 objetivo a ser buscado pode ser:
a discriminacao entre modelos rivais;
a estimacao precisa dos parametres de urn dado modelo.
Na elaboracao de urn modelo matematico sao testados varies possiveis mo
delos cineticos para os processos em estudo, buscando-se aquele que melhor re
presente as condicoes reais na faixa operacional de interesse. Para 0 modelo
cinetico mais adequado, busca-se entao que seus parametres sejam estimados com
a maxima precisao possfvel,
As ferramentas estatisticas envolvidas em urn projeto sequencial de experi
mentos sao: .
urn criterio de projeto, isto e, como escolher adequadamente as condicoes
do pr6ximo experimento;
urn criterio de parada, ou seja, quando 0 programa de experimentos pode
ser interrompido em virtude de ja se ter atingido 0 objetivo desejado.
As tecnicas de projeto sequencial de experimentos foram aplicadas princi
palmente no estudo da cinetica de reacoes cataliticas heterogeneas, No entanto,
tern sido pouco exploradas no ambito dos processos fermentativos, onde pode
riam ser muito uteis, dado 0 grande esforco envolvido na parte experimental
do estudo destes processes. "
Exemplos de aplicacao dessas tecnicas, apresentadas por FROMENT;
BISCHOFF;51 FROMENT; HOSTEN
55
e HIMMELBLAU,5o entre outros, mostram uma
reducao significativa (em torno de 50%) no mimero de experimentos necessaries
para a discriminacao entre modelos rivais ou para a estimacao precisa dos para
metros.
7.5 - S i m u l a ~ a o de processos fermentativos
Simular, nada mais edo que utilizar os modelos gerados, de maneira que os
mesmos reproduzam 0 comportamento real do sistema, com vistas a sua otimiza
c;ao e ainda permitam extrapolacoes validas deste comportamento. A simulacao
por computador pode ser de dois tipos, conforme definido a seguir.
. Simuladio analogica. Efeita por meio de circuitos eletronicos, Tern como van
tagem a facilidade com que resolve equacoes diferenciais, produzindo uma saida
em forma grafica. Tern como grande desvantagem a velocidade de processamento
lenta. Foi muito utilizada nas decadas de 50 e 60.
63
Simulacdodigiial. Efeita por meio de computadores digitais. Tern como gran
de vantagem em relacao a anal6gica a velocidade de processamento e uma grande
capacidade de mem6ria. Torna possivel a abordagem de problemas muito mais
sofisticados. Tern como desvantagem a necessidade de se implementar ou criar
tecnicas numericas de integracao, diferenciacao, convergencia, etc. Atualmente,
todo 0 trabalho de simulacao e, praticamente, feito em computadores digitais.
Dessa forma, quando alguem se refere a simulacao em computadoryesta sempre
se referindo asimulacao digital."
A v a l i a ~ o do modelomatematico I 73
Do ponto de vista do problema maternatico a ser resolvido, existem dois ti
pos basicos de simulacao, descritos a seguir.
Simuladio esidtica . Simulacao estatica refere-se a sistemas que estao operan
do em regime permanente, isto e, independentes do tempo. Por exemplo, a simu
lacao ou 0 projeto de uma planta de processo ou de urn equipamento (biorreator),
operando em regime continuo, sao realizados em regime permanente, ou seja,
atraves de uma simulacao estatica.
Simulaciio dinamica . Neste caso, a preocupacao e com a representacao de siste- I
mas que variam no tempo. Normalmente, trabalha-se com equacoes diferenciais or- "
dinarias no tempo para biorreatores operando em batelada ou durante 0 transiente 1
de sistemas continuos; pode-se trabalhar, ainda, com equacoes diferenciais parciais l
no tempo e no espac;o, quando e analisado 0 comportamento de biorreatores tubula- I
res ou mesmo de biorreatores completamente heterogeneos. I
Evidentemente, a qualidade da simulacao realizada vai depender dos se
guintes aspectos: ~
qualidade dos modelos utilizados na simulacao: ~
confiabilidade das propriedades fisicas e biol6gicas empregadas na for
mulacao dos modelos;
born senso na selecao dos metodos numericos a serem empregados, bern
como com a analise dos resultados de uma simulacao - muitas vezes os
modelos sao confiaveis, as condicoes operacionais sao adequadas, mas urn
problema numerico qualquer gera resultados inconsistentes.
7.s. I - Tecnicas rnaternaticas
Na simulacao de processos fermentativos homogeneos e heterogeneos, exis
tern 4 tecnicas maternaticas de calculo numerico largamente empregadas e que sao
adequadas para resolver a maioria dos problemas a serem enfrentados:
metodos de solucao de equacoes algebricas nao lineares (metodos de con
vergencia):"
metodos de solucao de sistemas de equacoes algebricas nao linearesr"
metodos de solucao de sistemas de equacoes diferenciais ordinarias de La
ordem - problemas de valor inicial:"
metodos de solucao de sistemas de equacoes diferenciais parciais - meto
do de colocacao ortogonal. 57
Por fugirem do escopo deste capitulo, nao serao detalhadas essas tecnicas, mas
o leitor interessado podera encontrar as informacoes necessarias asua adequada uti
lizacao na solucao de problemas de simulacao, nas referencias apresentadas:
7.5.2 ., Otirnizacao de processos fermentativos
Muitas vezes a etapa de fermentacao e a critica no estabelecimento dos para
metros economicos de urn processo biotecnol6gico; entretanto, isto nem sempre e
verdadeiro, 0 que complica sobremaneira a definicao da funcao objetivo a ser oti
mizada. Entende-se por funcao objetivo a representacao atraves de uma funcao
matematica do objetivo a ser buscado na operacao do processo em estudo. Po
174 .Modelagem rnatemarica e de processos fermentativos
. de-se, entao, definir uma funcao com objetivo tecnico (maximizar a produtivida
de, por exemplo) ou economico (maximizar 0 lucro, por exemplo) ou, ainda, mis
turando criterios tecnicos e economicos." Vma vez definida essa.funcao, e preciso
urn metoda de otimizacao de funcoes (ou otimizacao de parametres ou otimiza
estatica), para obter-se urn ponto maximo ou minimo. Existem varies meto
. dos de otimizacao descritos e periodicamente melhorados na literatura." Esses
metodos podem, ou nao, fazer usa de derivadas (da funcao objetivo ou do mode
10) em relacao as variaveis de otimizacao, sendo usualmente preferidos os meto
dos que nao us am derivadas - chamados metodos de pesquisa direta - pela fa
cilidade da sua execucao. Nesta categoria de metodos de otimizacao destaca-se 0
metodo dos poliedros flexiveis de NeIder & Mead, ja utilizado para 0 ajuste de
parametres.
EXEMPLO NUMERICO - ETAPA 7
Nessa etapa e apresentada a otimizacao da produtividade da fermentacao
alcoolica de hidrolisado de mandioca operada num sistema em batelada, utilizan
do 0 modelo ajustado no Etapa 5.
No caso do sistema operado em batelada as variaveis operacionais possfveis
de serem manipuladas, com vistas a maximizar a produtividade, sao as concentra
iniciais de celulas e substrato, fixada a concentracao inicial de produto pro
duzido durante a fase de preparo do inoculo. Entretanto, uma analise do processo,
a partir do seu modelo, permite concluir que a produtividade, funcao objetivo es
colhida, e monotonicamente crescente com a concentracao inicial de celulas, isto e.
a produtividade do processo cresce indefinidamente com 0 aumento de X
o
' Na
medida em que, operacionalmente, existem limitacoes quanta a concentracao ini
cial de celulas que pode ser empregada, serao considerados valores fixos de X
o
(X,
= 2,0 giL) e Po(Po= 2,0 giL) e variaremos apenas Sona busca do valor maximo da
produtividade.
Dessa forma, 0 problema de otimizacao proposto e resolvido, integrando 0
sistema de equacoes diferenciais, que comp6em 0 modelo do processo para dife
rentes valores de So' ate se obter a produtividade maxima correspondents a cada
operacao. A Figura 7.16 apresenta 0 resultado dessas simulacoes, sendo possivel
concluir que a produtividade maxima do processo estudado e de 5,26 g/L.h, obti
da numa operacao com So=260,0 giL.
6
"0
c
l
E

s:
Q)
-0-1

'S;
5
4
3
2
/



-r::




=s
-0

a.
0
0 200 400 600
So (gIL)
Figura 7.16 - Produtividade em etanolemfuncao da concentracao inicial de substrato num processo em batelada.
I
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Willibaldo Schmidell
Maria Candida Reginato Facciotti
8.1-
Denominam-se "biorreatores", "reatores bioquimicos", ou ainda "reatores
bio16gicos", os reatores quimicos nos quais ocorrem uma serie de reacoes quimi
cas catalisadas por "biocatalisadores". Esses .biocatalisadores podem ser enzimas
ou celulas vivas (microbianas, animais ou vegetais). Assim, logo de inicio, pode-se
classificar os biorreatores ern dois grandes grupos:
Grupo 1: Biorreatores nos quais as reacoes ocorrem na ausencia de celulas
vivas, ou seja, sao tipicamente os "reatores enzimaticos":
Grupo 2: Biorreatores nos quais as reacoes se processam na presenc;a de
celulas vivas".
,!
,
!
Embora nao seja totalmente generalizado, ha alguns autores, porem, que uti
lizam a denominacao "reatores bioquimicos" para se referirem apenas ao primeiro
grupo, restringindo assim a denominacao "reatores bio16gicos" apenas aos rea to
res que operam corn celulas vivas.
Corn relacao aos reatores corn celulas vivas, pode-se afirmar que os mais
amplamente conhecidos e corn uso bastante difundido, sao os reatores corn mi
crorganismos, os quais vern sendo empregados desde a decada de 1940 para a pro- II
ducao industrial de uma grande diversidade de produtos, tais como enzimas, I
antibi6ticos, vitaminas, acidos organicos, solventes, ou ainda no tratamento de re ' 1'1'1 .
siduos organicos industriais ou domesticos,
!I'
Embora se fale globalmente em "reatores corn microrganismos", emuito im i
portante destacar que, do ponto de vista da engenharia, dependendo do tipo de iI
microrganismo tais reatorespodem ter caracteristicas bastante distintas II:! .
no quese refere aos fenomenos de transporte que ocorrem no reator (calor, massa L.....
e quantidade de movimento). Assim, por exemplo, reatores que operam corn orga- I, .
t:
i!
__._ - _..- . ._ - -............... .... . .. _ _._ -.. -.- - - -
180 Biorreatores e processos fermentativos

nismos unicelulares como bacterias e leveduras possuem, em geral, urn comporta
mento reologico bastante distinto -daqueles que empregam fungos filamentosos
(bolores).
Deve-se mencionar ainda os biorreatores que operam com elevadas concen
tracoes celulares ("highcell density cultures"), 0 que propicia altas velocidades de
conversao do substrato em produto. Urn exemplo dessa situacao e a fermentacao
alcoolica, na qual se opera com cerca de 30g celulas /Iitro de meio (materia seca) .
Particularmente, no casode biorreatores que empregam microrganismos recombi
nantes, em virtude de uma possivel baixa producao espedfica da proteina hetero
loga de interesse,busca-se operar com concentracoes celulares da ordem de
lOOg/L/ 0 que exige condicoes especiais de operacao.
Outro campo de recente desenvolvimento e 0 cultivo de celulas animais e ve
getais, tendo alcancado rapido progresso nos ultimos dez anos, constituindo-se hoje
num dos grandes temas de aplicacao da Biotecnologia Moderna, Assim, pode-se ci
tar 0 emprego de biorreatores com celulas animais para a producao de uma serie de
produtos ligados a saude humana e animal, tais como vacinas virais, anticorpos
monoclonais, hormonios e fatores de crescimento.F " No que se refere as celulas ve
getais, ha exemplos de producao de principios ativos de medicamentos, como mor
fina e quinina, e outros produtos de utilizacao na industria cosmetica." Os reatores
que empregam celulas animais ou vegetais, em geral possuem varias particularida
des, tendo em vista as diferentes caracteristicas apresentadas por este tipo de celu
las em relacao as celulas microbianas, destacando-se entre elas a elevada
sensibilidade ao cisalhamento, caracteristica que, em casos extremos, leva a necessi
dade da utilizacao de biorreatores nao-convencionais, como reatores "air-lift", ou
ainda os reatores com membranas, nos quais nao se tern agitacao mecanica e, conse
quentemente as tens6es de cisalhamento sao menores. Y
8.2 - dos biorreatores

Encontram-se indicadas na literatura varias formas possiveis de classificar
os biorreatores, como por exemplo:
quanta ao tipo de biocatalisador (celulas ou enzimas);
quanta a configuracao do biocatalisador (celulas /enzimas livres ou imo
bilizadas);
quanta a forma de se agitar 0 liquido no reator.
Dentre as varias classificacoes encontradas nos livros-textos que abordam 0
tema biorreatores, uma das mais abrangentes e a de KLEINSTREUER,8 que apresen
ta uma classificacao mista, com base no tipo de biocatalisador empregado (enzi
rna, microrganismo aerobic ou anaerobic) e na configuracao deste (livre,
imobilizado ou confinado entre membranas).
Considerando-se, pois, as varias propostas usualmente encontradas, pro
poe-se no presente capitulo uma classificacao mista, a qual pretende ser mais
abrangente que as anteriormente citadas, conforme esquematizado a seguir.
. . --- . _
dos biorreatores 18I
CLASSIFICA<;Ao GERAL DOS BIORREATORES
(I) Reatores em fase aquosa (fermentacao submersa)
(1.1) Celulas/enzimas livres
Reatores agitados mecanicamente (STR: "stirred tank reactor")
Reatores agitados pneumaticamente .
Col una de bolhas ("bubble column")
Reatores "air-lift"
Reatores de fluxo pistonado ("plug-flow")
(1.2) Celulas/enzimas imobilizadas em suportes
Reatores com leito fixo
Reatores com leito fluidizado
Outras concepcoes .
(1.3) Celulas/enzimas confinadas entre membranas
Reatores com membranas planas
Reatores de fibra oca ("hollow-fiber")
(II) Reatores em fase ndo-aquosa (fermentacao semi-solida)
Reatores estaticos (reatores com bandejas)
Reatores com agitacao (tambor rotativo)
Reatores com leito fixo
Reatores com leito fluidizado gas-solido
Conforme se pode verificar, a partir da classificacao proposta, ha uma gran
de variedade de configuracoes possiveis para os biorreatores mas, no entanto, po
de-se afirmar que os mais amplamente empregados sao os reatores agitados
mecanicamente (STR), conhecidos tambem como reatores de mistura, constituindo
cerca de 90% do total de reatores utilizados industrialmente.
A capacidade dos biorreatores e bastante variavel, conforme 0 processo
em questao, podendo-se distinguir tres grandes grupos no que se refere aescala
de producao industrial. Reatores da ordem de algumas centenas de litros ate 1 a
. 2 m" de capacidade, sao empregados no cultivo de microrganismos patogenicos,
ou para 0 crescimento de celulas animais ou vegetais, em geral objetivando a
producao de produtos ligados a area de saude. Uma escala interrnediaria, na
qual se opera com reatores da ordem de algumas dezenas de metros cubicos ate
100 a 200 m", e especialmente empregada na producao de enzimas, antibi6ticos e
vitaminas, Finalmente, para processos 'que exigem poucos ou ate mesmo ne
nhum cuidado de assepsia, como e 0 caso da fermentacao alcoolica ou do trata
182 Biorreatores e processesfermentativos
mento biologico de residues, pode-se atingir reatores com alguns milhares de
metros ciibicos de capacidade."
Conforme indicado na Figura 8.1(a), 0 reator do tipo STR consiste em urn
tanque cilindrico, no qual sao comuns relacoes entre a altura e 0 diametro de 2:1
ou 3:1.
10
Normalmente 0 reator eequipado com chicanas ("baffles"), cuja funcao
eevitar a formacao de vortice durante a agitacao do Iiquido. 0 agitador emonta
do num eixo central ao fermentador, possuindo, ao longo de sua altura, uma se
rie de turbinas, as quais podem ser de diferentes tipos, sendo porem a rnais
amplamente utilizada a turbina de pas planas ("flat blade"), tarnbem conhecida
como turbina "Rushton". As razoes que fazem com que este tipo de turbina seja
a rnais amplamente empregada em processos fermentativos, serao discutidas
adiante, no Capitulo 14.
as reatores agitados pneumaticamente se caracterizam basicamente pela
ausencia do agitador mecanico, sendo a agitacao do lfquido efetuada apenas
pelo borbulhamento de urn gas (normalmente ar) no reator. Como consequencia
da ausencia do agitador mecanico, resultam, nesse tipo de reator, menores ten
soes de cisalhamento, 0 que os torna atraentes para 0 cultivo de celulas animais e
vegetats.Y
Ha na literatura uma consideravel diversidade de nomenclaturas para de
signar os reatores agitados pneumaticamente, nao havendo uma clara diferencia
<;ao entre eles. Segundo MERCHUK,Il a diferenciacao basica entre os reatores
coluna de bolhas ("bubble column") e os reatores "air-lift", e que nestes ultimos
tem-se uma movimentacao ciclica do fluido, bern definida, atraves de dispositivos
e arranjos internos construidos especialmente para este proposito, enquanto que
na coluna de bolhas tem-se urn movimento aleatoric do liquido no reator. As Figu
ras 8.1(b) e 8.1(c) ilustram esquematicamente tais tipos de reatores, os quais pos
. d d d fi - 12 13 14 C ' . d .
suem uma grande vane a e e con 19ura<;oes. " onvem am a mencionar que
os reatores tipo coluna de bolhas sao freqi.ientemente chamados de reatores tipo
. torre, enquanto que os reatores "air-lift" sao designados "loop reactors".
Nos reatores de fluxo pistonado ("plug-flow"), conforme indicado esquema
ticamente na Figura 8.1(d), 0 inoculo e 0 meio de cultura sao misturados na entra
da do sistema, sendo que idealmente a cultura flui com uma velocidade constante,
sem ocorrer mistura longitudinal ("backmix").15,16 Ha, portanto, uma variacao da
concentracao dos nutrientes e das celulas ao longo do comprimento do reator, sen
do este sistema comparavel a urn processo continuo realizado em rruiltiplos esta
gios, com urn elevado numero de reatores ligados em serie, conforme sera visto no
Capitulo 12. .
Conforme indicado na classificacao geral dos biorreatores, apresentada an
teriormente, e possivel dispor de reatores nos quais 0 biocalisador se encontra
imobilizado em urn suporte inerte, como, por exemplo, alginate, K-carragena, pec
tina, ou ainda materiais ceramicos, vidro, silica e outros." .
A finalidade basica do emprego de celulas imobilizadas num biorreator ea
manutencao de elevadas concentracoes celulares, podendo-se atingir, consequen
temente, elevadas produtividades no processo em questao. Dependendo da movi
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C1assifica,ao dos biorreatores 183
mentacao relativa das particulas ("pellets"), distinguem-se os reatores de leito
fixo, onde a movimentacao e praticamente inexistente, e os de leito fluidizado,
onde ha uma movimentacao intensa das particulas, sendo que a fluidizacao do lei
to pode ser provocada pela injecao de ar, ou de urn gas inerte, ou ainda pode ser
obtida por uma corrente de recirculacao de Iiquido no reator. As Figuras 8.1(e) e
8.1(f) ilustramas configuracoes mencionadas. Deve-se mencionar, ainda, 0 desen
volvimento recente de alguns biorreatores que empregam celulas e enzimas
co-imobilizadas, como descrito por exemplo no trabalho de GIORDANO, IS no qual
se empregou a co-imobilizacao de glicoamilase e celulas de Saccharomyces cerevisi
aepara a producao continua de etanol.
Por sua vez, os reatores com laminas de membranas planas e os reatores de
fibra oca ("hollow-fiber"), caracterizam-se por manterem as celulas confinadas en
tre membranas semipermeaveis ("entrapped biocatalyst"), as quais permitem 0
fluxo de liquido, mas nao a passagem de celulas.
19
,2o Esse tipo de reator normal
mente preve a separacao entre os fluxos de nutrientes e produtos metab6licos,
conforme se pode visualizar nas Figuras 8.1(g) e 8.1(h), 0 que permite imaginar
uma primeira operacao de separacacdo produto desejado, podendo contribuir
para a simplificacao das etapas de purificacao do produto ("downstream").
Como ocorre a passagem de nutrientes e produtos atraves de membranas,
esse tipo de reator costumaser designado por "reator de perfusao". No entanto,
o termo reator ou sistema de perfusao, tern sido empregado de forma mais gene
rica, incluindo a situacao de urn reator STR com reciclo externo de celulas por fil
tracao em membranas, ou ainda, simplesmente designando urn reator com
celulas imobilizadas."
Nesse tipo de reatores com membranas, as tens6es de cisalhamento sao mf
nimas, inferiores aquelas obtidas nos reatores "air-lift", 0 que os torna indicados
para utilizacao com alguns tipos de celulas animais extremamente sensiveis ao ci
salhamento. Comparativamenteaos tipicos reatores com celulas imobilizadas em
suportes inertes, tem-se neste tipo de reatores menores obstaculos difusionais, po
dendo-se igualmente manter elevadas concentracoes celulares." Particularmente,
. 0 reator de fibra oca consiste em urn feixe de fibras capilares de material semiper
meavel, no interior das quais ocorre escoamento laminar do meio de cultura, per
manecendo as celulas retidas na regiao anular entre as fibras, conforme indicado
na Figura 8.1(h).
. Todos os tipos de reatores mencionados ate 0 presente sao ditos reatores em
fase aquosa, ou seja, empregados nos processos de ferrnentacao submersa. Entre-
tanto, ha ainda os reatores em fase nao-aquosa, empregados para os processos de
fermentacao semi-solida, os quais se caracterizam pela ausencia de "agua livre",
podendo 0 teor de umidade variar de 30 a 80%, dependendo das caracteristicas de
retencao de agua do substrato s6lido empregado, embora 0 processo semi-solido
apresente uma serie de dificuldades, especialmente no que se refere ao controle
das condicoes de operacao: por outro lado, este processo apresenta uma serie de
aspectos interessantes, os quais podem torna-lo, em alguns casos, rnais economico
do que o tradicional processo submerso.23,24 0 entre os itens que necessitam de urn
maior desenvolvimento, encontra-se 0 estudo de novas concepcoes de reatores
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184 Biorreatores e processosfennentativos
para a fermentacao semi-solida, encontrando-sena literatura urn grande numero
de trabalhos nos quais se emprega 0 "reator de bandejas" ("s tationar y trays"), 0
qual ebastante limitado no que se refere as condicoes de transferencia de oxigenio
e controle das condicoes ambientais. Nesse sentido epossivel obter-se uma melho
ria, quando se procede a agitacao do meio de cultivo, por exemplo, empregan
do-se tambores rotativos.
25
,26 Mais recentemente, foram propostos os reatores de
leito fixo ou de lei to fluidizado gas-solido," :" nos quais se promove a passagem
de ar ou de urn gas inerte atraves de urn leito de particulas s6lidas. No caso do lei
to fluidizado, a vazao do gas esuficientemente elevada, de maneira a propiciar a
suspensao dos s6lidos na corrente gasosa, promovendo desta maneira, uma me
lhor condi cao de transferencia de massa no sistema (nutrientes, oxigenio) e ainda
auxiliando no controle da temperatura.
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Figura 8,1 - Tiposde biorreatores(a)STR; (b) colunadebolhas; (c) "air-lift"; (d) "plug-flow"; (e) com celulas imobili
zadas (Ieito fixo); (f) com celulas imobilizadas (Iei to fluidizado); (g) reator com membranasplanas; (h) "hollow-fiber".
_J
Formas de conduc;ao de um processo fermentativo 185
Conforme visto no presente item, ha uma grande diversidade possivel de
biorreatores a serem empregados em urn determinado processo fermentativo, sen
do que a melhor opcao dependera das caracteristicas do processo em questao, bern
como do microrganismo utilizado.
Convem salientar que alguns dos t6picos abordados no presente item serao
melhor detalhados em outros capitulos, tais como:
. Capitulo 13: Fermentacao em estado s6lido
Capitulo 16: Reatores com celulas imobilizadas
Capitulo 17: Reatores com enzimas imobilizadas
No item seguinte pretende-se mostrar que existem numerosas opcoes quan
to aforma de conducao do processo, ou seja, quanta aforma de operacao de 'urn
dado biorreator, e que a forma ideal de operacao, isto e, aquela que conduzira a
urn desempenho 6timo do processo, sera funcao novamente das particularidades
do material bio16gico empregado.
8.3 - Formas de de um processo fermentativo
Quando se pensa em executar urn processo fermentativo, normalmente se
imagina preparar urn certo meio de cultura que seja adequado anutricao e,desen
volvimento do microrganismo, bern como ao acumulo do produto desejado; colo
car este meio de cultura em urn biorreator (fermentador); adicionar 0
microrganismo responsavel pelo processo bio16gico (inocular) e aguardar que 0
processo ocorra. Ap6s urn determinado tempo de fermentacao, imagina-se retirar
o caldo fermentado do reator e executar as operacoes unitarias necessarias para a
recuperacao do produto.
A descricao acima eaquela tipica de urn processo descontinuo simples, ou
descontinuo tradicional, etambem designado como processo em batelada.
No entanto, essa descricao e tambem tipica de pessoas nao ligadas a Enge
nharia Bioquimica, ou com experiencia em processos fermentativos, pois, sem
querer recair em.afirrnacoes dotadas de extrema exagero, pode-se dizer que exis
tern infinitas formas de se conduzirum reator bio16gico, dependendo das caracte
risticas pr6prias do microrganismo, meio de cultivo e dos objetivos espedficos do
processo que se pretende executar.
Inclusive, ao se imaginar o .descontinuo como iinica alternativa para a con
ducao do processo fermentativo, pode-se incorrer no engano de concluir, precoce
mente, sobre a inviabilidade do processo produtivo, em virtude de sua baixa
produtividade.
Com base nessas consideracoes iniciais, fica clara a necessidade de uma
maior reflexao sobre os reatores bio16gicos, tendo em vista suaenorme flexibilida
de de operacao, bern como sua incidencia imediata quanta aeconomicidade de urn
dado processo fermentativo.
Pode-se afirinar que, a partir da decada de 1950, ocorreu urn maior desen
volvimento daarea de rea tores, encontrando a mesma, desde entao, urn formida
vel avanco, sendo responsavel pelo sucesso de muitos processos fermentativos,
obviamente ao lado dos demais desenvolvimentos das areas mais basicas, como
por exemplo a microbiologia destes processos.
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186 Biorreatores e processos fermentativos
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Nao eobjetivo do presente texto abordar todas as formas de operacao de urn
biorreator, mesmo porque isto seria inviavel, tamanha a diversidade hoje observa
da, dependendo das caracterfsticas pr6prias de cada processo. 0 que se pretende e
abordar as formas mais gerais, entendendo que tal estrategia permitira as particu
larizacoes que se fizerem necessarias.
Com essa ideia em mente, pode-se dizer que, de uma forma geral, urn reator
biol6gico pode ser operado das seguintes formas:
- Descontfnuo
com urn in6culo por tanque
com recirculacao de celulas
[ - Semicontfnuo
sem recirculacao de celulas
com recirculacao de celulas
- Descontfnuo alimentado
sem recirculacao de celulas
com recirculacao de celulas
- Contfnuo
executado em urn reator (com ou sem recirculacao de celulas)
executado em varies reatores (com ou sem recirculacao de celulas)
o processo descontinuo simples, ou seja, aquele efetuado com urn in6culo
por tanque, ja foi descrito no inicio deste item. No entanto, cabe ainda acrescentar
que esse processo e 0 mais seguro quando se tern 0 problema de manutencao de
condicoes de assepsia, pois ao final de cada batelada imagina-se que 0 reator de
vera ser esterilizado juntamente com 0 novo meio de cultura,recebendopm novo
in6culo, 0 qual podera sofrer todos os controles necessaries, a fim de assegurar a
presence iinica do microrganismo responsavel pelo processo.
Deve-se salientar que 0 conhecimento do processo descontinuo simples sig
nificao conhecimento basico da cinetica do processo, sendo, portanto, de extremo
interesse, nao se recomendando 0 estudo dos reatores alternativos sem que se do
minerazoavelmente bern 0 descontinuo, mesmo porque as demais alternativas
pressup6em este conhecimento cinetico. Nessa direcao, 0 Capitulo 6 ejustamente
dedicado ao estudo da cinetica de processos fermentativos. .
Por outro lade, no nivel de aplicacoes praticas, pode-se dizer que, para urn
processo fermentativo razoavelmente evoluido, dificilmente ele sera conduzido
como umreator descontinuo simples, havendo com muita frequencia alguma ela
boracao adicional. 0 descontinuo sera sempre a base para as comparacoes de efi
ciencias atingidas nessas elaboracoes, mas a sua baixa eficiencia estimula 0
surgimento das formas alternativas.
A primeira dessas alternativas e, quando 0 microrganismo permite, recircu
lar as celulas, ou seja, ao se encerrar a batelada efetua-se a separacao das celulas
Fermasde e n d ~ e de urn processo fermentative 187
por centrifugacao ou mesmo sedimentacao no interior do proprio rea tor, enviando
apenas 0 liquido fermentado para a recuperacao do produto. Com isso se busca
evitar 0 preparo de urn novo inoculo para cada batelada, 0 que sempre significa
custo adicional para 0 processo, alem de significar tambem urn certo tempo para a
obtencao de altas concentracoes celulares no reator, bern como consumo de subs
trato para isto. Essa estrategia de operacao e freqiientemente designada como ba
telada repetida.
Assim, a ideia de se recircular as celulas, mesmo para urn processo desconti
nuo, e possivel e mesmo interessante, desde que se possa manter as condicoes de
assepsia, e igualmente se possa manter 0 microrganismo suficientemente ativo
para a sintese do produto.
Se urn processo descontinuo e entendido como urn sistema fechado, devido
as suas caracteristicas, urn processo continuo, por outro lado, e oexemplo tipico
de urn sistema aberto. No processo continuo procura-se estabelecer urn fluxo con
tinuo de liquido atraves do reator, ou reatores dispostosem serie. Claro esta que,
caso.o processo assim 0 exija, 0 meio a: ser introduzido no reator deve ser devida
mente esterilizado, assim como se deve manter as condicoes de assepsia nestas
operacoes de alimentacao e retirada do.produto fermentado.
A opcao pela operacao de urn sistema continuo, constituido por varies rea
tores em serie, no qual a alimentacao de urn dado rea tor da serie e 0 efluente do
reator anterior, visa freqiientemente 0 estabelecimento de diferentes condicoes
nos varies biorreatores da serie. Inclusive, nessa opcao de operacao, abre-se a pos
sibilidade de distribuir a alimentacao do meio de cultura inicial entre reatores da
serie, 0 que pode justamente contribuir para 0 aparecimento destas diferentes con
dicoes entre os varies reatores.
Ainda,o reator continuo permite visualizar 0 reciclo de celulas. De fato, 011
quido fermentado, efluente de urn dado reator, pode ser submetido a urn sistema'
de separacao dos microrganismos (por sedimentacao, centrifugacao ou separacao
por membranas), -08 quais podem ser retornados ao volume de reacao, sendo 0 11
quido enviadopara a recuperacao do produto. Em .se tratando de reatores em se
rie, essa operacao pode ser efetuada em qualquer rea tor da serie, retornando-se 0
microrganismo para 0 fermentador mais adequado, evidenciando, assim, a enor
me flexibilidade de operacao disponivel.
o reator descontinuo alimentado ("fed batch") e aquele no qual se imagina
inicialmente introduzir 0 inoculo, 0 qual devera ocupar uma fracao do volume util
da ordem de 10 a 20%, iniciando-se entao a alimentacao com 0 meio de cultura,
empregando uma vazao adequada, sem ocorrer a retirada de liquido fermentado.
Essa operacao prolonga-se ate 0 preenchimento do volume iitil do rea tor, quando
entao inicia-se a retirada do caldo fermentado para a recuperacao do produto.
Essa forma de operacao e tipica da area de Engenharia Bioquimica, e foi pra
ticamente desenvolvida para os processos fermentativos, sendo muito pouco fre
qiiente para os reatores qufrnicos nao biologicos,
A descricao acima para 0 rea tor "fed batch", consiste - na verdade - na for
ma mais simples de operacao deste reator. Pode-se imaginar a separacao .das celu
las e retorna-las ao volume de reacao, a fim de se iniciar urn novo perfodo de
_.-- - .._- _._----_.. --.._- - --- - _.......... - - - - , - - -
188 Biorreatores e processos fennentativos
alimentacao, 0 que evita 0 preparo de urn novo in6culo. A ideia aeima tambem su
gere que se alimente 0 reator corn vazao constante, 0 que nao enecessariamente
obrigat6rio.
As alternativas meneionadas indicam a grande flexibilidade de operacao,
que tambem se observa para 0 "fed batch", a exemplo do reator continuo.
No entanto, cumpre destacar que se pode ainda, ao terminar 0 preenchi
mento do reator, proceder-se aretirada de uma certa fracao do liquido fermenta
do, inieiando-se entao urn novo .periodo de alimentacao. Essa alternativa e
freqiientemente indicada na literatura como descontinuo alimentado repetido.
Novamente convern esclarecer que esse estilo de conducao do reator depende fun
damentalmente das caracteristicas do microrganismo, que devera permanecer su
fieientemente ativo no sistema. Caso 0 microrganismo apresente sintomas de
atenuacao quantoa sua capaeidade de sintese do produto, 0 processo devera ser
interrompido, para se reinieiar corn urn novo in6culo.
Assim, e facil compreender que 0 interesse por urn processo continuo, ou
descontinuo alimentado repetido, depende da possibilidade de se prolongar ao
maximo 0 tempo de operacao, mantendo-se 0 processo ern condicoes de elevado
desempenho, quanta ao produto desejado e isento de contaminacoes.
Finalmente, 0 sistema de reacao semicontinuo, difereneia-se do descontinuo
alimentado, pelo fato de se retirar 0 liquido fermentado e se proceder ao preenchi
mento do reator empregando-se uma vazao muito elevada, de forma a se imaginar
que 0 reator esteja sendo preenchido instantaneamente. Ao final do novo periodo
de fermentacao, procede-se novamente aretirada de uma dada fracao do volume
(30 a 60%, por exemplo) e se preenche 0 reator instantaneamente.
Na verdade, como - do ponte de vista pratico - trabalhando-se corn reatores
de dezenas de milhares de litros, este preenchimento difieilmente pode ser efetua
do instantaneamente, corn frequencia acaba-se recaindo no reator descontinuo ali
mentado, motivo pelo qual alguns autores nao utilizam a designacao de
semicontinuo. De qualquer maneira, trata-se de uma tecnica distinta, n ~ qual esta
embutida a ideia da operacao por choques de carga de substrato, 0 que pode ser
interessante ern algumas situacoes, como na producao de enzimas sujeitas ao con
trole por inducao, .
Da mesma forma, urn rea tor descontinuo alimentado, dependendo da vazao
empregada, que possibilite urn certo acumulo do substrato limitante quando do
terrnino do periodo de alimentacao do rea tor, pode ter seu tempo de fermentacao
concluido em sistema descontinuo, a fim de que 0 substrato residual possa ser to
talmente consumido.
Essas iiltimas consideracoes pretendem alertar para as possibilidades de uti- .
Iizacao de misturas de conceitos (descontinuo, continuo, descontinuo alimentado),
a fim de se conseguir 0 maximo de desempenho de urn dado sistema biol6gico.
Elas tarnbem reforcarn a ideia sobre a enorme flexibilidade que se dispoe para a
operacao de urn biorreator.
Alguns processos tradieionais servem como exemplo dessa afirrnacao, c;omo
e 0 caso da fermentacao alco6lica executada segundo 0 processo Melle-Boinot,
Nesse processo, ao terrnino de U:Il1a fermentacao, 0 vinho ecentrifugado, retornan
Exemplos de comparac;3o de desempenhode biorreatores I89
do-se as celulas ao reator ap6s tratamento adequado. A seguir inicia-se aalimenta
do mosto a ser fermentado (na verdade, a introducao do in6culo e a alimenta
de mosto ocorremsimultaneamente desde 0 inicio do processo), operando-se
grande parte do tempo na forma de urn reator descontinuo alimentado. Quando
as dornas encontram-se preenchidas, aguarda-se tempo suficiente para 0 consumo
dos acucares fermentesciveis, operando-se, portanto, na forma descontinua,
as sistemas de tratamento de residuos tambem podem ser considerados
como exemplo, pois os enormes volumes de reacao, freqiientes nesta area, exigem
que sejam preenchidos de forma controlada segundo 0 sistema descontinuo ali
mentado, mesmo que sua operacao em regime seja obrigatoriamente em sistema
continuo. Freqiientemente a operacao em descontinuo alimentado e importante,
pois espera-se atingir 0 completo preenchimento do reator contando-se com urn
sistema biol6gico equilibrado, a fim de se poder iniciar a operacao continua em
condicoes de estabilidade (ausencia de materia organica acumulada, ou de produ
tos intermediaries nao completamente convertidos a gas ou biomassa).
Cabe, finalmente, comentar que as diferentes formas de operar urn certo bior
reator sao, em principio, aplicaveis a qualquer tipo de reator dentre os mencionados
no item 8.2, ficando esta flexibilidade mais ou menos evidente, dependendo do tipo
de reator considerado.
Analogamente ao indicado no item anterior, varies conceitos aqui introduzi
dos serao melhor detalhados em capitulos seguintes, tais como:
Capitulo 9: Fermentacao descontinua
Capitulo 10: Permentacao descontinua alimentada
Capitulo 11: Fermentacao semicontinua
Capitulo 12: Fermentacao continua
. .. .. _. Exemplos de de desempenho de biorreatores
Encontram-se na literatura alguns trabalhos recentes, os quais apresentam
estudos comparativos do desempenhci de biorreatores, como por exemplo, 0 tra
balho de MANOLOV,29 relativo aproducao de ribonuclease por Aspergillus clavatus,
l
onde se empregou urn reator tipo coluna de bolhas com celulas imobilizadas, ten

do-se obtido produtividades em enzimasignificativamente superiores ao se con
I'
duzir 0 processo tanto na forma de bateladas repetidas, bern como na forma conti
I'
nua, em comparacao com 0 descontinuo tradicional.
i
Da mesma forma, 0 trabalho de Guo et al.,30 sobre a producao de al Ii
fa-amilase por Bacillus subtilis em reator "air lift", indica a obtencao de uma pro I
I;
dutividade em enzima cerca de 5 vezes superior ado descontinuo, quando se ope
rou 0 reator na forma continua com elevados valores da vazao especifica de ali
..
mentacao.
Por sua vez, 0 artigo de MOSER
31
apresenta dados comparativos na producao
:1
de etanol, em reator agitado operado de forma continua (CSTR) e em reator tubu
lar ("plug-flow"), indicando situacoes em que se obtem produtividades mais ele
vadas para 0 reator tubular em relacao ao CSTR. \'
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190 Biorreatores e processes fermentatives
Ja no trabalho de MULLIGAN et al.
32
encontram-se dados comparativos sobre a
producao de lactato de amonio por Streptococcus cremoris, ern sistema continuo ern
rruiltiplos estagios, corn ou sem reciclo de celulas, ern relacao ao descontfnuo.
Pode-se citar ainda 0 artigo de BAYER et al.,33 relativo aproducao de cefalos
porina ern reatores "air lift", comparando-se 0 desempenho deste reator corn
aquele obtido ern rea tor agitado mecanicamente (STR).
o trabalho de RANE et al.,34 por sua vez, compara a producaode acido citrico
por Candida lypolitica ern reator tipo STR, operando-se 0 mesmo na forma continua
corn reciclo de celulas e na forma des continua alimentada.
Deve-se mencionar ainda os trabalhos de SCHMIDELL; FACCIOTII,35
FACCIOTTI et al.,36 KILIKIAN
37
e TONS0,38 os quais se referem ao estudo da sintese
de amiloglicosidase por Aspergillus sp ern diferentes tipos de processos, como 0
descontinuo simples, continuo, semicontinuo e descontinuo alimentado, ern reator
tipo STR, buscando-se comparar as produtividades ern enzima obtidas. Assim, ve
rificou-se a possibilidade de obtencao de uma produtividade ern glicoamilase cer
ca de 2,5 vezes superior no processo continuo ern relacao ao descontinuo, ao se
empregar elevados valores da vazao espedfica de alimentacao." Ja no caso do rea
tor semicontinuo, dependendo da fracao de corte empregada, bern como da con
centracao de polissacarideo alimentada no instante de realizacao dos cortes,
conseguiu-se obter produtividades ern enzima aproximadamente 0 dobro da obti
da no descontinuo, mantendo-se praticamente a mesma atividade enzimatica no
caldo." Ja no caso do reator descontinuo alimentado, verificou-se igualmente a
possibilidade de obtencao de uma produtividade ern enzima cerca do dobro da
obtida no descontinuo mas, diferentemente do processo semicontinuo, ern decor
rencia do aumento da atividade enzimatica no caldo fermentado." 0 que e alta
mente interessante do ponto de vista das operacoes de recuperacao e purificacao
da enzima ("downstream").
Assim, conforme se verifica a partir dos exemplos citados, a forma de opera
\ao do biorreator ede fundamental importancia no desempenho de urn determi
I.
nado processo fermentativo, devendo-se destacar, ainda, que todos os trabalhos
I!
acima mencionados sao relativamente recentes (de 1989 a 1996), indicando, por
11
tanto, uma grande atualidade do tema abordado no presente capitulo.
I
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193


--- - ---- - - ---_._------ --- - - --
Joao Carlos Monteiro de Carvalho
Sunao Sato
9.1 -
As ferrnentacoes descontinuas classicas, ou simplesmente, fermentacoes
descontinuas, vern sendo utilizadas pelo homem desde a Antiguidade e, ainda
hoje, sao as mais empregadas para obtencao de varies produtos fermentados. Sao
tambem conhecidas por fermentacoes por batelada ou processo descontinuo de
fermentacao.
Seu modo de operacao pode ser descrito assim: no instante inicial a solucao
nutriente esterilizada no fermentador einoculada com microrganismos e incuba
da, de modo a permitir que'a fermentacao ocorra sob condicoes 6timas. No decor
rer do processo fermentativo nada e adicionado, exceto oxigenio, no caso de
processes aerobicosIna forma de ar), antiespumante, e acido ou base para contro
le do pH.!
Terminada a fermentacao, descarrega-se adorna, e 0 meio fermentado segue
para os tratamentos finais. Entao, deve-se lavar adorna, esteriliza-la e recarrega-la
com mosto e inoculo, Algumas variacoes dessa definicao, no entanto, podem ocor
rer e serao comentadas no item "Classificacao".
Conclui-se, pela descricao acima, que se nao houver .adicao de solucoes para
controle do processo, nem perda de Iiquido por evaporacao, 0 volume no decorrer
da fermentacao permanece constante, 0 que pode ser considerado mais uma das
caracteristicas do processo descontinuo de fermentacao.
descontinua pode levar a baixos rendimentos e/ou produti
vidades, quando 0 substrato adicionado de uma s6 vez no inicio da fermentacao
exerce efeitos de inibicao, repressao, ou desvia 0 metabolismo celular a produtos
que nao interessam. Alem disso, apresenta "tempos mortos", ou seja, tempos em
que 0 fermentador nao esta sendo usado para 0 processo fermentativo propria
mente dito, tais como tempo de carga e descarga de dorna e periodo correspon
dente it lavagem e esterilizacao do fermentador.
--:--- '-C:- .,... _ ....,.-.__. -_.- . - "
194 descontfnua
Por outro lado, apresenta menores riscos de contaminacao (se comparados
com processos continuos de ferrnentacao), grande flexibilidade de operacao, devi
do ao fato de poder utilizar os fermentadores para a fabricacao de diferentes pro-
I dutos, a possibilidade de realizar fases sucessivas no mesmo recipiente, condicao
I de controle mais estreito da estabilidade genetica do microrganismo, assim como
a capacidade de identificar todosos materiais relacionados quando se esta desen
volvendo urn determinado lote de produto, 0 que e vital para a industria farrna
ceutica.' .
Ademais, e 0 mais utilizado na industria de alimentos. Alguns dos alimen
tos e bebidas produzidos por esse processo fermentativo sao iogurte, chucrute, pi
des, cerveja, vinho, entre outros.
Neste capitulo abordaremos alguns itens-que julgamos oportuno destacar,
quais sejam: inoculo, mosto, classificacao das diferentes modalidades de processo
descontinuo, bern como 0 ruimero de dornas de uma industria de fermentacao.
9.2 - Inocula
Charna-se inoculo, pe-de-cuba ou pe-de-ferrnentacao urn volume de suspen
sao de microrganismo de concentracao adequada capaz de garantir, em condicoes
economicas, a fermentacao de urn dado volume de mosto."
Para que se obtenha urn inoculo com capacidade produtiva elevada, deve-se
dar condicoes para que 0 microrganismo desejado seja propagado, que induem
desde sua manutencao ate a propagacao propriamente dita.
Ha muitas tecnicas para 0 armazenamento de microrganismos.Y sendo que
cada uma delas pode ser indicada levando em conta a cepa do microrganismo e as
condicoes laboratoriais disponiveis para mante-la. Tern por finalidade conservar a
cepa viavel e com capacidade produtiva, mantendo-a, portanto, dentro do possi
vel, com 0 minimo de divis6es celulares,' uma vez que, quando estas ocorrem, ha
possibilidade de haver mutacoes. Algumas delas sao: secagem de microrganismos
em terra, areia, silica ou outro material solido, conservacao em agar indinado ou
outras que limitem 0 metabolismo e respiracao microbiana (aqui se induem con
gelamento em congeladores ou em nitrogenio liquido, e manutencao de esporos
ou celulas em agua) e remocao daagua de celulas ou esporos por liofilizacao e ma
nutencao do material seco sob diferentes condicoes. A recuperacao do microrga
nismo e feita de diferentes maneiras, dependendo da tecnica que se adotou para
preserva-lo.l"
Tao importante e a manutencao da cepa, que muitas empresas de fermentacao
possuem centros especializados que tern esta funcao, distribuindo os microrganismos
para suas fabricas localizadas nacionalmente ou, mesmo, internacionalmente. Parale
lamente, fazem testes de viabilidade, de estabilidade genetica, alem de empregar me
todologias para melhoramento genetico. Dessa forma, garantem a qualidade e a
reprodutibilidade das cepas microbianas, 0 que nao significa que as fabricas nao te
nham 0 seu proprio controle na propagacao desses microrganismos.
Durante a fase de propagacao do inoculo deve-se tomar cuidados especiais
de modo a evitar contaminacao, pois comprometeria a producao industrial. Nessa

' .]
Inocula 195
fase, em processos aer6bios, urn foco potencial de contaminacao e0 ar fornecido
ao sistema, 0 qual deve ser esterilizado.
Quando 0 microrganismo produtor euma especie mutante, se ele for auxo
tr6fico, deve-se garantir 0 suprimento de substancias requeridas para 0 crescimen
to no meio durante a propagacao do inoculo." Alem disso, deve-se acompanhar se
os microrganismos continuam comcapacidade produtiva durante a fase de propa
i<
1';
gac;ao, pois mutacoes nao sao sempre estaveis e eles podem perde-la, deixando de
I
,"
apresentar capacidade produtiva.
o volume de in6culo introduzido no fermentador de producao esta comu
mente ao redor de 10% de sua capacidade util. No entanto, pode variar de 0,5 a
50%, como assinala BORZANe Afirma, ainda, que a tecnica de preparo do in6culo
compreende duas fases: a de laborat6rio e a industrial (ver Fig. 9.1).
mcubacac
~ J 1 ~ ' " ~ b " " ~ ~
Cultura Volumede Volume de
pura meio = V
1
meio =V
2>V1
. _ Dorna
Volume de Volume de
meio = meio = V
S>V4
V
4>V3
Figura 9.1 - Representacao esque rnatica do preparo do inocula.
3
A partir da cultura estoque, propaga-se 0 microrganismo por meio de meto
dologia conveniente. Normalmente na fase inicial passa-se domeio s6lido, em
condicoes assepticas, para urn tuba de ensaio contendomeio liquido esterilizado,
adequado para 0 desenvolvimento microbiano. Ap6s incubac;ao por urn determi
196 Fermentacao descontfnua
nado tempo, que depende do tipo de microrganismo cultivado (pois cada especie
microbiana possui velocidade de crescimento diferente), transfere-se 0 conteudo
desse tuba a frascos apropriados para agitadores rotativos ou reciprocos "sha
kers"- contendo meio esterilizado (podem ser erlenmeyers lisos ou chanfrados,
sendo que estes sao utilizados quando se tern microrganismos rnais exigentes
quanta aaeracao). .
. Ap6s incubacao, transfere-se a suspensao microbiana para frascos maiores
contendo meio nutriente esterilizado. 0 ruimero de transferencias vai depender
do volume titil do pre-fermentador (germinador). Todas as transferencias devem
ser feitas em condicoes assepticas (cujos cuidados variam com 0 processo fermen
tativo que se deseja realizar) e os frascos devidamente fechados, mas permitindo
entrada de ar para microrganismos aer6bios, de modo a evitar contaminacao. De
I
pendendo do volume do fermentador de producao, podera ser necessario mais de
urn germinador.
A cada passo, os organismos devem crescer rapidamente, sendo as transfe
rencias feitas na fase logaritmica de crescimento. Apenas na fase que corresponde
I
' I
ao in6culo que sera adicionado ao fermentador de producao, pode-se deixar que a
cultura atinja a fase de declinio de velocidade de crescimento, caso seja interessan
te iniciar a fase de producao com celulas de urn estagio rnais avancado da curva de
crescimento microbiano.
. Sugest5es para relacao entre volume que recebera a suspensao microbiana e
o volume desta nas varias etapas de propagacao de in6culo sao da ordem de 10
vezes," 20 vezes," mas ha indicacoes para valores possfveis de 100 a 200 vezes.t"
Muito importante, pois, e desenvolver urn protocolo para a propagacao do
in6culo. PARTON; WILLIS
4
apresentam casos interessantes, mostrando que deter
minados autores conseguiram 0 aumento deproducao de urn metab6lito secunda
rio quando utilizaram urn pre-fermentador para inocular 0 fermentador de
producao, em vez de utilizar in6culo oriundo de cultivo em agitador rotativo.
Tambem relataram que outros autores conseguiram produzir mais ce]ulas num
cultivo paraobtencao de biomassa quando utilizaram, como in6culo do fermenta
dor de producao, celulas na fase logaritmica de crescimento, em vez daquelas em
estado de aut6lise. Assim, 0 protocolo para propagacao, desenvolvido para cada
processo, indicara qual a melhor metodologia para se obter 0 in6culo no menor
tempo possivel e que leve a maiores rendimentos e/ou produtividades no proces
so industrial.
9.3 - Mosto
Como ja se sabe, cada microrganismo possui condicoes 6timas de crescimen
to tais como: temperatura, pH, nivel de oxigenio dissolvido, entre outras. a meio
de cultivo, por sua vez, tern influencia marcante nesse processo. Em microbiolo
gia, e chainado de meio de cultura. Aqui, na area de fermentacoes industrials, e
chamado de mosto ou meio de fermentacao, Deve possuir nutrientes requeridos
para 0 crescimento celular, que PIRT,lO aparte das fontes de energia, classifica nos
seguintes grupos: a) fontes dos elementos "principals" C, H, 0 e N; b) fonte
dos .elementos "secundarios" -'---'- P, K, S, Mg; c) vitaminas e hormonios: d) fontes
""_ iiIIllI.IL _ _ _. .__-:-- .-. ...,- - - -- - .. ~ - - -.--.- c. ------ -.o--_-_ _ . o c - _ . _ . _ _ ~ .. o. . ..---.1
Mosto 197
de "traces" de elementos, ou seja, requerimentos de elementos em quantidades
minimas para 0 crescimento microbiano (por exemplo, Cal Mn, Fe, Co, CUI Zn sao
freqiientemente essenciais para 0 crescimento microbiano).
Na formacao de urn meio de fermentacao (mosto) deve-se levar em conta a
necessidade desses nutrientes, lembrando queo meio, alem de propiciar 0 desen
volvimento microbiano, deve favorecer a formacao do produto que se deseja.
WANG et a/.
ll
sugerem' que a formacao de urn meio de cultivo leve em conta
a composicao celular, 0 requerimento energetico e a necessidade de substancias
especificas,
A composicao elementar de uma celula microbiana depende de muitos fato
res , como condicoes de cultivo, especie do microrganismo, e ate mesmo do subs
trato utilizado para seu crescimento. Porern, a titulo de orientacao, e apresentada
na Tabela 9.1 a composicao elementar tipica de urn microrganismo.
50
7 -12
1-3
PORCENTUAl DA CElULA SECA
Carbono
Nitrogenio
F6sforo
Enxofre
Magnesio
ElEMENTO
Tabela9.1 - Cornposicao elementartfpica de rnicrorganismos,I I
Urn meio para crescimento microbiano deve, no minimo, conter os elemen
tos presentes na celula na proporcao correta. Exceto para carbono, oxigenio e hi
drogenio, a formulacao de meio nutriente e baseada na Tabela9.1. As fontes de
nitrogenio podemser organicas ou inorganicas e de modo algum devem faltar na
composicao do meio de cultivo, sob pena de limitar 0 crescimento celular. Traces
de elementos (Cu, Co, Fe, Cal Zn, Mo, Mn), em principio, podem ser utilizados em
concentracoes da ordem de 10-4 e 10-
5
M para concentracoes de 30 g de celulas se
cas/L e 3 g de celulas secas /L, respectivamente. No entanto, alguns microrganis
mos necessitam de concentracoes maiores de alguns desses elementos, e
adaptacoes devem ser feitas nesse sentido.
Quanto a substancias organicas, tais como vitaminas e aminoacidos, devem
fazer parte da constituicao do mosto se os microrganismos nao os sintetizarem, a
menos que se opte pela adicao parcelada deles.
Os microrganismos, para seu crescimento, coordenam eficientemente 0 cata
bolismo (que tern como funcoes principais fornecer energia- em celulas hetero
troficas - e intermediaries de vias metabolicas) e 0 anabolismo (onde se da a
formacao de biomoleculas que farao parte da constituicao do microrganismo, tais
como polissacandeos, lipideos, proteinase acidos nucleicos) . 0 substrato limitan
te para microrganismos heterotroficos, alem de ser a: fonte de energia para essas
vias do metabolismo, normalmente supre necessidades da celula de carbono, oxi
genic e hidrogenio, que integrarao a composicao celular e/ou 0 produto.
__ ___ .. __ -. ,
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198 descontinua
Portanto, sua quantidade no meio de cultivo sera uma funcao de quanta se
deseja produzir de microrganismo, ou de produto, levando em conta a relacao es
tequiometrica entre substrata e quantidade possfvel de se produzir de celulas ou
de produto. No entanto, e conveniente lembrar que nao se pode ter urn mosto com
concentracoes elevadas de substrato, pois, nestas condicoes, pode se tornar inibi
t6rio para 0 crescimento microbiano. Quanto ao oxigenio, de importancia funda
mental as celulas aer6bias, considerado como urn nutriente especial devido as
suas particularidades, sera comentado em separado (Capitulo 14).
Sabendo quais os componentes que devem estar presentes num meio, po
de-se lancar mao de dois procedimentos para obte-lo: a partir de extratos de plan
tas ou animais, chamados de meios "naturais" (suco de uva, leite, agua de
maceracao de milho, etc.), ou a partir da elaboracao de meios quimicamente defi
nidos, chamados de meios "sinteticos". Com a finalidade de elucidar efeitos nutri
cionais, a medida do possivel, estes devem ser os escolhidos, pois aqueles tern a
desvantagem de seremde composicao indefinida e variavel.' " Por outro lado, po
dem ser meios bastante ricas e que geralmente nao necessitam de complementa
c;ao para sua utilizacao como mosto.
Do ponto de vista industrial, varies fatores devem ser considerados." 0 cus
to do substrato pode sercrucial, devendo tambem ser levada em conta a quantida
de de carbona disponivel, bern como as exigencies para sua ferrnentacao (por
exemplo, 0 fornecimento de oxigenio ao sistema deve ser aumentado, caso utilize
urn substrato de cadeia carbonica em menor grau de oxidacao, como na utilizacao
de hidrocarbonetos como fonte de carbona). 0 custo e 0 fator limitante da utiliza
c;ao de meios sinteticos em escala industrial. Outros fatores incluem: suprimento
do substrato (a maioria das empresas opta por comprar 0 substrato no mercado
aberto, com possibilidade de comprar de varies fornecedores), disponibilidade
(onde se considera se a materia-prima e sazonal ou nao e a possibilidade de seu
armazenamento), variabilidade na composicao da materia-prima, condicoes de
armazenamento, dificuldades de esterilizacao do mosto, fermentescibilidade (aqui
se deve lembrar que uma aparente nao fermentescibilidade nao enecessariainente
uma restricao se microrganismos alternativos puderem ser encontrados), exigen
cia de tratamentos para tornar 0 substrato presente na materia-prima fermentesci
vel (por exemplo, num processo de fermentacao alcoolica com levedura como
in6culo, materiais amilaceos devem ser hidrolisados a fim de se obter aciicares de
pequena cadeia carbonica, que serao fermentados) e comportamento do mosto du
rante e ap6s a fermentacao (por exemplo, producao excessiva de espuma e possi
bilidade de reciclar agua residuaria). Ainda e .importante destacar que 0 melhor
substrata para uma industria nao e necessariamente 0 melhor para outra que pro
duz 0 mesmo produto, pois cada uma tern seu microambiente, onde 0 custo de
transporte, combustivel e potencia, disponibilidade de agua, entre outras, deter
minam a escolha do substrato.
Alguns dos substratos .e/ ou materias-primas, possiveis para utilizacao em
cultivos microbianos, sao: acucares, melacos, soro de leite, celulose,.amido, resi
duos como liquor sulfitico e agua de maceracao de milho, metanol, etanol, alca
nos, 6leos e gorduras, etc.
. . .__.... __. . _ . ._.. . ._ _.__.. _. _. .... . ._..._ ' __ . . .---oiII
': ' :
Classficacao 199
9.4 -
Em escala industrial, muitos processos sao adaptados com vistas aotimizar
a producao, a processo descontinuo, por sua vez, tambem foi sendo adaptado de
modo a atender ao objetivo de diferentes indtistrias.. BORZANI
3
classifica os pro
cessos descontinuos em tres grandes grupos: aqueles em que cada dorna recebe
urn inoculo, processos com recirculacao domicrorganismo e processo por meio de
cortes. "
a primeiro grupo consiste na inoculacao de uma dorna com urn microrga
nismo que foi propagado a partir de uma cultura pura, como ja comentado ante
riormente. Oferece poucos riscos de contaminacao se a propagacao do inoculo foi
feita em boas condicoes de assepsia. Nas fermentacoes em que 0 meio e rico e 0
microrganismo e altamente suscetivel a contaminacao, a utilizacao deste processo
e indicada, a menos que 0 substrato adicionado de uma so vez no inicio da fer
mentacao leve a resultados insatisfatorios,
as processos com recirculacao do microrganismo, como 0 proprio nome in
dica, reaproveitam como inoculo 0 microrganismo da batelada anterior. Para tan
to, ou se espera que 0 microrganismo sedimente no fermentador (como e 0 caso de
cervejarias), ou se centrifuga 0 meio fermentado, separando assim as celulas e reu
tilizando-as. Esse procedimento e comum em destilarias de alcool, No entanto,
como ha tendencia de aumentar 0 ruimero de contaminantes a cada nova batelada,
as usinas normalmente empregam uma metodologia com vistas a elimina-los.
Consiste num tratamento do leite de levedo ._(suspensao de leveduras altamente
concentrada, obtida a partir da centrifugacao do meio fermentado) com agua e aci
do sulftirico. Deixado nessas condicoes, sob agitacao por 2 a 3 horas, proporciona
a eliminacao de contaminantes, bern como de celulas que ja se apresentem em fase
de degeneracao,
a ultimo grupoda classificacao apresentada e assim descrito:" /INa fermen
tacao por meio de cortes, opera-se do seguinte modo: inicia-se 0 trabalho inocu
lando-se uma dorna (que sera chamada de dorna A) com pe-de-cuba; quando a
fermentacao atinge urn estagio apropriado, passa-se, parte 'do conteudo do fermen
tador A para urn fermentador vazio (que sera chamado de dorna B) e, em seguida,
enchem-se as duas dornas com meio a fermentar. Essa operacao recebe 0 nome de
corte. Diz-se que a dorna A foi cortada para a dorna B ou, ainda, que B recebeu urn
cortede A" .
Esses cortes podem ser feitos na fase de crescimento mais intenso quando se
deseja propagar 0 inoculo, ou apos 0 termino do processo fermentativo.
A sucessao decortes pode acarretar serias quedas no rendimento, principal
mente quando se trabalha com meio nao esterilizado. Alem disso, 0 ruimero de
cortes sucessivos nao pode ser previsto, sendo que 0 controle do rendimento po
dera indicar em que momenta deve-se suspender 0 trabalhopor meio de cortes e
se iniciar nova fermentacao com inoculo novo."
No entanto, a producao de cada produto tern suas particularidades e a expe
riencia adquirida ao longo do tempo na fabrica leva 0 pessoal a decidir quais as
modificacoes que devem ser feitas no processo.raumentando, dia apos dia, 0 ren
dimento eZoua produtividade 'do mesmo,
I ,
200 descontfnua
"
9.5 - Numero de dornas
Tendo em vista 0 alto custo de urn fermentador, bern como 0 espaco que
ocupa, desnecessario e justificar a importancia para uma empresa determinar 0
ruimero de fermentadores que necessita para produzir 0 que deseja.
BORZANe sugeriu uma metodologia para 0 calculo do ruimero de fermenta
dores, a qual pode ser utilizada como caminho para se chegar ao mimero ideal de
fermentadores numa empresa que trabalha com processo descontinuo e que sera
iranscrita a seguir. Aspequenas modificacoes, em relacao a seu trabalho original
publicado, sao, basicamente, algumas passagens matematicas que serao aqui apre
sentadas.
Consideremos uma instalacao de fermentacao, funcionando por processo
descontfnuo, que devafornecer, de maneira ininterrupta, Iiquido fermentado ao
setor encarregado dos tratamentos finais. Suponhamos, ainda, para simplificar,
que nao esteja sendo utilizado 0 processo de cortes. Sejam dados:
F = vazao media de liquido fermentado que deve ser fornecido ininterrupta
mente ao setor de tratamentos finais;
i, = tempo necessario para que 0 conteudo de uma dorna fermente completa
mente; ,
V = capacidade uti! de cada dorna;
D = ruimero de dornas, de capacidade uti! V, necessario para garantir a
vazao F de liquido fermentado:
t
d
= tempo necessario para se descarregar uma dorna;
i , = tempo necessario para selimpar e carregar uma dorna.
o valor da vazao F depende dos seguintes fatores:
a) da quantidade de produto final quese deseja obter na unidade de tempo;
b) do rendimento dos tratamentos finais que devem conduzir ao produto
desejado; ,
c) da concentracao do produto final no liquido fermentado que, par sua vez,
e funcao do processo de fermentacao.
Se indicarmos com M a massa de produto final que interessa produzir em
urn tempo t, com r 0 rendimento dos tratamentos finais e com C a concentracao de
produto final no liquido fermentado, teremos: No t, ifOr 1;1' ) j ; VIf

/ 1 (J ::)SI t /1ft Pit ( ?
c.i .,
,
/
o valor medic de t
f
, por sua vez, depende do iocesso de fermentacao, en
quanta que 0 tempo de descarga t
d
por:
, td =V (9.1)
, A capacidade uti! de cada pratica, nao pode ser escolhida de ma
'neira completamente arbitraria, Ha fabricantes que fixam os tamanhos de domas
. __ _._. __ _. __ . _ . _ _ _ -. - - _ _ - 0 ' 0 . .. .. _.__ _ - _----- - - - - _ ' ,", . _ _ , __..:. _ _ . _ . _ . : _ ---'- _ _ _ . _. _ . __
Nornerode domas . 20 I
que podem oferecerdentro de sua linha normal de trabalho. Ha, por outro lado,
experiencia relativamente pequena na construcao de fermentadores de grandes
capacidades (diversas centenas de metros cubicos), principalmente nos processos
que exigem borbulhamento de ar e agitacao mecanica. Torna-se muito diffcil esta
belecer, nesse caso, recomendacoes gerais. A experiencia ja adquirida no funciona
mento de instalacoes analogas constitui criterio mais seguro de escolha de urn
valor adequado de V dentrf1 os possiveis.
o valor de t. (tempo necessario para limpar uma dorna descarregada e car
rega-la novamente) varia de caso para caso. Quando se ,pretende, no dimensiona
mento de uma instalacao, calcular 0 mimero de dornas, toma-se como ponfo de
partida:
t
c
=t
d
Essa igualdade, totalmentearbitraria, facilita a avaliacao de D e pode ser,
em muitos cas os, obedecida na pratica industrial. Feitas essas observacoes iniciais,
necessarias para que se possam interpretar com cautela os resultados obtidos no
calculo de D, passemosa esse calculo,
Consideremos uma dorna, que sera chamada de dorna ruimero I, em inicio
de trabalho; no intervalo de tempo t;> t
d
, ela sera limpa e carregada; decorrido
urn intervalo de. tempo tf,o liquido nela contido estara completamente fermentado
e, ap6s outro intervalo de tempo t
d
, ela seencontrara vazia e em condicoes de reini
ciar seu ciclo de trabalho. Para, que nao haja interrupcao de fornecimento de mate
rial fermentado ao setor dos tratamentos finais, quando terminar a descarga da
dorna ruimero 1 devera existir uma outra (que sera indicada por dorna mimero 2)
pronta para ser descarregada. Quando a dorna ruimero 2 tiver sido descarregada,
devera existir uma terceira em condicoes de iniciar sua descarga. Essa sequencia
de operacoes pode ser visualizada na Figura 9.2.
Tempo
(1). F----+-------F--------,--tt------'---------------=---
.
(2)
(3)
Figura 9.2 - Cronograma de funcionamento de dornas em um descontfnuo. (I) Infcio dopreparo da dor
3processo
na; (2) fim da carga; .(3) firn da fermentacao: (4) fim da descarga.
--- -- - - ---- --- - ------
--
202 Fermentao descontinua
Devera existir, portanto, urn intervalo de tempo t
d
separando 0 inicio de fun
cionamento de duas dornas consecutivas. Nessas condicoes, tomando-se conven
cionalmente como instante zero oinicio de trabalho da dorna ruimero 1, a dorna 0
devera comecar a funcionar no instante (O-l)t
d
Por outro lado, como indica a Fi
gura 9.3, a dorna 0 devera iniciar seu funcionamento no instante t
d
+ tf. Logo, po
demos escrever:
(O-l) ;t
d
=t
d
+t
f
(0;;:: 3)
: . 0 = 2 + t
f
ltd
: . 0 = 2 +(F t
f
I V) (9.2)
expressao que nos permite calcular 0 mimero de dornas, desde que conhecamos F,
Ve tf.
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
.
,
(1)
(4) - -- -- - --- - - - -.----- --
(3)
n01 : nOD n01
,
,
,
(2)
Tempo

Figura 9.3 - Cronogramade funcionamentodas domasnurnero I e nurnero 0 .. (I) Infcio do preparodadoma; (2)
fim dacarga; (3) fimdafermentacao: (4) fimdadescarga.'
Ao procurarmos dimensionar uma instalacao, os valores de F e de t sao co
nhecidos, mas os de V podem variar em intervalos muitos amplos, Surge, portan
to, a necessidade de escolher urn valor de V para podermos dar andamento ao
projeto que nos interessa.
Desde que nao exista urn criterio que nos leve a atribuir a V determinados
valores, poderemos, com 0 objetivo de iniciar 0 dimensionamento que temos
em vista, calcular 0 chamado numero econiimico de dornas, definido como sendo
o ruimero de dornas de custo total minimo capaz de atender as necessidades da
instalacao. Esse ruimero economico, indicado por E, pode ser calculado como
segue: sendo p 0 custo de urn fermentador de capacidade util V, e valida a
equacao empirica
_.. ... .._._-_ ._- .. .. _-... -...__.... ._-- .__... __._ - .. __...__... _._ --- - - - - ....- ..._.... . ... -_._-------'
Numero de domas 203
p.=k'V
a
(9.3)
sendo k e a dois parametres que dependem das condicoes economicas locais no
momenta considerado, e 0 < a < 1. Indicando comP 0 custo de D fermentadores,
temos, combinando as Eqs. (9.2) e (9.3):
(9.4)
Derivando essa equacao e igualando a derivada a zero, obtem-se 0 ponto de
minimo (menor valor de P), caso em que D e, por definicao, igual a E.
Como os termos k, F, t
f
e a sao constantes, pode-se substitui-Ios por K, que e
uma constante fruto das operacoes que envolvem as constantes acima. Portanto,
chega-se a:
P =K . D / (D - 2)a
(9.5)
Derivando a Eq. 9.5, tem-se:
dP K.D.a.(D-2)a-l__(D-2)a K
dD (D - 2)2a
Considerando (dPldD) =0, obtem-se:
D = E == 2 / (1 - a) (9.6)
Substituindo a Eq. 9.6 na Eq. 9.2, calcula-se a capacidade util de cada um dos
E fermentadores (V
e
) . Ou seja,
(9.7)
Pode-se tambem avaliar 0 ruimero economico de dornas, sem determinar os
parametres da correlacao empirica (Eq.. 9.3)., da seguinte maneira: tendo-se uma
lista de de dornas de diversas capacidades, calcula-se, para cada valor de V
desta lista, 0 correspondente D pela Eq. 9.2; tendo-se D e 0 unitario.icalcu
la-se 0 dasD dornas; escolhe-se entao, entre os diversos valores calculados,
o valor de V, e conseqiientemente de D, que tenha conduzido ao custo total mini
mo.
Convem salientar que 0 valor de E podera nao atender a outros requisitos
do processo. Quando tal fato acontecer, escolher-se-a entao um valor de D que sa
tisfaca a esses outros requisitos e que se situe tao proximo de E quanta .
Finalizando, asdimensoes comumente utilizadas industrialmente para al
guns processos fermentativos sao apresentadas na Tabela 9.2.
204 descontfnua
Tabela 9.2 - Drnensoes de fermentadores paraalguns processos fermentativos
l
VOLUME DO FERMENTADOR (m
3
)
1- 20

40 -80 Algumas enzimas e antibi6ticos.

u
I
Penicilina, antibi6ticos aminoglicosi
100 -150 dicos, proteases, amilases, transfor
macae de est er6ides, aminoacidos.
450
PRODUTO
I
..
Enzimas de diagn6stico, substancias
i
para biologia molecular.
Aminoacidos (acido glutamico).
.. .:r. '. ;- . s
,(-. ;. tl lI:I:'; ..__ 7 . . .. .. , . .. ' . ..-,. 1':1. ... 1 1 -\'
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205
Joao Carlos Monteiro de Carvalho
Sunao Sato
10.1 -
Varies processos fermentati vos tern sido desenvolvidos em funcao de dife
rentes aplicacoes. Urn desses, que tern importancia tanto em escala industrial
como em nivel de pesquisa, e0 processo descontinuo alimentado, tambern conhe
cido como processo por batelada alimentada ou, simplesmente, fermentacao des
continua alimentada.
Embora a utilizacao desse processo venha desde cerca de 1900 para regular
crescimento de Saccharomuces cereoisiae.' os primeiros a utilizarem 0 termo "cultu
ra por processo descontinuo alimentado" a titulo decatalogacao foram YOSHIDA
et al} para se referirem a uma ferrnentacao descontinua continuamente alirnenta
da com meio nutriente.
F
mosto
<;

Figura 10.1 - Esquema ilustrativo do modo de operacao
o-Lo'?
de umaferrnentacaodescontfnuaalimentada.
in6culo
....... '_"' .__._... __ __ ..__.. .... _,. .... . .. _..__.. _. __ ._. . .. _.. __
!I
il
[I
il
:1
Ii
[I
'.: . ",. ,
..__._..__..JL.. ' _............-'..........o-........_!!'"!

'.
206 Fermentao descontinua a1imentada
Basicamente, 0 processo descontinuo alimentado e definido como uma tee
nica em processos microbianos, onde urn ou rnais nutrientes sao adicionados ao
fermentador durante 0 cultivo e em que os produtos ai permanecem ate 0 final da
fermentacao. Em alguns casos, todos os nutrientes sao gradualmente alimentados
adorna" (Fig. 10.1). Adicionalmente, outros autores':' estendem esse conceito para
o acrescimo de aditivos, tais como precursores de produtos. A vazao de alimenta
~ a o pode ser constante ou variar com 0 tempo," e a adicao de mosto pode ser de
forma continua ou intermitente. Mudanca de volume pode ou nao ocorrer, depen
dendo da concentracao de substrato e da taxa de evaporacao do sistema.
Devido a flexibilidade de utilizacao de diferentes vazoes de enchimento de
dornas com meio nutriente, e possivel controlar a concentracao de substrato no fer
mentador, de modo que, por exemplo, 0 metabolismo microbiano seja deslocado para
uma determinada via metabolica, levando ao acumulo de urn produto especffico.
Cada condicao de trabalho pode levar a diferentes perfis de concentracao
nao s6 de substrato, mas tambem de celulas e produto. Uma representacao esque
matica de urn comportamento possivel para 0 processo pode ser observada nas Fi
guras 10.2 e 10.3. Num cultivo, sabe-se que e crescente 0 ruimero de
microrganismos ao longo do tempo, 0 que leva ao aumento da massa celular na
dorna. No entanto, a concentracao de microrganismos pode ter urn perfil decres
cente durante 0 periodo correspondente ao enchimento da dorna (Fig. 10.2). Isso
pode ocorrer, pois a concentracao celular nao depende somente da massa de mi
crorganismos, mas tambem da variacao de volume decorrente da adicao de mosto
adorna. Por outro lado, deve-se lembrar que, ap6s a fase de enchimento da dorna,
o processo passa a ter caracteristica de processo descontinuo classico (sem entrada
ou saida de fluido da dorna) e a fermentacao termina no instante a partir do qual a
massa de produto na dorna permanece constante (Fig. 10.3).
J .
,
,
,
,
Mx :

x.
x
t t
TE TF
Figura 10.2 - Massa celular(Mx)e concentracao celular(X) em u n ~ a o dotempo paraum procesodescontfnuo ali
mentado(curvas hipoteticas, poisX, por exemplo, poderiaser constanteou crescente no perfodo deenchimentoda
dorna).
_...._-- -_...._ ._- - --_ ._ ._--_._----_..- ._._. .- . _.. - ._.__... _ ._-- - ------ ---- - --_ .. - - - - - - - ~ - _ ... _ ... _- ---- _. _------"
207
Deve-se salientar que parte do desenvolvimento do processo descontinuo
alimentado tern se dado empiricamente em escala industrial," e estas informacoes,
quase sempre determinantes da viabilidade da producao industrial, constituem
segredo industrial e dificilmente sao divulgadas.
. , v' yf
CI)
Vi
Figura 10.3 - Volume de meio(V), concentracao de substrato (5)e massa de produto(Mp) nadoma em do
tempo paraumprocessodescontfnuo alimentado(curvas hipoteticas, nestecaso,comvazao constante de alimentacao).
Ao longo deste capitulo, abordaremos alguns casos onde a aplicacao do pro
cesso descontinuo alimentado possa ser indicada, bern como uma classificacao e
alguns modelos matematicos para representa-lo.
10.2 -
Antes de 1940 a maioria dos processos fermentativos envolvia a conversao
de carboidratos a outros compostos organicos simples. Seguindo 0 sucesso da
aplicacao das fermentacoes, descontinuas alimentadas para producao de levedura,
tentou-se a utilizacao destas (com adicao de urn ou mais componentes necessaries
ao metabolismo do microrganismo) para a producao de glicerol, acetona, butanol,
acido latico eoutros materiais, resultando, em muitas ocasioes, em urn melhor
controle do processo de fermentacao e mais eficientes utilizacoes dos componen
tes do meio."
Esse exito se deve a iruimeros fatores, discutidos amplamente na literatura,
que podem agir isoladamente ou em conjunto para os mais diversos tipos de pro
dutos e/ou celulas obtidos por fermentacao,
Algumas das finalidades ao se empregar as fermentacoes descontinuas ali
mentadas sao relacionadas a seguir.
10.2.1 - dos efeitos do controle do metabolismo celular
Para que urn microrganismo tenha sua sobrevivenciagarantida no meio am
biente, ele tern necessariamentede ser eficiente, ou seja, nao deve desperdicar
energia. Devido a isso, dispoe de mecanismos regulat6rios em seu metabolismo,
que previnem que nao haja superproducao de urn determinado produto ou sintese
de uma enzima desnecessaria, entre outros. A utilizacao do processo descontinuo
...... ...___ _ l ___'" __ .
- -------------
208 Fermentao descontfnua aJimentada
alimentado de fermentacao pode ser iitil quando se procura contornar alguns des
ses mecanismos.
Em microrganismos, glicose ou outras fontes de carbono rapidamente meta
bolizaveis reprimem a expressao de genes que codificam enzimas relacionadas ao
metabolismo de outras fontes de carbono. Esse fenomeno e conhecido como re
pressao catabolica." Muitas enzimas, especialmente aquelas envolvidas em carni
nhos catab6licos, estao sujeitas a essa regulacao repressiva. Uma importante
tecnica p ~ r a superar repressao catab6lica na biossintese de enzimas ea cultura por
batelada alimentada em que a concentracao de glicose no meio em fermentacao e
mantida baixa, onde 0 crescimento erestringido, e a biossintese de enzima desre
primida.t"
Na producao de levedura de panificacao procura-se minimizar 0 efeito gli
cose atraves da utilizacao de diversas tecnicas de alimentacao de dornas," manten
do-se baixos os niveis de concentracao de acucar no meio em ferrnentacao.
Evitando que esse substrato seja deslocado para producao de etanol, aumenta-se a
eficiencia de transformacao da fonte de carbono em celulas.
Muito ligado arepressao catab6lica esta urn mecanismo de regulacao deno
minado inducao, Tambem echamado de desrepressao, uma vez que os genes que
. codificam a sintese de enzimas induzidas estao usualmente reprimidos e, em pre
senca de urn substrato e/ou indutor, sao desreprimidos, liberando a sintese da
respectiva enzima. Diversas enzimas do catabolismo tern sua biossintese regulada
desse modo." Por exemplo, em processos fermentativos cujo produto seja uma
proteina recombinante, a inducao de proteases se da quando ocorre a diminuicao
da concentracao de nitrogenio no meio." Trabalhando com E. coli recombinante
para producao de somatotropina bovina, YOON et al," conseguiram evitar que
esta fosse degradada por proteases, por meio da adicao de extrato de levedura
como fonte de nitrogenio organica, 0 que evitou a inducao (desrepressao) dos ge
nes que controlam a formacao de proteases.
Repressao catab6lica tambem tern influencia na producao de metab6litos se
cundarios. Glicose tern efeito repressor na formacao de alcal6ides de ergot, cefalos
porina C, indolmicina, bacitracina, estreptomicina, neomicina, novobiocina,
penicilina, entre outras." Tambem nesses casos a utilizacao do processo desconti
nuo alimentado com a finalidade de manter baixas concentracoes de glicose pode
ser indicada, em vez de se utilizar uma fonte de carbona que nao seja repressora.
Como normalmente as maiores velocidades de crescimento microbiano
ocorrem com valores de concentracao de substrato no meio em ferrnentacao maio
res que aqueles onde os efeitos de repressao catab6lica sao minimizados, ha su
gestae que se conduza 0 processo fermentativo em duas fases: a primeira, onde se
forneca rnais substrato e se obtenha 0 aumento da biomassa e outra, onde se dimi
nua 0 fornecimento de substrato de talforma a limitar a concentracao de substrato
e a velocidade do crescimento celular, de modo que haja desrepressao e a enzima
e/ou produto desejado seja produzido." Essa tecnica permite, portanto, que al
guns processos fermentativos, principalmente aqueles em que a formacao de pro
duto nao seja associada ao crescimento, sejam estendidos, trabalhando por urn
periodo maior com as celulas em condicoes onde ocorra a producao do produto
desejado.
___ _____ _ _ 0 _ .. . __. _
Aplicac;6es 209
Outro mecanismo de regulacao que a celula microbiana possui, especial
mente titil no anabolismo, ea.inibicao por "feedback" (retroinibicao) . Muitas enzi
mas biossinteticas sao inibidas por produtos finals." Urn meio de reduzir a
formacao de produtos finais indesejaveis (que exercem inibicao e/ou repressao
das enzimas que levam aformacao do produto desejado) etrabalhar com mutan
tes auxotr6ficos (mutantes nutricionais), controlando a alimentacao do nutriente
requerido para seu crescimento. Essa tecnica ecomumente utilizada na producao
industrial de aminoacidos.'
10.2.2 - Prevencio da por substrato ou precursores
Nutrientes tais como metanol, etanol, acido acetico e compostos aromati
cos inibem 0 crescimento de microrganismos, mesmo a concentracoes relativa
mente baixas." Por outro lado, qualquer fonte nutriente pode se tornar inibit6ria,
dependendo de sua concentracao no meio, do microrganismo e das condicoes de
fermentacao. Por exemplo, muitos pesquisadores concordam, de urn modo geral,
que a inibicao pelo substrato comeca a ser significativa para valores superiores a
100 giL em fermentacoes alcoolicas com Saccharomyces cerevisiae e glicose como
substrato. . . icrona
It'
men e, em muitas errnentacoes,
d
eve-se a
. 121314 Ad" f - di
icionar pre
cursores para se obter maior quantidade de produto, os quais, muitas vezes, sao
t6xicos para a microrganismo a partir de determinadas concentracoes no caldo de
cultivo.
Em todos esses cas os, 0 controle da vazao de alimentacao permite que se
evite 0 trabalho em condicoes inibit6rias, melhorando a produtividade e/ou ren
dimento desses processos fermentativos.
10.2.3 - Minimizao da formacao de produtos de metabolismo t6xicos
A producao de produtos de metabolismo t6xicos e particularmente critica
em processos onde se deseja a obtencao de altas densidades celulares. Alguns dos
casos onde se visa tais niveis de concentracoes sao ferrnentacoescom mi
crorganismos recombinantes e com celulas animais, uma vez que, geralmente, es
ses agentes de fermentacao produzem pouco produto. 0 aumento do ruimero de
celulas compensaria essa deficiencia. Para se conseguir tal objetivo e necessario
restringir a velocidade de crescimento devido a limitacoesde transferencia de oxi
genic, bern como transferencia de calor." Em E. coli, fonte de carbona em excesso,
mesmo em aerobiose,leva aformacao de acido acetico" (inibidor de crescimehto),
que de certa forma esta relacionada ao aumento da velocidade de crescimento do
microrganismo." Por outro lado, no cultivo de celulas animais, os produtos t6xi
cos maiscomuns sao lactato e amenia."
Em ambos os casos acima, 0 controle da velocidade de fornecimento de
substrato ao sistema permite que se mantenha a velocidade de crescimento celular
em intervalos desejados e/ou minimize a formacao de produtos t6xicos para as
celulas, possibilitando que se consiga altas concentracoes destas e, tambem, au
menta na quantidade de produto formado.
.,..
2 I0 Fermentacao descontinuaalimentada
10.2.4 - Superacao de problemas frequentes de estabilidade em
processocontinuo
Contaminacao, mutacao e instabilidade de plasmideo sao algumas das difi
culdades de manter estavel urn processo continuo. Nesses casos, utiliza-se 0 pro
cesso descontinuo alimentado com a finalidade de supera-las.'
10.2.5 - Adequa<;ao do processo fermentativo a condicoes operacionais
No Brasil, 0 aumento da capacidade de producao de etanol das unidades in
dustriais forcou 0 aumento da capacidade volumetrica e do mimero de fermenta
dores." Apesar de grande parte das instalacoes industriais anteriormente virem
trabalhando com 0 processo descontinuo classico, nao foi mais possfvel mante-lo,
devido a problema de intensa formacao de espuma, que era menos significativo
quando se operava com dornas de pequena capacidade volumetrica, sem levar em
conta efeitos de inibicao pelo substrato, que pode ocorrer quando a concentracao
de substrato atinge maiores valores no meio de ferrnentacao. Surgiu, entao, a apli
cacao do processo descontinuo alimentado para contornar esses problemas. Em
estudo de vaz6es de enchimento de dornas, vazoes decrescentes levaram a maio
res produtividades em etano1.
19

20
,21,22 AQUARONE et al." concluem que vaz6es de
crescentes levam a maiores produtividades em etanol e minimizam problemas
com espuma, pois a velocidade de adicao de acucar e maxima no inicio, quando se
tern menores volumes de meio em fermentacao e ainda nao ha inibicao por etanol,
e minima no final da fase de enchimento.
No caso de ter-se urn nutriente que seja instavel nas condicoes de Iermenta
e cujo custo justifique sua utilizacao, ele pode ser usado, desde que seja adici
onado aos poucos, ajustando a velocidade de adicao a velocidade de consumo
pelo microrganismo.
Tarnbem em processos aer6bios de periodos mais extensos, tais como em
fermentacoes de antibi6ticos (1 a 2 semanas), pode-se incorporar 0 subsjrato a ser
adicionado no liquido de reposicao de perda por evaporacao.v" Aqui 0 processo
descontinuo alimentado concatena dois objetivos: repoe liquido que 0 sistema per
de e alimenta-o com 0 substrato.
10.2.6 - Estudo de cinetica de processos fermentativos
Processo descontinuo alimentado e util para 0 estudo de cinetica de proces
sos fermentativos, pois permite a manutencao de baixos niveis de substrato por lon
go perfodo de tempo, que e favoravel a estimacao de parametres cineticos."
permite manter concentracao celular constante e controlar velocidade de crescimen
to em condicoes transientes. Ademais, ha evidencias que as maximas velocidades
de alguns processos podem ser encontradas somente nessas circunstancias."
I 0.3
Devido adiversidade de aplicacoes do processo descontinuo alimentado, al
gumas variacoes podem decorrer com a finalidade de ajusta-lo a producao de di
- . . - _ _ "._--O-. " " ' .
---_. -.._. _ _._- -_.- ::-._ _.-_..__._-_ __._------.. .. . . __ _._.. _.._--- - --, ..
C1assifica"ao 2 I I
versos produtos obtidos por fermentacao, sendo qualificados na literatura por
terminologias complementares.
Processo descontinuo alimentado ,r.epetitivo.--e aquele em que uma fracao
constante de volume de cultura e rernovida a intervalos de tempo fixos, podendo
ser mantido indefinidamente.v" Em outras palavras, de tempos em tempos, reti
ra-se rapidamente urn determinado volume de meio fermentado da dorna (0 qual
sera destinado aseparacao do produto fermentado), sendo recomposto ate seu va
lor maximo atraves da adicao de mosto com vazao de alimentacao conveniente. "
Terminada a fermentacao, repete-se 0 procedimento, que sera interrompido se cair
a produtividade e/ou rendimento do sistema, que podem ocorrer, por exemplo, se
houver contaminacao. Enchimentos e esvaziamentos repetidos de volumes especi
ficos resultam numa operacao ciclica de variacao de volume," sendo designado
por estes autores como processo descontinuo alimentado ciclico, como assinalam
MORl et al.
29
Esse tipo de processo tern sido utilizado industrialmente para produ
de levedura e de antibioticos," com 0 intuito de aproveitar como inoculo 0 mi
crorganismo que esta crescendo com alta velocidade de crescimento e de trabalhar
com ascelulas que estao na fase produtiva por mais tempo, respectivamente, le
vando ao aumento de produtividade do sistema.
Processo descontinuo descreve 0 modo de operacao
em que a concentracao de substrato limitante e mantida constante no meio em fer
mentacao pelo suprimento continuo do nutriente.F:" Como 0 proprio nome suge
re, tern por finalidade estender 0 periodo de fermentacao, mantendo niveis de
concentracao de substrato no reator adequados para que as celulascontinuem com
atividade fermentativa direcionada para a formacao do produto desejado.
Tanto a fermentacao descontinua alimentada como a descontinua alimenta
da estendida usualmente cobrem somente urn ciclo de operacao e diferem do pro
cesso descontfnuo alimentado repetitive" (ciclico) quanta a duracao da
periodicidade aplicada acultura.
o processo descontinuo alimentado pode ser dividido emdois grupos, ba
seados no fato de a adicao de substrato ser ou nao controlada por urn mecanismo
de retroalimentacao':" (Tab . 10.1).
No modo de

operacao com controle por retroalimentacao, 0 fornecimento de
substrato pode ser controlado em funcao da concentracao deste no meio de fer
mentacao (controle direto) ou em funcao de outros parametres (controle indireto),
tais como densidade optica, pH, quociente respiratorio, entre outros.
Por outro lado, 0 suprimento de substrato ao sistema e feito intermitente
mente ou de forma ininterrupta ate 0 final da fase de enchimento da dorna nos
processos nao sujeitos ao controle por retroalimentacao. Alem disso, pode-se ali
mentar com vaz6es constantes ou variaveis.
Em ambos os modos de operacao, 0 que se visa e a otimizacao dos valores
da concentracao de substrato no fermentador, com vistas a aumentar 0 rendimen
to e/ou produtividade do processo fermentativo. Ha casos em que se visa manter
uma determinada concentracao de nutriente no caldo em fermentacao e outros em
que se deseja que ela oscile de acordo com urn perfil definido, considerado como
otimo.l"
-,
212 Fermenta<;ao descontfnua alimentada
Tabela 10.1 - Gassificacao de tecnicas de processodescontfnuo alimentado.'
'C. \.'<' . : .. ... . "\:' .
1 , . .. r
" :\ {7. .:.".
TECNICA EXEMPLO
I; :
.,
Metodo
Parametro Substrato/
Produto
.' ,
Condicao
de controle aditivo

Quociente
1
Indireto Melaco Levedura b
Corn controle respirat6rio 1-
por retroali-
if
mentacao
Direto Etanol Etanol
Proteina 1;'#
microbiana
Intermitente
"t:..
Acido
ou Nenhum
fenilacetico
Penicilina
incrementos

:A
..

Sem controle Adicao


.1,
por retroali- corn taxa Nenhum Glicerol
p-galactosi-

dase
..:.: :
mentacao constante
e;
. .
Adicao
Proteina
:;"
corn taxa Nenhum Etanol
microbiana
exponencial
.. ;:. .
. .
:
- '. '
10.4 - Modelos matematicos
A utilizacao de equacoes que representam urn processo pode permitir a esti
macae de parametres, bern como sua otimizacao.
Consideraremos aqui modelos que foram desenvolvidos para fermentadores
agitados (homogeneos), alimentados com mosto constituido de urn substrato limi
tante.
33
. . .
1004.1 - Modelo para celulas
Tem-se que a velocidade de variacao de massa de celulas no reator corres
ponde amassa celular formada decorrente do crescimento microbiano. Algebrica
mente:
(10.1)
dMx
--=Il' V, X (10.2)
dt
d(V . X) = Il . V . X
(10.3)
dt
_._ __.. ._. _
.....------- _-_. .------.-.-- .,.-..--.-..-- ------, __.__-- ....--....iI
Modelosmaternaticos 213
dV dX
- . X +-'V = 11 ' V . X (lOA)
dt dt
Considerando que a variacao de volume na dorna deve-se exclusivamente a
alimentacao:
(10.5)
(10.6)
(10.7)
dX
-=(ll-D)X (10.8)
dt
Notar, pela eq. 10.8, que se nao houver variacao da concentracao celular no
decorrer do tempo, isto e, dX/ dt= a, tem-se a igualdade 11 = D. Nessa condicao, a
velocidade especifica de crescimento celular enumericamente igual avazao espe
cifica de alimentacao.
Exemplificando: Num processo onde 0 volume varie de Vi a V
f
e se alimen
te a dorna com vazao constante F temos que V = Vi + F . t. Assim, D decresce
com 0 tempo de acordo corn a expressao:
D=F /(V
j
+Ft) (10.9)
Desta forma, se dX/dt = 0,11= D = F/(V
i
+F t), decrescendo, neste caso, ao
longo do tempo.
10.4.2 - Modelo para substrata
A velocidade de variacao da massa de substrato no fermentador correspon
de adiferenca entre a massa de substrato adicionada por tempo e a utilizada para
o crescimento celular. Pode ser representada pela expressao:
dM sr =F.S _ dMsc
(10.10)
dt m dt
d(V . S) = F .S _ dMsc .
(10.11)
dt . m dt
.__. . - - - _ . _ - - - - _ . . - _ - - - - - - ~
2 14 descontfnua alimentada
dV d5 _dM
sc
-5+-V=F5 (10.12)
dt dt dt 01
Considerando que a variacao de volume na dorna deve-se exclusivamente a
alimentacao:
(10.13)
d5
D5+-=D5 -r
s
(10.14)
dt 01
onde: r, =velocidade de consumo de substrato
d5 = D. (5 - 5) - r.
(10.15)
dt . 01 s ,
Sabendo que Y / =r.rr.. chega-se a:
x s
d5 1
- = D (5 -5)--r (10.16)
dt 01 Y
x
/
s
x
d5 . 1
(10.17)
-=D(5
01
-5) --'/l'X
dt Y
x
/
s
A eq. 10.17 e uma equacao simplificada, estando de acordo com trabalhos
descritos na literatura. Ha autores, entretanto, que sugerem equacoes mais com
pletas, onde consideram que uma parcela do substrato vai para crescimento celu
lar e outra para a manutencao.t" e ate parcela que considera substrato destinado a
formacao de produtos complexes." Tambem aqui, vale lembrar que 0 valor de D e
variavel com 0 tempo, diferenciando a equacao acima daquela proposta para ba
Ianco de substrato de urn processo continuo com dorna unica," onde 0 valor de D
efixo .
1004.3 - Modelo para produto
A velocidade de variacao de massa de produto no fermentador depende da
massa que e formada devido ao metabolismo microbiano. Ou seja:
(10.18)
d(V . P) = /l . V . X
(10.19)
dt P
Modeles matematkos 215
Considerando que a variacao de volume na dorna deve-se exclusivamente a
alimentacao, tern-se:
dP
F .p +- .v = . v .X (10.21)
dt
dP
X (10.22)
dt
dP
X-DP (10.23)
dt
onde: p . x =r
p
Nomenclatura:
D: Vazao especifica de alimentacao (h-
1
)
F: Vazao volumetrica de alimentacao (L/h)
M
p
: Massa de produto no fermentador. (g)
M
se
: Massa de substrato consumida pelo microrganismo (g)
M
sr
: Massa de substrato (residual) no fermentador (g)
M
x
: Massa celular no fermentador (g de materia seca)
P: Concentracao de produto no fermentador (giL)
r
p
: Velocidade de formacao de produto (g/L.h)
r
s
: Velocidade de consumo de substrato (g/L.h)
r.; Velocidade de crescimento celular (g de materia seca/L.h)
S: Concentracao de substrato residual no ferrnentador (giL)
Sm: Concentracao de substrato no mosto de alimentacao (giL)
t: Instante t (h)
TE: Tempo de enchimento do fermentador (h)
TF: Tempo de fermentacao (h)
V: Volume de meio no fermentador (fase liquida + fase s6lida) (L)
Vi: Volume de in6culo (L)
V
f
: Volume final de meio no fermentador (maximo valor de V)(L)
X: Concentracao celular no fermentador (g de materia seca/L)
: Velocidade especifica de crescimento celular (h-
1
)
Velocidade especifica de formacao de produto (h-
1
)
Y
x
/
s
: Fator de conversao de substrato limitante ern celulas (g de massa
celular seca formada/g de substrato consumido)
2I 6 Fermentacao descontfnua alimentada
(dMp/dt): Velocidade de variacao da massa de produto
no fermentador (g/h)
(dMpl dt)c: Velocidade de formacao de produto em termos massicos (g/h)
(dMscidt): Velocidade de consumo de substrato em termos massicos (g/h)
(dMsrldt): Velocidade de variacao da massa de substrato residual
no fermentador (g/h)
(dMjdt): Velocidade de variacao de massa celular seca no fermentador
(g de materia seca/h)
(dMjdt)c: Velocidade de crescimento celular em termos massicos
(g de materia seca/h)
(dPIdt): Velocidade de variacao da concentracao de produto
no fermentador (giL h)
(dS/dt) : Velocidade de variacao da concentracao de substrato residual
no fermentador (giL h)
(dVI dt) : Velocidade de variacao de volume na dorna (L/h)
(dXI dt): Velocidade de variacao da concentracao celular no fermentador
(g de materia seca/L h)
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_ _ _ _ _ ________ _ _ _ _
219
_. _- ---================================
..- - - - -_.
Walter Borzani
I 1.1 -
o processo fermentativo recebe a denominacao de semicontinuo quando,
uma vez colocados no rea tor 0 meio de ferrnentacao e 0 inoculo, as operacoes que
se seguem obedecerem aseguinte ordem:
Operacao n. ? l-Aguarda-se 0 terminoda fermentacao,
Operacao n. D 2 - Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no rea
tor 0 restante de mosto fermentado.
Operacao n. ? 3 - Adiciona-se ao rea tor urn volume de meio de fermentacao
igual ao volume de meio fermentado retirado na Operacao n." 2.
o meio de fermentacao adicionado na Operacao n.? 3 encontra, no reator as
celulas microbianas existentes no meio fermentado que nele foi mantido. Em ou
tras palavras, 0 meio fermentado nao retirado do fermentador na Operacao n.D 2
serve de inoculo ao meio de fermentacao adicionado na Operacao n.? 3. Reini
cia-se, desse modo, a sequencia de operacoes acima descrita, que sera repetida en
quanta nao houver queda da produtividade do processo.
Em alguns casos 0 meio fermentado retirado do fermentador (Operacao n. ?
2) esubmetido a uma centrifugacao, para separar os microrganismos nele existen
tes, microrganismos estes que voltam ao rea tor juntamente com 0 meio de fermen
. tacao citado.na Operacao n.? 3.
Urn processo como 0 aqui descrito chama-se semicontinuo, porque sao inter
mitentes tanto 0 fluxo de entrada do meio no reator quanta 0 de saida de material
fermentado.
o antigo processo de fabricacao de vinagres a partir de vinho, conhecido
como processo lento (ou processo frances ou, ainda, processo de Orleans), e urn
exemplo tipico de processo semicontinuo (ver Vol. 4, Capitulo 6).
I

1'-----0--- 1
220 Fermentacao semicontinua
11.2 - Produtividade do processo semicontinuo
A produtividade de urn processo fermentativo depende de muitos fatores,
tais como: microrganismo utilizado, metodo de preparo do inocula, concentracao
microbiana no fermentador, composicao do meio, temperatura, pH, fornecimento
de oxigenio e de nutrientes durante 0 desenvolvimento da fermentacao, e outros
mais.
Nosso objetivo neste momento, e, porern, bastante especifico. Para definir
esse objetivo de maneira a nao deixar margem a duvidas, chamemos de V 0 volu
me total de meio inoculado existente no reator e ja completamente fermentado
(Operacao n.? I), e de a .V (sendo 0 < a < 1) 0 volume de meio fermentado retira
do do reator na Operacao n. D 2.
Interessa-nos saber de que maneira a fracao a afeta a produtividade do pro
cesso.
Nao e diffcil mostrar que a afeta a produtividade. Para tanto, indiquemos
por:
50= concentracao do substrato principal (geralmente, a fonte de carbono) no
meio de ferrnentacao, substrato este que sera totalmente consumido.
No = concentracao de outro nutriente importante para a atividade vital do
microrganismo (como a fonte de rutrogeruo. por exemplo) no meio de fermenta
<;ao.
P, = concentracao do produto no meio fermentado.
N, = concentracao, no meio fermentado, do outro nutriente importante para
a atuacao do microrganismo.
X
f
= concentracao microbiana no meio ferinentado.
Se, na Operacao n.? 2, 0 volume de meio retirado do reator ea V, 0 volume
de meio remanescente sera (1- a)V.
Conseqiientemente, na Operacao n.? 3 serao misturados urn volump (l-a)V
de meio fermentado e urn volume a . V de meio de fermentacao,
Podemos entao calcular, na mistura resultante:
a) concentracao do substrate principal (5J:
(11.1)
b) concentracao do outro nutriente ja citado (N;):
I
(11.2)
!
I
c) concentracao microbiana (Xi)' admitindo-se que nao hajaretorno, ao reator, dos
microrganismos existentes no volume de meio fermentado a .V: .
~ J
(11.3)
- . "."' " .......... . _ _, _....__._ __. _ . _ . _ ~ . ~ - ,._----:-- - _.. - - _ _._..__ _----..
Produtividade do processo semicontinuo 221
d) concentracao do produto (PJ
(11.4)
o tempo para se completar a fermentacao da mistura resultante da Opera
\ao n.? 3 (e, consequentemente, a produtividade do processo) depende:
a) do valor de X, pdrque quanta maior for a concentracao microbiana ini
cial, menor sera 0 tempo de fermentacao.
b) do valor de 5
i
, uma vez que quanta maior for a concentracao inicial do
substrato, maior sera 0 tempo necessario asua transformacao em produto;
c) do valor de Nil pois se a concentracao inicial do outro nutriente ja referido
nao for adequada, as celulas microbianas trabalharao mais lentamente;
d) do valor de Pi' porque 0 produto da ferrnentacao e, muito frequentemen
te, urn inibidor da atividade microbiana, 0 que pode acarretar maior tempo para
se atingir fermentacao completa.
Mas as eqs. (11.1) a (11.4) nos mostram que 5
i
, N
i
, Xi e Pi dependem de a.
Logo, a afetara a produtividade do processo.
A Figura 11.1 mostra, esquematicamente, de que maneiras a pode influir na
produtividade. .
OJ
"C
tll
"C
: ~
'S
"C
e
0..
a
Figura 11.1 - Representacaoesquematica de possfveis intluencias de a naprodutividade do processo semicontfnuo.
Nao cabe, em urn curso de graduacao, examinar pormenorizadamente os re
sultados representados na Figura 11.1. Os interessados poderao, contudo, consul-
tar a literatura indicada no final deste Capitulo.
Duas situacoes particulares, porern, devem ser comentadas, a saber:
a) Se a =I, isto e, se na Operacao n.? 2 retirarmos todo 0 meio fermentado
existente no reator e 0 substituirmos por meio de fermentacao, nao se processara
mais qualquer transforrnacao, porque nao havera celulas microbianas para servi
j
rl
I
.
III;.. ' ........ ~
222 semicontinua
rem de inoculo ao meio adicionado. Em outras palavras, a produtividade sera
nula.
b) Se a. se aproximar de zero, 0 volume de meio fermentado periodicamente
retirado do reator (Operacao n.? 2) sera muito pequeno quando comparado com 0
volume de meio fermentado remanescente, e 0 processo semicontinuo se aproxi
mara do continuo.
I 1.3 - Comentarios finais
Em que pese 0 fato de 0 processo semicontinuo apresentar relativamente
poucas aplicacoes, seu emprego, principalmente quando 0 volume de producao e
relativamente pequeno, po de apresentar algumas vantagens significativas, desta
cando-se:
a) possibilidade de operar 0 fermentador por longos periodos (as vezes, al
guns meses) sem que seja necessario preparar urn novo inoculo:
b) possibilidade de aumentar a produtividade do reator apenas modifican
do-se 0 cronograma de trabalho:
c) possibilidade de, uma vez conhecidas as melhores condicoes de operacao,
conseguir produtividade significativamente maior do que a obtida em processo
descontinuo.
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223
~ 4 ' - - - ' - - = = = = = = = =
Maria Candida Reginato Facciotti
12.1 - Conceitos basicos
o processo de fermentacao continua caracteriza-se por possuir uma alimen
tacao continua de meio de cultura a uma determinada vazao constante, sendo 0
volume de reacao mantido constante atraves da retirada continua de caldo fer
mentado.
A manutencao de volume constante de liquido no reator ede primordial im
portancia, a fimde que 0 sistema atinja a condicao de estado estacionario ou regi
me permanente ("steaqy state"), condicao na qual as variaveis de estado
(concentracao de celulas, de substrato limitante e de produto) permanecem cons
tantes ao longodo tempo de operacao do sistema.
De fato, 0 processo continuo caracteriza-se fundamentalmente por ser urn
sistema que pode operar por longos periodos de tempo em estado estacionario,
decorrendo desta situacao uma serie de vantagens em relacao ao processo descon
tinuo tradicional, conforme sera visto adiante.
Entretanto, a manutencao de volume constante no rea tor significa teorica
mente a necessidade de se contar com vazoes identicas de alimentacao e de retira
da de rneio, 0 que epraticamente impossivel de se obter na pratica. Por essa razao,
utilizam-se em geral sistemas de retirada deliquido por transbordamento ("l a
drao"), de forma a manter 0 nivel de liquido constante ou, ainda pode-se empre
gar bombas de alta vazao na saida, acionadas intermitentemente, de forma a
manter lima massa constante no reator. Para essa finalidade, alguns fermentado
. res de laborat6rio mais modernos contam corn urn sistema automatico de controle
da massa do reator, atraves da manutencao do mesmo sobre uma balanca, a qual
comanda oacionarnento das bombas de alimentacao e de retirada de liquido.
Outro problema que pode igualmente comprometer a manutencao de volu
me constante, principalmente em processos aerados, ea formacao intensa de espu
_ _ _ _ ., _ _ - _ - . - - _ - _ - - - - - - - . ~ _ - _ _ . _ _ u . :.._. . .... _ . .._ _ - ~ ' - - - - - - ' - - - - - - , - - - - - - ~ - - - - - ' - - - _ = - - - ~ - - - - - - -
L._
224 . Fermentacao continua
.ma, que deve ser evitada, seja atraves da de antiespumantes
apropriados, ou atraves de sistemas mecanicos de quebra de espuma.
Tais problemas tornam-se particularmente criticos quando s:e opera em rea
tores de pequena capacidade, onde se torna de vital importancia a precisao no es
tabelecimento das vazoes de alimentacao e de retirada do caldo fermentado..
.12.2 - Vantagens e desvantagens do processo continuo
em ao descontinuo
Conforme mencionado anteriormente, as principals vantagens apresentadas
pelo processo continuo de fermentacao, em relacao ao descontinuo tradicional,
sao decorrentes da operacao em estado estacionario, podendo-se destacar:
... aumento da produtividade do processo, em virtude de uma reducao dos
tempos mortos ou nao-produtivos:
obtencao de caldo fermentado uniforme, 0 que facilita 0 projeto das opera
coes.de recuperacao do produto de interesse ("downstream");
manutencao das celulas em urn mesmo estado fisiol6gico, 0 que torna 0
processo continuo uma excelente ferramenta para estudos de mecanismos
de regulacao metabolica'" ou, ainda, para estudos de otimizacao da com
. - d d It 3 4 5 6
e melo e cu ura; I I I
possibilidade de associacao com outras operacoes continuas na linha de
producao:
maior facilidade no emprego de controlesavancados:
menor necessidade de mao-de-obra.
Entretanto, ao lado das imimeras vantagens apontadas, 0 processo continuo
de fermentacao apresenta tambem algumas desvantagens ou problemas praticos,
que podem limitar 0 emprego deste tipo de sistema em escala industrial, para al
guns processos fermentativos. Assim, podem-se destacar: .
maior investimento inicial na planta;
possibilidade de ocorrencia de mutacoes geneticas espontaneas, resultan
do na selecao de mutantes menos produtivos;
maior possibilidade de ocorrencia de contaminacoes, por se tratar de urn
sistema essencialmente aberto, necessitando pois, de manutencao de con
dicoes de assepsia nos sistemas alimentacao e retirada de meio, desde
que 0 processo assim 0 exija;
dificuldades de manutencao de homogeneidade no reator, quando se traba
lha com baixas vazoes, ou quando 0 caldo adquire comportamento pseudo
plastico, como e0 casodo cultivo de fungos filamentosos;
dificuldades de operacao em estado estacionario em determinadas situa
coes (formacao de espuma, crescimento do microrganismo nas paredes do
reator, ainda, nos de entrada e saida de Iiquido). '.
Apesar dos problemas acima mencionados, a utilizacao doprocesso con
tinuo de fermentacao encontra grande aplicacao pratica, podendo-se citar como
exemplo tipico aferrnentacaoalcoolica, onde se utiliza normalmente, em escala
_ _._.._.._ .. __. __.. __.. __ _ __ _ _ _.._ _ - _ _._..... . __ _ .._.._ _.. .__._..__ __.._ _._=_ __ .. _ _ _ ..
Formas de operacaono sistema continuo 225
industrial, 0 processo continuo com reciclo de celulas ou, ainda, 0 processo conti- .
nuo em multiples estagios," permitindo, desta forma, a obtencao de elevados ren
dimentos, bern como elevadas produtividades do processo. Outro importante
exemplo de utilizacao do processo continuo em larga escala e0 tratamento biolo
gico de residuos, em reatores de fluxo ascendente (tipo UASB), empregados para 0
tratamento de uma grande variedade de efluentes industriais, tais como os oriun
dos de fabricas 'de cervejas e refrierantes, de fabricas de laticinios ,e de indtistrias
alimenticias de urn modo geral.
8
,9, 0 ,
Deve-se ressaltar que ambos os casos de emprego da ferrnentacao continua
acima citados, sao processos nao assepticos, nos quais se enlpregam reatores de
enormes capacidades, podendo chegar a ate alguns milhoes de litros. Por outro
lado, para processos exigentes em termos de manutencao de condicoes de assep
sia, como e0 caso da producao de enzimas e antibioticos, 0 processo continuo en
contra ainda aplicacao restrita, devido principalmente a possibilidade de
ocorrencia de contaminacoes, conforme mencionado anteriormente.
12.3 - Formas de o p e r a ~ a o no sistema continuo
o processo de ferrnentacao continua normalmente tern inicio em urn pro
cesso descontinuo, ou seja, carrega-se inicialmente 0 reator com meio de cultura,
procede-se a inoculacao com 0 microrganismo responsavel pela conversao, sen
do que, ap6s algum periodo de operacao descontinua, inicia-se aalimentacao de
meio de cultura e retirada de caldo, dando-se inicio efetivamente ao processo
continuo.
Dependendo do instante em que se inicie 0 processo continuo propriamente
dito, bern como da vazao de alimentacao empregada, 0 sistema podera convergir
com maior ou menor rapidez a situacao de estado estacionario. Assim, recomen
da-se usualmente que se inicie a alimentacao com 0 cultivo em fase exponencial, e
contendo uma concentracao celular a mais elevada possivel.
o sistema continuo de fermentacao eextremamente versatil quanta as suas
varias possibilidades de operacao, tais como:
Continuo em urn unico estagio (urn iinico reator):
sem reciclo de celulas
com reciclo de celulas
Continuo em rruiltiplos estagios (n reatores em serie):
com uma unica alimentacao (com ou sem reciclo de celulas)
com rruiltiplas alimentacoes (com ou sem reciclo de celulas)
Cada uma dessas diferentes opcoes ira resultar emdistintos comportamen
tos das variaveis de estado (concentracao de celulas, de substrate e de produto)
nos diversos estados estacionarios possiveis, podendo-se, assim, definir faixas
ideais de operacao do sistema, tendo como objetivo basico :a obtencao de elevadas
produtividades do processo.
Nos subitens seguintes, focalizar-se-a, com detalhes, cada uma destas dife
rente's formas de operacao no sistema continuo.
226 Fermentao continua
12.3.1 - Equacionamento para 0 reator contfnuo ideal
sem reciclo de celulas
A Figura 12.1 mostra, esquematicamente, urn sistema empregado para a rea
lizacao de urn cultivo continuo em urn iinico estagio, sem recirculacao de celulas.
o meio de cultura contendo 0 substrato limitante em uma determinada concentra
c;ao, e alimentado a uma vazao constante. Admite-se agitacao perfeita, de forma
que 0 reator possa ser considerado como homogeneo. Assim, portanto, admite-se
que cada porcao de meio alimentada no reator seja instantaneamente misturada
no volume de reacao, de forma que 0 liquido efluente possuira as mesmas con
centracoes de celulas, substrato e produto, que aquelas existentes no meio de rea
c;ao.
F
X,S,P
Figura 12.1 - Sistema continuoem umunico estagio, semreciclode celulas
Definem-se, pois, as seguintes variaveis:
F =vazao volumetrica de alimentacao de meio(L/h)
V = volume de meio no reator (L)
X =concentracao de celulas no reator (giL)
X, = concentracao de celulas no meio de alimentacao (giL)

S =concentracao do substrato limitante no reator (giL)
So =concentracao do substrato limitante no meio de alimentacao (giL)
P =concentracao do produto P no reator (giL)
P
o
=concentracao do produto P no meio de alimentacao (giL)
J..l =.velocidade especifica de crescimento = (1I X). (dXI dt) (h -1)
. J..l
p=
velocidade espedfica de producao do produto P generico =
(g produto/g celulas -h ou simplesmente gig ".h)
J..ls= velocidade espedfica de consumo de substrato = (1I X) (-dS I dt)
(g substratolg celula- h ou simplesmente gl g . h)
Y
x
/
s
=fator de conversao substrato a celulas =L1X/(L1S)total
(g celula/'g substrato ou simplesmente gig)
Assim, pode-se escrever 0 seguintebalanco material para 0 microrganismo,
considerando 0 rea tor como volume de controle:
- - ~ ~ _ - - -- - - - - - .-.- .-.- - ~ - - - - - ~ - - , c , - - - - - - - ' - " '-.-'- -. ".'--. ' .- ..'_ - - - ---- . . . ~ _
__

" ' ->.
Formas de no sistema contfnuo 227
(Massa
(Variacao da
(Massa de (Massa de celulas
massa de
celulas de celulas + que aparece
celulas
que entra) que sai) devido ao
no reator)
crescimento)
Portanto, considerando-se volume constante, tem-se:
J
I
I
dX (dX) (12.1) V-. =FX
o
-FX+V
dt dt crescirnento
A velocidade global instantanea de crescimento, por sua vez, pode ser ex
pressa como:
-
dX)
=IlX
(12.2)
(
dt crescimento
Define-se a "vazao especifica de alimentacao" (D) ("dilution rate"), como
sendo a relacao entre a vazao volumetrica de alimentacao e 0 volume de meio no
reator. Assim, tem-se que:
(12.3)
sendo que (1/ D)= tempo de residencia hidraulico no reator.
Assim, substituindo-se as equacoes (12.2) e (12.3) na equacao (12.1) ob-
I
tern-se:
j
(12.4)
I
!
Como frequentemente se procede aalimentacao de meio de cultura esterili I
zado, tem-se normalmente X
o
= O. Assim, tem-se:
I
i
(12.5)
I
Considerando, pois, que se tenha atingido uma situacao de estado estaciona
rio no reator, na qual a concentracao celular permanece constante (e, portanto,
I
dX/ dt =0), obtem-se que:
(12.6)
ou, ainda:
(12.7)
I
As equacoes acima sao de fundamental importancia na analise do processo
continuo de fermentacao, pois indicam que, na condicao de regime permanente, a I
i
__ ____ ,. _ . _: , .,.... ._' --:- _ ' " . _. , . _ .._.,... _ . _ _ ' ....... . .., _ _' __. , ---,_ _ ' _ T__ _
..._ _ _ . ._......... ...... ..._ _. _ ..L I_----,.

",
228 Fermentacao continua
concentracao celular se mantem constante gra<;as a urn equilfbrio entre a velocida
de de crescimento celular e a velocidade de retirada de celulas do fermentador e,
ainda, que a velocidade especifica de crescimento e igual avazao espedfica de
alimentacao (D). Ou seja, significa que atraves da imposicao de uma determinada
vazao de alimentacao ao reator, consegue-se controlar a velocidade especifica de
crescimento das celulas, significando que e possivel, em principio, fixar 0 estado
fisiol6gico das celulas, 0 que e sem duvida de primordial importancia.
De forma analoga ao que foi efetuado para 0 microrganismo, pode-se equa
cionar os balances materiais para 0 substrato limitante e para 0 produto P generi
co, de forma a se obter as express6es a seguir: .
d5
-=D(5
0
-5)-- (12.8)
dt Y XIS
dP
-=D(P
o
(12.9)
dt
Deve-se observar que, na eq. (12.8),0 ultimo termo representa a velocidade
de consumo do substrato para crescimento das celulas, sendo que nao se conside
rou 0 consumo de substrato para a manutencao destas, assunto 0 qual sera abor
dado no item 12.3.2.
Por outro lado, na eq. (12.9) 0 ultimo termo representa a velocidade global
de sintese do produto P pelas celulas, Conforme sera visto adiante, no item 12.4,
dependendo da cinetica de formacao do produto, dada por diferentes correla
coes entre e u, poder-se-ao ter distintos comportamentos da concentracao de
produto no reator. Deve-se esc1arecer, ainda, que tambem nao se considerou que
haja decomposicao ou degradacao do produto, 0 que eventualmente podera
ocorrer e, obviamente, nestes casos, sera necessario inc1uir urn termo adicional
na eq. (12.9).
Considerando-se, pois, a eq. (12.8) em estado estacionario (dS/dt= 0), po
de-se escrever:
-5)
(12.10)
Assim, fazendo-se = D, obtem-se a expressao:
x = Y
x
/
s
(5
0
.-5) (12.11)
No que se refere a operacao do biorreator em regime continuo, e da mais
alta importancia que se procureconhecer 0 comportamento das variaveis de esta
do X, 5 e P, em estado estacionario, em funcao da vazao especffica de alimentacao
D, a fim de que se possam estabelecer faixas ideais de operacao do sistema, tendo
em vista a obtencao de altas produtividades do processo.
Formas de operacao no sistema continuo 229
Nesse sentido, torna-se necessario 0 conhecimento da cinetica do processo, 0
que significa dispor de uma correlacao entre a velocidade especifica de crescimen
to (u) e a concentracao do substrato limitante (5).
Como se sabe, embora existam varias propostas na literatura, 0 modelo cine
tico de MONOD
ll
e 0 mais amplamente empregado, adequando-se para urn grande
ruimero de processos fermentativos. Por essa razao, e de grande interesse obter-se
as curvas de X e 5 em estado estacionario, quando se considera valido 0 modelo
de Monod, dado pela equacao abaixo:
(12.12)
onde:
/-lmax = velocidade especifica maxima de crescimento (h-
1
)
Kg =constante de saturacao de Monod (giL)
Assim, fazendo-se 11 = V e isolando-se 5, obtem-se:
5= KsV
(12.13)
/-lmax - V
Substituindo-se a eq. (12.13) na eq. (12.11), obtem-se a seguinte equacao para
X em funcao de D:
(12.14)
X = YxIS (50 __K---,=s:.-V_)
/-lmax -V
Por outro lade, a produtividade em celulas, no sistema continuo sem reciclo
de celulas, e dadapor:
S;x=VJf =VYXIS (50 __K---,=s:.-V_)
(12.15)
/-lmax -V
Dessa forma, a partir das eqs. (12.13), (12.14) e (12.15), pode-se preyer 0
comportamento de X, 5 e P
x
, em funcao da vazao especifica de alimentacao V,
conforme indicado na Figura 12.2, onde se apresentam as curvas obtidas por simu
lacao das citadas equacoes,
A partir daFigura 12.2, observa-se que os valores de X permanecem pratica
mente constantes em uma grande faixa de valores de V, ocorrendo uma brusca
queda ate 0 valor zero, quando V se aproxima do valor de /-lmax' Por outro lade, a
equacao (12.13) indica que quando V = /-lmaXf 0 valor de 5 tende ao infinito, 0 que
na pratica significa tender para 0 maximo valor possivel, ou seja, 0 valor 50' isto e,
a concentracao do substrato naalirnentacao.
Nesse caso, quando 5 = So observa-se, a partir da eq. (12.14), que se obtern urn
valor nulo para a concentracao celular em estado estacionario. Tal condicao de ope
_ 1 i I i i i i I i i i ~ L
230 Fermentacao continua
racao econhecida como "estado estacionario de lavagem", ou simplesmente "la
vagem" (,iwash-but"), situacao na qual ocorre urn arraste das celulas do reator. a
valor da vazao espedfica de alimentacao no qual se tern a maxima velocidade es
pecifica de crescimento edenominado "D critico"(D
c
) '
x
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
s
0;2 0,3
D(1/h)
Figura 12.2 - Sistema contfnuo em um unicoestagio, semreciclo de celulas (simulacao das equacoes 12.13
- I
a 12.15, comJ..lmax= 0,5 h ; K
s
= 0, I g / L ; YXIS = 0,5; 5
0=
Igil )
Assim, a condicao de lavagem do reator permite estabelecer a faixa de ope
racao do reator continuo que, no caso do reator ideal, sem reciclo de celulas, esta
entre zero e IlmaXf obedecendo-se, portanto, acondicao D < D;.
. Entretanto, dentro dessa ampla faixa de operacao, verifica-se, a partir da
Figura 12.2, que os rna is altos valores de produtividade em celulas sao obtidos
quando D esta muito proximo a IlmaXf ouseja, numa regiao de grande instabilida
de de operacao do reator, pois uma flutuacao minima na vazao especjfica de ali
mentacao, podera ocasionar a lavagem do reator.Por essa razao, caso 0 objetivo
do processo seja a producao de celulas, recomenda-se a operacao do reator em
valores urn pouco menores de D (em torno de 10 a 15% menor), obtendo-se assim
uma produtividade em celulas menor que a maxima, porem ainda suficiente
mente elevada.
a arraste das celulas, embora obviamente indesejavel quando se esta ope
rando urn reator continuo, eusualmente empregado para a determinacao da velo
cidade especifica maxima de crescimento (Ilmax), sendo esta tecnica conhecida
como "metododinamico de determinacao de Ilmax" sendo amplamente descrita na
li teratura.
12
Essa tecnica consiste em, partindo-se de urn dado estado estacionario
com Il =0, impor-se uma vazao especifica de alimentacao nitidamente superior a
IlmaXf de forma a se obter urn decrescimo da concentracao celular no reator, confor
me pode ser verificado a partir da eq. (12.5), reescrita abaixo:
dX
- = (Il max - D)X
(12.16)
dt
~ _ . - .. ~ _ .__. _ _ __. - ..---- .--- -- - - _.-_.-- - - - - ~ - -.--..-.. _.. __
t .
!
I
Formas de operacaonosistema continuo 23 I
1
Assim, integrando-se a equacao acima entre toa t, sendo to0 instante em que
I
I
se fez D > no qual se tinhauma concentracao celular igual a X; tem-se:
I
(12.17)
Assim, plotando-se In(XjX
j
) em funcao do tempo, obtem-se uma reta, cujo
coeficiente angular eigual a - D) . Como D econhecido, calcula-se assim 0 va
lor de A Figura 12.3 ilustra 0 procedimento descrito.
Convem ainda, aproveitar a Figura 12.2 para colocar as definicoes de "qui
miostato" e "turbidostato", frequentemente mencionadas na literatura. Por quimi
estate entende-se urn reator continuo operando na regiao de valores de D para os
quais X varia pouco e, portanto, eurn processo cuja composicao quimica emanti
da constante (X e 5 constantes), atraves da introducao de substrato pela alimenta
-;ao. Por turbidostato, por outro lade, designa-se 0 processo continuo operando na
regiao de grande variacao de X, isto e, na regiao de D pr6ximo a Nesse caso,
ajusta-se a vazao de alimentacao de forma a manter X constante, 0 que em alguns
casos, corresponde a manter a turbidez do meio constante.
Para finalizar 0 presente item, convem mencionar que, no caso do tratamen
"
to bio16gico de residuos, deve-se operar 0 reator com baixos valores de D, pois 0 :ri
objetivo, neste caso, e obter urn efluente combaixos valores da concentracao do
substrato. Nessa situacao de baixos valores de 5, todavia, tornam-se criticos certos
fenomenos, tais como, metabolismo end6geno, lise celular e consumo de substrato
para manutencao, cujas consequencias para 0 desempenho do reator serao analisa
das no pr6ximo item.
-'-
In(XlX,)
o
-2
-4
-6
-8
-10
-12
-14'--_---'-__ __-'--_---''-_--'-__-'-_---'
o 2 4 6 8 10 12 14
Tempo (h)
I
Figura 12.3 - Metodo dinamico de determ inacao de f.lmax. (simolacao da equacao 12.17,com f.lmax = 0,5h- ; D =
1,5h-
I
; Xi = 5,0 gil; to = 0)
.. ,.- .-- -_ __. -.. _- -_._- -_._. -_.-._._._- -- --- -----_._-..
232 Fermentacao continua
12.3.2 - Desvios do comportamento ideal devido arnaoutencao
e ao decaimento celular
No desenvolvimento apresentado no item anterior, considerou-se urn reator
continuo ideal, sem levar em consideracao 0 consumo de substrato para manuten
c;ao, bern como sem considerar a possivel ocorrencia de decaimento celular ("de
cay"), seja como consequencia do metabolismo endogene, ou ainda, resultante de
lise eel ular.13
No presente item pretende-se, pois, verificar quais os tipos de alteracoes resul
. tantes no comportamento das variaveis de estado XeS, em funcao da vazao especifi
ca de alimentacao, quando se levam em consideracao os aspectos mencionados.
Assim, as equacoes de balance material para 0 microrganismo para 0 subs
trato limitante, adquirem 0 seguinte forrnato:
(12.18)
dS ( fl J
(12.19)
-=D(So -S)- -+ms X
dt Y
G
onde:
k
d
=velocidade especifica de decaimento celular (h-
1
)
YG =fator de conversao verdadeiro substrato a celulas (gig), PIRT
12
m
s
= coeficiente de manutencao (h-
1
)
Considerando-se as equacoes (12.18) e (12.19) em estado estacionario e admi
tindo-se valida a cinetica de Monod, obtem-se as seguintes expressoes para XeS:

X = YGD(So - S)
(12.20)
YGms +(D+k
d
)
S= Ks(D+k d )
(12.21)
flmax - (D + k
d
)
sendo que, em estado estacionario, tem-se fl = D + k
d

Assim, na Figura 12.4 apresentam-se as curvas de XeS obtidas por si
mulacao das eqs. (12.20) e (12.21), nas quais se considerou diferentes valores
parak
d
ems"
Conforme se pode verificar atraves dessa figura, as alteracoes mais significa
tivas no comportamento da concentracao celular ocorrem na regiao de baixos va
lores de D e, portanto, onde se tern baixas concentracoes de substrato, situacao na
qual 0 substrato eutilizado preferencialmente para manutencao da viabilidade ce
lular.
....... ...L . . .. _ _....._
..... _ .._._ . _.._. __...,.__._--, ...._ --_..__._.__ ---_ ....:...-->. _ - --- _. __._----- _.._-
I
Formasde operacaono sistemacontinuo 233
Portanto, em processos nos quais se trabalha com baixas vazoes especificas de
alimentacao, cujo exemplo tipico e0 tratamento biol6gico de residuos, nos quais se
opera na regiao de baixos valores de S, ha necessidade de se tomar uma certa cau
tela no estabelecimento da vazao de operacao, pois se podera obter, em estado es
tacionario, concentracoes celularessignificativamente inferiores as previstas
quando nao se considera 0 decaimento celular e 0 consumo de substrato para rna
nutencao. Deve-se mencionar, ainda, que nas simulacoes apresentadas na Figura
12.4, considerou-se k
d
e m, constantes. Entretanto, para urn tratamento mais rigo
roso, se poderia considera-loscomo sendo funcoes de S e, portanto, variaveis com
D, conforme indicam algumas propostas na Iiteratura.P:"
Convem mencionar, ainda, que uma serie de consequencias importantes sao
observadas, quando se analisa a ocorrencia de perda de viabilidade celular no rea
tor continuo, conforme apontado em trabalho recente, por FACCIOTTI;
SCHMIDELL.14
12.3.3 - Sistema continuo com reciclo de celu'as
A operacao do sistema continuo com recirculacao de celulas tern como obje
tivo a obtencao de alta densidade celular no rea tor, aumentando-se assim conside
ravelmente as velocidades e, portanto, em ultima analise, a produtividade do
processo. 0 reciclo de celulas pode ser interno ou externo ao reator.
Por recirculacao interna entende-se a situacao na qual uma fracao das celu
las emantida no reator, seja atraves de umasimples sedimentacao, ou atraves do
emprego de urn filtro na saida de Iiquido do reator. No caso do reciclo externo 0 11
quido efluente circula atraves de urn "separador de celulas" (sedimentador, cen
trifuga ou sistema de filtracao por membranas), de maneira que uma corrente
concentrada em celulas retorna ao fermentador, enquanto uma outra (filtrado ou
I'
permeado), sai praticamente isenta de celulas,
!
X(g/L) S(g/L)
6,--------------------,---,---, 10
S(Kd=O;
ms=O
oUO,03)
/
0,2 0,3 0,1 0,4 0,5
4
51---------"----_
8
6
4
2
0
D(1/h)
Figura 12.4 - Influenciada rnanutencaoe do decaimento celular no sistemacontinuoemumunicoestagio, semrecidode
celelas(simulac;ao dasequacoes 12.20 e 12.21 ,com flmax = O,sh-I ; Ks = 0, 1gil; YG = 0,5; So = 1gil)
234 Fermenta o continua
Deve-se ressaltar que a recirculacao interna de celulas representa uma situa
\ao comparativamente mais segura em termos de manutencao de condicoes de as
sepsia, quando comparada com 0 reciclo externo, sendo poresta razao rnais
adequada no caso de processos exigentes em termos de assepsia, como e 0 caso da
producao de enzimas e antibi6ticos. Por outro lado, 0 reciclo externo torna-se uma
alternativa bastante viavel no caso de processos em que esta preocupacao nao seja
tao intensa, ou ate mesmo nao exista, como por exemplo na ferrnentacao alcoolica,
ou, ainda, no tratamento biol6gico de residuos (processo de lodos ati vados), os
quais sao exemplos praticos de utilizacao do processo continuo com reciclo exter
no de celulas em escala industrial, com reatores de grandes capacidades, poden
do-se chegar a ate alguns milhares de metros cubicos,
12.3.3.1 - Sistema com reciclo interno
Considerando-se 0 sistema continuo com reciclo interno de celulas indicado
na Figura 12.5, no qual a retencao de celulas ocorre atraves do emprego de uma
filtracao interna do liquido efluente,definem-se os seguintesparametros:
c =fracao do liquido efluente removida diretamente do fermentador,
sem passar pelo filtro ("purga")
h =fator de diluicao da concentracao celular obtido no liquido filtrado
cF
F X,S
So (1-c) F
r;==!====F'f=A hX,S

Figura 12.5 - Sistema continuo em um unico estagio, com reciclo intemo de celulas.
Assim, pode-se escrever a seguinte equacao de balance material para 0 mi
crorganismo no fermentador, considerando-se K; =0:
dX
v-= VIlX -cFX -(1- c)F hX (12.22)
dt
Deve-se observar que 0 segundo termodo membro direito da equacao acima
representa a massa de celulas que e removida atraves da purga, enquanto que 0
ultimo se refere a massa de celulas removida atraves do efluente filtrado, com
uma vazao (1 - c)F e com uma concentracao de celulas igual a hX.
Aprimeira vista pode parecer estranho 0 fato de se considerar a existencia
de uma "purga", conforme representado na Figura 12.5. De fato, a sua existencia
nao e estritamente necessariavEntretanto, conforme sera visto adiante, essa saida
..----..---_....-_. - - - - - ~ . _ . - - - . _ . 7 " - - - - - - - - - .. .-.-.-.:- ._._- "--_.._- - ". - - ~ ...- - - - - - - - - - ~ . _ - - _ . - ..,.---- -..-._..-- - - ..-.--- - - ---.,.----.-.- . - . - "---....:-- "-- ------ ... _.... _-..._.
Formasde operacao no sistema continuo 235
direta de caldo fermentado, sem filtracao, permite umamaior controlabilidade do
processo em termos de manutencao do estado estacionario neste sistema.
A seguir, dividindo-se os termos da eq. (12.22) pelo volume de meio no rea
tor (V), obtem-se, ap6s alguns rearranjos: .
dX
-={Jl-D[c+h(l-c)]}X (12.23)
dt
Seja:
A=[c+h(l-c)] (12.24)
Assim, pode-se escrever que:
dX
-=(Jl-AD)X (12.25)
dt
Portanto, em estado estacionario (dXj dt = 0), obtem-se:
Jl=AD (12.26)
A eq. (12.26) indica que, em estado estacionario, nao emais valida a igualda
de entre Jl e D, conforme ocorre para 0 sistema continuo simples sem reciclo de ce
lulas. Alern disso, pode-se observar que A sera sempre menor do que 1, pois
considerando-se as duas situacoes extremas possfveis, quais sejam: h=O (retencao
total de celulas atraves do,filtro) e h =1 (retencao nula de celulas, recaindo portan
to, no sistema sem reciclo), verifica-se que c < A < 1, significando portanto, que
Jl < D. Essa desigualdade possui urn significado pratico de grande importancia,
pois indica que, para esse sistema, 0 valor de D no qual ocorrera a lavagem, isto e,
D critico, sera superior ao valor de JlmaXf pois:
D = Jlmax
(12.27)
C A
Significa, portanto, na pratica, uma ampliacao na faixa de operacao da vazao
espedfica de alimentacao, podendo-se operar com valores de D superiores a Jlmax' .
Com relacao a equacao de balance material para 0 substrato limitante, po
de-se verificar que nao ha alteracao desta em relacao a anteriormente desenvolvi
da para 0 sistema sem reciclo de celulas (eq. 12.8).
Assim, considerando-se valida a cinetica de Monod, obtem-se em estado es
tacionario:
5_)
x = Y = -_ .
(12.28)
x / ~ s _(5--=-_
A
., ' ' r
236 Ferrnentacaocontinua
s= KsAO
(12.29)
l-lrnax -AO
P
x
=AOX (12.30)
Atraves das equacoes acima, torna-se possivel verificar algumas conse
quencias praticas adicionais advindas do reciclo de celulas, alern da arnpliacao
da faixa de operacao da vazao especifica de alimentacao, discutida anteriormen
teo Dessa maneira, pode-se observar, comparando-se as eqs. (12.28) e (i2.29) com
as eqs. (12.11) e (12.13), que no sistema com recirculacao de celulas tern-se, em
estado estacionario, uma maior concentracao de celulas, ao lado de uma menor
concentracao de substrato, sendo que a concentracao celular no sistema com reci
clo e aproximadamente igual a do sistema sem reciclo, multiplicada pelo fator
(1/ A) .
No que se refere a produtividade em celulas, verifica-se que para valores
de 0 inferiores a l-lmax' a produtividade no sistema com reciclo e praticamente
igual a do sistema sem reciclo. Ja para valores de 0 superiores a l-lmax' verifi
cam-se elevadas produtividades no sistema com reciclo, enquanto que obvia
mente se observam valores nulos no sistema sem reciclo, devido aocorrencia de
lavagem de celulas.
Pode-se concluir, portanto, que caso 0 objetivo do processo seja a produ
c;ao de celulas, entao 0 sistema com reciclo oferecera vantagens realmente efeti
vas em relacao ao sistema sem reciclo, isto e, maiores valores de X e p
x
apenas
caso se opere na regiao de valores de 0 superiores a l-lmax' ate 0 limite de l-lmaJA,
conforme se pode verificar atraves da Figura 12.6, na qual se apresentam as
curvasde X e P
x
, obtidas por simulacao das eqs. (12.28) e (12.30) (X
e
/
ree
e p xe/r ee),
bern como se indicam ainda, as curvas respectivas para 0 sistema sem reciclo
(Xs / ree e Pxs /ree)'
Por outro lado, no caso de tratamento de residuos, onde 0 objetivo e a degra
dacao da materia organica, pode-se observar que, comparativamente ao sistema
sem reciclo, e possivel a obtencao de concentracoes residuais de substrato ainda
bastante baixas, para valores mais altos de 0, significando desta maneira uma sen
sivel reducao no tempo de residencia necessario para se atingir a degradacaode
sejada da materia organica do residuo.
Com relacao ao acumulo de urn deterininado produto de interesse, a faixa
ideal de operacao em termos de 0 ira depender da cinetica de formacao desse pro
duto, o que sera abordado separadamente no item 12.4.
Convem ressaltar que nas equacoes desenvolvidas para 0 sistema com reci
clo de celulas, nao se considerou a ocorrencia de decaimento celular, bern como 0
consumo de substrato para manutencao celular, os quais podem serparticular
mente criticosquando se empregam valores muito baixos de 0, conforme discuti
do anteriormente no item 12.3.2.
Formas de operacao no sistema continuo 237
12
Px
c/rec
4
1,0 1,5 2,0
D(1/h)
Figura 12.6 - Sistema continuoem um unico estagio, com reciclo de celulas (simulacao dasequacoes 12.28e
12.30, com Ilmax = 0.5 h- I ; K
s
= O. I gil; YXIS = 0.5; So= 10gil; c = 0; h = 0.2).
Urn aspecto adicional que merece ser comentado, diz respeito aimportancia
da existencia da "purga" no sistema continuo com reciclo, isto e, de uma saida di
reta de liquido efluente do reator, sem passar pelo filtro. Caso essa nao exista,
tern-se c =0, podendo-se observar, a partir das eqs. (12.24) e (12.26) que, em estado
estacionario, a velocidade especifica de crescimento sera igual ao parametro h, 0
qual depende diretamente da eficiencia do filtro empregado. Assim, caso ocorra
urn entupimento desse filtro, 0 que significa ter-se h = 0, isto resulta teoricamente
na impossibilidade de se atingir uma condicao de estado estacionario, conforme se
pode verificar atraves da eq. (12.28), pois tem-se A =e X =00 . No entanto, se hou
ver uma purga, mesmo que se tenha h = 0, ter-se-a A"* 0 e, portanto, torna-se pos
sivel atingir a condicao de estado estacionario.
Para finalizar 0 presente item, convem esclarecer que, no caso de se executar
o reciclo de celulas atraves da sedimentacao de celulas no reator, conforme indica
do na Figura 12.7, as equacoes de balance material para este tipo de situacao sao
as mesmas desenvolvidas, considerando-se a filtracao interna das celulas, sendo
que neste caso, entretanto, 0 volume V refere-se ao volume da "zona de reacao"
ou "zona de crescimento" apenas.
12.3.3.2 - Sistema com recic/o externo
A Figura 12.8 representa esquematicamente urn sistema continuo com reci
clo externo de celulas, definindo-se os seguintes parametres adicionais:
F
s=
vazao de saida do liquido efluente (L/h)
a =fracao da vazao do liquido efluente que ereciclada
g = fator relativo ao incremento da concentracao celular obtido no "separa
dor" (centrifuga, sedimentador ou filtro de membranas), sendo g>l.
Os parametres c e h possuem significado analogo ao visto anteriormente
para 0 sistema com reciclo interno de celulas.
_._- - _._ --.. .. ------.---.-----.--_. ._------. _---- -- --_.__. __~ . - - - ~ - - - - - - ~ - - - - - - - _ ... - - - - - - - - ~ . - - - - - - - - _ . _ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - _ .
r
_ - - - - .. - ~ - - ' - ' - ~ - ~ " "
238 Fermentao continua
(1-c)F
hX,S
zona de
sedlmentacao
zona de
reacac
So X,S
Figura 12.7 - Sistema continuo com sedirnentacao interna de celulas.
(1-c) F
hX,S
cF
gX,S
gX,S
Figura 12.8 - Sistema continuo em urn unico estagio com recicloexterno de celulas,
Tern-se, pois:

F
s
=F +aF
s
(12.31)
Portanto:
F
F
s
=-- (12.32)
(1 -a)
Assim, efetuando-se urn balance material para as celulas, considerando-se 0
rea tor como volume de controle, obtem-se:
. dX .
V - = V ~ X +aF
s
gX -FsX (12.33)
dt
Assim, dividindo-se ambos os membros da equacao acima por V, e ainda
utilizando-se a eq. 12.32, obtem-se ap6s alguns rearranjos:
______.....-.... iIliIIIiIrIIIlLL' .__. ...__. . ,_.._ _ .. - ---- .--. - - - - --- --- ..- -- .---._.
..' ....
Forrnasde operacao no sistemacontinuo 239
(12.34)
5eja:
l-ag
B=-
(12.35)
I-a
Assim, pode-se escrever que:
dX (12.36)
dt
Deve-se, pois, observar que a equacao (12.36)acima, eformalmente identica
aequacao (12.25), desenvolvida anteriormente para 0 sistema com reciclo interne
de celulas e, consequentemente, serao obtidas para 0 sistema com reciclo externo,
conclusoes analogas aquelas discutidas anteriormente. Assim, em estado estacio
nario tem-se:
(12.37)
x= y XI S (50-5)
(12.38)
B
5= KsBD
(12.39)
-BD
P
x
=BDX (12.40)
o valor de D critico nesse sistema sera, portanto:
D=
(12.41)
C B
Verifica-se, pois, que as eqs . (12.37) a (12.41) sao analogas aquelas previa
mente desenvolvidas para 0 sistema continuo com reciclo interne de celulas, sen
. do que formal mente tern-se a variavel B em vez de A. Consequentemente, 0
comportamento de X, 5 e P
x
em estado estacionario, em funcao da vazao especifi
ca de alimentacao, sera 0 mesmo visto anteriormente no item 12.3.3.1.
Entretanto, deve-se salientar que como (1 - ag) < (1 - a), significa que B < I,
ou seja, significa que necessariamente se deve ter 0 produto ag < I, pois ag = lin
dicaria uma situacao hipotetica. ina qual todas as celulas estariam sendo recicladas
ao rea tor, nao sendo possivel atingir-se a condicao de estado estacionario.
.. . .. ..__ ..... ",__,, ,_,_, ,
_ . . _. . ... _. _._ . . . .__. - . . _.-__ . _. _ -:-,-. .--- --- ---.-- --- -. - --. - - -.-.-.-. __ .__ _ . _c_. .. _, _,... .
'.
240 Fennentao continua
Convem esclarecer ainda que, no sistema esquematizado na Figura 12.8,
considerou-se a existencia de uma purga apes 0 processo de separacao de celulas,
Todavia, poder-se-ia imaginar a alocacao dessa purga diretamente no reator, da
mesma forma como foi efetuado para 0 sistema com reciclo interno de celulas,
sendo que obviamente se teria uma alteracao nas equacoes de balance material de
senvolvidas.
De fato, em alguns textos encontra-se a mencionada situacao, sendo que al
guns autores optam ainda por fazer os balances materiais considerando-se con
juntamente 0 reator mais 0 separador como volume de controle. Tais estilos
diferentes de abordagem conduzem, no entanto, as mesmas conclusoes indicadas
no presente texto, com relacao ao desempenho do processo de fermentacao conti
nua com reciclo externo de celulas,
12.3.4 ': Sistema continuo em multiples estagios
Quando se imagina a operacao do sistema continuo em multiples estagios,
isto e, com n-reatores acoplados em serie, conhecido tambem como sistema em
"cascata", diversas sao as opcoes de conducao do processo, podendo-se ter:
sistema com uma unica alimentacao
("single-stream multi-stage")
sistema com multiplas alimentacoes
("multi-stream multi-stage")
sistema com reciclo de celulas, com uma ou com multiplas alimentacoes
Essas diferentes possibilidades estao esquematizadas nas Figuras 12.9 e 12.10,
onde se observa que no caso do sistema com uma unica alimentacao tem-se a ali
mentacao de meio esterilizado apenasno primeiro estagio, enquanto que nos
demais reatores a alimentacao e0 lfquido efluente do reator imediatamente anterior
a este. Ja no caso do sistema com multiplas alimentacoes tem-se, num ~ a d o reator
intermediario, duas alimentacoes, sendo uma 0 meio de cultura esterilizado e a se
gunda 0 efluente do fermentador anterior.
Figura 12.9 - Sistema continuo em multiples estagios, com uma unica alirnentacio e com reciclo.
__I.L .. . __ -
.---.----.------.--.. - - - - - - - - - _ _ _ _ O ~ __ - - - - ~ - , , - -
Formas de operacaono sistemacontinuo 24 1
Figura 12.10 - Sistema continuoem multiples estagios, com multiplas alirnentacoes e com reciclo.
No caso do sistema com reciclo de celulas, embora nas Figuras 12.9 e 12.10 es
teja representado esquematicamente 0 reciclo do ultimo para 0 primeiro estagio, po
de-se ter na realidade iruimeras outras possibilidades, imaginando-se por exemplo
'a existencia de reciclos intermediaries entre os estagios, caso esta-configuracao seja
interessante em termos de permitir uma melhoria no desempenho do processo.
Tais sofisticacoes, entretanto, em nivel do arranjo dos reatores, nem.sempre
sao de facil implantacao e execucao em nivel industrial, podendo acarretar custos
adicionais consideraveis. Por essa razao, a utilizacao do sistema continuo em rrnil
tiplos estagios encontra ainda aplicacao restrita, apresentando, no entanto, uma
grande potencialidade, em vista da grande versatilidade do sistema e das vanta
gens que pode apresentar no que se refere aodesempenho do processo.
De urn modo geral, os sistemas em multiples estagios proporcionam dife
rentes ambientes para 0 desenvolvimento das celulas, ao se mudar de urn estagio
para outro, aproximando-se assim de urn: rea tor de fluxo pistonado ("plug-flow")
e, permitindo, portanto, que se empreguem condicoes otimizadas distintas nos va.,
rios reatores. Assim, porexemplo, no caso da producao de urn determinado meta
b6lito, cuja cinetica de formacao seja nao-associada ao crescimento, pode-se
imaginar a utilizacao de dois reatores em serie, sendo que no primeiro se poderia
otimizar as .condicoes de cultivo de forma a se maximizar 0 crescimento celular,
enquanto que no segundo se poderiam empregar condicoes que levassem a uma
maximizacao da producao do produto de interesse.
Urn outro exemplo de aplicacao do sistema continuo em multiples estagios,
frequenternente mencionado na literatura, e a sua utilizacao para processos com
inibicao pelo produto, como e0 caso da producao de etanol. Nesses casos, tem-se
normalmente elevadas velocidades de conversao nos estagios iniciais, pois as con
centracoes do produto sao ainda relativamente baixas, ao passo que nos estagios
finais tem-se baixas velocidades, sendo denominados de estagios de "polimento",
nos quais se verifica 0 consumo do residual da fonte de carbono e se atingem, por
tanto, elevadas concentracoes do produto inibit6rio.
Convem esclarecer que.0 equacionamento para urn sistema de multiplos es
tagios deve seguir a mesma estrategia utilizada nos itens anteriores, sendo que,
para os reatores intermediaries da serie, se devera considerar, no balance material
para as celulas, urn termo relativo a entrada de celulas, provenientes do efluente
do reator anterior a este.
-- - -- - . _ . _ - - - - - - - - - - ' - - - - - - - ' - - ' - - - - - - - ~ - - - ' - ' ~ - ' - - - ~
- --_._--_. . ._-_._.__.. -- -- -- - - ~ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~ - " . , - - ~ ~ . ~ - - . . -
-. :
242 continua
12.4 - de produtos no sistema continuo
Neste item sera abordada a formacao de produtos no sistema continuo sem
reciclo de celulas, considerando-se a classificacao de GADEN/
s
: com equaciona
mento correlacionando as velocidades especificas de crescimento (u) e de produ
\ao conforme proposto originalmente por LUEDEKING e PIRET/
6
como
especificamos a seguir:
Producao associada ao crescimento:
(12.42)
Producao nao-associada ao crescimento:
=p (12.43)
Producao parcialmente associada:
+p (12.44)
onde a e pserao considerados constantes.
Considerando-se a eq. (12.9) de balance material para 0 produto, desenvol
vida no item 12.3.1: fazendo-se Po = 0, obtem-se a seguinte expressao para a con
centracao do produto P em estado estacionario (dP / dt = 0):

(12.45)
D
Por outro lado, a produtividade deste produto sera dada por:
(DP) (12.46)

Substituindo-se, pois, as eqs. (12.42) a (12.44) nas eqs. (12.45) e (12.46), e lem
brando que = D, obtem-se as seguintes expressoes para a concentracao do pro
duto (P) e a sua produtividade (DP), em estado estacionario, em funcao de D:
Producao associada:
P=aX (12.47)
(DP) = a (DX) =aP
x
(12.48)
Producao nao-associada:
(12.49)
ii lrIlJL c __ _
. _---- --- -----. - - ------ - - .".----- - - - - - ----- --_._--
Formac;ao de produtosno sistema continuo 243
(OP) = (12.50)
Producao parcialmente associada:
(OP) = X (aD
(12.51)
(12.52)
....
As Figuras 12.11 a 12.13 indicam as curvas de P e (OP) obtidas por simula
c;ao das eqs. (12.47) a (12.52).
Dessa maneira, conforme se pode observar a partir da Figura 12.11, bern
como atraves das eqs. (12.47) e (12.48), no caso de producao associada ao cresci
mento, 0 comportamento matematico de P e (OP) eanalogo ao observado para X e
P
x
, respedivamente, obviamente multiplicados por urn fator a, aqui considerado
constante. Portanto, interessa nesse caso a operacao do sistema continuo em valo
res relativamente elevados de 0, situacao na qual se poderao obter, ao mesmo
tempo, elevada concentracao do produto, bern como elevada produtividade deste.
No caso de producao nao-associada ao crescimento, conforme indicado pe
las eqs. (12.49) e (12.50), bern como pela Figura 12.12, observa-se que a concentra
c;ao do produto P varia inversamente com 0, ao passo que a produtividade (OP)
e proporcional a X, ou seja, permanece praticamente constante para uma ampla
faixa de variacao de 0, decaindo bruscamente proximo a Ilmax' isto e, proximo a
lavagem. Conclui-se, portanto, que neste caso einteressante trabalhar-se com va
lores relativamente baixos de 0, no sentido de se conciliar altos valores de P e
(OP).
Por ultimo, no caso de producao parcialmente associada ao crescimento, po
de-se verificaratraves das eqs. (12.51) e (12.52), bern como atraves da Figura 12.13,
que P varia inversamente com 0, enquanto que a produtividade (OP) econstitui
da pela soma de dois termos, sendo urn deles a produtividade em celulas multipli
cadapor a, e 0 Dutro 0 termo 0 qual eaproximadamente constante para uma
ampla faixa de valores de 0, desde que seja constante. Dessa forma, conforme se
verifica na Figura 12.13, a regiao de operacao mais favoravel situa-se na faixa de
valores intermediaries de O.
o tratamento apresentado no presente item indica, portanto, que depen
dendo do tipo de cinetica de formacao do produto, havera determinadas faixas
mais adequadas de operacao do sistema continuo, de forma a se buscar a obten
c;ao de elevadas concentracoes e produtividades do produto de interesse. De
ve-se destacar ainda, que as curvas apresentadas nas Figuras 12.11 a 12.13 sao
validas, desdeque a cinetica de Monod seja adequada para representar 0 pro
cesso, uma vez que esta hipotese foi considerada no desenvolvimento do pre
sente capitulo.
.. ..__.__._.__.._. ....__.. ......._ ..,...",'" ..
3
2
2
o':"""'--------,c'-:-__-::"-::__----=-'-=--_----=-'-:-_--,:_'' 0
4
,
, ;
244 Fermentaocontinua
X,P(g/L) Px,(OP)(g/Lh)
10 .---- - - --- - - - - - - - - - --,
6
5
8r--------
P
----_
4
6
X
I i
. I o 0,2 0(1111) 0,3 0,4 0,5
I f
Figura 12.1 I - Producao associada ao crescimento das equacoes 12.47 e 12.48,com Jlmax = 0,5h- I;
: j
K
s
= 0, I giL; YXIS = 0,5; So= IgiL; a= 1,6g1g)
I
X,P(g/L) Px,(OP)(g/Lh)
I 80 3,0

2,5
60
2,0
40 1,5
1,0
20
0,5
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4
D(1/h)
Figura 12.12 - Producao nao-asscciadaao crescimento (sirnulacaodas equacoes 12.49e 12.50, com Jlmax =
0,5h-
l
; K
s
= 0, I giL; YXJS = 0,5; So = Igil; 13 = 0,5 gig.h).

X, P(g/L) Px,(OP)(g/L.h)
(OP)
X
60
50
5
4
3
2
70
o 0
o 0,1 0,2 0( 1111) 0,3 0,4 0,5
Figura 12.13 -'- Producao parcialmente associada ao crescirnento (sirnulacao das equacoes 12.5 I e 12.52)
ji
(Jlmax = 0,5h- I; K
s
= 0, I gil; YXIS = 0,5; So = Igil; a = 1,83 gig; 13 = 0, 155 gig. h).
Ii
---
-I
. _,. .._. .__. .__ .. _. __.__ ,..,.__.,." .". __."_ ,_.,, _ ", _.. . ._._.. ._._.". '._ .__
Referendas bibliogratkas 245
Claro esta, portanto, que caso outro modelo cinetico seja rnais adequado para
a descricao do processo, tais como as propostas de Teissier, Contois, Andrews e ou
tros," este devera ser introduzido no conjunto de equacoes, no lugar da equacao de
Monod, (eq. 12.12), de maneira que assim se possam obter os novos perfis de con
centracao celular, concentracao de substrato e produto, e de produtividades, em
funcao da vazao especifica de alimentacao, de forma a se definir as faixas ideais de
operacao do sistema continuo para cada caso especifico.
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l
i
:
,
l
I
.
i

I
~
i
,
,
I 1
1:1
Ie:
' - ~ - - _ . _ - - - - - - - - - - - - _
----- - --
247
,-- - --- ------,--- - - - --- ---
--- - --- -"---_ ._---===========::::=:.::===-===
-- - --- -- -
.._------ _. _ __ . ---_._---=-=--======
_ _
- "

----- - -_._----- --
- - --- _ ._- - ----- - ------- - - --- - ,--- - - _._ - - - -
Vanildo Luiz Del Bianchi ,
Iracema de Oliveira Moraes
Deise Maria Fontana Capalbo
13.1 -
Quem nunca viu uma laranja coberta por uma camada verde ou negra de
mofos? Urn pao embolorado? Ou mesmo urn sapato mofado ap6s ter sido deixado
em urn lugar iimido? Pois bern, esses exemplos citados, que acontecem com fre
quencia na natureza, ocorrem principalmente devido a determinadas condicoes
ambientais e alimentacao propfcias ao crescimento desses microrganismos.
Porem, esse desenvolvimento microbiano indesejavel pode ser, se houver
urn controle do processo, uma ferramenta potencialmente interessante na obten
c;ao de di versos produtos, tais como enzimas, biomassa microbiana, in6culos, alem
de alimentos, medicamentos, pigmentos, etc. .
Essa forma de processo e denominada "fermentacao em estado s6lido" , "fer
mentacao em substrato s6lido", "fermentacao em meio semi-solido" ou simples
mente "fermentacao semi-solida". Como forma abreviada, pode ser utilizada tam
bern a sigla FSS (embora, menos freqiientemente, alguns pesquisadores prefiram
usar as siglas FMSe FES).
Esse processo, comumente empregado em paises do Oriente e do continente
africano visando a elaboracao de alimentos, vern ganhando adeptos em sua utili
zacao, ana ap6s ano, entre pesquisadores da Europa e do continente americano,
devido a peculiaridades que serao enfocadas nas paginas seguintes.
Tomando por base a definicao utilizada por DURANT et al,', na qual tam
bern se enquadram algumas outras extraidas da literatura/ ,3,4,5 mas ressalvando
que 0 substrato nao tern de ser necessariamente insohivel em agua e, desta forma
ser s6lido, pois ocorrem exemplos em que 0 substrato liquido (solucao de sacaro
se e de sais nutrientes ou melaco) esta umedecendo uma matriz s6lida inerte (sa
bugo de milho ou bagaco de cana)/ ,7,8 a fermentacao em estado s6lido pode ser
definida como "processos que referem-se a cultura de microrganismos sobre ou
dentro de particulas em matriz s6lida (substrato ou material inerte), onde 0 con
248 Fermentacao em estadosolido
teudo de liquido (substrato ou meio umidificante) ligado a ela esta a um nivel de
atividade de agua que, por um lado, assegure 0 crescimento e metabolismo das
celulas e, por outro, nao exceda a maxima capacidade de Iigacao da agua com a
matriz s6Iida".
Por essa definicao, eliminam-se tambem algumas confusoes criadas por de
terminados autores," que colocam erroneamente os sistemas de filtro biol6gico ae
r6bio utilizados em processos de tratamento de aguas residuarias e 0 sistema de
fermentacao acetica para obtencao de vinagre, onde, em ambos os casos, ha a per
colacao de nutrientes liquidos atraves de uma matriz s6lida inerte e insohivel, na
qual estao imobilizados os microrganismos, como processos de fermentacao em
estado s6lido.
a termo fermentacao em superficie, as vezes utilizado para referir-se acul
tura em substrato s6lido, deve ser evitado, pois esta denominacao diz respeito ao
processo em que ha 0 crescimento microbiano sobre a superficie liquida estatica
de um substrato, tal como a antiga forma de producao de vinagre em barris.
Outro erro que nao deve ser cometido econfundir esse processo com a cul
tura em meio s6lido ou semi-s6lido utilizando agar, usualmente empregada em
microbiologia para a selecao e manutencao de microrganismos.
Nesse capitulo serao descritos, de maneira sucinta, t6picos de interesse a
compreensao desse processo, mais especificamente tipos de microrganismos, ca
racteristicas dos substratos, formas de reatores e principais controles comumente
utilizados, as vantagens e desvantagens inerentes ao sistema em relacao ao pro
cesso submerso, alem de exemplificar alguns casos relatados por pesquisadores
em diversos artigos cientificos.
Porem, dentre todos os assuntos analisados, 0 estudo sobre producao de co
gumelos comestiveis, pela quantidade de material bibliografico existente, mesmo
empregando os meios em estado s6lido para 0 crescimento e producao enzimatica,
nao sera examinado neste capitulo, pois merece uma atencao 'a parte.
No item "Referencias bibliograficas" sera apresentado um vasto nUmero de
titulos de artigos cientificos utilizados neste capitulo, visando facilitar a procura
de material bibliografico para aqueles que quiserem iniciar uma pesquisa envol
venda esse processo. .
13.2 - Hist6rico do processo da FSS
Pelos primeiros exemplos citados neste capitulo, pode-se concluir que a
ocorrencia da fermentacao em estado s6lido e, com certeza, mais antiga que 0 pr6
prio homem, sendo, portanto, muito dificil precisar 0 inicio desta pratica pela ati
vidade humana. Sabe-se, contudo, que varias formas de alimentos utilizando esse
processo microbiano fazem parte da dieta de diversos povos ha muitos seculos.
Sao citados exemplos de alimentos que necessitavam, de alguma forma, da
fermentacao emestado s6lido ha milenios. Como, por exemplo, na China, a pro
ducao de molho de soja em 1.000 a.C. e a de "chiang" (similar ao "miso") entre
2.500 e 500 a.C.,Z,lO os quais sao obtidos a partir da modificacao enzimatica do
meio utilizando-se 0 "koji". a "koji" consiste numa massa umidificada de um
Hist6rico do processoda FSS 249
cereal cozido (na maior parte dos casos, arroz) na qual houve 0 crescimento de
Aspergillus oryzae e a conseqiiente producao de urn complexo enzimatico com ati
vidade diastatica.
10
,1l
Uma das primeiras referencias que se tern sobre 0 processo em meio solido
no Ocidente, alem de uma citacao da obtencao de queijo roquefort em 100 d.C.,2
esta associada, no inicio deste seculo, nos Estados Unidos, ao nome do pesquisa
dor Takamine na producao de "mold bran", similar ao "Koji", que consiste basica
mente no emprego do farelo de trigo no lugar do arroz e de outros fungos para a
obtencao do complexo enzimatico. Esse estudo visava substituir 0 malte na indus
tria de destilados. 2,5,10
Segundo HESSELTINE/
o
VNDERKOFLER et al.
12
,13 continuou este trabalho de
1937 a 49, no objetivo de produzir alcool etilico a partir de milho. Utilizaram-se
para esse processo fermentadores do tipo tambores rotativos, tambores estaticos
ou simples bandejas, sendo estudadas as vantagens e desvantagens de cada urn
destes reatores.
Assim, ate a metade deste seculo, e sempre se referindo a esta parte do pla
neta, dominaram, para 0 caso de fermentacao em estado solido, as pesquisas em
torno da producao de enzimas microbianas.
Porem, principalmente para agilizar a producao de penicilina, durante 0 pe
riododa Segunda Guerra Mundial, houve a opcao de desenvolver os processos
que envolviam a fermentacao Iiquida em tanques profundos, negligenciando os
processos em estado solido.10/11 .
Dessa forma, as pesquisas voltaram-se quase que exclusivamente para 0
projeto de desenvolvimento de fermentadores para os p r o c e s ~ o s em fase Iiquida,
com muito poucos estudos empregando a ferrnentacao em substrato solido.
Apenas para exemplificar, ha citacoes de experienciaspara producao de aci
do citrico .em fermentacao em estado solido ate 1936, retornando novamente 0 in
teresse nesses estudos somente em 1975.
14
.
No [apao, contudo, 0 processo tradicional, que era realizado em bandejas de
madeira ou bambu, onde os cereais, tais como arroz e trigo ou trigo e soja eram
inoculados e fermentados com 0 "koji", foi sendo aperfeicoado, Projetaram-se in
cubadoras automatizadas com inoculacao, controle das condicoes ambientais, agi
tacao controlada do meio e recuperacao do produto final, utilizando-se tambem
linhagens mutantes melhoradas." Esses fatos conduziram 0 [apao a obtencao de
uma tecnologia cada vez mais avancada, em termos de producao por fermentacao
em estado s6lido.
. Nos paisesdo Ocidente, nos dias de hoje, diversos estudos estao sendo reali
zados utilizando-se substrato solido, tanto na obtencao de bioprodutos como no
desenvolvimento de reatores ou conhecimento do metabolismo e condicoes do
processo. Porem, em niveis industriais, 0 processo submerso. continua sendo 0
principal sistema de geracao de.produtos obtidos via fermentacao, sendo insigni
ficante 0 ruimero de empresas que empregam a fermentacao em estado solido para
estes fins.
250 Fermentacao em estado s61ido
13.3 - Microrganismos comumente utilizados
PANDEy15 indica que os processos por fermentacao em estado s6lido podem
utilizar tanto microrganismos em seu estado natural, como por exemplo nos casos
de ensilagem ou compostagern," como na forma deculturas puras individuais, em
que se enquadram a maior parte das pesquisas nesta area, ou, mais raramente, na
forma de culturas mistas."
Devido aos baixos niveis de agua no sistema, os fungos filamentosos tern re
cebido a maioria das atencoes nas pesquisas, pois apresentam melhor capacidade
de crescimento nestas condicoes.' Assim, urn vasto campo de estudos tern se vis
lumbrado utilizando estes microrganismos.
Como exemplos, podem ser citados, dentre muitos outros, 0 usa de culturas
de Rhizopus, Trichoderma, Penicillium ou Aspergillus para obtencao de enriqueci
mento proteico e producao de enzimas, Mucor ou Rhizopus na producao de renina
microbiana, Penicillium para a groduc;ao de penicilina e Fusarium ou Giberella para
a obtencao de acido giberelico. 5
, !
.!
Porem, outros microrganismos tern obtido espac;o nesse tipo de sistema,
como a producao de esporos de Bacillus thuringiensis' para a producao de bioinse
ticidas, de u-amilase por Iinhazens de Bacillus,t9e de alcool por Zymomonas mobilis
ou por Ieveduras tra icionais. .
dicionai 2'6.21
Ou seja, como todo 0 processo fermentativo, a escolha do microrganismo
adequado e uma pec;a ,chave no sucesso da producao desejada. Por exemplo, a
n-amilase pode ser produzida por, no minimo, 28 tipos diferentes de culturas mi
crobianas. Ja a cultura de Aspergillus niger tern a capacidade de produzir nada me
nos do que 19 tipos diferentes de enzimas, dependendo da inducao e/ou do
substrato utilizado."
Neste sentido. :a fermentacao em estado s6lido tern se mostrado apta a reali
zar varies tipos de transformacoes, seja ela por fungos, leveduras ou bacterias, e 0
que ira determinar a escolha da linhagem rna is apropriada, durante a fase de sele
c;ao de microrganismos, sera 0 estudo detalhado do processo, visando obtero me
lhor meio de cultura e as melhores condicoes ambientais da fermentacao,
principalmente no que se refere atemperatura e aumidade do sistema.
13.4 - Substratos: caracteristicas e
Ao iniciar este item, antes de tudo e necessario comentar que 0 termo fer
i
mentacao em estado s6lido remete aideia de dois tipos de materiais insohiveis em
I
1- ,
agua, sobre os quais os microrganismos irao crescer: quando 0 siiporte s6lido atua
ele pr6prio como fonte de nutrientes e no caso em que os nutrientes sao sohiveis
em agua e os microrganismos estao aderidos a uma matriz s6lida, inerte ou nao,
I
I
que ira absorver 0 meio de cultura lfquido. A maioria dos processos revistos em li
!
I teratura utilizam 0 principio em que 0 suportes6lido atua tambern como fonte de
i
nutrientes.
Em relacao ao segundo caso existem, dentre outras, as citacoes da producao
de esporos de Aspergillus niger em sabugo de milho umedecido com solucao de sa
carose para a formacao de in6culo na producao de acido cftrico," do emprego de
!
,
I
1
, J
i
,__ ___
.. .._-.--..... .. ..__._ ... _.__._- --- --_._----- -.- --- -- -- - -- -- ------- - -- - - -- - -- - _.- - - - ---_. --
Substratos: caracterfsticas e cornposkao 25 I
uma solucao de glicose e de nutrientes umedecendo bagaco de cana para a produ
de acido latico," de particulas de polpa de madeira fornecendo umidade e
permitindo melhor ventilacao em meio de arroz ou farelo de trigo para producao
de enzimas" e a obtencao de alcooletilico em bagaco de cana umedecido com me

Epossivel notar, pelos exemplos citados, que 0 substrato pode estar tanto na
forma natural como na forma sintetica, dependendo do processo que se deseja rea
lizar, da facilidade de se obter determinadas materias-primas ou dos resultados
que se deseja conseguir. Bagaco de cana pode ser abundante em determinadas re
gi6es, assirn como 0 sabugo de milho ou a palha de arroz pode ser em outras.
. Ja para estudos de cinetica das fermentacoes, cita-se 0 exemplo da utilizacao
de particulas de argila24/25 como matriz salida inerte insohivel, que nao exercem in
fluencia sobre 0 consumo de substrato e facilitam a separacao entre a massa mi
crobiana e 0 meio de cultura.
Porern, de forma geral, os materiais utilizados sao provenientes de mate
rias-primas, produtos e/ou residuos agroindustriais, sendo que, logicamente, de
pendendo do produto que se deseja obter, estes ultimos tern tido a preferencia nas
pesquisas, devido ao baixo ou nenhum valor comercial.
Pode-se tambem incorporar solucao nutriente ao substrato solido, visando
adequa-lo melhor as condicoes nutricionais do microrganismo para a fermentacao
desejada. Como 0 estudo realizado para a producao de a-galactosidase por Asper
gillus niger." no qual ao meio composto de farelo de trigo foram adicionados ureia
(como fonte de nitrogenio), agua de maceracao de milho (como fonte de fatores de
crescimento), farinha de soja ou farinha guar (como indutores da enzima) e acido
citrico (que favorece a producao da enzima desejada). Ou, no caso de enriqueci
mento proteico, quando ,se introduz fontes de nitrogenio tais como amenia, ureia,
triptona e caseina" ou solucoes sinteticas como sulfato de amenia.
a substrato (ou a matriz salida) deve ter algumas caracteristicas que possi
bilitem 0 maior rendirnento do processo. A principal peculiaridade e 0 alto grau
de acessibilidade do microrganismo a todo 0 meioe, para tanto, de suas caracte
risticas mais importantes destacarn-se a porosidade, 0 tamanho e 0 formato das
particulas,
Em relacao ao tamanho da particula, um problema se apresenta: se, por urn
lado, quanta menor 0 tamanho maior a area superficial e, consequentemente, maior
o grau de transformacao, por outro lado 0 processo necessita ter uma granulome
tria propria visando permitir a circulacao do ar por entre a massa e a dissipacao
de gases e calor produzidos, os quais poderiam vir a prejudicar 0 rendimento do
processo. Esse item e importante para a definicao da alturado substrato e da gra
nulometria do meio que deve ser empregada no processo..
Por exemplo, segundo estudo de PANDEY et al.,28 particulas de farelo de tri
go e farinha de milho (a uma proporcao de 9:1) com diametros entre 425-500 urn e
500-600 um, respectivamente,resultaram em uma maior producaode amiloglico
sidase, embora tenha sido notado que particulas de diametro entre 180 urn e 1,4
mm tenharn apresentado rendimentos .similares.

.....1iiiIoiIjj 1iiMill 1lliMM1IiIIoOiooo.L-_ .
252 Fermentacao em estado s6lido
ECHEVARRIA et al.
29
obtiveram 0 melhor rendimento de enriquecimento pro
teico de Aspergillus niger utilizando particulas de cana-de-acucar com 1,4 mm. Ja
BUDIATMAN; LONSANE
3o
utilizaram residue fibroso do processamento de mandio
ca com diametro entre 3,0 e 5,Omm para a producao de pectinase.
A Figura 13.1 apresenta a velocidade de ferrnentacao, avaliada pela porcen
tagem de CO
2
produzida no decorrer do processo, em funcao do tamanho das par
ticulas do meio s6lido. Pode-se observar que, conforme diminui 0 tamanho das
particulas, aumenta a quantidade de gas carbonico produzido, assim como dimi
nui 0 tempo em que 0 processo atinge 0 maximo de producao de CO
2
,
10
0 2,Omm

00
N
8
0
0
o
4,Omm

6 s.omrn
12,Omm
4
2
o
o 5 10 15 20 25 30 35 40
Tempo de termentacao (horas)
Figura 13.1 - lnfluencia do tamanho das navelocidade de ferrnentacao de a<;ucarde beterrabapor Zymo
monas mobilis para a producao de etanol. 0
Quanto a porosidade, a principal qualidade desta caracteristica ea capacida
de de absorcao de agua, que facilita 0 transporte de enzimas e metab6litospor en
tre 0 meio e os microrganismos.
Embora alguns autores citem como aspecto importante a simplieidade do
meio de cultura utilizado no processo, em boa parte dos estudos 0 substrato ne
cessita de urn pre-tratarnento para se adequar as condicoes necessarias ao cresci
mento e a producao de metab6litos pelos microrganismos. Assim, para facilitar a
atuacao dos microrganismos sobre 0 meio, podem ser empregados os processos
de:
esmagamento, quebra, moagem e peneiramento, visando adequar 0 meio
a granulometria rna is adequada do processo;
suplementacao de nutrientes e correcao de pH, para suprir a falta de
algum nutriente ou adequar as melhores condicoes de crescimento mi
crobiano;
hidr6lise acida ou alcalina de material celul6sico, visando facilitar a atua
<;ao enzimatica:
embebicao, para regular 0 teor de umidade inicial do processo;.
vaporizacao ou aquecimento, visando a gelatinizacao ou inchamento do
substrate:"
__. _. .__ _ _ _ ... . .. __
Substratos: caracteristicas e composicao 253
adicao de agente sequestrante, com 0 objetivo de retirar ions metalicos do
meio, que podem diminuir 0 rendimento do processor"
processo de esterilizacao, que visa a diminuicao ou eliminacao de possi
veis contaminacoes,
Nesse ultimo caso, porem, alem de ser uma etapa de consumo muito grande
de energia, a esterilizacao pelo calor pode causar uma modificacao nas caracteris
ticas do substrato, tais como textura ou qualidade nutricional, que refletem na for
macae de uma massa compacta ou granular, urn ressecamento da massa e, as ve
zes, uma adesao da massa aparede do fermentador. OSHIMA32 cita a modificacao
da textura de diferentes meios apos a esterilizacao,
Felizmente, alguns autores mostram que, a partir da adicao de uma quanti
dade grande de inoculo que visa evitar ou abrandar 0 problema de contamina
coes, a nao esterilizacao do meio nao afeta a produtividade, como por exemplo na
obtencao de penicilina-v' e de etano1.
34
Diversas materias-primas e, dentre estas, principalmente diversos tipos de
residuos agroindustriais, podem ser empregadas na fermentacao em estado soli
do. A escolha de cada meio, logicamente, ira depender do produto final que se de
seja obter.
Pode-se exemplificar os seguintes materiais:
celulose, hemicelulose e lignina oriundas de biomassa vegetal e/ou ester
co de animais para a producao de compostos organicos;3S,36
farel0
37,38
e palha de trigo," farinha e farelo de soja," farinha, manipueira e
residuos solidos do processamento da mandioca," palha e quirera .de ar
42,43
roz,40,41 bagaco de cana e melaco para producao de enzimas;
sorgo," polpa de beterraba.":" "grits" de milho," bagaco de maca, bagaco
de uva, quirera de arroz, melaco e cana-de-acucar" para a producao de al
cool;
residuos de banana, farinha," manipueira e residues solidos do processa
mento de mandioca, espiga de milho, de laranja," ca
na-de-acucar," bagaco de cana, bagaco de maca,' melaco, vinhaca, farelo
e palha de trigo," grao-de-bico, beterraba, polpa de cafe," polpa de bata
ta-doce,' arroz cozido," folha de "mapleT" para a obtencao de enriqueci
mento proteico:
bagaco de cana, agua demaceracao de milho, lactose, sacarose'" e farelo
de trigo" para a producao de antibioticos:
graos de milho," alfafa e aveia." graos de sorgo, soja, trigo, amendoim,
milho" e arrozlO,Slpara a verificacao de producao de toxinas;
farelo de trigo," beterraba, bagaco de cana e para a producao
de acidos organicos: .
soja ("hamanatto", "tempeh", "miso", "natto", "shoyu"), pasta de amen
doim ("ontjom"), peixe ("katsuobushi") e mandioca ("gari", "kokonte",
"lafun") para a elaboracao de alimentos e condimentos orientais
2,l1,S3
e
africanos:" .
254 Fermentacao em estados61ido
to" ) ) d
sacarose, polpa de beterraba e graos de argila/
4
,25 farinha de mandioca e
solucao nutriente'" para a determinacao das cineticas do processo.
Urn problema que pode surgir quando da atividade ern laiga escala para a
obtencao de urn bioproduto por FSS e 0 descarte ou 0 aproveitamento do residuo
gerado.
Segundo ROUSSOS,55 tem-se sugerido a utilizacao do residuo na geracao de
biogas, de racao animal, disposicao ern aterro sanitario e de fabricacao de chapas e
papeis, sem, porern, haver uma pesquisa concreta da viabilidade de cada aplica
<;ao. Foi, entao, realizado urn estudo de ensilagem corn 0 residuo proveniente da
producao de celulase por Trichoderma harzianum ern meio de bagaco de cana, fare
10 de trigo e solucao nutriente. 0 residuo foi prensado e ajustado a uma umidade
entre 33 e 45%. Ap6s a adicao de bacterias lacteas, solucoes acidas e melaco de
cana, a massa foi colocada ern sacos plasticos perfurados a 23-28C. Depois de 6
meses, verificou-se que 0 residuo mantinha as mesmas qualidades iniciais.
13.5 - Reatores para a fermentacao semi-salida
Para iniciar a discussao sobre os tipos de reatores comumente empregados,
e interessante analisar quais as formas de processo que sao utilizadas para a reali
zacao de uma ferrnentacao ern estado s6lido.
A forma empregada ern praticamente todos os estudos revistos diz respeito
ao processo ern batelada no qual, basicamente, 0 meio e adicionado ao rea tor,
ocorrendo entao a inoculacao do substrato e a incubacao do mesmo por urn deter
minado periodo de tempo.
A seguir, 0 produto obtido pode ser extraido por suspensao do meio corn
agua, solucoes-tampao ou solventes (como no caso de enzimas, acidos, alcool, ...)
ou entao, simplesmente, secado e armazenado (como para a producao de bioinse
ticidas ou proteina microbiana).
Porern, outros processos sao citados na literatura. .
Efetuou-se uma fermentacao semicontinua para a producao de acido citrico,
ern que ha, por cinco vezes consecutivas no maximo, a extracao do produto e a re
introducao do meio de cultura a matriz inerte e microrganismos para uma nova
ferrnentacao, permanecendo assim a .matriz s6lida junto corn a massa microbiana
durante 20 a 25 dias dentro do reator empregado."
No caso da producao de acido giberelico," cita-se 0 processo ern batelada
alimentada, no qual ha a adicao de porcoes iguais de sacarose ao meio no terceiro,
quarto e quinto dia de fermentacao, visando diminuir 0 efeito inibidor ocasionado
por este substrato a massa microbiana.
Nos anos 40, ha uma citacao de producao ern escala industrial de enzimas
fungicas, por Aspergillus oryzae, por processo contfnuo." 0 metoda, baseado no
sistema de bandejas, consistia na esterilizacao, resfriamento, alimentacao e inocu
lacaodo substrato por meios mecanicos, fermentacao e secagem atraves da passa
gem das bandejas, colocadas ern uma especie de estantes rolantes, por tuneis
aclimatados, finalizando com moagem e empacotamento mecanicos.
. .
. . .-_.. - - _ . ~ _ . _ - - - _.'':"'"-- - --_.;_..-:-- ..__._.._-._--------_...._ ._._.-:.._. . ._'._-- - .-.' _. .. . _ ~ . " ' - - - ~ " ' : " .. - ~ - - - _ . _ . _ - - - - . _ " _ . _ ~ - - - - - ' - ' . _ . ' _ . -
Reatorespara aferrnentacao semi-s6lida 255
Urn outro item que deve tambern ser analisado refere-se a escolha dos fer
mentadores e, neste caso, deve-se levar em conta os objetivos da fermentacao.V a
analise economica dos custos iniciais e operacionais do processo.l-V a manipula
c;ao simplificada do sistema (carga/recarga, limpeza, manutencao)! e a possibili
dade de monitoramento e controle de diversos parametres, se houver necessida
de.I ,57 .
Para a ampliacao de escala do reator, deve-se verificar, primeiramente, em
escala de laborat6rio, se os objetivos foram alcancados.V eobservar parametres
que, em pequena esc ala, nao sao compativeis com a escala industrial (como os
efeitos da espessura da camada, da compactacao do substrato, da taxa de aeracao
e da dissipacao de calorj.l
Dos diferentes tipos de reatores encontrados na literatura, s e g u e ~ s e como
exemplos de alguns dos mais comumente empregados:
Reatores de vidro: logicamente, por serum processo ainda nao muito di
fundido, quando se fala em ferrnentacao em estado s6lido deve-se pensar
antes de tudo em pesquisas que sao realizadas, em nivel de laborat6rio,
atraves deste metodo,
Assim, os primeiros reatores que devem ser citados sao os de vidro, comu
mente utilizados em laborat6rio. Erlenmeyers sao os primeiros a serem lembra
dos, devido afacilidade de manuseio durante as pesquisas. .
Frascos de Fembach
58
tambem sao bastante utilizados, inclusive em nivel in
dustrial, para a producao de esporos, devido aampla area superficial entre 0 substra
to e a atmosfera que 0 mesmo fomece para 0 desenvolvimento dos microrganismos.
Carrafas de culturatambern sao muito empregadas pelos mesmos fatos ex
postos acima.Esses "reatores", embora excelentes para 0 inicio de uma pesquisa,
deixam a desejar quando se pensa em uma ampliacao de escala do processo.
Dessa forma, diversostipos de reatores tern sido propostos para amenizar os
problemas de aeracao, troca de calor, umidade, entre outros.
I
Figura 13.2 - Reatoresde vidro: pelaordem, frasco de Fembach de 2500 mL, garrafade cuttura, tubular vertical,
erlenmeyer de 250 mL, erlenmeyer de 2800 mL.
!
. __. __ L
256 Fermenta o em estado s6lido
Bandejas: as primeiras a surgirem foram as bandejas rasas. Construidas em
estrutura de madeira." bambu.i aluminio'" ou outros materials," de di ver
sos tamanhos (mas, corn a altura do meio variando basicamente entre 2 a 7
cm
2
,9) , elas podem possuir seu fundo intacto, 0 que significaria uma atuacao
muito parecida .com ados erlenmeyers, porem com uma area superficial de
troca e uma capacidade de alocar meio de cultura muito maior. Podem
tambem ter seu fundo substituido por uma tela perfurada, 0 que lhes con
fere uma maior eficiencia na circulacao de ar por todo 0 meio, e nao so
mente na parte superior exposta ao ambiente.
Para a disposicao das bandejas, deve-se ter urn local apropriado para 0 de
senvolvimento da fermentacao. Podem ser utilizadas simplesmente salas com es
tantes, fazendo-se uso de ar natural ou aeracao forcada (passando antes por umi
dificadores), desde que haja 0 controle de temperatura e umidade. As bandejas,
perfuradas, por outro lade, podem ser tambem dispostas em estufas que possuam
uma adaptacao para a entrada de aeracao forcada pelo fundo do equipamento.
CANNEL; MOO-YOUNG
2
citam 0 exemplo de utilizacao de grandes bandejas
(1,4 a 4,5m
2
) com fundo de tela, para a producao de "koji" em processo mecaniza
do, que sao colocadas em camaras de incubacao tendo a temperatura ajustada pela
passagem de ar por entre 0 substrato.
Nesses cas os, 0 substrato e aspergido por uma solucao de in6culo. Instala
coes desse tipo requerem urn elevado mimero de trabalhadores, alem de 0 mimero
de bandejas manipuladas diariamente ser igualmente elevado.

Figura 13.3 - Reatores tipo bandeja: pelaordern, commeio de cultura e vazio comfundo perfurado.
Tanques circulares: pode ser visto,na Figura 13.4, 0 exemplo de urn equi
pamento em cultura estatica, em nivel industrial. TOYAMA
6o
indica urn
equipamento, denominado produtor de "koji" automatico estacionario,
que consiste de dois tanques rotat6rios de 7 m .de diametro, dotados de
urn agitador helicoidal, dentro de uma camara de condicoes controladas.
Podem ser processados, a cada batelada, cerca de 2 a 3 toneladas de meio
de cultura, com alimentacao, esterilizacao, inoculacao e retirada do pro
duto realizados automaticamente.
._. __.,,- -------- .-._- --:------- - _._ _._---_.... . _....
Reatores paraa fermentao semi-s6lida 257
/1'\ A A r.
v v V'"
'
r

12c:J_

Figura 13.4 - Tanques circulares
s
Esteira rolante: este sistema e uma variante do fermentador de bandejas.
As etapas de inoculacao e incubacao do material esterilizado sao realiza
das em longas esteiras de fundo perfurado por onde circula ar umido, De
acordo com as necessidades de cada produto, pode ser realizada tambern
uma agitacao ocasional.
5
Figura 13.5 - Esteira rolantes
Tubular horizontal: neste processo, tambem denominado tambor rotativo,
o substrato e esterilizado e resfriado diretamente no tambor. A rotacao do
reator pode ser ocasionada tanto por urn eixo central como pela movimen
tacao de roletes sobre os quais 0 fermentador esteja montado. A rotacao
pode variar de 1 ate 180 rpm.
Carga
! Agua
---r-=------=----.=-K )
Descarga
Figura 13.6 - Reator tubular horizontal com intema''
A agitacao do substrato pode ser realizada pela simples rotacao do reator ou
por agitador central contendo mimero variavel de pas; neste segundo caso, 0 pro
cesso e denominado por fermentador tubular com agitacao interna.
.... . _ - .._-_... _. _ .. _ ---,c---".
-." ...:
Condicionador de ar
D
B
-
f--f--
f--
0 C"I
- - -
258 Fermentacaoem estados6lido
A aeracao da massa 'erealizada pela passagem de ar esterilizado e umidifi
cado atraves do reator, objetivando tambem 0 controle da temperatura interna.
Esse equipamento apresenta como dificuldades a serem suplantadas 0 custo
relativamente elevado para 0 volume de material produzido, a manutencao da iri
tegridade do micelio devido a agitacao do sistema, alem das dificuldades de am
pliacao de escala do processo."
Utilizou-se esse tipo de reator para a producao de ocratoxinas," tendo33 em
de diarnetro, quatro chicanas internas e uma rotacao a uma velocidade de 1 a 40
rpm. Estabeleceu-se que, para permitir a formacao das hifas, a fase inicial deveria
ser realizada em processo estatico, TOYAMA
60
citou, tambem, 0 exemplo de urn
tambor rotativo automatico, em escala industrial, para a producao de "koji", em
que todas as etapas do processo sao realizadas automaticamente.
Em nivellaboratorial, 0 tambor rotativo foi utilizado por NISHI0
62
(capaci
dade de dois litros) e SILMAN
58
(capacidade para 150 g de meio) para a producao
de extrato enzimatico a partir de Aspergillus.
Tubular vertical: tarnbem denominado fermentador tipo coluna, tern
sido 0 reator utilizado em pesquisas quando se deseja obter 0 controle
do processo. Esses reatores podem ser construidos em vidro'" ou aco
inox,' com dimens6es de 2 a 40 em de diametro por 20 a 180 em de al
tura
1
,44, 62,63,64, permitindo uma capacidade entre 10 g e 8 kg
33
,54,63,64 a
cada batelada.
o controle da temperatura deve ser feito atraves da passagem de ar por en
tre 0 meio, embora alguns pesquisadores indiquem a existencia de jaquetas em
torno do reator." Porem, devido abaixa condutividade terrnica do material solido
utilizado, somente a utilizacao de jaquetas nao esuficiente para controlar a tempe
ratura interna do reator.
Dentro dessa categoria, encontra-se 0 reator Zymotis, projetado pela
ORSTOM-Franc;a, que possui capacidade para receber 21 kg de meio."
Esse tipo de reator apresenta, como vantagens, urn espac;o reduzido, a
rapidez de carga e descarga e uma relacao volume total/volume utilproximo
a 1. Como desvantagens, a compactacao da massa, a dificuldade de dissipacao
de calor e urn grau de umidade da massa nao uniforme ao longo do equipa
mento.f .
Visando superar algumas das desvantagens apresentadas, se inclui tambem
o denominado reator de leito fluidizado ar-solido que, segundo pesquisadores,"
fornece urn melhor controle de temperatura, de umidade e maior homogeneidade
do sistema.
Sacos plasticos: na verificacao de producao de tempeh.t" de toxinas" e
pesticidaa." foram utilizados sacos de polietileno autoclavaveis, com
dimens6es de 20,0 x 38,0 cm
59
e 30,5 x 61,0 ern." Tambem utilizaram-se ,
tubosplasticos de 10,0 em de diametro. " Cita-se que enecessario per
furar os sacos apos urn certo periodo, para permitir a aeracao do
meio.
49
,59 . .
-- --- ----_._----- - -----_ _-.-_ . - - --- _.. _- - - --- -.- _ .. - ~ - - - -- - _ .. - ~ - - _ . _ - _ - - - - - - - - - - - .
Controles do processo 259
13.6 - Controles do processo
Como em todo processo fermentativo, 0 controle de determinados parame
tros se faz necessario para a obtencao de produtos com caracteristicas constantes e
uniformes.
Em relacao aos conhecimentos de engenharia bioquimica, importantes a
compreensao desse item, ~ A M A N A MURTHY et al.
68
apresentam uma resenha a res
peito de transferencia de massa, transferencia de calor, cinetica das reacoes, medi
. das experimentais de crescimento de biomassa e controle de temperatura e con
centracao de gases, alem da influencia do substrato e do biorreator no processo
fermentativo.
o controle da umidade, da temperatura e do pH do meio, a velocidade e fre
quencia de agitacao, as condicoes de transferencia de oxigenio e de nutrientes, as
caracteristicas do substrato, alem das caracteristicas e estimativa de crescimento e
da automacao do processo sao os parametres rnais freqiientemente analisados em
diversos estudos revistos.
Umidade: 0 teor de umidade do substrato e urn dos principais parametres
que influencia 0 sucesso de uma fermentacao em estado solido.
A natureza do substrato, as necessidades do microrganismo utilizado e 0
tipo de produto final desejado sao os principais fatores que determinam 0 grau de
umidade que 0 substrato devera ter no inicio e ao longo da fermentacao.v"
Urn substrato apropriadamente umedecido deve ter urn filme superficial de
agua visando facilitar a dissolucao e a transferencia de massa de nutrientes e de
oxigenio. Porem, entre as partfculas devem existir canais que permitam a difusao
de gases e a dissipacao de calor."
Assim, se 0 nivel de umidade for elevado, implicata no decrescimo de poro
sidade do substrato e ira resultar em uma menor difusao de oxigenio no interior
do meio e consequente decrescimo de trocas gasosas, alem de aumentar 0 risco de
contaminacao, principalmente a bacteriana."
Para niveis de umidade menores que 0 necessitado, havera maier dificulda
de na difusao de nutrientes, resultando em urn crescimento do microrganismo me
nor do que 0 possivel e esperado e, conseqiientemente, com menor producao do
produto desejado (lembrando ~ u e , a urn teor de umidade abaixo de 12%, nao ha
desenvolvimento microbiano)." .
o teor de umidade na FSS pode variar entre 18 e 85%, sendo ele estipulado
em funcao do poder de absorcao do substrato. Como exemplo, pode-se citar 0 pro
cesso "koji" (cultura de fungos sobre arroz cozido) onde 0 substrato e moderada
mente umedecido durante 0 cozimento pelo vapor (35 a 40% de agua), e mantido
iimido pela passagem de ar com 80 a 90% de umidade relativa, para 0 desenvolvi
mento de determinados fungos em sua superficie.
Para a producao de toxinas, e necessario apenas urn teor de umidade entre
18 a 30%,61,63 enquanto que para 0 crescimento de microrganismos, tendo a ligno
celulose como substrato, os niveis variaram entre 70 a 80%. Quando 0 microrga
nismo utilizado e uma bacteria, a umidade costuma ser sempre superior a 60%.
A Figura 13.7 apresenta a taxa de producao de proteinas de Aspergillus niger
de acordo com a umidade inicial do meio de cultura. Pode-se observar que, con
. .. . .. .- "-'- - -" ' - -' - .--' -' -'-" " '--' -'-" ' " -- _ ..--' - . . --- _..--- _.._-- ---- ----- ---_ .._--- ----_.------ _.'-" . _ . .' -" ---' .......'--,----'
260 em estados61ido
forme ha 0 aumento da umidade do meio de 35% para 55%, aumenta-se a produ
<;ao de proteinas no processo, assim como diminui 0 tempo em que se da a fase
logaritmica e 0 ponto maximo de obtencao do bioproduto desejado.

s
14
.a
iil 12
Cl
0
10
S
III 8
<:

6
e
a.
4
2
0
-5 5 15 25 35 45
Tempo de fermentacao (horas)
Figura 13.7 - lnfluencia do teor de umidade no crescimento de Aspergillusniger.44
Durante a fermentacao, havera uma perda de umidade devido a evaporacao
e as atividades metab6licas microbianas. Essa perda podera ser reposta ou evita
da, pela adicao de agua esterilizada em intervalos constantes de tempo, pela ma
nutencao da umidade atmosferica entre 90-97% de umidade relativa atraves de
injecao continua de ar timido no fermentador ou com a instalacao de umidificado
res.'
Atividade de agua: este parametro fornece a quantidade de agua nao li
gada viavel a disposicao dos microrganismos. Ela edefinida como a ra
zao entre a pressao de equilibrio de vapor do substrato em-relacao a
agua pura, a mesma temperatura. A atividade de agua (a
w
) influencia 0
desenvolvimento microbiano e os processos bioquimicos. Assim, cada
microrganismo tern urn nivel de a., minimo para que possa efetuar suas
atividades metab6licas. Em termos gerais, por exemplo, os fungos pos
suem uma a., minima de 0,7, enquanto que para as leveduras 0 valor si
tua-se em 0,8 e para as bacterias, 0,9.
68
Em PANDEy/5 sao citados exemplos em que, durante uma fermentacao em
estado s6lido para fungos filamentosos, altas atividades de agua favorecem a es
porulacao, enquanto que para baixas atividades ha 0 favorecimento de crescimen
to micelial ou germinacao dos esporos. A atividade da agua influencia a producao
de aromas em queijos, sendo encontrado que 0 ponto otimo de producao situa-se
na faixa de a; =0,98. NARAHARA40 cita que 0 desenvolvimento de Aspergillus ory
zae em arroz cozido cessa a valores inferiores a a., = 0,90. YANC/
o
para .oenriqueci
mento proteico de residuos de batata-doce com leveduras arniloliticas, indica
valores de a., = 0.98-0,99.
Controles do processo 261
Temperatura: devido as atividades metab6licas dos microrganismos e de
pendendo da altura da camada de substrato, uma grande quantidade de
calor pode ser produzida durante 0 processo fermentativo.
Por exemplo, RATHBUN, SHULER
71
indicam urn gradiente de 3C a cada cen
timetro de meio em urn reator, sem dissipacao de calor, com uma camada de subs
trato de 6,5 cm de profundidade, para a producao de tempeh.
Como a temperatura afeta diretamente a germinacao dos esporos, 0 cresci
mento e a esporulacao dos microrganismos e a formacao de produto, 0 calor pro
duzido devera ser imediatamente dissipado, para que 0 aumento da temperatura
nao prejudique a fermentacao desejada.
Isso pode ser efetuado com aintroducao de ar comprimido atraves do meio
de cultura, com 0 controle da temperatura da sala ou do equipamento onde ocorre
a fermentacao, ou pelo sistema de camisas em torno do fermentador com circula
cao de agua refrigerante."
No processo de compostagem, que utiliza grandes leiras de dificil oxigena
;ao interna, a temperatura interior chega a atingir niveis de 60 a 70c.
57
Ja em urn exemplo de producao de etanol, a temperatura Mirna situou-se na
faixa de 35C, sendo que foi observada a producao de sorbitol a temperaturas pou
co maiores (39C) e a formacao de levana a temperaturas mais baixas (25
oC).
21
A Figura 13.8 apresenta a taxa de producao de proteinas de Aspergillus niger
em relacao a temperatura empregada no processo. Pode-se observar que, embora
a temperatura de 40C tenha apresentado um .menor tempo em que ocorre a fase
logaritmica, 0 processo a temperatura de 35C obteve os maiores valores de pro
ducao proteica. Observa-se tambem que a temperatura de 45C apresentou uma
perdasensivel na eficiencia do processo.
40 35
45.. .
30 25
. J o : : : ~ : ; ; : ~ : : : : - 35...
40...
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2
00
5
Tempo de fermentacao (horas)
Figura 13.8 - lnfluencia da temperatura no crescimento de Aspergillusniger.44
Quanto ao controle de temperatura, NARAHARA40 reporta que para a produ
;ao de enzimas proteoliticas utilizando-se Aspergillus oryzae em arroz cozido, a
I
,I
,j
I
f
"1IiIiIlIII&L
262 em estado s6lido
temperatura ideal situa-se na faixa de 30C,sendo que, visando 0 crescimento do
microrganismo, a temperatura deve ser mantida a 38e.
pH: 0 controle do pH durante a fermentacao ern estado solido, embora
este seja urn dos parametres mais criticos, dificilmente sera conseguido
devido it heterogeneidade e it consistencia do material. Como tentativa de
amenizar 0 efeito de uma variacao brusca do potencial hidrogenionico,
utilizam-se substratos corn boa capacidade tamponante ou a adicao de so
lucoes-tampao durante a etapa de umidificacao do substrate.'
Aeracao: para urn born rendimento e uma rapida fermentacao ern substra
to solido, e necessario 0 usa de uma grande area superficial do meio de
cultura, no qual 0 microrganismo pode se desenvolver ern contato corn 0
ar. Na maior parte dos processos, tanto ern nfvel laboratorial como ern ni
vel industrial, a oxigenacao do meio erealizada pela introducao de ar es
terilizado sob pressao no equipamento de fermentacao.
Dependendo do valor da taxa de aeracao introduzida, pode ser ocasionada
uma perda de umidade devido it exaustao do ar, provocando uma secagem nao
desejada do substrato. Assim sendo, torna-se sempre necessario, nesses casos, a
presenca de umidificadores de ar antes da introducao do mesmo ao reator.
Ha diferentes maneiras para se obter uma melhor movimentacao do ar por
entre 0 substrato, permitindo assim uma melhor transferencia de oxigenio, quer
seja pela utilizacao de material poroso medianamente granulado ou fibroso, pelo
uso de pequena espessura da camada de substrato, pela utilizacao de bandejas
perfuradas ou reatores corn fundo composto por uma tela de arame, pela agitacao
do substrato ou ainda pela introducao de ar forcado esteril dentro do reator.'
Essa quantidade de ar esteril a ser introduzida no processo fermentativo vai
depender da natureza dos microrganismos, da quantidade de calor metabolico a
ser dissipada do processo, da espessura da camada de substrato, da quantidade de
CO
2
e outros metabolites volateis a serem eliminados e da necessidade de oxige
nio para a sintese dos produtos.' .
Ern comparacao corn a fermentacao submersa, esta necessita de quatro a cin
co vezes rnais oxigenio que a fermentacao ern estado solido."
Para se avaliar a taxa de consumo de oxigenio e de formacao de outros ga
ses, pode-se utilizar tanto urn analisador de O
2
e CO
2
, assim como urn cromatogra
fo a
a gas,
za
capazes
d
e ana
li
isar os gases existentes
.
na atmos era
do
' o
f
0 reator.
62 72
Agitacao: 0 emprego da agitacao ern urn processo ern estado solido pode
vir a fornecer uma melhor homogeneizacao quanta it distribuicao dos ino
culos e do umidificante, impedir a formacao de agregados e favorecer tan
to a transferencia gasosa pela exposicao de particulas de substrato it
atmosfera do fermentador como a troca de calor dentro do meio.' A agita
porem, devido it fragmentacao mecanica do rnicelio, pode interferir
na formacao dos esporos e no desenvolvimento natural do microrganis
mo." Pode causar tambem a compactacao do meio e a danificacao das hi
fas .
s
Estimativa e caracteristica de crescimento: a sequencia de crescimento mi
crobiano ern meio de cultura, ern condicoes otimas, envolve a germinacao
-._.__ .-._ - __ - _-_._ -.
Controles do processo 263
nas primeiras horas, seguida de um aumento gradual de temperatura de
vido ao infcio das atividades metab6licas, uma taxa crescente das ativida
des metab6licas, a fase estacionaria e de declinio. A duracao de cada etapa
vai depender das condicoes de fermentacao, do microrganismoemprega
do e do produto que se deseja obter." '
o fungo filamentosp tem a capacidade de penetrarnos s p a ~ o s inter e intra
granulares por meios mecanicos ou enzimaticos, com a firme fixacao das hifas na
superffcie do substrato e posterior intensa ramificacao e penetracao na parede ce
lular do substrato pela atuacao de enzimas extracelulares produzidas e excretadas
pelos microrganismos. ' '
Alguns estudos tern sido realizados visando determinar as cineticasde cres
cimento do microrganismo, de consumo de substrato e de geracao doproduto.
Contudo, e muito dificil estimar diretamente a biomassa microbiana no processo
em estado solido," assim como separar, em muitos casos, 0 micelio do substrato.
Dessa forma, sao utilizados metodos indiretos, tais como extracao alcali
na da proteina micelial do complexo celulose-fungo; estimativa da quantida
de de ATP ou glicosamina
24,2s,62
do microrganismo; estimativa da quantidade
de proteinas por infravermelho': determinacao da atividade da lacase extrace
lular; deterrninacao continua da quantidade de CO
2
e O
2
presentes na atmosfe
ra do fermentador por analisadores de gases,1,23,24,40,72,73,74 ou por absorcao do
CO
2
em NaOH.
S4
Extracao de produtos: existem poucas informacoes disponiveis em litera
tura relacionadas a estudos de extracao de produtos obtidos por FSS. Por
exemplo, para extracao de enzimas extracelulares, em geral, apenas ecita
da a utilizacao de um diluente, como agua corrente, agua destilada, solu
'\aodiluida de sais ou solucao-tampao,
RAMAKRISHNA et al.
75
realizaram uma pesquisa visando recuperar amilo
glicosidase, produzida por Aspergillus niger em meio de farelo de trigo, farinha
de milho e solucao nutriente, utilizando os metodos de percolacao e recupera
\ao em sistemas multiestagios em contracorrente. Concluiram, por esse estudo,
que:
a) para a percolacao, 0 rendimento da extracao e0 mesmo, tanto utilizando a
proporcao 1:10 como 1:100 entre meio e diluente. Nesse caso, 0 rendimento maxi
mo de extracao foi de 80 a 82%.
b) A recuperacao com agitacao ecerca de 8% maior em relacao ao processo
estatico. Ainda assim, tende a restar 17% da enzima produzida retida na matriz
salida.
c) a utilizacao de solucao de sais, na faixa de 0,50/0 a 5
%
, nao afetou a taxa de
extracao.
d) 0 sistema utilizando cinco estagios, com odiluente circulando continua
mente por entre eles, rnostrou-se mais vantajoso, devido ao fato de 0 extrato enzi
matico obtido estar rnais concentrado,' elirninando, por vezes, a necessidade de'
concentracao que poderia interferir na atividade enzimatica,
264 - emestado s61ido
13.7 - Vantagens e desvantagens
o processo em estado solido apresenta as seguintes vantagens operacionais
em relacao ao processo submerso:
apresenta uma aceleracao na taxa de reacao devido ao direto contato entre
. . 21
o su bstrato e 0 microrgarusmo:
pode eliminar etapas de pre-tratamento do substrato, como no caso da
producao de etanol, no qual nao ha a necessidade do processo de extracao
do caldo de cana:"
varies estudos apontam que 0 substrato utilizado e relativamente simples,
necessitando, em muitos casos, somente de adicao de agua ou uma peque
na correcao do meio com a introducao de fontes de nitrogenio e de outros
nutrientes minerais;2,9,l1,76
devido a menor quantidade de agua empregada, 0 volume do rea tor deve
ser sempre bern menor que a operacao similar em processo submerso, 0
que ira reduzir os custos de operacao e de capital investido assim como 0
' . - 279 11 2i.76
ocupad0 necessano ao processo; , " , ,
essa baixa quantidade de agua empregada tambem deve reduzir os custos
de capital investido e de energia consumida na recuperacao do produto,
como no caso da producao de alcool;2,21
a utilizacao de agitacao continua raramente e necessaria, podendo ser em
pregada, ocasionalmente, apenas uma leve mistura do substrato."
a aeracao, natural ou forcada, e facilmente acessivel aos microrganismos,
devido aos intersticios existentes entre as particulas do substrato;2,9,76
_os baixos teores de umidade empregados, somados a alta concentracao de
inoculo incorporado ao meio, reduzem, ou muitas vezes ate eliminam, 0
problema de contaminacao por outros microrganismos indesejaveis;2,7,33,34,76
as condicoes de crescimento empregadas sao, em geral, similarss as condi
naturais de crescimento dos fungos filamentosos, 0 que possibilita,
em muitos casos, maiores rendimentos na obtencao de produtos de utili
zacao industrial."
tambem esse fato permite 0 estudo de casos que somente ocorrem em con
dicoes semelhantes a fermentacao em estado solido, como a producao de
toxinas por determinados fungos filamentosos em graos/
6
0 produto final encontra-se rnais concentrado, 0 que permite, em alguns
casos, como na producao de bioinseticidas ou racao animal," 0 processo
direto de secagem e embalagem do produto final obtido, ou mesmo a utili
zacao direta, como para alguns alimentos orientais.' :"
quando for necessaria a recuperacao do material obtido,a concentracao
do mesmo facilita esta etapa, pois permite a utilizacao de menores quanti
dades de solventes empregados para extrairo produto:"
'ha uma menor producao de residuos liquidos a serem tratados ou dispos
tos, 0 que reduz tambem os custos de capital investido e de operacao da
_____ ___"...:L . ._. . . . --.- - . . _
Vantagens e desvantagens 265
planta de tratamento construida, alem de resultar em uma reducao nos
problemas ambientais originados pelo processo;2,7,76
assim como 0 processo submerso, a fermentacao em estado solido pode
ser realizada de modo continuo, semicontfnuo ou em batelada, e os equi
pamentos empregados em laboratorio, planta-piloto ou em escala indus
trial por este sistema nao sao mais complexos em comparacao com aqueles
utilizados na fermentacao tradicional;
sendo necessaria uma area de estocagem do produto semiprocessado ou
final, esta devera ser bern menor que a" similar em processo submersor'
em diversos casos, obteve-se urn rendimento do processo maior que em
comparacao afermentacao submerse."
Contudo, 0 processo apresenta tambem as seguintes limitacoes, que devem
ser conhecidas para futuros estudos visando uma possivel resolucao destes pro
blemas:
dependendo das caracterfsticas do meio e do tipo de reator empregado,
pode haver dificuldade em dissipar tanto 0 calor produzido como os gases
gerados durante 0 processo, 0 que ira conduzir, para 0 primeiro caso, a
uma elevacao da temperatura em pontos localizados, e, no computo geral,
resultara em" quedas sensiveis no rendimentor'
devido aheterogeneidade do substrato, dissipacao de calor e gases gera
dos, manipulacao do meio e do produto final e do monitoramentoe con
trole do processo, podera haver dificuldades intrinsecas quando se desejar
realizar a ampliacao de escala do sistema;
se for necessario 0 emprego da agitacao do meio em fermentacao, a ener
gia despendida devera ser "bern maior que em processo submerso.i':"
embora estejam sendo realizados estudos para a suplantacao desses pro
blemas, ainda ha uma dificuldade no acompanhamento controle de pa
rametroaoperacionais, tais como temperatura, umidade, aeracao e
de microrganismos;2,S,9, 6
para evitar a esterilizacao do meio e visando obter 0 maximo de rendi
mento, ha a necessidade de incorporar uma grande de inoculo
ao substrato e posterior homogeneizacao do sistema; ,11
assim como, para alguns estudos, somente essa forma de processo pode
ser utilizada, para outros casos, principalmente quando ha 0 envolvimen
. to de bacterias, a exclusividade cabe ao processo submerso;
da mesma forma que a fermentacao tradicional, ha a necessidade do
pre-tratamento dos substratos, e, em alguns casos, mais custoso, ade
qua-los afermentacao desejada:"
ha uma dificuldade de coleta de amostras representativas durante 0 pro
cesso, devido anao homogeneidade da massa em fermentacao."
de acordo com 0 processo, pode haver a necessidade deum controle mais
rigoroso das condicoes ambientais nos locais de acesso a fermentacao,
principalmente quando houver a producao de esporos de fungos filamen
tosos, visando preservar a saude das pessoas envolvidas com 0 sistema;
_fIIiiIilIiIiiilliiliit:
266 Fermenta o emestado sOlido
embora seja urn fato que varies estudos tern side realizados, notando-se
urn crescente interesse nessa area por pesquisadores do Ocidente, ainda
ha uma reduzida oferta de publicacoes tecnicas'' e de exemplos concretos
que possam ser observados e vivenciados.
13.8 - Exemplos de casos
Este item e dedicado aapresentacao de alguns estudos referentes aexplora
c;ao da fermentacao em estado solido para a obtencao de bioprodutos por diversos
autores, publicados nos rnais importantes periodicos da area de biotecnologia e bio
processos. Nao se trata de esgotar 0 tema, e sim de dar subsidios para quem quiser
comecar a utilizar esse processo em suas pesquisas.
PRODU\=AO DE ALCOOL ETfLICO
Foram tres as principais linhagens de microrganismos estudadas na pro
ducao de alcool etilico via FSS: a tradicional Saccharomyces cerevisia/ ,8,1 2,34 e
2o,21
Schuianniomuces castelli,64,77dentre as leveduras, e a bacteria Zymomonas mobilis.
o empregode cada uma delas dependeu principalmente do substrato a ser utiliza
do: no caso de Saccharomyces e Zymomonas, 0 meio de cultura deve ser composto
basicamente por acucares (cana-de-acucar," beterraba,z,21 sorgo/ vagem de alfar
roba") ou amide pre-sacarificado (milho e cevada'"): ja para Schwanniomyces castel
li, pode ser utilizado amido diretamente.i" uma vez que estes microrganismos
apresentam enzimas com capacidade amilolitica. No caso, os autores utilizaram
amido sohivel embebido em bagaco de cana. 0 teor de umidade do meio, nos dife
rentes estudos, variou de 70,0 a 77,3%, a temperatura de 25 a 35C e 0 pH de 4 ~ 0 a
5,7.0 etanol pode ser obtido em urn periodo entre 16 a 30 horas, a partir de inocu
los variando de 1,0 x 10
7
a 7,5 x 10
8
celulas / g meio. Utilizaram-se particulas de ta
manho desde 0,5 a 5,0 mm, sendo que a eficiencia de conversao a etanol situou-se
na faixa de 80 a 95%.

PRODU\=AO DE ACIDOS ORGANICOS
a) Acido lactico: a producao pode ser obtida a partir de Rhizopus oryzae,
dentre os fungos" e pelas bacterias Lactobacillus casei, Lactobacillus helveticus e
Streptococcus thermophiius." Utilizaram-se, como meio de cultura, solucoes de gli
cose e de carbonato de calcic embebendo particulas de bagaco de cana de tamanho
entre 0,8 a 2,0 mm ou torta de filtro (residuo da industria de alcool) simplesmente.
Em uma comparacao com 0 processo em meio liquido, SOCCOL et al.
78
apontaram
umrendimento na faixa de 77% para ambas as fermentacoes.
b) Acido giberelico: esta producao foi realizada utilizando-se linhagens de
Gibberella fujikuroi em meio de cultivo composto basicamente de farelo de trigo,
amide sohivel e solucao de nutrientes minerais, com 0 teor de umidade sendo es
tabelecido a partir da proporcao de duas partes de meio solido para umade liqui
do. Manteve-se a temperatura a 28C e a producao efetuou-se por urn periodo de 6
a 7 dias, utilizando-se os processos de fermentacao em estado solido, tanto em ba
telada como em batelada alimentada."
~ - - - - . - - - - ..-- - -7- .- ---. ----- ----- . - - . _. __ . ... . . .__ . - - . ~ - - , - - - - - - - - - - - - - . - - - -
Exemplos de cases 267
c) Acido citrico: 0 microrganismo utilizado para esta producao foi, em to
dos os estudos, Aspergillus niger.
6,31
,52,79,80 Os meios de cultura podem ser melaco
(junto com a adicao de solucao de nutrientes abase de nitrogenio, f6sforo e potas
sio) em bagaco de cana/
1
,52 torta de filtro do processamento de cana-de-acucar.i"
79
bagaco de ma<;a ou sacarose.f com 0 teor de acucar variando de 8,5 a 14,0%. A
temperatura situou-se na faixa de 28 a 30e, com 0 meio tendo urn teor de umida
de em torno de 65 a 88%,; e valores de pH entre 5,5 e 5,8. Inoculando-se com uma
suspensao de 2,0 x 10
6
meio, ap6s 4 a 6 dias, obteve-se uma conversao
de 80%. A adicao de metanol
52
,7 e/ou hexacianoferrato':" (agente seqiiestrante)
ao substrato aumentou 0 rendimento do processo.
PRODU<;Ao DE ENZIMAS
a) Fitase: para a reducao de niveis de acido fitico em farinha de semente
de colza e de canola (subprodutos do processamento de 6leo a partir destas ma
terias-primas). utilizou-se uma cultura de Aspergillus carbonarius em meio compos
to por farinha de canola e fosfato inorganico. " 0 periodo de fermentacao foi de 72
horas, a urn teor de umidade de 53-60%? A adicao de oleato de s6dio (1%) e Twe
en-80 ao meio aumentou a produtividade do processo."
b) u-amilase: para a producao desta enzima terrnoestavel, utilizaram-se di
versas linhagens de Bacillus, como Bacillus coagulans." Bacillus megaterium" Ba
cillus iicheniformis" e Bacillus sp.,86 em meio de farelo de trigo," com particulas de
diametro entre 0,4 e 0,8 ern, pH inicial 7,0 a 40c.
84
Foi mostrado que a atividade
enzimatica e reduzida em ate 85% caso 0 teor de umidade inicial do meio varie de
65% a 95%. LONSANE; RAMESH
19
mostram urn resumo desta producao em FSS por
bacterias. Ja por fungos, verificou-se a producao por Rhizopus oryzae em meio a
base de mandioca. "
c) Pectinase: foram emgregadas culturas de Aspergillus sp}O Aspergillus car
bonarius" e Aspergillus niger 3 em meio de residue fibroso de processamento de
mandioca.i" farelo de trigo e sais," pectina mais sacarose, glicose ou acido galactu
ronico embebidos em suporte de baraa<;o de cana." Urn dos meios consistiu de par
ticulas de tamanho entre 3-5 mm, a uma umidade de 70%/ ,43 e a 30c.
88
Foi
constatado que, em termos de atividade enzimatica, a fermentacao em estado soli
do foi onze vezes superior afermentacao submersa."
d) Celulases: Foi observada a atividade celulolitica de extratos enzimati
cos obtidos a partir de Trichoderma reesei.' Trichoderma viride,42,89Penicillium ci
trinum" Penicillium chrysogenum e Fusarium oxusporum" tendo como substrate
89
palha de trigo," bagaco de cana seco ao sol." cascas de arroz" e fibra de COCO.
Foram utilizadas, como condicoes do processo, urn pH inicial de 5,8 a urn teor
de umidade de 80% e temperatura de 25C
42
e 30C/ durante urn periodo de
7-14 dias.
41
,42,89 Observou-se, tarnbem, que a producao em meio s6lido foi tres
. a sub 42
vezes supenor a su mersa. .
e) Enzimas proteoliticas: verificou-se a producao de enzimas proteoliti
cas a partir de Bacillus amylolique/.aciens/ oAspergillus auiamori," e Asp ergillus
oryzae,4, 91 a temperatura de 30C
4
,90e 37C, 37fH inicial de 7, 9
39
e urn teor de
umidade de 35%,4 u tilizando arroz co zido; ' farelo de trig0
91
e farinha de
soja."
i
... lL. ....
268 Fermenta9io em estado s61ido
f) amiloglicosidase: estudou-se a producao por Rhizopus oryzae,s7Aspergillus
oryzae,23 e Asperf.sillus niger,15,28,37,38,92 em meio abase de farinha de mandioca," fare
10 de trig0
28
,38,7 ,92 e farelo de arroz." Empregou-se, como condicoes de cultivo,
uma temperatura entre 28 e 30C,15,23,38,92 a valores iniciais de umidade de 55% e pH
4,7.
92
Mostrou-se que a em meio solido foi 32 vezes superior apro
ducao em meio liquido. 7
Meio de cultura abase de farelo de trigo umedecido, esterilizado com vapor
Resfriamento e inoculacao com esporos de Aspergillus
Mistura e colocacao em bandejas ou tambores rotativos
lncubacao a 2D-45C de 1 a 7 dias
Extrayao da enzima com aqua ou solucao-tarnpao Secagem e moagem da cultura
Extrato enzimatico Farelo enzimatico
57
Figura 13.9 - Uma sequenciatfpicade um processo de producaode enzimaspelo rnetodo de cultura s6lida.
PRODU<;AO DE TOXINAS
Observou-se que diferentes especies de Fusarium sao potenciais produtores
de toxinas, tais como a fusarina C,93 a fumonisina," deoxiniealenol e
3-acetildeoxinivaleol,51 tendo como substrato arroz" ou milho." Da mesma forma,
Aspergillus produzem aflatoxina e ocratoxina, principalmente por Aspergillus flavus,
Aspergillus parasiticus e Aspergillus ocraceus.
1O
,50,61,94,95 Os estudos foram conduzidos
em uma faixa de temperatura entre 25 a 29C, teor de umidade entre 18 a 31%,61,63
utilizando-se como meio solido forrazens de alfafa e aveia,1O,50,94 graos de sorgo,
. tri d . ' lh 105095
sOJa, ngo, amen oim, rru 0 e arroz. ' ,
PRODU<;AO DE ANTIBI6TICOS
a) Penicilina: a utilizacao de Penicillium chrysogenum, em meio de bagaco de
cana umidificado com solucao nutriente abase de glicose, lactose e .agua de mace
racao de milho, obteve maior produtividade volumetrica e maior rendimento em
menor periodo de fermentacao, quando comparado com 0 processo submerso.
Para tanto, foi introduzido no processo urn inoculo com 5,0 x 10
6
esporos por gra
rna de meio, atemperatura de 26C, pH inicial de 5,5 e urn teor de umidade inicial
de 70 a 73%, durante urn periodo de 46 horas."
_ _ _ _ _ _" , _ _ " , __,_, , , , ,,, _ , _ , _ _ . . __,__ _ _ 0 _ _ ' _ - . - - -- - --_. ,. __
Exemplos de casos 269
b) Iturina: para a producao deste antibi6tico antifungico por Bacillus subtilis,
utilizou-se farelo de trigo, verificando-se que a producao em meio s6lido foi de
cinco a seis vezes maior que a similar em meio liquido."
PRODU\=AO DE BIOPESTICIDAS
a) Foram produzidos esporos do fungo entomopatogenico Beauveria
brongniartii em graos de rnilho pre-tratados, alcancando urn rendimento de 4,8 x
10
8
conidios por grama de graos;67
b) Estudou-se a atuacao do farelo fungico, obtido a partir da fermentacao de
Stilbella aciculosa em farelo de trigo, contra Rhizocionia solani;96:.
c) Esporos de Coniothyrium minitans, inibidor da germinacao de Sclerotinia
sclerotiorum, foram produzidos em diferentes tipos de substratos, alcancando urn
rendimento na faixa de 1,9 a 9,3 x 10
8
esporos por grama de meio de cultura:"
d) Verificou-se a producao de esporos de Bacillus thuringiensis a partir de
residuos de industria de processamento de mandioca, alcancando um alto rendi
mento no processo, bern superior acultura submersa."
PRODU\=Ao DE .ESPOROS
Efetuou-se a obtencao de esporos de Trichoderma harzianum (potencial gera
dor de .celulases, biopesticidas, antibi6ticos, compostos flavorizantes e proteina
microbiana) em suporte inerte (bagaco de cana) e substrato composto por fari
nha de mandioca e solucao nutriente, a 29C!C, com urn teor de umidade de 75
%
,
durante urn periodo de 6 dias a uma taxa de aeracao de 300 litros de ar por quilo
grama de meio por horae A partir de urn inoculo de 3,0 x 10
7
esporos/ g meio, fo
ram gerados ate 5,0 x 10
10
esporos Zg de meio, 5 vezes mais que a producao em
meio agar. 98
ENRIQUECIMENTO PROTEICO
Visando obter urn enriquecimento proteico.microbiano, foram estudadas as
linhagens de Aspergillus niger,29,44,45,47 Trichoderma reesei.r" Rhyzopus Sp.,45 Rhizopus
oligosporue." Aspergillus oruzae" Saccharomuces diastaticus e Saccharomyces Sp.70 Os
meiosempregados foram cana-de-acticar e nutrientes." polpade batata-doce,':"
arroz cozido." farinha de mandioca e solucao salina," "grits" de milho," polpa de
.cafe,47 bagaco de Iaranja," palha de trigo e solucao nutriente.f com uma concen
tracao inicial de 2 a 5 x 10
7
esporos por grama de meio.":"
Verificou-se que as variaveis do processo observadas foram as mais diversi
ficadas dentre todas as aplicacoes da fermentacao em estado s6lido revistas. Como
exemplos, os estudos foram conduzidosvavum 'pH inicial de 2,5,t 3,5,47 3,8,t
65
%,70
3,5-4,3,45 4,2,29 4,5
70
e 5,0,46 a teores de umidade de 400/0,40 50-550/0,44 60
%,99
e 80
%,47
temperaturas de 28C,t 29C,
4630C,45,70
33-36(:,29 35C,44,47
37C,99 e 38C,40 com taxas de aeracao de 4,3
29
e 8,0
471itros
por quilograma de meio
por minuto.
Tambem foram realizados estudos a de residuos agricolas celulosicos
(palha de centeio'i", folha de com pre-tratamento com H
2
S0
4
e
270 Fermentacaoem estados61ido
NH
40H,35
ou NaOH
36
a 121C para hidr6lise do material. Ap6s essa etapa, adicio
nou-se solucao salinae inoculou-se com Candida utilis, Aerobasidium pululans, Tri
choderma oiride" e Chaetomium cellutoluticum." a urn teor de umidade de 75%-78%e
temperatura ambiente'" ou a 37c.
36
ALIMENTOS ORIENTAlS
Como exemplo, foi estudada a producao de tempeh, urn tradicional ali
mento da Indonesia, a partir de Rhizopus oiigosporus'" e Rhizopus Sp.,59 em meio
abase de trigo
l OO
ou soja," a 31C por 20-24 horas.
59
,100 Por esse processo, 0 sabor
desagradavel da soja torna-se rnais aceitavel, 0 alimento e rna is facilmente di
gerivel devido aacao das enzimas lipoliticas, proteoliticas e amiloliticas produ
zidas, alem de aumentar os niveis de niacina e riboflavina ao longo da
fermentacao.l'"
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274 Fermentacaoem estado s6lido
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I
I
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I
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277

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Willibaldo Schmidell
14.1 - A importancia da transferencia de oxigenio
Entre os processos biotecnol6gicos de interesse industrial, envolvendo 0 cul
tivo de celulas microbianas, sem diivida os processos conduzidos em aerobiose
encontram uma situacao de enorme destaque. Assim, por exemplo, a producao de
antibi6ticos, enzimas, vitaminas, fermentos e inoculantes, proteinas recombinan
tes (hormonios de crescimento, insulina; etc .), constitui em sua grande maioria
processos aer6bios. Igualmente, 0 cultivo de celulas animais, visando a producao
de produtos ou aposterior infeccao por virus para a obtencao de vacinas, sao pro
cessos aer6bios. .
Dessa forma, os processos fermentativos envolvendo 0 cultivo de celulas ae
r6bias ou aer6bias facultativas, visando a producao de produtos como os acima
exemplificados, ou ainda para a realizacao do tratamento biol6gico de aguas resi
duarias, tern todos 0 aspecto comum de exigirem urn adequado dimensionamento
do sistema de transferencia de oxigenio, ou seja, da operacao de dissolucao do oxi
genio contido nafase gasosa (normalmente 0 ar, ou ar enriquecido com oxigenio)
para a fase liquida, de onde 0 microrganismo ira consumir este oxigenio para a
respiracao.
Como se sabe, do ponto de vista bioquimico, 0 oxigenio e0 ultimo elemento
a aceitar eletrons, ao final da cadeia respirat6ria, sendo entao reduzido a agua,
permitindo que ocorra a reoxidacao das coenzimas que participam das reacoes de
desidrogenacao (ao longo da glic6lise e do ciclo de Krebs) e, ainda, permitindo 0
armazenamento de energia atraves da passagem das moleculas de ADP para ATP.
Estas iiltimas, por sua vez, irao participar necessariamente nas reacoes de sintese
de moleculas, para a sobrevivencia das celulas e para 0 surgimento de novas celu
las, no processo de proliferacao da biomassa microbiana, para as quais e funda
mental a introducao de energia.
- - - _.- .,".- . _-. -- -. - -- - --- -- ._- - - ............. - ---.-- -------
- - ---- --'-
$
278 Agitac;ao e aeracaoem biorreatores
Assim sendo, urn cultivo que seja altamente eficiente, ocorrendo com ele
vadas velocidades de crescimento celular, significa altas velocidades deconsu
mo da fonte de carbono, a fim de que haja abundancia de eletrons transportados
na cadeia respiratoriaIgeracao de ATP), mas significa tambem, obrigatoriamente,
a necessidade da existencia de oxigenio dissolvido, a fim de que estes eletrons se
jam drenados ao final desta cadeia.
A equacao estequiometrica de oxidacao completa da glicose ilustra bern esta
situacao:
ou seja, para que ocorra a oxidacao de 1 mol de glicose, enecessario 0 consumo de
6 mols de 02'
Essas consideracoes tornam obvia a compreensao sobre a necessidade de se
agitar e aerar urn meio de cultivo, para que se possa efetuar urn processo fermen
tativo aerobic. No entanto, ainda resta entender a necessidade de executar essa
operacao ao longo de todo urn processo fermentativo e nao apenas em seus instan
tes iniciais.
Para que essa necessidade fique clara, epreciso lembrar que esempre possi
vel dissolver quantidades significativas das fontes de carbono, nitrogenio, fosforo
e demais nutrientes necessaries. De fato, sabe-se que a glicose ebastante sohivel
em agua, sendo possivel solubilizar centenas de gramas por litro de solucao, sem
maiores dificuldades. Igualmente, para os outros nutrientes necessaries, esempre
possivel encontrar especies quimicas razoavelmente sohiveis, de forma a se colo
car adisposicao dos microrganismos dezenas de gramas por litro.
Para 0 oxigenio, no entanto, essa situacao ebastante distinta, pois este ele
mento emuito pouco soluvel em agua. De fato, a concentracao de oxigenio dissol
vido na saturacao eapenas da ordem de 7 mg0
2/L
(7 ppm), ao se borbulhar ar at
mosferico apressao de 1 atm e a 35C.
Conclui-se, portanto, que de nada adiantaria dissolver centenas de gramas
de glicose por litro, alem das quantidades necessarias dos demais nutrientes, para
que se imaginasse efetuar urn processo fermentative descontinuo aerobic, sem
que se imaginasse igualmente introduzir, ao longo do processo, 0 oxigenio neces
sario para suportar a condicao de aerobiose, tendo em vista a baixfssima capacida
de de armazenar 0 O
2
na solucao.
Exatamente por essa razao eque se costuma afirmar que a extensao de urn
processo descontinuo aerobic e, porconseguinte, a obtencao de elevadas concen
tracoes do produto desejado, depende enormemente da capacidade de se transfe
rir 0 O
2
para a fase liquida, especialmente nos instantes mais avancados do
processo, onde a concentracao celular pode ser elevada.
Da mesma forma, no que se refere aos processos continuos e descontinuos
alimentados,o emprego de elevadas vaz6es de alimentacao de nutrientes so sera
efetivo caso se tenha sistemas bern dimensionados de transferencia de oxigenio.
Sistemas paraa transferencia de oxigenio 279
Em outraspalavras, pode-se ter situacoes em que a capacidade de transferenciade
oxigenio eque ditara as condicoes de operacao,
... Como se sabe, existem varies trabalhos publicados nos quais se indicam as
vantagens em se operar reatores com altissimas densidades celulares (algo como
100 gil) e empregando-se celulas mantidas em altas velocidades especificas de
crescimento e, por decorrencia, com elevadas velocidades especificas de respira
cao (conforme sera visto mais adiante). Tais situacoes devem ser observadas com
certa cautela, pois sera sempre muito complicado efetuar-se a ampliacao de escala
dessas situacoes, justamente .tendo em vista as enormes capacidades de transfe
rencia de oxigenio que seriam necessarias,
Igualmente, sabe-se das freqiientes criticas elaboradas com relacao aos siste
mas aerobics de tratamento de residuos, os quais sao sempre muito mal monitora
dos e controlados, tendo em vista nao pertencerem especificamente ao sistema
produtivo da unidade industrial. Deve-se, antes, buscar explicacoes no dimensio
do de de O
2
(freqiientemente se superestima
capacidade, a flm de reduzir 0 tamanho dos reatores), ou observar a forma de ope
rar, a qual deve ser compativel com a capacidade de manter 0 sistema biol6gico
em condicoes de aerobiose.
Essas consideracoes caracterizam a necessidade de se entender a's bases fun
damentais da transferencia de oxigenio, objetivo central do presente texto, 0 qual
ecomplementado com as consideracoes do capitulo seguinte (Capitulo 15: Varia
de Escala).
14.2 - Sistemas para a transferencia de oxigenio
Tendo em vista a importancia da operacao de transferencia de oxigenio, ede
seesperar que existam muitas formas de executa-la, obviamente umas mais eficien
tes do .que outras, Aquelas menos eficientes, em termos de transferencia de oxige
nio, podem ser interessantes sob outros aspectos, como, por exemplo, a de
submeterem as celulas a um menor cisalhamento.
Na Figura 14.1 estao indicadas algumas possibilidades de se transferir oxi
genio em biorreatores.
as esquemas indicados por (1) e (2) na Figura 14.1, indicam 0 que se costu
rna chamar de aeracao superficial (designacao nao apropriada, pois toda transfe
rencia ocorre em uma superficie). 0 esquema (1)- procura ilustrar a operacao de
bandejas, ou lagoas de oxidacao para 0 tratamento biol6gico de residues, nas
quais a transferencia de oxigenio ocorre por simples difusao no Iiquido em con
tato com 0 ar atmosferico. [ao esquema (2) sugere a transferencia de oxigenio em
reatores com celulas imobilizadas (aderidas) em um leito fixo,constituido por
cavacos de madeira, no caso de reatores para a producao de vinagre, ou casca
Iho, no caso de filtros aerobics para 0 tratamento de aguas residuarias.
As demais ilustracoes da Figura 14.1 referem-se a chamada aeracao em
profundidade, ou seja, aquelas nas quais se procura transferiroxigenio atraves
do borbulhamento de are
280 e em biorreatores
Os detalhes (3) e (4) sugerem a possibilidade de se transferir oxigenio
apenas por borbulhamento de ar.
o reator indicado com 0 mimero (3), tambem conhecido como coluna de bo
lhas, utilizado ainda para a producao de fermento, consiste simplesmente numa
serpentina localizada no fundo do reator, atraves da qual de vem surgir bolhas de
pequeno diametro que sobem toda a altura do rea tor, provocando agitacao e
tr ansferindo oxigenio. Uma alternativa a esse sistema de serpentinas pode ser a
colocacao de calotas de aco sinterizado, para dentro das quais se faz fluir 0 ar , 0
qual passa para 0 Iiquido na forma de pequenas bolhas (sistema "air-blown"), em
vi rtude do s poros diminutos do elemento sinterizado,
] ii 0 esquema (4) ilustra a forma mais convencional dos reatores conhecidos
como "air-lift" (existem muitas vari antes deste tipo de reator), nos quais 0 ar ein
troduzido em uma charnine no interior do reator, atraves de urn metal ou material
ceramico sinterizado de pequenos poros, 0 que provoca uma intensa agitacao no
Iiquido, dependendo da vazao de ar empregada. Esses reator es sao bastante
interessantes para 0 cultivo de celulas que apresentem grandesensibilidade
ao cisalhamento, como e0 caso do cultivo de celulas animais. .
Turbinas
Chicanas
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Figura 14.1 - Sistemas diversosparaatransferenda de oxigenio em biorreatores. ( I) bandeja ou lagoa: (2) reator de
leito fixo; (3) colunade bolhas; (4) "air-lift"; (5) tanque agitado e aerado; (6) "draught-tube".
---"' _ _ _ _ _._ .
Concentracao de oxigeniodissolvido em solucoes saturadas 28 I
Esses reatores apenas aerados tern merecido muita nao apenas
pelo menor cisalhamento, mas tambem por evitarem 0 emprego de sistemas de
agitacao, 0 que simplifica a construcao do biorreator, alem de tambem permiti
rem uma eventual economia de energia. Por outro lado, esses reatores normal
mente exigem vazoes de aeracao mais elevadas, a fim de manterem urn born
nivel de agitacao e transferencia de oxigenio, 0 que significa urn maior dispen
dio de energia na compressaodo are Apenas para se ter uma ideia, eles sao ope
rados com vazoes especificas pr6ximas a 1 min" (ou, como comumente
mencionado, Lv.v.m. - volume de ar por volume de meio por minuto), enquan
to que os aeradoseagttadcs ficam mais pr6ximos de 0,5 min-I. .
Outro detalhe importante e que os reatores apenas aerados costumam ser
projetados com uma alturabern superior ao diametro do tanque, contrariamente
aos agitados e aerados, a fimde permitirem .um maior tempo de residencia do ar
em contato com 0 liquido.
Finalmente, os esquemas indicados com' os ruimeros (5) e (6), na Figura
14.1, referern-se justamente aos reatores agitados e aerados. 0 detalhe (5) ilus
tra 0 tradicional tanque agitado, que continua sendo 0 'lipo de reator mais fre
qiiente na industria, responsavel por cerca de 93% das aplicacoes.i
o reator tipo tanque agitado e aerado, entendido como padrao, apresenta
altura do Iiquido igual ao diametro do tanque, sendo agitado por urn impelidor
tipo 'turbina com 6 pas planas ("flat-blade turbine"), apresentando urn diame
tro igual a 1/3 do diametro do tanque. A fim de evitar a formacao de v6rtice,
usa-se urn sistema de 4 chicanas, diametralmente opostas, apresentando cada
uma largura de1/10 ou 1/12 do diametro do tanque.
. Conforme ja salientado no Capitulo 8, apesar de existir a descricao des
se tanque padrao, na verdade raramente verifica-se uma perfeita obediencia a
essas relacoes geometricas, observando-se, freqiientemente, tanques com altu
ra maior do que 0 diametro, assim como turbinas de dimensoes superiores a
indicadavalem do emprego de multiplas turbinas. [ustifica-se tal procedimen
to pela necessidade de se obter maior homogeneizacao do conteudo do reator,
assim como transferencia de oxigenio mais efetiva. Essefato dificulta urn cor
reto dimensionamento da transferencia de oxigenio, por ausencia de dados
em geometrias distintas, conforme se vera mais adiante.
o esquema indicado com 0 ruimero (6), propoe a colocacao do impelidor
no interior de urn duto, objetivando a formacao de v6rtice no interior desta
chamine e, com isto, ampliar a efetividade na transferencia de oxigenio. 0 sis
tema "draught-tube" de fato encontra alguma aplicacao industrial, mas een
tendido como 0 sistema que causa maior cisalhamento nas celulas, em relacao
/
ao tanque agitado e aerado convencional.
14.3 - Concentracac de oxigenio dissolvido em
saturadas
Conforme apontado anteriormente, 0 oxigenio e muito pouco soluvel em
agua, 0 que acaba causando a necessidade de se fornecereste elemento ao longo
de todo 0 processo fermentativo.
282 e aeracao em biorreatores
Na Tabela 14.1 encontram-se alguns dados a respeito da solubilidade do oxi
genio, na condicao de saturacao, para diferentes temperaturas, pressao parcial de
oxigenio na fase gasosa e presenc;a de sais dissolvidos.'
A observacao dos valores contidos na Tabela 14.1 evidencia a baixa solubili
dade do oxigenio. ipois a concentracao de saturacao em agua e de apenas 7 mg/L a
35C, quando em equilibrio com 0 ar atmosferico, 0 qual apresenta uma fracao mo
lar ou volumetrica de 20,9% de oxigenio, ou seja, a uma pressao total de 1 atm
apresenta uma pressao parcial de oxigenio de 0,209 atm.
Ta bela 14.1 - Valoresda concentracao de oxigenio dissolvido na saturacao, em diferentes condic;oes.
3
Temp
(0C)
Cone, NaCl P. Pare. O
2
(M) (atm)
Cone. O
2
na Cte . Henry
sat. (mg/L) (mg/L. atm) ..
25 - 0,209 8,10 38,8
35 - 0,209 6,99 33,4
25 - I,D 40,3
25 0,5 I,D 34,2
25
25
-
'.
.,'. .

I,D I,D
2,0 I,D
..
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:, .;L ; < ..
28,5

22,7
.'
. '
, :., - .-t. ," " . ' ; " ! 1! J' a -';i l
." . '
Observa-se que a concentracao de oxigenio dissolvido diminui com 0 au
mento da temperatura, assim como diminui com 0 aumento da concentracao de
urn sal dissolvido. Por outro lado, a concentracao de O
2
aumenta com 0 aumento
da pressao parcial de oxigenio na fase gasosa, como seria 0 caso de sajurar agua
com oxigenio puro (pressao parcial de O
2
de 1 atm), atingindo-se 40,3 mg/ L no
equilibrio a 25C.
Os ruimeros apontados na Tabela 14.1 permitem refletir sobre alguns pontos
importantes, considerando a necessidade de se ter valores da concentracao na satura
c;ao rnais elevados. Em primeiro lugar, 0 abaixamento da temperatura nao seria solu
c;ao mais adequada, .pois na maioria dos processos fermentativos de importancia
trabalha-se na faixa mesofilica de temperaturas, ou seja, da ordem de 35C. '
A operacao com press6es parciais de oxigenio no gas mais elevadas, e de
fato uma alternativa interessante, sendo mesmo praticada atraves do enriqueci
mento do ar atmosferico com oxigenio, No entanto, essa operacao deve ser efetua
da com muito cuidado, pois grande parte dos microrganismos aerobics apresenta
tendencia a inibicao por elevadas concentracoes de oxigenio dissolvido, inibicao
esta observada para valores nao muito distintos da concentracao de saturacao com
oar atmosferico. Ha ate mesmo indicios de inibicao, para algumas especies, para
valores da ordem de 7 a 8 mg/L, ou mesmo inferiores.'
___t
. ...... -._---_.' ._._-.._--. _-... _._."._ ._--- ------- ----- -- -- - - - -- - - . - --.- - - -.
Concentracaode oxigeniodissolvido em solucoessaturadas 283
fato de se observar uma reducao da concentracao de oxigenio dissolvido,
quando se dissolvem outras especies quimicas em urn Iiquido, permite lembrar
que sempre se fermenta solucoes de nutrientes, 0 que significa a presenca de mui
tas substancias dissolvidas, as quais, no compute final, reduzem a concentracao
de saturacao do oxigenio em relacao ao valor observado para a agua.
Esse problema eainda agravado, lembrando-se que 0 microrganismo con
some esses nutrientes, aci longo do tempo, lancando no meio produtos de meta
bolismo. Isso significa que a composicao quimica do meio de cultura ealterada a
cada instante do processo, 0 que causa alteracao na concentracao do oxigenio
dissolvido na saturacao.
Por esse motivo existem na Iiteraturapropostas para 0 calculo da concentra
de saturacao, a partir do conhecimento da composicao quimica do meio a cada
instante, 0 que, alem de conduzir a calculos relativamente tediosos, ainda exige
determinacoes analiticas detalhadas, nao muito freqiientes em processos fermen
tativos. Existe tambem proposta para essa determinacao experimental," que apre
senta particular utilidade para 0 conhecimento da concentracao de saturacao pelo
menos no instante inicial.
Em se tratando de uma solucao bastante diluida, para este caso eaplicavel a
lei de Henry, segundo a qual a concentracao de oxigenio dissolvido no eqnilibrio
(saturacao) eproporcional apressao parcial de oxigenio no gas, ou seja:
c, =H .'P (14.1)
g
onde: C, =concentracao de oxigenio na saturacao (g02/m3)
H =constante de Henry (g02/m3. atm)
P =pressao parcial; de O
2
na fase gasosa (atm) =X
0 2
.P
X
0 2
=fracao molar ou volumetrica do O
2
no gas
P =pressao total do gas (atm)
Dessa forma, ao variar a composicao quimica de urn dado Iiquido, 0 que va
ria ea constante de Henry e, portanto, a concentracao de saturacao para urn dado
valor da pressao parcial do oxigenio no gas. Na Tabela 14.1 encontram-se alguns
dados para essa constante de Henry.
Enecessario lembrar que a concentracao de oxigenio dissolvido, duran
te urn processo fermentativo, enormalmente monitorada atraves de eletrodos
(polarograficosou galvanicos - para maiores detalhes sobre eletrodos, suge
re-se a leitura da revisao escrita por LEE;TSAO).7 Esses eletrodos sao calibra
dos no instante inicial, antes de se efetuar a inoculacao do reator,
saturando-se 0 Iiquido com oxigenio atraves de agitacao eaeracao, fixando-se
na escala do aparelho 0 valor 100%. Caso nao se conheca a constante de Henry
para 0 Iiquido em estudo, tambern nao se conhece 0 valor absoluto da concen
tracao de saturacao, sendo que durante 0 processo fermentativo 0 eletrodo in
dicara valores intermediaries entre zero e 100%, 0 quesignifica, para urn dado
instante, a concentracao de oxigenio dissolvido em relacao asaturacao. .
..... --. -'-"-'-' - ._" ..__ - _ - .. .. - .. '---'" --._ _._._." .. -,--." ..,-..-.- ._-_.. .. - ...,,_.-_ _._ __.- ._-_._.__.-.__.._"._._.. .._- _ .
I
I
i
1
I
I
----_..
---
-------
-- -- --- - - - - - - - -
284 e em biorreatores
Como esses eletrodos respondem a pressao parcial do oxigenio, para efetuar
medidas confiaveis, deve-se manter constante a pressao no interior do reator pois,
caso ela varie, 0 eletrodo indicara variacoes que nao sao devidas ao fen6meno bio
logico que esta ocorrendo. Igualmente, deve-se lembrar que 0 eletrodo nao indica
ra variacoes em virtude de alteracoes na composicao do meio, sendo, portanto, urn
dado valor indicado sempre correspondente a uma porcentagem do valor inicial
da saturacao. Dessa maneira, e possivel ocorrer a indicacao de valores superiores
a 100%, caso ocorra urn aumento de pressao no reator, ou caso se introduza oxige
nio na corrente gasosa.
Tendo em vista as dificuldades apontadas, alguns autores preferem, quando
ha a necessidade do conhecimento do valor absoluto da concentracao de oxigenio
dissolvido, supor que se trata de agua, utilizando entao valores existentes em ma
nuais. Tambem existem alguns trabalhos nos quais se observam concentracoes de
oxigenio dissolvido expressas em pressao parcial de oxigenio (mmHg), lembran
do-se que para 0 ar, a 1 atm de pressao total, tem-se 159 mmHg para a pressao
parcial do oxigenio.
14.4 - Transferencla de oxigenio e respiracao microbiana
o objetivo central de urn sistema de agitacao e aeracao e 0 fornecimento de
oxigenio para a manutencao de uma dada atividade respirat6ria de urn certo con
junto de celulas. Assim, 0 que se visa e transferir 0 oxigenio da fase gasosa para 0
liquido, fazer com que este oxigenio dissolvido chegue as celulas suspensas, pene
tre nestas celulas e, finalmente, seja consumido na reacao,
E, portanto, possfvel imaginar que existam muitas resistencias a
. esse transporte do oxigenio da fase gasosa ate 0 seu consumo final. Na Figura 14.2
busca-se ilustrar algumas dessas possiveis resistencias.
- - ... ....
Pellculas
estagnadas
Meio de
cultivo

Reyao
bioqulmica
-----_......
celula
,
,
,
I
Interface
,
gas-liquido
-'
Figura 14.2 - Resistencias associadas adissolucao e ao consumo do oxigenio,
Transferenda de oxigenio e respiracaomicrobiana 285
Conforme sugere a Figura 14.2, essa questao pode ser dividida em tres
problemas distintos. 0 primeiro diz respeito adissolucao, ou transferencia do
oxigenio do gas para 0 Iiquido, 0 segundo aeventual difusao do oxigenio ate a
celula e, finalmente, 0 problema do consumo do oxigenio.
No que se refere aresistencia 4, ou seja, aquela associada adifusao do oxige
nio ate as celulas, espera-se que 0 liquido seja suficientemente agitado, a fim de
que possa ocorrer 0 transporte convectivo e, desta forma, imagina-se que esta re
sistencia possa ser desprezada. No caso de liquidos extremamente viscosos essa
hip6tese pode nao se verificar.
No caso da transferencia do oxigenio do gas para 0 Iiquido, pode-se imagi
nar uma primeira resistencia (resistencia 1 - Figura 14.2) devido a uma pelicula
gasosa estagnada, atraves da qual 0 oxigenio deve difundir. A seguir, pode-se
imaginar uma resistencia na interface gas-Iiquido (resistencia 2) e, finalmente, a
resistencia associada apelicula liquida estagnada ao redor da bolha de gas (resis
tencia 3). Dados existentes na literatura permitem imaginar que a resistencia do
lade da fase gasosa pode ser desprezada, em virtude da intensa movimentacao
das moleculas de oxigenio. Da mesma forma, a resistencia devido ainterface e co
mumente considerada desprezivel, a menos que se empregue substancias que pos
sam aderir a essa superficie e, desta forma, provocar urn aumento nesta
resistencia, como e 0 caso de alguns antiespumantes.
Conclui-se, portanto, que a resistencia dominante refere-se aquela associada
apelicula liquida, resistencia esta que e funcao da difusividade do oxigenio no H
quido, assim como devido aespessura desta pelicula.
No lado do consumo do oxigenio, pode-se imaginar uma resistencia devido
apellcula lfquida em torno da celula (resistencia 5 - Figura 14.2), outra devido a
resistencia imposta pela membrana celular (resistencia 6), a resistencia devido a
difusao do oxigenio no citoplasma (7) e, finalmente, aquela associada avelocidade
da reacao de consumo final deste oxigenio (resistencia 8).
Tendo em vista as diminutas dimensoes das celulas, assim como a enorme
area exposta ao meio Iiquido, a resistencia 5 pode ser desprezada. Da mesma for
ma, a resistencia 6 pode ser desprezada, pois a membrana celular nao deve opor
I
I
~
resistencia adifusao do oxigenio, sendo hoje entendido que 0 oxigenio penetra na
celula por simples difusao, nao havendo sistemas de transporte para este elernen
to,U fato inclusive que justifica a possibilidade de inibicao da atividade de celulas,
quando expostas a elevadas concentracoes de oxigenio no meio liquido, conforme
apontado anteriormente.
t
No que se refere aresistencia 7, pode-se tambem considera-la pouco significati
!
va, tendo em vista novamente a elevada area exposta pela celula ao meio ambiente. i
!
No caso de celulas eucari6ticas, poder-se-ia imaginar alguma dificuldade para 0
oxigenio atingir as membranas internas das mitocondrias, onde estao localizados I
os sistemas enzimaticos e as proteinas responsaveis pela respiracao." No caso de
bacterias, a localizacao desses sistemas e na membrana citoplasmatica, motivo
I
pelo qual nao ha realmente razao para considerar essa resistencia.
l
i
.. - c._--.---__. . . _ ~ . - - - - - - - - . - - - - - - - - - - - - - - - - - , - - - - - - ~ - - - - - c - - - - - - - - - - - - ----- ---- . .-- . J ~ - , ~
j'
286 A g i t a ~ o e aeracao em biorreatores
Dessa forma, do lado do consumo, a resistencia rna is significativa ficaria
por conta da velocidade da reacao enzimatica da respiracao (resistencia 8), ou
seja, na dependencia da atividade e concentracao dos complexos enzimaticos
e proteicos que efetuam esta reacao, alem de toda a atividade biol6gica da ce
lula, 0 que incide na disponibilidade de eletrons a serem transportados pela
cadeia respirat6ria, com a concomitante utilizacao do ATP gerado para a sin
tese de novas moleculas. No que tange aatividade e concentracao dos comple
xos proteicos responsaveis pela respiracao, nao se tern condicoes simples de
interferencia, a nao ser que se imaginasse alteracoes geneticas 0 que, apesar
de extremamente atraente, ainda e, presentemente, tarefa relativamente com
plicada.
.
Claro esta que no caso de microrganismos que crescem em aglomerados,
como e0 caso de fungos filamentosos que crescem na forma de micelios, ainda se
poderia considerar uma resistencia adicional em termos da difusao do oxigenio
para as celulas mais internas dos aglomerados.
A partir dessa discussao, pode-se perceber que a tarefa de projetar ade
quadamente urn sistema de transferencia de oxigenio, reside em obter-se uma
eficiente dissolucao do oxigenio no meio Iiquido, deixando entao para as celu
las a situacao de nao limitacao de oxigenio, para que elas possam consumir este
substrato de forma plena, dentro das caracteristicas biol6gicas pr6prias de cada
especie.
Transferencia de oxigenio e microbiana 287
Gas
PeHcula
Hquida
Lfquido
Figura 14.3 - Interface gas-liquido com as pelfculas estagnadas.
Admitindo que 0 sistema esteja em estado estacionario, em termos da trans
ferencia de oxigenio, assim como a existencia de urn perfil linear da concentracao
de oxigenio no interior das peliculas, pode-se escrever:
gradiente
n =---
O
2
resistencia
onde: no =fluxo de oxigenio por unidade dearea interfacial
2
(g02/m2. h)
resistencia = inverso do coeficiente de transferencia
ou seja:
(14.2)
onde: kg =coeficiente de transferencia de massa da pelicula gasosa (m/h)
k
L
=coeficiente de transferencia de massa da pelicula Iiquida (m/h)
P =pressao parcial de O
2
no seio gasoso (atm)
Pi =pressao parcial de O
2
na interface (atm)
PI =pressao parcial de O
2
em urn gasque estaria em equilibrio com a
concentracao de oxigenio C no liquido, segundo a lei de Henry (atm)
H =constante de Henry (g02/m3 . atm)
C
s
=concentracao de O
2
dissolvido no Iiquido em equilibrio com P
g
,
segundo a lei de Henry (g02/m3)
C
i
=concentracao de O
2
dissolvido ern equilfbrio com Pi (g02/m3)
C =concentracao de oxigenio no seio liquido (g02/m3)
Como se observa na Eq. 14.2, introduziram-se como gradientes as diferencas
entre as press6es parciais de
2
, ou estas traduzidas em concentracoes atraves da
lei de Henry.
----.. .,-_ - ... ' .. : ...-. __.."C---' -'.C , .. - .....-- .._ .. '--'"'' .. c.-._- .. _ - _.' .. ', __ .
288 Agitao e aerao.em biorreatores
Na verdade, nao ha condicoes de se conhecer os valores relativos ainterface
gas-Iiquido, podendo-se determinar os valores das concentracoes no seio do gas e
do liquido. Assim, prefere-se trabalhar com urn coeficiente global de transferencia
de oxigenio (0 qual corresponderia a soma das resistencias das duas peliculas).
Ou, ainda, lembrando que a resistencia devido ao filme gasoso pode ser despreza
da, tendo em vista a resistencia do filme liquido, pode-se considerar Ps = Pi e, como
decorrencia, C, =Cs.
Assim, a Eq. 14.2 pode ser escrita:
(14.3)
:i
Tendo em vista que esse fluxo de oxigenio esta definido por unidade de area
:i
interfacial de troca de massa, area essa de dificil quantificacao quando se tern urn
!
01
enorme mimero de bolhas suspensas em urn liquido, pode-se definir:
i
d
area interfacial de transferencia de massa (rrr')
a =---------------::------:.-.:....
II
volume total de liquido (rrr')
,I!
Ii i
[I Assim, pode-se escrever:
I
11 (14.4)
onde: n
02a
=velocidade de transferencia de oxigenio (g02/m3 . h)
kLa = coeficiente volumetrico de transferencia de O
2
(h-
1
)
Finalmente, casonao se esteja em estado estacionario em termos de fluxo de
O
2
, mas esteja ocorrendo uma variacao da concentracao de O
2
dissolvido (C) no
tempo (t), pode-se escrever que n 02a = dC / dt (g02 / m 3 . h), ou seja:

dC (14.5)
-=kLa(C -C)
dt S
Essa equacao, apesar de ser extremamente simples, permite uma exata com
preensao de todas as formas de que se dispoe para 0 controle da concentracao de
oxigenio dissolvido em urn certo meio.
De fate, caso se enriqueca em 0
2
0 gas de entrada de urn reator (aumento de
p
g
) , ou se aumente a pressao de cabeca do fermentador (aumento de P), incremen
ta-se 0 gradiente (C, - C), para urn dado valor de C em urn certo instante, pois se
estaria aumentando 0 valor de Cs. Igualmente, aumentando-se a frequencia de agi
tacao, se estaria rompendo e dispersando mais as bolhas de ar (aumento de a) e re
duzindo a espessura do filme liquido (aumento de k
L
) . Por outro lade, 0 aumento
da vazao de aeracao, significa tim maior aciimulo de bolhas de ar no seio liquido
(aumento de a), ao mesmo tempo em que se promove urn maior arraste do CO
2
produzido (aumento de p
g
) .
Transferencia de oxigenioe respiracao microbiana 289
As Eqs. 14.4 e 14.5 permitem ainda entender que a maxima capacidade de
transferencia de oxigenio de urn dado sistema de agitacao e aeracao e dada pelo
produto kLaC
s
' ou seja para a situacao de concentracaode O
2
nula no meio. Tal si
tuacao nao tern interesse, no que se refere ao cultivo de urn dado microrganismo
aer6bio, mas e interessante para a caracterizacao de urn dado sistema de transfe
rencia.
Na realidade, aose desenvolver uma dada equacao que pretende descrever
urn certo fenomeno, sempre ocorre a necessidade da introducao de certos parame
tros, os quais necessitam ser determinados experimentalmente, a fim de que a
equacao desenvolvida possa ter utilidade pratica. Igualmente, a caracterizacao de
urn dado sistema de transferencia de oxigenio, conforme descrito pela Eq. 14.5,
significa determinar os valores do parametro kLa, 0 que e possivel atraves de di
versas metodologias.
A mais antiga dentre elas e 0 chamado metoda do sulfito, que consiste em
transferir oxigenio para uma solucao de sulfito de s6dio na de urn sal de
cobre como catalisador. Essa metodologia esta muito bern descrita no trabalho pu
blicado por COOPERet al.
9
Coloca-se no reator uma solucao de sulfito de s6dio, adiciona-se sulfato de
cobre e estabelece-se a aeracao desejada. Em urn dado instante colhe-se uma
amostra e determina-se a concentracao de sulfito por iodometria (adiciona-se a
amostra uma solucao de iodo, que oxida 0 sulfito a sulfato, e titula-se 0 iodo em
excesso por uma solucao de tiossulfato). Apos urn certo intervalo de tempo em
que se mantern constantes as condicoes de aeracao, colhe-se uma nova amostra e
determina-se novamente a concentracao de sulfito remanescente.
Atraves da estequiometria da reacao de oxidacao do sulfito a sulfato pelo
oxigenio, imaginando-se que todo 0 oxigenio dissolvido reage instantaneamente,
pode-se conhecer a velocidade de dissolucao do oxigenio, ou seja:
Dessa forma, conhecendo-se a massa total de oxigenio que foi transferido
para 0 volume total de reacao, durante 0 intervale de tempo entre as duas amos
tras, tem-se todos os dados para 0 calculo da grandeza no a da Eq. 14.4. Como,
2
em principio, a concentracao do oxigenio dissolvido, na solucao relativamente
concentrada de sulfito, pode ser desprezada, pode-se escrever:
(14.6)
onde: K
v
= coeficiente de absorcao (g02/m3. h atm)
Assim, prefere-se efetuar 0 calculo desse coeficiente de absorcao, 0 qual en
globa a constante de Henry para a solucao submetida aaeracao, ou seja, evita-se a
necessidade de conhecer a concentracao de oxigenio na saturacao, Caso a concen
tracao de oxigeniodlssolvido nao seja nula, logicamente na Eq. 14.6 n
02a
deve ser
dividido por (p
g
PI)' sendo PI determinado a partir do sinal de urn eletrodo.
_ _ _ . _ . _ _._ . 0 .
---._. ._-_... .._. --_.._-_. ..__.--- --.., " - , ". ,
..1_--,--_.. .. .__._.__ ....
290 . e aeracao em biorreatore s
Uma duvida adicional seria quanta ao valor de P
g
a ser utilizado para 0 cal
culo de K
v
. Realmente, 0 gas que entra no reator e diferente do gas que sai do sis
. tema, pois oxigenio foi transferido ao lfquido. Uma forma seria considerar 0 reator
como homogeneo e determinar a fracao volumetrica de oxigenio no gas efluente, 0
qual seria representativo do gas que esta trocando massa com 0 meio. Essa hipote
se de homogeneidade e dificil de ser aceita, especialmente para reatores de grande
porte, sendo mais conveniente calcular a media logaritmica entre as press6es par
f
dais de oxigenio na entrada e saida do reator, ou seja:
lO
I f' "
(14.7)
I
! onde: Pge= pressao parcial de O
2
no gas de entrada (atm)
I; Pgs =pressao parcial de O
2
no gas de saida (atm)
II Novamente a Eq. 14.7 foi escrita supondo 0 caso mais comum de se ter PI = 0
atm.
Na Eq. 14.7 tern-se:
!I
i
L
(14.8)
Pge =xoze(P+ H )
i
10,3
onde: X
0 2e
= fracao molar ou volumetrica de O
2
no gas que entra no reator
I.
(0,209 para 0 ar)
II'
I
P = pressao interna no reator (pressao atmosferica + sobrepressao na
I' cabeca) (atm)
:i'
H
L
= altura da coluna Iiquida (m)
Pgs = XO
Ze
(1- E)P (14.9)

Na Eq. 14.9 E representa a eficiencia da transferencia de oxigenio, ou seja :
E = oxigenio transferido
(14.10)
oxigenio total introduzido
onde: V = volume de reacao (m
3
)
Q = vazao de aeracao (CNTP) (m"jh)
Nesse metoda do sulfito e necessario lembrar que se esta agitando e aerando
uma solucao de sulfito de s6dio, a qual tern caracteristicas distintas de urn meio de
cultura que se pretende fermentar. Possivelmente a diferenca mais importante e
que se emprega solucao salina relativamente concentrada, 0 que significa urn meio
nao coalescente. Ou seja, as bolhas de ar, em seu trajeto entre 0 fundo e 0 topo da
coluna liquida, nao se juntam, 0 que significa a possibilidade de manter uma ele
vada area de transferencia de massa (a), 0 que pode nao ocorrer em urn meio de
cultura. Com isto, de uma forma geral, obtem-se valores da velocidade de transfe
rencia maiores do que os observados durante urn processo fermentativo (este pon
to sera novamente abordado mais adiante) .
..,. _,- -- -- --
...._. ------ _.. .._- --:- _._' , ,....-._._- - '-_ ..__.. .-_ _--_.._.._.. _ ..
Transferenciade oxigenioe microbiana 29 I
Alem disso, deve-se salientar que 0 metodo do sulfito permite a determina
<;ao da maxima capacidade de transferencia de oxigenio, pois se imagina nula a
concentracao de oxigenio na solucao. Esse fato tern muita importancia quando se
empregam dados de transferencia obtidos pelo metodo do sulfito, no projeto de
sistemas de agitacao e aeracao, para os quais se tera C t: O.
Mais recentemente, tern surgido algumas alternativas ao metodo do sulfito
tradicional. Uma delas consiste em se dispor, no reator, de urn eletrodo para a de
terminacao da concentracao de oxigenio dissolvido. Coloca-se no reator a solucao
do catalisador, praticando-se a aeracao e a agitacao a ser estudada, 0 que permite
calibrar 0 eletrodo na posicao 100%. Ao se adicionar a solucao de sulfito de sodio,
mantendo-se a agitacao e a aeracao, ocorre urn rapido decrescimo no sinal da son
da, ate urn valor proximo a zero. 0 sinal da sonda permanecera baixo enquanto
existir sulfito nao oxidado no reator. No instante em que a sonda indicar urn rapi
do sinal ascendente, isto sera devido ao termino do sulfito de sodio.
Dessa forma, conhecendo-se a massa de sulfito adicionada e 0 tempo paraa
sua completa oxidacao, tem-se 0 dado necessario para 0 calculo de Ky , havendo a
vantagem de nao se necessitar colher amostras e realizar as titulacoes com iodo.
Outro avanco recente do metoda do sulfito foi 0 proposto por IMAI et al,"
Esses autores imaginaram efetuar 0 me todo do sulfito emprocesso continuo, ou
seja, alimentam 0 rea tor, submetido a aeracao e agitacao, com uma solucao de sul
fito de sodio e catalisador em uma dada vazao, de forma a manter constante uma
certa concentracao de oxigenio dissolvido indicada por urn eletrodo. 0 balance
material, no estado estacionario, para 0 sulfito de sodio, conhecendo-se as concen
tracoes de sulfito na entrada e na saida do reator considerado homogeneo, permite
o calculo de kLa ou de Ky.
Sem duvida essa proposta de processo continuo significa urn avanco sig
nificativo para 0 metoda do sulfito, pois permite 0 emprego de baixas concen
tracoes do reagente, 0 que incide em economia para 0 processo, quando
imaginado para grandes reatores, alem de se obter valores mais compativeis
com os sistemas reais, nos quais ocorre coalescencia de bolhas, conforme men
cionado anteriormente.
Outra estrategia existente para a determinacao experimental de kLa e a que
utiliza apenas 0 sinal de resposta de urn eletrodo imerso no liquido submetido a
aeracao.
o ensaio tipico para a determinacao de kLa, pelo emprego de urn eletrodo es
pecifico para a medida da concentracao de O
2
em urn meio liquido (metodo dina
mico), consiste em inicialmente borbulhar nitrogenio no liquido, a fim de eliminar
todo 0 O
2
dissolvido, ate que a sonda indique 0 valor zero.
A seguir, em urn dado instante, inicia-se a aeracao e a agitacao do meio
liquido, nas condicoes em que se pretende obter 0 valor dekLa, passando-se
entao a registrar 0 sinal da sonda. Esse sinal saira do valor zero, aumentando
ate atingir a saturacao, ou seja, ate que 0 eletrodo indique 0 valor 100% (sonda
previamente calibrada no liquido saturado em O
2
) ,
-----,-- --.-- . .- -- ---_._-- , --, -- _.,---_. _- - ,.__ .. -- --......._-----_.........
r
Ii
':"
L
_ _ _ _ _
'I"
,
Nessas condicoes aEq. 14.5 pode ser integrada, conhecendo-se a condicao
inicial (t = 0; C = 0), pois epossivel separar as variaveis:
dC =kLa.dt,ouintegrada
(C, - C)
(14.11)
In(1- J= -kLaf
ou ainda:
(14.12)
C
s
Observa-se pela Eq. 14.11 que ao se plotar In(1 - CIC
s
) em funcao do tempo
(f), a partir dos dados experimentais obtidos pelo ensaio descrito, deve-se obter
uma reta cujo coeficiente angular fornece 0 valor de k.a. Observa-se tarnbem que
nao ha a necessidade do conhecimento da concentracao de saturacao (C
s
) ' mas das
fracoes (CIC
s
) , ou seja, 0 sinal da sonda previamente calibrada no intervalo de
zero a 100%, 0 que simplifica 0 calculo da grandeza desejada.
Na verdade, 0 valor de kLa estaria correto, caso a sonda apresentasse um per
feito acompanhamento do aumento da concentracao de O
2
no Iiquido, 0 que pode
nao ocorrer em virtude do atraso no sinal.
Esse atraso edevido anecessidade de 0 O
2
dissolvido no seio liquidoter de
se difundir atraves da membrana do eletrodo, que isola 0 meio liquido da superfi
cie do catodo (onde 0 oxigenio ereduzido gerando 0 fluxo de eletrons), alem de se
poder considerar, ainda, um filme liquido estagnado, dependendo da condicao de
agitacao empregada (e, portanto, da velocidade de passagem de liquido pela su
perficie do eletrodo), atraves do qual 0 O
2
deve se difundir.
Justamente com 0 objetivo de corrigir esse atraso da sonda, AIBA.ef al.
lO
pro
puseram que 0 sinal da sonda (C
p
) , varie no tempo proporcionalmente adiferenca
entre a concentracao real deO, (C) e 0 sinal (C
p
) , ou seja:
ac, (14.13)
ill = k
p
(C - C
p
)
onde: C, = sinal do eletrodo (C, = 0 para t = 0 e C, = C, para t = (0)
k
p
= constante de atraso do eletrodo (h-
1
)
Introduzindo-se na Eq. 14.130 valor de C em funcao do tempo, obtido a par
tir da Eq. 14.12 e, agora, integrando-se a equacao resultante, obtem-se:
(14.14)
C
p
1 kLa - k .1 *e-kla.1
-= + -e P
c, k
p
-kLa k
p
-kLa
Observa-se, na Eq. 14.14, que para valores de k muito maiores do que kLa,
p
esta equacao retorna a Eq. 14.12, ou seja, nao haveria a necessidade de corrigir 0
sinal do eletrodo
... ".- ,- - ,--- . __ _ _ _--, _---_. - . -- ---.-,.._-_..-._--- _
Transferenda de oxigenio e respiracaomicrobiana 293
De qualquer forma, epossivel ajustar a Eq.14.14 aos dados experimenta
is (C, = j(t, obtendo-se 0 valor correto de ,. desde que se conheca 0 valor de
k
p

Essa constante de atraso do eletrodo pode ser determinada atraves de urn
ensaio em degrau, ou seja, equilibrando-se a sonda em urn liquido submetido a
borbulhamento com nitrogenio (sonda indicando 0 valor zero) e, a seguir, reti
rando-se a sonda deste liquido e introduzindo-a imediatamente em urn Iiquido
saturado em O
2
(caso se pretenda determinar apenas 0 atraso da sonda sem a in
terferencia do filme Iiquido, este deve estar intensamente agitado, ou, ainda, po
de-se equilibrar a sonda em atmosfera de nitrogenio gasoso e, a seguir, expo-la
ao ar atmosferico). Nessas condicoes tern-se desde 0 instante t = 0 do degrau que
C = C, e, portanto, na Eq. 14.13 fica-se com:
a qual integrada fornece:
(14.15)
A Eq. 14.15 mostra que plotando-se os valores de In(l - CpiCs), em funcao
do tempo, obtidos no ensaio em degrau, deve-se obter uma reta, cujo coeficiente
angular permite a obtencao do valor de k
p
Ebastante frequente contar-se, como inforrnacao do fabricante do eletro
do, que uma sonda razoavelmente rapida permite a obtencao de 90% da res
posta em 20 segundos, no teste em degrau. Ora, essa informacao pode ser en
tendida como atribuir-se, na Eq. 14.15,0 valor ( C ~ / C s ) =0,9 para t =20 s (lem
brando-se quea reta passa pela origem, pois (Cp/C
s)
= 0 para t = 0), 0 que per
mite a traducao da inforrnacao para 0 valor de k
p
=0,12 S-I, ou k
p
=414,6 h-
I
.
Apenas como ilustracao, e possivel simular as Eqs. 14.12 e 14.14, a fim
de se observar a variacao da concentracao real de O
2
dissolvido (C) e da con
centracao prevista pela sonda (C
p
) , em funcao do tempo, para determinados
valores de kLa e k
p
Tais simulacoes estao indicadas na Figura 14.4, na qual se
pode ter uma clara ideia a respeito da importancia de se efetuar esta correcao,
Assim sendo, e possivel, a partir das equacoes anteriores, gerar curvas
semelhantes as da Figura 14.4 para distintos val ores de k.. Tal procedirriento
permite concluir que, com uma sonda que apresente urn k
p
da ordem de 400
h-
I
, pode-se estimar, com uma razoavel precisao, sem a necessidade de efetuar
correcoes, valores de kLa inferiores a 200 h-
I
. Acima desses valores de kLa, os
erros tornarn-se muito elevados, exigindo que se efetue a correcao proposta
pela Eq . 14.14.
. .. .. . .. .. ... .... . . ... ...... .. .._... . ..... ... ..... .__.__._ ____
'1
!
!
1
,
J
1
1
l
j
I
1
'I
I
.1
_ ....,...-
294 e em biorreatores
C/Cs; Cp/Cs
1,2
1,0
C/Cs
0,8
1
0,6
kLa= 400 1/h
k
p
= 414,61/h
Cp/Cs
0,4
0,2
10 20 30 40
Tempo (s)
Figura 14.4 - Variacao no tempo daconcentracao real deO
2
dissolvido(CICs)e sinal do eletrodo (C!Cs)durantea
execucaodo metoda dinamico,
14.4.2 - Respiracao microbiana
No item anterior buscou-se abordar as bases te6ricas que permitem 0 estu
do da transferencia do oxigenio do ar para 0 meio liquido, havendo agora a ne
cessidade de abordar 0 problema do consumo do oxigenio dissolvido, ou seja, da
respiracao microbiana.
Inicialmente enecessario definir 0 que se entende por velocidade especifica
de respira\ao(Qoz), como sendo:
- 1 d0
Q
0
2 = - -
2
(14.16)
X dt

onde: Qoz = velocidade especifica de respiracao (gOz/ geel . h)
X = concentracao celular (geel/m
3
)
(dOz/dt)=velocidade de consumo de O, (gOz/m
3
h)
Na verdade, esta grandeza Qoz introduz, na presente discussao, a caracteris
tica biol6gica do sistema em estudo, pois ela depende do microrganismo emprega
do, assim como .da composicao do meio e das condicoes de fermentacao (pH,
temperatura, etc.).
valor de Qoz, para urn dado microrganismo, efuncao da concentracao de
oxigenio dissolvido no meio liquido (C), seguindo uma equacao tipo Monod, ou
seja:
C
(14.17)
Q02 =Q02max K C
. . 0 +
Transferenda de oxigenio e respiracao microbiana 295
onde: = maximo valor de Qoz (gOz! gcel.h)
K
o
=constante de saturacao para 0 Oz (gOz!m
3
)
A Figura 14.5 ilustra a variacao de Qoz corn a concentracao de oxigenio dis
solvido no meio, segundo 0 proposto pela Eq. 14.17.
Cerit
C(mg0t'L)
Figura 14.5 - Representacao esquernaticada variacao de 0
0 2
com C, segundo a equacao de Monod.
Nessa figura observa-se que acima de uma dada concentracao de Oz dissol
vido, definida como concentracao critica (CCrit), 0 valor de Qoz econstante e maxi
mo. Isso significa que 0 dimensionamento de urn sistema de agitacao e aeracao,
caso tenha como objetivo, permitir a maxima velocidade especifica de respiracao
(situacao muito freqiiente), deve buscar a manutencao da concentracao de Oz dis
sol vido acimadaconcentracao critica, a fim de que 0 Oz nao seja limitante.
Alguns valores de CCrit existem na literatura, como os exemplificados na
Tabela. 14.2.
3
Tabela 14.2 - Valoresda concentracao crftica de O
2
dissolvido paraalgunsmicrorganismos(3).
Mierorganismo Temperatura (OC) Ccrit (mg/L) ;
Escherichia coli
Serratia marcescens
Levedura
P. chrysogenum
37,8 .
31,0
34,8
24,0
30,0
0,26
0,48
0,15
0,70
0,29
I'r,

I



Aspergillus oryzae

,
'.,
..
v v
30,0


0,64
. ' . ... . ..

j
296 . Agitao e aerao em biorreatores
Como se pode observar, os valores de C
eri l
situam-se entre 0,3 e 0,7 ppm, ou
seja, valores abaixo de 10% da concentracao de saturacao (da ordem de 7 ppm, a
35C e 1 atm, empregando-se ar atmosferico - Tabela 14.1) . Sao valores portanto
extremamente baixos, 0 que indica igualmente valores muito baixos para a cons
tante de saturacao (K
o
)'
Caso a producao de urn dado produto seja maxima para condicoes de limita
<;ao de oxigenio dissolvido (entre zero e 10% da saturacao), isto significa uma certa
dificuldade no controle da concentracao de oz dissolvido dentro destes limites
bastante restritos. Normalmente esse tipo de condicao e obtido naturalmente,
atraves da imposicao de uma transferencia de ozsabidamente insuficiente para a
manutencao de QOZmax'
Enecessario mencionar que esses valores de C
eril
sao caracteristicos de celu
las que crescem isoladamente. No caso de microrganismos que crescem na forma
de grumos, ou "pellets", como e0 caso de fungos filamentosos, essa concentracao
critica pode atingir valores da ordem de 30 a 50% da concentracao de saturacao.
Obviamente, para esses cas os, a situacao etambern mais complicada, pois para se
poder manter altasvelocidades espedficas de respiracao, sao necessarias altas
concentracoes de O, dissolvido, a fim de que 0 Oz possa ser transportado para 0
interior dos flocos ou grumos.
Conforme comentado anteriormente, nao eapenas a concentracao de Oz dis
solvido que interfere em Q02' mas tambem as demais condicoes de cultivo. Portan
to, mesmo intuitivamente, pode-se entender que celulas que estejam crescendo em
altas velocidades tern de apresentar elevadas velocidades de consumo da fonte de
carbono, assim como elevadas velocidades de respiracao, conforme indicado ante
riormente.
Essa reflexao permite concluir que deve existir uma relacao entre a velocida
de espedfica de respiracao (Qoz) e a velocidade espedfica de crescimento (u). Nor
malmente admite-se a existencia de uma relacao linear, conforme sugerido por
PIRT(IZ), ou seja:
(14.18)
onde: rna = coeficiente de manutencao para 0 Oz (gOz/ geel . h)
Yo = fator de conversao de O, para celulas (geel/ gOz)
J.l. =(l/X)(dX/dt) =velocidade especifica de crescimento (h-
1
)
X = concentracao celular (geel/L)
Esse coeficiente demanutencao (rna) significa a velocidade espedfica de res
piracao para f.l = 0, ou seja, a velocidade espedfica de consumo de Oz para manter
as celulas viaveis.
Urn exemplo de aplicacao da Eq .14.18 foi propiciado por FACHINI/
3
du
rante cultivos descontinuos de Aspergillus auiamori NRRL 3112 em distintas
--_.- _ .---.-. - ---------;----C--- . - - - - - - - - - ...- . .-- ..
Transferenda de oxigenioe respiracao microbiana 297
condicoes de transferencia de oxigenio. Esse autor obteve urn valor medic para m.,
da ordem de 2 mmol0
2
/ gcel . he 1,55 gcel/g0
2
como representativo de Yo. No en
tanto, deve-se salientar que os valores de m
o
variaram de 1,5 a 4,1 mmol0
2
/ gcel . h
para os diferentes cultivos, enquanto que os valores de Yo apresentaram uma maior
constancia, sugerindo que os valores maiores de m
o
foram observados para as con
dicoes de transferencia de oxigenio mais intensas.
14.4.3 - Analise conjunta datransferencia e consumo do oxigenio
Durante 0 cultivo de urn dado microrganismo, efetua-se a transferencia de
oxigenio da fase gasosa para a fase Iiquida, enquanto que, simultaneamente, 0 mi
crorganismo consome 0 O
2
dissolvido. Assim sendo, 0 equacionamento rnais ade
quado surge atraves de urn balance de oxigenio no meio liquido, ou seja:
dC
dt =kLa(C
s
- C) - Q02X (14.19)
A Eq. 14.19 indica que a variacao da concentracao de oxigenio dissolvido no
liquido (dC/dt) e 0 resultado da diferenca entre a quantidade de O
2
que se conse
gue dissolver (kLa (C, - C e 0 oxigenio consumido pelas celulas (Q
02
X). No caso
de urn processo fermentativo continuo, dever-se-ia ainda considerar 0 O
2
que en
tra no reator com 0 meio de alimentacao (DC
s
, onde D =vazao especifica de ali
mentacao) e 0 O
2
que sai do reator com 0 liquido fermentado (DC). No entanto,
estas parcelas adicionais sao freqiientemente desprezadas, pois sao muito peque
nas em relacao as demais.
E necessario lembrar que a cinetica de urn dado cultivo esta amplamente
contemplada na Eq.14.19, pois X ira variar com 0 tempo e Q02 varia com Il (Eq.
14.18).
Dessa forma, considerando urn processo fermentativo des continuo, e facil
compreender que, no instante inicial, tem-se uma baixa concentracao celular (X
o
)
e, como 0 cultivopodera contar com uma fase lag (Il=O), ter-se-a tambem 0 mini
mo valor para Q02(= mo), 0 que significa a necessidade de baixas transferencias de
O
2
a fim de satisfazer a esta pequena demanda (moX
o
)' No entanto, com 0 decorrer
do tempo X ira aumentar, ocorrendo 0 mesmo com 0 valor de Q02f 0 qual atingira
o seu maximo valor na fase exponencial (Il = Ilmax)' A seguir, Q02 devera diminuir
com 0 valor de Il, mas ainda se observara urn aumento em X, devendo, portanto,
ainda ocorrer urn aumento na demanda Q
02
X, a qual devera atingir 0 maximo va
lor para instantes posteriores a fase exponencial, passando entao a decrescer.
Claro esta que 0 sistema de transferencia de O
2
devera ser dimensionado de
forma a atender a maxima demanda, caso se pretenda manter 0 cultivo em condi
. ~ 6 e s nao limitantes em termos de oxigenio dissolvido.
Dentro dessa ideia, a Figura 14.6 procura ilustrar duas possibilidades de
operacao, devendo-se informar que esta figura foi elaborada a partir de dados ex
perimentaisl-' obtidos durante 0 cultivo de Aspergillus awamori, durante 0 qual nao
se observou fase exponencial, sendo os valores de Q02 calculados a partir da Eq.
14.18. Ainda, saliente-se que as escalas foram tornadas relativas, pois os valores
absolutos nao sao necessaries dentro da presente discussao.
..__ . . . _.__... ... .LI-.......__........ _ _ .
298 Agitaoe aeracao em biorreatores
primeiro estilo de operacao seria imaginar a existencia de urn eletrodo
para a medida da concentracao de O
2
dissolvido, sendo 0 seu sinal empregado
para uma de controle, a fim de manter constante esta concentracao (variando
a frequencia de agitacao e a vazao de aeracao). Nessa situacao, na Eq. 14.19 como
C econstante dCI dt enulo, podendo-se escrever:
(14.20)
onde: C, = valor constante estipulado para C (exemplos C, = 0,2 C, conforme Fig.
14.6, ou c, = C
crit
) (g02/m
3
)
ou ainda:
(14.21)
Observa-se, pela Eq. 14.21, que para manter C = C, deve-se variar kLa propor
cionalmente a Q
02
X, tendo em vista que a grandeza C, - C, econstante, desde que
nao se varie a pressao parcial de O
2
no gas empregado na aeracao. Isso pode ser
verificado na Figura 14.6, na qual tambem pode-se observar que 0 maximo valor
de kLa eatingido para 0 maximo valor de Q
02
X.
X,I!, Q02X,C (esc. rei.) kLa (esc. reI.) 1,0
1,2
C(kLa cte)
+ 0,8
0,8
0,6
0,2 0,4 0,6 0,8
Tempo (escala reI.)
Figura 14.6 - de duas possiveis formas para projetar umsistemade transferencia de 0 2: comC = de. e
kLo variavel, ou com kLo = de. e C variavel com 0 minimo fi xado em 0,2 C, (vide texto).
A consequencia imediata dessa estrategia de operacao ea necessidade de in
vestimento em sistema de controle, ao lado de uma evidente economia de energia, a
fim de manter 0 processo na condicao desejada. De fato, no inicio dever-se-a agitar
':,"" ..__e aerar muito pouco, pois a demanda e baixa, conforme indicado anteriormente.
Apenas se utilizaria a maxima energia no instante da maxima demanda.
. ,
L ---------_. _------_._---- --- __ - --._- -_._--- ---- ---- _.-------.-- - -. -- - --- -- ---_ _-
0,6

0,4
0,4
0,2
0,2
__
Transf erenciade oxigenio e microbiana 299
A segunda opcao seria calcular 0 valor de kLa para 0 instante de maximo va
lor de Q
02
X, atraves da Eq. 14.21, praticando este valor (traduzido por urn certo
valor da frequencia de agitacao e uma dada vazao de aeracao) desde 0 inicio do
processo. Nesse caso, C variara com 0 tempo, atingindo 0 valor minimo (C
c
) no
instante de maximo Q
02
X (Fig. 14.6).
De fate, a partir da Eq. 14.19, desprezando-se 0 valor de dC/dt, pode-se escrever:
= 1 _ Qo, X (14.22)
c, kLaC
s
Essa Eq. 14.22 indica a variacao de C (ou C/C
s
) em funcao de Q
02
X, ou seja,
em funcao do tempo, com urn valor constante de kLa.
Obviamente, nessa segunda opcao se estaria gastando rnais energia e, por
outro lade, investindo menos em controle.
Na realidade, dificilmente observa-se urn valor constante de kLa ao longo de
urn processo fermentativo, mantendo-se fixas as condicoes de aeracao e agitacao,
pois a atividade microbiana vai provocando alteracoes nas caracteristicas do meio
(por exemplo, aumento da viscosidade), 0 que freqiientemente contribui para uma
reducao de kLa (diminuicao da difusividade do 02' aumento da espessura do filme
Iiquido estagnado e aumento da tendencia de coalescencia de bolhas). Por outro
lade, a necessidade da adicao de antiespumantes freqiientemente contribui para a
reducao de kLa, em virtude de introduzir uma resistencia adicional na interface
gas-Iiquido.
Todos os fatos apontados indicam a clara necessidade de se determinar os
valores de kLa e Q02 durante urn processo fermentativo, a fim de se contar com da
dos confiaveis para 0 correto dimensionamento de urn sistema de transferencia de
2'
14.4.4 - Deterrninacao de kLQ e Q02 durante 0 processo fermentativo
As metodologias descritas no item 14.4.1 para a determinacao de kLa sem a
de microrganismos, encontram importancia especialmente quando se
i
pretende comparar 0 desempenho de diferentes sistemas de agitacao e aeracao,
I
No presente item ha a preocupacao em descrever alguns metodos para a quantifi
!
cacao de kLa e Q02 durante urn processo fermentativo, ou seja, na de mi
crorganismos.
I
Urn dos metodos mais utilizados para realizar essa tarefa, e 0 que emprega
I
uma sonda para a determinacao da concentracao de 02 dissolvido, conhecido
i
como metoda dinamico.l't
Nesse metoda, em urn dado instante de urn processo fermentativo (to), in
terrompe-se a aeracao, de forma a anular a transferencia de oxigenio, conforme
I
ilustrado na Figura 14.7. Recornenda-se tarnbem reduzir a frequencia de agita
a fim de reduzir ao maximo a transferencia de 02 na superffcie do liquido,
mas isto deve ser executado com cautela, pois esta reducao pode causar uma bai
xa velocidade de Iiquido na superficie do eletrodo, 0 que pode causar urn.atraso
exagerado de sinal.
I
- -- --_ ...-..._-- _... .----- - -- - - .- - _. ..--,- - -- -c- - : .-." - _ .. _-_ -: . . __ . _ _____.- . __ .. -.-"'""". .- .. . ...-.. - _. _ _ ___ _ __ _ _
) "
300 Agitayio e aerayioem biorreatores
Cone. 02 dissolv.(e
Co
Co 1-------,_
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
_ ____ ___ L _
Co1
,
,
,
,
,
,
,
:to t1
Tempo
Figura 14.7 - Variac;ao daconcentracaode O
2
dissolvidc com 0 tempo, duranteaexecucao do metododinamico.
Como se observa na Figura 14.7, a concentracao de O
2
dissolvido Co, que es
tava ocorrendo no instante inicial, comeca a diminuir, sendo que 0 sinalda sonda
deve ser registrado continuamente. Ao se atingir urn certo valor COl (instante t
l
) ,
retoma-se a agitacao e a aeracao, nas condicoes que estavam sendo praticadas, ob
servando-se, entao, 0 aumento da concentracao de O
2
dissolvido, ate atingir-se no
vamente 0 valor anterior Co.
Tal procedimento deve levar urn tempo relativamente curto, nao demandan
do mais do que alguns minutos para sua execucao, tempo este que depende obvia
mente do instante da fermentacao, ou rnais propriamente da concentracao celular
existente. Assim sendo, dentro desse curto intervalo de tempo, pode-se supor que
nao haja alteracao da concentracao celular (X), assim como deve ser mantido cons
tante 0 valor de Q 02t nao permitindo que a concentracao de O
2
atinja valores abai
xo da concentracao critica (deve-se manter C > C
cril
) '
Nessas condicoes, para 0 trecho sem aeracao, deve-se observar, a.partir da
Eq. 14.19, que:
dC
-=-Q02X (14.23)
dt
Conforme comentado anteriormente, 0 produto Q
02
X deve ser constante
durante esse intervalo de tempo, 0 que permite a integracao da Eq. 14.23, ob
tendo-se:
(14.24)
A Eq. 14.24preve que a partir do instante to (C =Co), deve ocorrer uma va
riacao linear de C com 0 tempo, reta esta cujo coeficiente angular e igual a
(-Q02X), resultando, assim, determinado 0 valor de Q02 conhecendo-se 0 valor de
X neste instante. Conforme se pode observar na Figura 14.7, nao ocorre relacao
linear desde 0 instante da interrupcao da aeracao, pois ha urn certo periodo em
que ainda existem bolhas de ar no seio liquido e, portanto, ainda ocorre alguma
transferencia de O
2
,
_. _._---- -_ ._._._ -"- - -_.. ~ - _ . - - - - - ... .., :---. - . - - - ~ - - : - - - __._ .-- -_..._, . - - ~ ~ _ .
Transferenda de oxigenioe nespirao microbiana 30 I
Uma vez conhecido 0 valor de Q
02
X, e possfvel efetuar 0 calculo de kLa de
duas formas distintas.
A primeira delas consiste em imaginar que a concentracao de O
2
dissolvido
ao longo do processo fermentativo, varia muito lentamente, esperando-se que ao
final da aplicacao do metoda dinamico, a concentracao de O
2
dissolvido volte ao
valor original Co' Assim, supondo estado estacionario em relacao a C, pode-se fa
zer novamente (dC/dt) = b na Eq. 14.19,0 que significa considerar a Eq. 14.21 e,
portanto:
(14.25)
Essa metodologia de calculo apenas deve ser aplicada para os instantes
em que ja se tenham valores de Co razoavelmente abaixo de C, (por exemplo va
lores de Co < 0,8 C
s),
caso contrario passa-se a obter valores de kLa absurdamen
te altos, pois se esta dividindo Q
02
X por valores muito baixos e, ainda, possivel
mente afetados por erros de medida.
Asegunda forma para 0 calculo de kLa, e a mais adequada, consiste em em
pregar os dados obtidos no trecho ascendente da concentracao de O
2
dissolvido,
durante 0 qual a Eq. 14.19 aplica-se na integra. Assim, rearranjando a Eq. 14.19 ob
tern-se:
(14.26)
Admitindo-se, novamente. iestado estacionario na Eq. 14.19, no patamar que
antecede a interrupcao da aeracao (C =Co), pode-se demonstrar que:
(14.27)
Introduzindo-se a Eq. 14.27 na Eq. 14.26, fica-se com:
(14.28)
Essa equacao pode ser integrada, lembrando que para 0 instante inicial de
retomada da agitacao e aeracao, ou seja, para t =t , tem-se C =COlt obtendo-se: .
(14.29)
-- --- - --,-._-_. -.-. ... -. - - -_.. - -- .. . - _ . ~ - ' - " - - .-_ .. ._- ,..._._----...~ - - . __.__.._- _.._ - --- -. ------ - -- - - - ----.
302 . e em biorreatores
Dessa forma,' plotando-se C =f(t), conforme proposto pela Eq. 14.29, ob
tem-se uma reta, cujo coeficiente angular permite 0 calculo de kLa. Na realidade,
aqui tambem ocorrera um certo periodo transitorio, no qual as bolhas de ar ainda
nao estao ocupando 0 volume total de reacao, de forma a se verificar a relacao li
near apenas para instantes ligeiramente posteriores a retomada da aeracao. No
te-se tambemque a Eq. 14.29 pode ser usada justamente para explicitar C em fun
\ao do tempo.
Deve-se observar que nas consideracoes anteriores nao se levou em conside
racao 0 possivel atraso na resposta do eletrodo, conforme efetuado na determina
\ao de kLa na ausencia do microrganismo.
13 6bvio que essa abordagem adicional eagora mais complicada, mas pode
ser realizada de algumas maneiras distintas.
Inicialmente, ao se empregar 0 trecho descendente para 0 calculo de Q02X, e
possrvelimaginar que 0 atraso da sonda possa causar determinacoes afetadas de
erro. No entanto, desde que se empregue sondas em boas condicoes e suficiente
mente rapidas, esta demonstrado na literatura (e tambem sera visto mais adiante)
que a reta obtida com 0 sinal da sonda C, =f(t) eparalela areta da concentracao
real C = f(t) e, portanto, 0 coeficiente angular continua a fornecer 0 valor correto
de Q02X, Para verificar essa informacao, sugere-se a leitura dos artigos de
KOIZUMI;AIBA
15
e de YANGet al.
16
Alternativamente, pode-se raciocinar segundo proposto por BADINO Jr. et
al.,17 que consiste em retomar a sugestao de equacionamento proposta por AlBA et
al.,t considerando que a resposta do eletrodo possa ser descrita segundo a Eq.
14.13.
Para tanto, retomando a Eq. 14.24 e fazendo-se to = 0 (instante inicial da in
terrupcao da aeracao) e introduzindo 0 valor de C na Eq. 14.13, fica-se com:
(14.30)

Essa equacao pode ser integrada, fornecendo:
(14.31)
C =Co - Q02
X
[t- J:...- + 1 J
P k k k t
*e
. P P
P
onde: Co = Cpo = concentracao real de O
2
antes da interrupcao da aeracao,
coincidente com 0 sinal do eletrodo.
A Eq. 14.31, a qual obviamente leva em conta a constante de atraso da son
da, porem nao considera 0 transiente antes mencionado (existencia de bolhas de
ar nos instantes imediatamente posteriores ainterrupcao da aeracao), preve que
para tempos elevados no ensaio (0 termo 1/k
p
e
kp
.
t
seria desprezivel), obter-se-ia
uma reta paralela arepresentada pela Eq. 14.24, podendo-se portanto estimar 0
valor. de Q02X atraves do sinal do eletrodo (C, f(t. Igualmente, para valores
elevados de k
p
(sonda rapida), as Eqs. 14.24 seriam coincidentes.
Transferendade oxigenioe microbiana 303
Na Figura 14.8 indica-se 0 ajuste da Eq. 14.31 a dados experimentais, duran
te 0 cultivo de Aspergillus awamori, assim como a reta prevista pela Eq. 14.24.
Como se pode notar, 0 ajuste eexcelente, apesar de nao se considerar 0 periodo
transit6rio.
A fim de efetuar 0 calculo de k.a, levando ern conta 0 atraso da sonda, po
de-se empregar estrategia semelhante adescrita acima, considerando 0 trecho as
cendente da concentracao de O
2
dissolvido.
c
p
(mmoL I L)
0,20 ,------,------,,----.-----r--,..-----,----,----...,
0,15
0,10
0,05
0,00
Ponto de inflexao
Eq.14.24
Eq.14.29
Eq.14.31 /.
- - - - I
I,
- - - - - I..
C
p02
C
01
- - - -
Ar
destiqado
__'---_-'

20 40 60 80
Tempo (5)
Figura 14.8 - Dados experimentais do rnetodo dinarnico (0), aplicado em um dado instante de um cultivo de
Aspergillusavanori. Ascurvas tracadas correspondem as equacoes indicadas (vide texto) .
. De fato, retomando a Eq. 14.28 e efetuando-se a integracao a partir do ins
tante t
2
=0, cuja concentracao de O
2
dissolvido eC
O2
, fica-se corn:
(14.32)
Pode-se agora substituir este valor de C na Eq.14.13 e, ern seguida, integrar a
equacao resultante, obtendo-se:
k (C -C )
-C -kp.t C (1 -kp.t) p 0 02 ( -kp .t -kLQ t)
(14.33)
C - 02e + 0 - e + * e - e
P P k - k a
P L.
onde: C
p02
= sinal da sonda no instante t
2
= 0 considerado para a integracao
concentracao real de 02 no instante t
2
= 0 C
O2
=
Co = Cpo = concentracao de O
2
antes da interrupcao da aeracao
(a concentracao real coincide corn 0 sinal do eletrodo)
A Figura 14.8 mostra 0 ajuste da Eq. 14.33 aos dados experimentais obtidos
durante urn ensaio de cultivo de Aspergillus awamori, a partir do qual pode-se esti
mar os valores de kLa e C
O2
(a qual nao econhecida, pois ea concentracao real),
_ _ _ . ...,.. . __ . ._ . __... . ._ .. .c _ . _ . .
304 A g i t a ~ o e aeracao em biorreatores
conhecendo-se os valores de k
p
(determinado previamente com ensaio em de
grau), Coe C
p02
' 0 ajuste pode ser realizado atraves da rotina de Marquardt para a
estimativa de parametres, sendo 0 instante inicial de integracao escolhido (t
2
) 0
correspondente ao ponto de inflexao da curva ascendente de Cp=f(t), a fim de evi
tar 0 periodo transiente ja mencionado. Observe-se, tambem, a partir da Eq.14.33,
que 0 valor de kLa pode ser determinado diretamente a partir do sinal do eletrodo,
sem a necessidade do conhecimento de C
s'
pois todos os termos desta equacao po
dem ser divididos por C
s'
Outra interessante forma de se efetuar a determinacao de kLa e Q02, atraves
do metodo dinamico levando em conta 0 atraso do eletrodo, e mediante a propos
ta elaborada por MIGNONE;ERTOLA18 e MIGNONE,19 a qual deve ser examinada
pelo leitor interessado em aprimorar este tipo de metodologia.
De qualquer maneira, para a aplicacao do metodo dinarnico, ha a neces
sidade de se contar com valores relativamente elevados da concentracao de
oxigenio dissolvido no meio no instante em que se pretende aplicar 0 metodo
(Co), Isso ocorre, pois nao se deve permitir que esta concentracao caia abaixo
da concentracao critica, a fim de manter constante 0 valor de Q02 das celulas
presentes.
Esse fato limita a aplicacao dessa metodologia, para instantes adiantados de
uma fermentacao, quando 0 O
2
dissolvido ja esteja baixo e, assim, nao se pode cor
tar a aeracao, sem 0 risco de se ter C<C
crit
'
Alem disso, todos os metodos que empregam eletrodos tern 0 inconveniente
de se colocar este eletrodo em uma dada posicao no interior do reator. Assim sen
do, a determinacao efetuada e valida para 0 ponto de medida e, normalmente, ex
trapola-se 0 valor dekLa para todo 0 reator.
No caso de reatoresde pequenas dimensoes, essa extrapolacao e bastante ra
zoavel, tendo em vista a possibilidade de considera-lo como homogeneo. No en
tanto, para reatores de porte medic ou grande (milhares de litros), a consideracao
de reator homogeneo dificilmente e verdadeira, 0 que torna estas metodologias

passiveis de criticas.
Uma alternativa aos eletrodos imersos no liquido e a realizacao de medi
das nos gases afluente e efluente do reator, 0 que permite a execucao de balances
gasosos e 0 calculo de kLa e Q02' Para tanto, necessita-se monitorar com precisao
as vazoes de entrada e saida de gases no reator, alem do teor de O
2
e CO
2
nestes
gases.
Normalmente empregam-se os analisadores paramagneticos para a monito
racao de 0
21
e os analisadores infravermelho para a medida do CO
2
, Altemativa
mente, pode-se tambem empregar sondas para medir 0 teor de O
2
em urn gas
efluente, 0 que conta com a vantagem de serem equipamentos de baixo custo, mas
~ s vezes questionados quanta asua precisao.
Em todo caso, as medidas efetuadas nos gases efluentes sao, em principio,
rnais recomendaveis, pois podem ser feitas sem assepsia, permitindo as freqiientes
calibracoes e manutencoes dos instrumentos de medida, 0 que obviamente nao e
possivel com os sensores imersos no meio liquido.

Transferenciade oxigenio e respiracao microbiana 305
Imagine-se urn reator de volume uti! V, que esteja recebendo uma dada va
zao de ar, podendo-se medir 0 teor de oxigenio na entrada e na saida deste reator.
balance para 0 oxigenio no gas, fornece:
- = kLa(C
s
-C)V
(14.34)
onde: X
02 e
= fracao molar ou volumetrica de O
2
no gas de entrada
= vazao molar de gas na entrada (mol gas/h)
x02s = fracao molar ou volumetrica de 02 no gas de saida
= vazao molar de gas na saida (mol gas/h)
V =volume de liquido no rea tor
Por outro lado, ja se sabe que 0 balance de 02 no liquido fornece:
(14.35)
Introduzindo-se a Eq.14.34 na Eq.14.35, obtem-se:
(14.36)
Na Eq. 14.36 pode-se novamente imaginar que a variacao da concentracao
de 02 dissolvido em funcao do tempo seja pequena ao longo do processo, 0 que
significa escrever que (dCI dt)=O (hip6tese esta que a rigor nao e necessaria, desde
que se disponha do registro de C=f(t) e se calcule 0 valor de dCI dt no instante da
realizacao do balance), obtendo-se entao:
(14.37)
As vaz6es molares podem ser convertidas em vaz6es volumetricas, lem
brando-se que:

RT
onde: Q = vazao volumetrica do gas (m
3
/ h )
P = pressao total do gas (atm)
R = constante universal dos gases (m
3.atm/mol.K)
T = temperatura absoluta do gas (K)
Assim, na Eq.14.37,fica-se com:
(14.38)
.. . .. .. . -_. . .-- - _ .- ._._.. . ... _. .. ._._ _..__.. ._.......... ................
306 .. e em biorreatores
onde: P; = pressao do gas na entrada do reator (atm)
T, = temperatura do gas na entrada do reator (K)
Qge = vazao volumetrica de gas na entrada do reator (m"IIi.)
P; = pressao do gas na saida do reator (atm)
T; = temperatura do gas na saida do reator (K)
Qgs = vazao volumetrica de gas na saida do reator (m
3/h)
Atraves da Eq. 14.38 e possivel calcular Q02X, desde que se disponha das
grandezas nela indicadas. Particularmente, deve-se salientar que naentrada do
gas (onde x
0 2e
=O,209, caso se esteja empregando ar atmosferico sem enriqueci
mento com 02) a pressao total (P
e
) consiste na somat6ria da pressao atmosferica,
da pressao na cabeca do reator e da pressao exercida pela coluna de Iiquido no
reator, conforme indicado na Eq. 14.8. Essa coluna Iiquida, que pode ser despre
zada para pequenos reatores de bancada, nao pode ser desconsiderada para rea
tores de grande porte, para os quais pode-se ter varies metros de altura (8 m, por
exemplo).
Caso se possa admitir que as vaz6es molares de entrada e saida sejam iguais
(0 que significa imaginar que cada mol de O
2
consumido gere urn mol de CO
2,
ou
seja, que 0 coeficiente respirat6rio RQ=(Qco2/Qo2)=1, onde Qco2=(1/X).(dC0
2/dt),
sendo que experimentalmente com frequencia observam-se valores superiores a
unidade, como por exemplo 1,1, ou mesmo superiores), alem de se admitir que os
gases de entrada e saida estejam na mesma temperatura e pressao (desprezan
do-se' a coluna Iiquida), entao resulta igualdade das vazoes volumetricas e, por
tanto, na Eq. 14.38 fica-se com:
(14.39)

E6bvio que a Eq. 14.39 e bern mais simples do que a Eq. 14.38, mas e preciso
prestar atencao nas simplificacoes introduzidas.
Caso se esteja utilizando ar atmosferico ese possa dispor da medida da fra
\ao molar de O
2
no gas efluente (X
0 2s
) e, simultaneamente, da fracao molar de CO
2
neste gas (X
C0 2s
) , pode-se efetuar urn balance de nitrogenio (componente inerte),
obtendo:
onde: X
N2e
= fracao molar de N
2
na entrada
X
N2s
= fracao molar de N
2
na saida
<Par = vazao molar de ar na entrada do reator (mol/h)
___ _ __
Transferenciade oxigenio e microbiana 307
ou, ainda, pode-se escrever:
e, finalmente:
A.
't' gs
= ar .0,79
l-x0
2s
-XC02S
(14.40)
onde: x co,s = fracao molar de CO
2
na saida.
Logo, e possivel calcular desde que se disponha adicionalmente de
xC02s' nao havendo assim a necessidade de medir esta vazao.
Saliente-se, ainda, que a disponibilidade de xC02s (considera-se, normal
mente, desprezivel 0 teor de CO
2
no ar de entrada) permite a realizacao do balan
c;ogasoso para 0 CO
2
e, portanto, 0 calculo de Q02' desde que se admita coeficien
te respirat6rio RQ igual a urn, conforme discutido acima. Essa euma alternativa
possivel, lembrando a maior robustez dos analisadores de CO
2
,
Quanto adeterminacao de kLa, esta erealizada imaginando-se estado estacio
nario para C, ou seja, atraves da Eq. 14.25, lembrando a restricao acima mencionada
sobre a necessidade de se contar corn uma concentracao de 02 dissolvido razoavel
mente distinta da concentracao de saturacao, a fim de nao se superestimar 0 valor
de kLa.
emprego do balance gasoso euma ferramenta bastante conveniente, pois
alem das vantagens acima indicadas sobre a efetivacao da medida fora do reator,
ainda se esta analisando 0 reator como urn todo e nao efetuando uma leitura ern
urn certo ponto do rea tor. Adicionalmente, essa metodologia nao interfere na ope
racao do reator, pois nada ealterado ern termos de sua conducao, nao havendo ne
cessidade de alterar vazao de ar ou frequencia de agitacao.
Trata-se, portanto, de uma medida "on-line", que conta corn 0 inconvenien
te, como as anteriores, de se necessitar do conhecimento de X para se saber 0 valor
de Q02' No entanto, 0 valor da grandeza Q02X ja eextremamente util, ern termos
de controle do processo. .
Urn outro problema dessa metodologia refere-se aquantificacaodas diferen
cas entre as fracoes molares de 02 e CO
2
dos gases de entrada e saida do reator,
para os instantes iniciais do processo fermentativo. De fato, para esses instantes,
normalmente a concentracao celular ebaixa, havendo urn baixo consumo de 02 e,
por conseguinte,um gas efluente corn composicao muito pr6xima ao gas de entra
da. Isso dificulta uma boa estimativa de Q02X, 0 que, ao lado da problematica da
deterrninacao de baixas concentracoes celulares, impede que se obtenha bons va
lores para Q02'
Essa observacao ede importancia para 0 emprego do balance gasoso de uma
forma geral, pois 0 usa de elevadas vaz6es de aeracao pode tambem expandir essa
dificuldade para todo 0 processo fermentativo recomenda-se empregar baixas va
z6es especificas de aeracao (=relac;ao Q/v), como, por exemplo, 0,2 vvm (volume
de ar por volume de meio por minuto), ern vez de 1,0 v vm como eusual ern pe
quenos reatores de bancada.
i
____ _ _
r
f
I'
I 308 Agita9io e aeracao em biorreatores
I
l
,
Claro esta que se a estimativa de Q
02
X e ruim, por se ter gases de entrada e
saida muito semelhantes, isto freqiientemente tambem significa ter C::C
s
, 0 que in
viabiliza as estimativas de kLa.
Deve-se lembrar que, quando se discutiu 0 metodo dinamico (uso de eletro
dos no Iiquido), urn serio problema residia em haver dificuldades para os instan
tes adiantados do processo fermentativo, quando a concentracao celular fosse
elevada, pois a concentracao de Oyno liquido pode atingir valores reduzidos.
No entanto, para os instantes iniciais tem-se baixos valores de X e elevados
valores de C, 0 que permite a realizacao do metoda dinamico, com relativa facili
dade. Adicionalmente, os baixos valores de X, causam urn decrescimo lento da
concentracao de O
2
dissolvido, quando se interrompe a aeracao, 0 que facilita 0
monitoramento de C atraves do sinal do eletrodo Cpo Quando se retoma a aeracao,
no entanto, verifica-se urn rapido aumento em C, 0 que continua a exigir 0 empre
. .
i i
~
go das metodologias para a correcao do sinal do eletrodo.
De qualquer maneira, 0 exposto acima permite conduir que 0 metodo dina
mico e 0 balance gasoso, enquanto duas metodologias distintas para as determina
coes de kLa e Q02, sao na realidade complementares. a metodo dinamico aplica-se
bern no inicio de urn processo descontinuo, ou para processos com baixa concen
tracao celular, enquanto que 0 balance gasoso encontra melhor aplicacao para
concentracoes celulares mais elevadas.
14.5 - Transferencia de oxigenio em sistemas agitados
e aerados
Sabendo-se como e possivel determinar experimentalmente os valores de
kLa durante urn processo fermentativo, surge naturalmente 0 interesse em corre
lacionar os valores deste coeficiente de transferencia com as condicoes de agita

<;ao e aeracao empregadas, objetivando sempre 0 atendimento da demanda Q


02
X,
conforme amplamente discutido no item 14.4.3.
Essa tarefa exige que se aborde, em urn primeiro momento, a operacao uni
taria de agitacao (ou mistura), a fim de se contar com algumas informacoes funda
mentais sobre esta operacao, a qual objetiva estudar a transferencia de energia a
urn liquido submetido aagitacao, 0 que permite 0 dimensionamento desta opera
<;ao muito freqiiente na industria quimica,
14.5.1 - Agita<;ao de Ifquidos newtonianos
as objetivos de uma operacao de mistura podem ser tornar (ou manter) ho
mogenea uma solucao, manter s6lidos em suspensao, ou, ainda, tornar eficientes
os transportes de calor e massa. Esses objetivos podem ser atingidos na medida
em que se busque movimentar 0 Iiquido no interior de urn recipiente, ou seja,
procura-se transmitir potencia (energia/tempo) ao lfquido, atraves de urn siste
ma de agitacao.
......1IiIIiIIoiII1Iii.liiooI......... . L J L ~ _ - - - - - - - - - ~ - - - - - - - . - - - - - - - - - -
Transferenciade oxigenioem sistemas agitados e aerados 309
A determinacao dessa energia transmitida pode ser efetuada pelo emprego
de dinamometros, "strain-gage", ou por balance termico, lernbrando-se, no entan
to, que sempre se busca determinar a potencia efetivamente transmitida ao liqui
do e nao a potencia total despendida (sempre ocorrem perdas de potencia nos se
los de entrada do eixo no biorreator, no sistema de reducao de velocidade, ou no
pr6prio motor). Os detalhes dessas metodologias de medida devem ser observa
dos nos trabalhos que serao mencionados a seguir.
Conforme sugerido na Figura 14.9, eintuitivo imaginar que quando se faz
girar urn dado impelidor, imerso em urn liquido, a capacidade desta turbina de
transmitir potencia ao liquido depende de uma enorme quantidade de possiveis
variaveis. De fato, 0 tipo de impelidor usado, seu diarnetro, a freqtiencia do
agitador, 0 diametro do tanque, a altura da col una liquida, a existencia ou nao
de chicanas e sua largura, as caracteristicas do liquido (densidade, viscosida
de), sao apenas alguns exemplos das possiveis variaveis que afetam a potencia
que se transfere a urn Iiquido submetido a agitacao.
Uma possivel estrategia para abordar esse tipo de situacao, consiste em Ian
car mao da analise dimensional, atraves da qual se busca juntar as variaveis em
grupos adimensionais e, a seguir, obter as correlacoes entre esses adimensionais.
Justamente essa foi a estrategia empregada por RUSHTON et al.,z21 os quais
demonstraram que:
(14.41)
onde: N; = Numero de potencia (=P/N
3D
j
Sp)
(adimensional)
N
Re
= Niimero de Reynolds (adimensional)
N
Fr
= Niimero de Froude (=N
2DJ
g) (adimensional)
P = potencia transmitida na agitacao (W)
N = frequencia de agitacao (rps ou S-l)
p = densidade do liquido (kg Zm")
Jl = viscosidade do liquido (kg Zrn-s)
g = aceleracao da gravidade (m/S2)
H
D, = diametro do impelidor (m)
HL/Dj,DT/Dj,WB/Dj,'" = adimensionais ligados ageometria do reator
L
= altura da coluna de liquido (m)
D
T
= diametro do tanque (m)
WB= largura da chicana (m)
C = distancia do impelidor ao fundo do rea tor (m)
Wj = altura da pa da turbina (m)
- --- -... --.--..--..".-.-.- ----- - ._-.-.-- -... ...__.... - . .--.-- ... .-.-..----.-..- -. -.-.- - ------ ----..--- - -- - .__...JL---,.__ _ _
3I 0 . e aeracao em biorreatores
i
W
S
.
i
i
i

............._....,.... ................ ............-......................... ......
J:!...W.
-
OJ
-;1-1'
!'Ill

I C
i
Figura 14.9 - Esquema de um tanque agitado por turbina
de pas planas, com indicacao de dimens6es importantes na
transrnissao de potencia ao Ifquido.


RUSHTON et al.
2o
,21 efetuaram determinacoes de potencia transmitida para
um grande ruimero de impelidores e em diferentes geometrias. Na Figura 14.10
encontram-se dados para a turbina de disco e pas planas ("flat-blade turbine") e
para 0 impelidor tipo helice ("marine propeller"- helice impelidora de navios),
que sao os impelidores mais freqiientemente empregados em processos fermenta
tivos. Esses dados foram obtidos atraves da variacao de N, D
i
, P e fl em tanques ge
ometricamente semelhantes, providos com chicanas, indicando-se na Tabela 14.3
as relacoes geometricas utilizadas, as quais sao entendidas como relacoes padrao,
conforme discutido no item 14.2. Em distintas geometrias as curvas sao semelhan
tes.porem deslocadas em relacao as curvas indicadas na Figura 14.10..
Para essa situacao de tanques geometricamente semelhantes e ainda dotados
com chicanas, que evitam a formacao de v6rtice, nao ocorrendo, portanto, a parti
cipacao do ruimero de Froude, a Eq. 14.41 fica:
Helice
(marine propeller)
/
Turbina com disco e pas planas
/
10
10
0,1 '--...........................................----'--.......--....................'--...............
1
(14.42)
100

3D S
Figura 14.10 - Nurnero de potencia (N p==PIN p) em func;ao do Numero de Reynolds para j
impelidores tipo pasplanase tipo helice ("propeller"). Dados obtidos paraasgeometrias indicadasnaTabela 14.3.
Transferencia de oxigenio em sistemas agitados e aerados 31-I
Tabela 14.3 - Relacoes geornetricas relativas aos dadosda Figura 14.10. Tanques com4 chicanas.
Tipo de
impelidor
DT/D
i
HL/D
i
C/D
i
Li/D
i
Wi/D
i
WB/D
T
Turbina com
6 pas planas
3 3 1 0,25 0,2 0,10
Helice
(pitch=D
i
)
3 3 1 - - 0,10
Na Figura 14.10 observa-se a possibilidade de definir tres distintas regi6es: a
regiao laminar (N
Re<10),
uma regiao de transicao e, finalmente, a regiao turbulen
ta para elevados valores do mimero de Reynolds (N
Re>10
4
) .
Na regiao laminar constata-se ql:le:
(14.43)
Na regiao de fluxo turbulento:
(14.44)
As Eqs.14.43 e 14.44 indicam que, para 0 dimensionamento de sistemas de
agitacao na regiao laminar, a potencia varia proporcionalmente com 0 quadra
do da frequencia de agitacao e com 0 cuba do diametro do impelidor, alern de
depender da viscosidade do fluido. Ja na regiao turbulenta, na qual freqiiente
mente se procura efetuar os dimensionamentos, a potencia e proporcional ao
cuba da frequencia e aquinta potencia do diametro do impelidor, dependendo
tambem da derisidade do fluido e nao da viscosidade.
Conforme se pode observar na Figura 14.10, na regiao turbulenta Np =6,
sendo este 0 'valor mais elevado dentre todas as turbinas ensaiadas por
RUSHTON. Alern disso, observa-se que na regiao de transicao ha uma tenden
cia de queda do Np , 0 que einteressante para urn processo fermentativo quan
do ocorre aumento na viscosidade do meioe, portanto, uma reducao no N
Re

Assim, caso 0 sistema de agitacao tenha sido dimensionado na regiao turbu
lenta, operando com uma. frequencia de agitacao constante, nao havera risco
para 0 motor com 0 progresso da fermentacao, pelo menos ate a regiao lami
nar. Essas sao duels raz6es pelas quais freqiientemente se -emprega turbina
tipo pas planas, para a agitacao e transferencia de oxigenio em urn processo
aerobic.
Na verdade, 0 motivo que determina uma menor transmissao de paten
cia ao Iiquido por uma turbina tipo helice ("propeller"), reside no fato de que
este impelidor tern urn fluxo de descarga do liquido na direcao axial (para baixo
- - - - - - ' - - - - ' - - - ~ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ~ . _ - - - - - - - - - - - - - . ---._-, .... ~ - ~ ~ - ~ ........................... - - ~
312 Agitao e aera o em biorreatores
na direcao do eixo; vide Fig. 14.11), enquanto que uma turbina de pas planas apre
senta fluxo de descarga na direcao radial (na direcao das paredes do tanque; vide
Fig. 14.12) . Assim, sao turbinas que podem ter funcoes distintas em urn reator,
mas em termos de transferencia de potencia, sem dtivida, a turbina tipo
"flat-blade" emais efetiva.
- ,-
t
t
t
I"
Ii
\t
I
i )
'"'----..L "" ----. It
Figura 14.1 1 - Escoamento axial para impelidorestipo helice ("propeller") em tanque com chicanas.
I
!!
I

Figura 14.12 - Escoamento radial paraimpelidorestipodiscoe pas planas ("flat-blade") emtanquecomchicanas.


Apenas para se ter uma ideia da importancia do tipo de turbina, em termos
da localizacao da curva de Np=!(N
Re
) , dados fornecidos por KING et al.
22
permitem
conduir que para uma turbina com 4 pas planas obtem-se Np=2,2, valor este bern
inferior ao mencionado anteriormente (turbina com 6 pas planas). Alem disso, es
,.
ses autores observaram uma reducao no N, para valores elevados do N
Re
, em vir
tude da incorporacao de ar da superficie, quando se agita a elevadas frequencias
i:
i'
II
i
de rotacao.
i;1
b ,
Da mesma maneira a geometria do sistema interfere muito na potencia
t1
f! /:'
transmitida como, por exemplo, a altura da pa (Wi) da turbina, assim como a dis
l
i.. ' I;' ;
tancia da turbina ao fundo do tanque, ocorrendo a maxima transmissao de poten
,1
: ,I
:
i !f
Ii
cia na condicao (C/D
i
)=l , conforme indicado por BATES et at." Esses autores, as
:i'
sim como outros, encontraram N p=5, para as mesmas condicoes geometricas e
Ii r
mesma turbina de pas planas que a empregada por RUSHTON, valor este diferente
"
Ii!

do indicado anteriormente.
.,1
'I
ii
Transferenda de oxigenio em sistemas agitados e aerados 3I 3
Como freqiientemente se tern 0 problema .de calcular a potencia transmitida
em sistemas geometricamente distintos daqueles ensaiados por RUSHTON, AlBA
et al.lOpropoem multiplicar a potencia, estimada atraves dos dados de RUSHTON,
pelo seguinte fator de correcao:
f = (DTIDi)*(HLIDi)* (14.45)
C (D
T
I DJ(H
L
I D
j
)
onde: (DTI DJ e (HLI Dj ) relacoes geometricas de RUSHTON.
(DT/D jf e (HL/Djf relacoes geometricas distintas ern relacao as propostas
por RUSHTON.
Essa expressao deve, no entanto, ser empregada com a devida cautela, tendo
em vista a interferencia da geometria que, as vezes, e diffcil de ser prevista de for
ma mais conveniente.
Vma outra importante questao, tendo em vista a realidade de urn processo
fermentativo, reside na freqiiente necessidade de se empregar rnais do que urn im
pelidor em urn mesmo eixo, situacao esta naoexaminada por RUSHTON et al.zo,zl
E bastante intuitivo imaginar que, caso se pretenda colocar dois impelidores
em urn eixo, se estes estiverem muito proximos urn do outro nao se tera a maxima
eficiencia na transferencia de potencia, assim como nao se atingira a melhor condicao
de mistura. Por esta razao, encontra-se na literatura'" a seguinte recomendacao:
D, < H
j
< 2D
j
(onde: Hi=disHincia entre impelidores)
e sendo 0 ruimero de impelidores definido da seguinte forma:
H
L
-D H
L
-2D
- - - - ' ~ _ - = - l > NQdeimpelidores > 1
o, o,
Em termos quantitativos, ha presentemente algumas mencoes na literatura
sobre a potencia transmitida ao liquido por duas turbinas em relacao a que se obser
va com apenas uma turbina. Na Figura 14.13 da-seuma ideia dos resultados obti
dos por HUDCOVA et al.z
5
(dados experimentais foram omitidos), na qual se observa
que ocorre a transferencia do dobro de potencia apenas quando (Hi I Dj 1,8.
as resultados indicados na Figura 14.13 foram obtidos com a geometria proxi
ma a indicada na Tabela 14.3, para a turbina de pas planas, apenas que varies dados
experimentais foram obtidos com (HdD
T)=2.
Quando as turbinas se encontrampro
ximas [(H)D
j
)<1,8], 0 fluxo de Iiquido causado por cada uma delas interfere no de
sempenho das outras turbinas, nao permitindo 0 maximo de potencia transmitida.
Nessa direcao, BATES et al}4 apesar de obterem urn perfil de variacao distin
to do indicado na Figura 14.13, possivelmente por empregarem turbinas de pas
planas distintas das anteriores, indicaram que (FzIP
l
) == 2 quando (H)Dj 1,3..
Esse dado reforca a ideia de que, acima de urn certo espacamento entre os impeli
dores, 0 qual depende do tipo de turbina empregada, esses impelidores passam a
operar de forma independente, 0 que permite estimar a potencia transmitida para
sistemas com multiplas turbinas.
314 Agitac;ao e em biorreatores
P2/P1
2,2r-------------'--------------,
2,0
1,8
1,6
1,4
3,0
Figura 14.13 - Rela<;aa entre a patencia transmitidapar duasturbinas em rela<;aa atransferida par umaturbina
(P2/PI), em fun<;aa da rela<;aa HID
j
, paraturbina de pas planas (Hj=distinciaentre as turbinas).25
14.5.2 - de Ifquidos newtonianos submetidos a aeracao.
As inforrnacoes contidas no item anterior permitem efetuar estimativas
de potencia transmitida para urn Iiquido, por urn determinado sistema deagi
tacao, quando nao se esta praticando a aeracao (borbulhamento de ar), ou
seja, quando ha apenas a preocupacao com 0 problema da mistura. Quando ha
preocupacao com a transferencia de oxigenio, havera tarnbern a necessidade
de aerar 0 liquido submetido a agitacao, fato este que provocara alteracoes
sensiveis na potencia transmitida.
De fato, quando se tern bolhas de ar suspensas em urn Iiquido, ocorre
uma reducao na densidade aparente, 0 que deve provocar uma reduiao na po
tencia que se consegue transmitir em relacao apotencia transferida ao liquido
nao aerado.
A fim de estudar esse tipo de situacao, mais complexa do que a anterior,
OHYAMA; ENDOH
26
definiram urn adimensional, que chamaram de Numero de
Aeracao (N
A
) , atraves da seguinte expressao:
N _Qlof_ Q
(14.46)
A - NO . -
I I
onde: N
A
= Numero de Aeracao (adimensional)
Q = vazao de arIm"Is)
NO
j
=velocidade da extremidade do impelidor (m/s)
A seguir, esses autores propuseram a construcao de graficos nos quais
colocavam a relacao entre a potencia transmitida no sistema aerado e a poten
Transferenda de oxigenio em sistemasagitados e aerados 3 I 5
cia sem aeracao (Pg/ P), ern funcao deste ruimero de aeracao sendo, portanto,
relacoes entre mimeros adimensionais.
Urn exemplo desse tipo de resultado experimental encontra-se na Figura
14.14, resultados esses obtidos por HUDCOVA et al./
5
novamente obtidos ern
urn sistema corn dimensoes padronizadas (Tab. 14.3) e duas turbinas corn seis
pas planas, distanciadas de Hj=3Di
, condicao para a qual as turbinas se com
portavam de forma razoavelrnente independente. Saliente-se, tambern, que es
ses autores realizaram medidas de potencia corn dois sistemas "strain-gage",
urn deles colocado entre os impelidores e 0 outro acima dos dois, de forma a
obter os dados de potencia para cada impelidor.
Conforme se pode observar, ocorre uma sensivel queda na potencia transmiti
da, a qual e funcao da vazao de ar empregada. Particularmente, a turbina colocada na
parte inferior, situada logo acima do dispersor de ar, e a que sofre uma maior perda
de potencia transmitida, justamente por receber diretamente todo 0 fluxo de ar,
tendo a importante tarefa de dispersar este ar. Ja a turbina colocada na parte supe
rior conta corn uma menor perda de potencia transmitida, pois ela nao recebe todo
o fluxo de ar, 0 qual ja foi dispersado. Dessa forma, as duas turbinas juntas tam
bern nao conseguem transmitir a mesma potencia que a observada no sistema sem
aeracao, mas 0 valor de Pg/P e superior ao obtido corn apenas urn impelidor.
N=25 S-1
(H/D
j
)=3
___
0,8
0,6
0,4
X Impelidor inferior
*
+ Os dois impelidores
Impelidor superior
0,05 0,10 N 0,15 0,20
A
Figura 14./4 - P / P em func;ao de N
A
= Q/ND
j
3
para sistema de agita<;ao com duas turbinas de pas planas.
25
g
Uma interessante observacao foi a efetuada por MARTINEZ et al." no que se
refere ao emprego de distintos dispersores de ar. Esses autores indicaram que 0
uso de aneis no lugar de simples orificios, permiteobter uma maior potencia
transmitida pelo sistema de agitacao. Quando empregaramum anel corn urn dia
metro superior ao diametro do impelidor, obtiveram valores muito maiores da re
lacao Pg/P, para uma ampla faixa de valores de N
A
: Esses fatos comprovam
.. ..-__ . - -_... __.- ..._--...-...._,-- - - -- - -- - - - - - - ------ --- - -- -- --
3 16 Agita910 e aeracao em biorreatores
novamente a importancia, em termos de transferencia de energia, de se procurar
evitar que urn maior fluxo de ar incida diretamente sobre a turbina.
MICHEL; MILLER}Sa partir do exame de seus resultados experimentais, pro
puseram a seguinte equacao:
(14.47)
onde: Pg=potencia transmitida ao liquido sob aeracao (watt-W)
Na Eq. 14.47 a constante de proporcionalidade efuncao da geometria do sis
tema, mas, tendo em vista que esta correlacao nao foi estabelecida entre mimeros
adimensionais, ela depende tambem das unidades consideradas para as varias
grandezas envolvidas.
Assim, considerando 0 Sistema Internacional de unidades (S.L), MILLER
29
propoe:
2
P ND
3)0,45
(14.48)
Pg = 0,70
{
QO,56'
com: Pge P em W
Nems
1
Djemm
Qemm
3/s.
A expressao de MICHEL; MILLER,28 apesar da dificuldade de nao propor
uma relacao entre ruimeros adimensionais, costuma ajustar-se muito bern a da
dos experimentais, rp.esmo obtidos em sistemas geometricamente distintos,
conforme sera comentado no item seguinte.
Antes, porem, uma duvida adicional merece ser esclarecida. 0 motor
que ira acionar 0 sistema de agitacao deve ser dimensionado segundo uma
dada potencia Pg (adicionada da perda de potencia no selo da cabeca do rea
tor), mas nos instantes iniciais de operacao, quando se estiver dissolvendo os
nutrientes e promovendo a esterilizacao, nao se estara promovendo a aeracao
do meio e, caso 0 reator ja esteja operando no volume de reacao pretendido, a
potencia que se estara transmitindo sera P e nao Ps:
Caso se possa prever urn sistema de agitacao que permita a variacao da
frequencia de agitacao (N), segundo a Eq. 14.44, deve-se prever uma frequen
cia suficientemente baixa que permita a operacao sem riscos para 0 motor.
Alternativamente, ha a possibilidade de se colocar dobradicas em algumas la
minas das turbinas tipo "flat-blade" (por exemplo, em urn impelidor de seis
pas planas, tres delas podem conter dobradicas), de forma que quando se esti
ver esterilizando, faz-se 0 motor girar na direcao de fechamento das pas dota
das de dobradicas, invertendo-se 0 sentido de rotacao do motor' tao logo se
inicie a aeracao, quando entao todas as laminas se abrirao.
~ . ~ - - - _ . _-,--_.._-- --_.,---,._.-_._..
-- - - ___ _ __ , _ - - . _ _ - .
- -
--- ----_ -- - . . - - -----;-- - - .... _ ,-- . . . -_ --- ..__. __-' ......._. --_ - - " - - ' - ' - ~ ' - : : " " - - - - ' - - - .
. "
. '. ;
Transtereoda de oxigenio em sistemas agitados e aerados 317
14.5.3 - e aeracao de Ifquidos nao-newtonianos
Ate este ponto tratou-se apenas de situacoes nas quais 0 interesse reside
na agitacao e aeracao de Iiquidos newtonianos, mas sabe-se que durante urn
processo fermentativo e possivel ocorrerem alteracoes significativas no caldo,
podendo este passar acondicao de liquido nao-newtoniano, como e 0 caso de
processos envolvendo 0 !culti vo de fungos filamentosos.
Ebern evidente que essa situacao e mais complexa, exigindo urn tratamen
to especial, sendo 0 caso mais freqiiente 0 surgimento de urn comportamento
pseudoplastico.
Na Figura 14.15 indicam-se as possiveis formas de variacao da tensao de
cisalhamento (r) em funcao do gradiente de velocidade (dv/dr), para alguns 11
quidos tipicos.
Tensao de Cisalhamento (r)
newtoniano
,
,
,
,
,
-,
Dilatante
Gradiente de velocidade (dv/df)
Figura 14.15 - Tensaode cisalhamento (,) em fun<;ao do gradiente de velocidade (dv/dr), paraIfquido newtoniano
e Ifquidos nao-newtonianos.
as liquidos newtonianos caracterizam-se por apresentar uma proporcionali
dade entre a tensao de cisalhamento e 0 gradiente de velocidade, sendo esta cons
tante de proporcionalidade definida como a viscosidade do Iiquido, ou seja:
(14.49)
onde: 't = tensao de cisalhamento (kg Zm.s-, Pa)
l!= viscosidade do liquido (kg/m.s, Pa.s)
(dv/dr) = gradiente de velocidade na direcao radial (8-
1)
.__ _ .,_._ _ .. _ __ ..,__ _.. __ _ _ __ _. _ _._ ._....L.;.
-- -- --- - - - - - - - -
318 .Agita"ao e aeracao em biorreatores
Para 0 liquido binghamiano pode-se escrever:
(14.50)
onde: y = coeficiente de rigidez (kg/m.s)
Para alguns fluidos nao-newtonianos, ebastante freqiiente aplicar-se a cha
mada lei de potencia, ou seja:
dV)n
(14.51)
't =K(dr
onde: K = Indice de consistencia (kg m" . sn-2 ou g . ern" . s'")
n = Indice de comportamento do fluxo (adimensional)
Obviamente na Eq. 14.51 se n = 1 trata-se de urn lfquido newtoniano; se
o< n < 1 trata-se de urn lfquido pseudoplastico: quando n > 1 trata-se de urn If
quido dilatante.
Ainda, na Figura 14.15, caso se imaginasse uma reta unindo a origem
(r = 0; dv / dr = 0) com urn determinado ponto sobre a curva de urn fluido pseu
doplastico, por exemplo, pode-se definir uma viscosidade aparente, como 0
coeficiente angular desta reta, ou seja:
(14.52)
onde: J-l
ap
= viscosidade aparente (kg/m . s)
Conforme se pode observar na Figura 14.15, essa viscosidade aparente
varia com 0 valor do gradiente de velocidade, sendo que, para 0 lfquido pseu
doplastico, ela diminui com 0 aumento de dv / dr. Dessa forma, ao se submeter
urn dado fluido pseudoplastico a diferentes valores de dv / dr, em urn vi scosi
metro, pode-se obter distintos valores de J-l e, com esta serie de dados, efetuar
ap
a deterrninacao dos parametres Ken, ou seJa:
10gJ-l ap =logK +(n -l)log(dv/dr) (14.53)
Essa equacao indica que a relacao entre 10gJ-l em funcao do log(dv/ dr) e
ap
linear, 0 que permite 0 calculo dos parametres que caracterizam 0 liquido.
Na Figura 14.16 encontra-se urn exemplo de dados de caracterizacao reo16
gica, ao longo de urn cultivo de Aspergillu s awamori, sendo os valores de Ken plo
tados em funcao da concentracao celular.
3o
Conforme se pode observar, os valores de n e K variam ao longo do tem
po, ou com aconcentracao celular, havendo inclusive a possibilidade de ajus
te de uma funcao exponencial entre os valores de K e X (K=0,51e
o
,31X) , 0 que
Transferendadeoxigenioemsistemas agitadose aerados 3 I 9
mostra a influencia do crescimento das celulas na alteracao das caracterfsticas
reol6gicas do meio, 0 que claramente torna 0 problema bern rna is complexo.
Para uma melhor compreensao da dificuldade em se ter de manusear urn
liquido nao-newtoniano, basta lembrar que para estes fluidos nao epossivel
definir uma dada viscosidade, pois essa depende do valor de dv / dr que esta
ocorrendo no tanque, gradiente de velocidade este imposto pelo impelidor.
Dessa forma, nao se pede definir urn dado valor para 0 ruimero de Reynolds
(N
Re
, Eq. 14.41) e, assim, fica impossivel obter a correlacao entre Np=!(N
Re
) ,
conforme indicado na Figura 14.10.
o que pode ser feito etrabalhar com a viscosidade aparente (/lap, Eq. 14.52)
e definir urn Niimero de Reynolds modificado. icomo sendo:
N =
ND
lp (14.54)
Re m
/lap
indice de f1uxo (n) indice de consistllncia (K)
1,2 r------------------------, 35
" ,. -+.;1
+ : 30
1,0
K=0,51exp (0,31.x) + +
+
25
20 +
15
10
5
__.l__.....L__L__J__ ___l._-JO
6 8 10 12 14 16
X(giL)
Figura 14.16 - Valoresdo fndicede comportamento do f1uxo (n, adimensional) e do fndice de consistencia(K, em
g.cm-I .sn-2) em da concentracao celular (X), durante cult ivo de Aspergillus ovatiori.30 .
Varios pesquisadores abordaram esse problema, ressaltando-se a con
tribuicao de METZNER; OTT0
31
e CALDERBANK; MOO-YOUNG, 32 que empre
garam a seguinte metodologia experimental, aplicavel para urn dado liquido
nao-newtoniano:
a) inicialmente agitaram 0 liquido nao-newtoniano num determinado tan
que com distintas frequencies de agitacao