Anda di halaman 1dari 4

UJI AKTIVITAS ENZIM AMILASE Aktivitas enzim merupakan suatu ukuran kuantitas dari aktivitas enzim per volume

larutan, serta unit aktivitas enzim dinyatakan sebagai sebagai jumlah mol substrat yang dikonversi per unit waktu = 1 mol/ menit (Academic Dictionaries and Encyclopedies, 2009). Pada uji aktivitas enzim, aktivitas amylase dari enzim kasar ditentukan dengan cara mengukur jumlah gula pereduksi yang dihasilkan oleh aktivitas hidrolisis enzim terhadap substrat pati. Caranya 250l enzim kasar ditambahkan pada 1 ml amilum 1% untuk kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu 42oC dengan tujuan agar enzim bereaksi dengan substrat, kemudian aktivitas enzim tersebut didinginkan dengan jalan pemanasan selama 10 menit pada suhu 100oC dan selanjutnya didinginkan. Setelah pendinginan mencapai suhu ruang, ditambahkan pereaksi Somogy-Nelson sebanyak 1 ml dan kemudian dipanaskan kembali pada suhu 100oC sampai mendidih selama 20 menit dan didinginkan kembali. Sesuai dengan Kombong (2004), dalam uji aktivitas enzim ditambahkan pereaksi Somogy-Nelson dan dipanaskan dalam air mendidih sampai terbentuk warna kuning kecoklatan kemudian larutan didinginkan samapai suhu kamar atau didinginkan di bawah air mengalir dan diukur absorbansinya pada spektronik-20D pada panjang gelombang 550 nm. Perhitungan unit aktivitas enzim amylase dinyatakan dalam Unit Aktivitas Enzim yaitu banyaknya g gula pereduksi yang dihasilkan oleh 1 ml enzim dalam setiap menit. Pengukuran aktivitas enzim dilakukan dengan mengkonversikan nilai absorbansi yang diperoleh ke dalam persamaan linear kurva standar gula pereduksi, kemudian dihitung dengan rumus sebagai berikut (Sutrisno, 2007) : AE =
x.V . fp p.q

Dimana : AE = aktivitas enzim V = volume total sampel tiap tabung (ml) q = waktu inkubasi p = jumlah enzim (ml) x = konsentrasi gula pereduksi (g/ml)

fp = faktor pengenceran Data praktikum terhadap pengujian aktivitas amilase pada organ hati adalah sebagai berikut : Perhitungan Aktivitas Ekstrak Enzim Amilase Kasar Tabel Hasil pengukuran transmitansi glukosa hasil hidrolisis ekstrak enzim amilase kasar dari berbagai jaringan hewan Kelompok Sampel % Transmitasi Ulangan 1 Ulangan 2 1. Usus 28 32 2. Hepar 33 46 3. Paru 65 51 Tabel Hasil Analisa Spectrofotometri Larutan Glukosa hasil hidrolisis ekstrak enzim amilase kasar dari berbagai jaringan hewan
Kelompok 1 1 (usus) 2 (hati) 3 (paru) 28,00 46,00 65,00 %T 2 32,00 33,00 51,00 1 3,57 2,17 1,54 T 2 3,13 3,03 1,96 1 0,5 5 0,3 4 0,1 9 A 2 0,49 0,48 0,29 Konsentrasi glukosa (ppm 1 2 19,7 4 17,67 12,0 4 17,20 6,68 10,44 Rerata Konsentrasi Glukosa 18,71 14,62 8,56 Unit Aktivitas (U) 2,70 2,11 0,62

Penentuan konsentrasi glukosa dari kurva baku Persamaan regresi linier glukosa standar: y = 0.028x Dimana: Y = absorbansi X = konsentrasi (ppm) 1. Usus Ulangan 1 y = 0,028x 0,55 = 0,028 x X = 19,74 ppm 2. Hati Ulangan 1 y = 0,028x 0,34 = 0,028 x Ulangan 2 y = 0,028x 0,48 = 0,028 x Rata-rata : X = 14,62 ppm Ulangan 2 y = 0,028x 0,49 = 0,028 x X = 17,67 ppm Rata-rata : X = 18,71 ppm

X = 12,04 ppm 3. Paru Ulangan 1 y = 0,028x 0,19 = 0,028 x X = 6,68 ppm Pengukuran aktivitas enzim

= 17,20 ppm Rata-rata : X = 8,56 ppm

Ulangan 2 y = 0,028x 0,29 = 0,028 x X = 10,44 ppm

Unit Aktivitas (U) = Mr glukosa x p.q x fp Dimana: V= volume total (ml) P= volume enzim (ml) q= waktu reaksi /inkubasi (menit) fp= faktor pengenceran 1. Usus Unit Aktivitas (U) = Mr glukosa x p.q x fp = 180,157 g / mol x 0,25 ml.10 menit x 20 = 2. Hati Unit Aktivitas (U) = Mr glukosa x p.q x fp = 180,157 g / mol x 0,25 ml.10 menit x 20 = 2,11 U 3. Paru Unit Aktivitas (U) = Mr glukosa x p.q x fp
14,62 ppm 3,25 ml 18,71 ppm 3,25 ml

[ glukosa ]

[ glukosa ]

2.7 U

[ glukosa ]

[ glukosa ]

= 180,157 g / mol x 0,25 ml.10 menit x 10 = 0.62 U

14,62 ppm

3,25 ml

Academic

Dictionaries

and

Encyclopedies.

2009.

Enzyme

Activity.

www.dio.academic.ru Kombong, H. 2004. Evaluasi Daya Hidrolitik Enzim Glukoamilase dari Filtrat Kultur Aspergillus niger. Jurnal ILMU DASAR Vol.5 No. 1, hal 16-20. Sutrisno. 2007. Isolasi dan Karakterisasi Ekstrak Kasar Enzim Xilanase dari Aspergilus niger. Jurusan Kimia, FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.

Anda mungkin juga menyukai