Anda di halaman 1dari 9

Riyanpharmacy.blogspot.

com

KINETIKA REAKSI ENZIM

TUJUAN PERCOBAAN
Mahasiswa dapat memahami kinetika reaksi enzim dan factor-faktor yang mempengaruhi kondisi optimum suatu enzim.

PRINSIP PERCOBAAN
Enzim merupakan protein yang mengkatalis reaksi biokimia yang secara kolektif membentuk metabolisme perantara. Laju awal (Vo) dari reaksi yang dikatalisis enzim meningkat dengan bertambahnya konsentrasi substrat hingga dicapai keadaan dimana penambahan substrat tidak lagi meningkatkan laju awal reaksi dan bila semua enzim dalam keadaan ES (jenuh oleh substrat) maka laju reaksi akan mencapai nilai maksimum (Vmaks)

ALAT DAN BAHAN


Alat Stopwatch Tabung reaksi Pengaduk gelas Pipet ukur 1 ml, 10 ml Pipet tetes Water bath 350C Kertas saring Kuvet Spektofotometer/calorimeter Corong kaca

Bahan

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

Larutan TCA 20 % Larutan kasein 2 % (b/v) Larutan dapar fosfat 0.1 M PH 8.0

Aquadest Reagen folin-ciacalteu Larutan tripsin (10 mg tripsin dalam 25 ml dapar fosfat 0.1 M pH 8.0)

PROSEDUR KERJA
Tabung t= 0 menit

Masukkan larutan buffer fosfat dan tripsin kedalam tabung dan tambahkan masing masing 3 ml larutan TCA 20 % aduk larutan tersebut dengan perlahan-lahan,lalu inkubasikan dalam water bath 350C selama 30 menit.Setelah larutan diinkubasi tambahkan larutan kasein sesuai table yang ditentukan dan diamkan dalam air es selama 20 menit,kemudian sentrifugasikan masing-masing tabung selama 10 menit dan saring untuk diambil supernatannya dan filtrate diuji lebih lanjut dengan metode anson.

Tabung t = 20 menit

Larutan buffer fosfat dan tripsin kedalam tabung dan tambahkan 3 ml larutan TCA 20 % pada setiap tabung dan inkubasikan masing masing tabung selama 5 menit pada waterbath 350C sambil diaduk perlahan (jangan sampai berbusa) setelah itu inkubasikan kembali larutan tersebut selama 20 menit dihitung setelah penambahan tripsin dan hentikan penambahan 3 ml TCA 20 % kedalam masing-masing tabung dan aduk dengan kuat dan diamkan selama 20 menit dalam air es untuk menyempurnakan pengendapan lalu sentrifugasikan selama 10 menit kemudian saring untuk di ambil supernatannya dan filtrate yang akan di uji lebih lanjut dengan metode anson.

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

DATA PENGAMATAN GAMBAR KETERANGAN


Tgl.Praktikum : 23 Desember 2008 Masa inkubasi : 35o 20 menit Masa sentrifugasi : Hasil : bening, terdapat endapan sedikit

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

GAMBAR

KETERANGAN
Medium : FTM Kultur : Sampel Insto Tgl.Praktikum : 16 Desember 2008 Tgl.Pengamatan : 18 Desember 2008 Masa inkubasi : 37o 48 jam

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

PEMBAHASAN

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

PERHITUNGAN A = At20 At0 t = t20 t0 V = A/t S = Aliquot 2% Vtot Persamaan michaelis - menten Vo = Vmaks [S] [S] + kM 1 = [S] + kM Vo Vmaks [S] 1 = kM + [S] Vmaks [S] 1 + [S] 1 Vmaks

Vo Vmaks [S] 1 = Vo kM Vmaks

Persamaan Lineweaver burk.

Adalah transformasi persamaan michaelis menten, bagi enzim yang mengikuti persamaan michaelis menten membentuk garis lurus terhadap pemetaan 1/Vo dengan 1/[S], memiliki gradient Km/ V maks.

Table perhitungan
A Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5 0,026 0,031 0,025 0,17 0,06 V 0,0013 0,00155 0,00125 0,00085 0.0003 [S] x 10-3 0,2857 1,429 2,8571 8,5714 14,2857 1/Vo 769,23 645,16 800 1176,47 3333,33 1/[S] 3500,175 699,79 350,005 116,667 69,98

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

grafik tabel pengamatan

4000 3000 y = -565.95x + 3042.7 R2 = 0.628

1/v

2000 1000 0

69.98 116.67 350.01 699.79 3500.2 1/s


1 = Vo kM Vmaks 1 + [S] 1 Vmaks

= bx + a = - 565,95x + 3042,7

1/Vmaks = 3042,7 Vmaks = 0.0003287 Km/Vmaks = -565,95 Km = -565,95 . 0,0003287 = 0.1926018

Grafik menurun di karenakan beberapa hal,yaitu : - A pada t20 dan t0 memiliki harga yang hampir sama, membuat harga Vmaks
cenderung turun.

- Perbedaan waktu penambahan tripsin. - Kesalahan prosedur. - Kesalahan perhitungan dan pembulatan angka
Dari data tersebut berarti enzim tidak mengikuti persamaan Michael - marten

Mipa-farmasi.blogspot.com

Riyanpharmacy.blogspot.com

KESIMPULAN

DAFTAR PUSTAKA
Fessenden dan Fessenden. 1997. Dasar-Dasar Kimia Organik. Binarupa Aksara:Jakarta Fessenden dan Fessenden. Kimia Organik Edisi Ketiga Jilid 2. Erlangga: Jakarta Lehninger.1982.Dasar Dasar Biokimia.Erlangga:Jakarta Sunarya, Yayan. 2006. Mudah dan Aktif Belajar Kimia. Binarupa Aksara: Jakarta Wikipedia. Protein. URL:http://en.wikipedia.org/wiki/protein. Accesed October 20, 2008 Wikipedia. Asam Amino. URL:http://en.wikipedia.org/wiki/Asam_amino. Accesed October 20, 2008 Pujiadi, Anna., 1994. Dasar-dasar Biokimia. Universitas Indonesia (UI-Press): Jakarta Yazid, Estien., 2006. Penuntun Praktikum Biokimia. Andi Offset : Yogyakarta

Mipa-farmasi.blogspot.com