Anda di halaman 1dari 10

Cara Membuat Larutan Buffer Sitrat

sumber gambar: wikipedia informasitips.com Seperti kita ketahui bahwa larutan buffer atau dapar memiliki pernan yang sangat penting, tidak hanya bagi tubuh manusia namun juga dalam pekerjaan laboratorium. Larutan buffer diperlukan agar kondisi atau tingkat keasaman atau kebasaan dalam suatu larutan tetap terjaga pada nilai pH yang diinginkan. Hal tersebut terutama untuk zat-zat yang sifatnya sensitive terhadap adanya perubahan sedikit pH, contohnya seperti protein. Dalam artikel ini, Kami akan coba menguraikan bagaimana cara membuat larutan buffer sitrat. Larutan buffer sitrat digunakan untuk kisaran pH asam, yaitu pada kisaran nilai pH 3.0 6.2. Hal pertama yang harus dilakukan adalah mempersiapkan 2 larutan stok, yaitu:

Larutan Stok A: 0.1 M larutan Asam Sitrat (21.01 gram Asam sitrat dilarutkan dalam 1 L Aquades) Larutan Stok B: 0.1 M larutan Sodium Sitrat atau Natrium Sitrat (29.41 gram Natrium Sitrat atau C6H5O7Na3.2H2O dilarutkan dalam 1 L Aquades)

Selanjutnya untuk membuat larutan buffer Sitrat pH tertentu Kamu tinggal mengikuti formula berikut: x mL Larutan Stok A + y mL larutan Stok B, kemudian larutan dicukupkan volumenya hingga 100 mL Nilai x dan y pada formula di atas mengikuti tabel berikut ini: x y pH

x 46.5 43.7 40.0 37.0 35.0 33.0 31.5 28.0 25.5 23.0 20.5 18.0 16.0 13.7 11.8 9.5 7.2

y 3.5 6.3 10.0 13.0 15.0 17.0 18.5 22.0 24.5 27.0 29.5 32.0 34.0 36.3 38.2 41.5 42.8

pH 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2

Contoh cara membaca tabel Jika Kamu ingin membuat larutan buffer Sitrat pH 3.0, maka yang harus Kamu lakukan adalah:

46.5 mL larutan Stok A dicampur dengan 3.5 mL larutan Stok B Campuran larutan Stok A dan B kemudian volumenya dicukupkan hingga 100 mL dengan Aquades, atau dengan kata lain 50 mL Aquades ditambahkan ke dalam campuran larutan Stok A dan B.

Bagaimana? Mudah bukan membuat larutan Buffer Sitrat? Selamat bekerja.


[Kungfuchem] Cara Membuat Larutan Buffer Sitrat pH 1.2 -6.6

izulthea
o o

Options
o o o

Posted By:

Mon Oct 20, 2008 9:44 am |

< Prev N ext >

1. Pembuatan Larutan A dan B ( B1 dan B2) Larutan A Larutan B Komposisi

Larutan di-Natrium sitrat 0.1 mol/L (asam sitrat monohidrat 21.014 gr = 200 ml NaOH 1M, encerkan tepat 1 L B1 : HCl 0.1 mol/L B2 : NaOH 0.1 mol/L X ml Larutan A + (100 - X) Larutan B

2. Prosedur Pembuatan Larutan Buffer: untuk mendapatkan pH tertentu, pipet X ml larutan A, masukkan dalam labu ukur 100 ml dan tambahkan larutan B sehingga tepat 100 ml. Larutan B1 untuk pH : 1.2 - 5.0; Larutan B2 untuk pH : 5.2 - 6.6 Larutan B : HCl 0.1 M pH 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0

X ml 9.0 17.9 23.6 27.6 30.2 32.2 34.1 36.0 37.9 39.9 pH 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 4.0

X ml 42.1 44.8 47.8 51.2 55.1 60.0 66.4 74.9 85.6 100

Larutan B : NaOH 0.1 M pH X ml 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6

87.1 78.0 70.3 64.5 60.3 57.2 54.8 53.2

Bicara tentang analisa kimia, salah satu hal yang sedikit merepotkan bagi saya adalah buffer. Buffer atau larutan penyangga adalah larutan yang terdiri dari asam lemah dan garam-nya yang dapat mempertahankan dan menjaga pH. Bidang bioteknologi tidak bisa dipisahkan dari penggunaan larutan ini. Kebutuhan buffer kadang menyulitkan karena hampir setiap analisa membutuhkan kondisi pH tertentu yang relatif stabil. Karena banyaknya macam dan jenis buffer, pemilihan buffer yang akan digunakan menjadi masalah tersendiri. Dalam memilih buffer, yang harus diperhatikan adalah pH optimum serta sifatsifat biologisnya. Banyak jenis buffer yang mempunyai impact terhadap sistem biologis, aktivitas enzim, substrate, atau kofaktor.

Sebagai contoh buffer phosphat akan menghambat aktivitas dari beberapa metabolik enzim termasuk karboksilase, fumarase, dan phosphoglucomutase. Barbiturate menghambat phophorilasi oksidatif. Tris buffer bereaksi dengan amin primer dan memodifikasi transport elektron dan phosphorilasi pada kloroplast. Tris juga menghambat enzim respirasi di mitokondria. Dan masih banyak efek lain yang diberikan buffer. Oleh karena itu pemilihan buffer terkadang menjadi kesulitan yang cukup merepotkan. Oleh karena itu, gunakan konsentrasi buffer serendah mungkin yang masih dapat untuk memaintain pH. Berikut beberapa macam buffer yang kerap digunakan:

A. GLYCINEHCL; PH 2.23.6, PKA = 2.35 Campur 25 ml 0.2 M glycine dan x ml HCl, kemudian encerkan hingga 100 ml dengan air suling. x (ml) 22.0 16.2 12.1 8.4 5.7 4.1 3.2 2.5 pH 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6

B. SODIUM ACETATE; PH 3.65.6, PKA = 4.76 Mencampurkan 0.1N acetic acid dan 0.1N sodium acetate untuk mencapai pH tertentu. acetic acid (ml) 185 176 164 147 126 sodium acetate (ml) 15 24 36 53 74 pH

3.6 3.8 4.0 4.2 4.4

102 80 59 42 29 19

98 120 141 158 171 181

4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6

C. BUFFERED SALINE (PBS, TBS, TNT, PBT) Larutan buffer saline sering digunakan ketika melakukan eksperiment yang berhubungan dengan immunolocalization. Ada beberapa variasi dari buffer ini, tiga diantaranya sebagai berikut.
PBS 20x stock Potassium chloride NaCl Potassium phosphate monobasic Sodium phosphate dibasic (7H2O) DI 4g 160 g 4g 43.2 g 53.6 mM 274 mM 29.4 mM 17.5 mM to 1 liter Use TBS when performing immunocytochemical experiments on phosphate-sensitive tissues (photosynthetic tissues typically) TNT NaCl Tris buffer (100 mM, pH 7.5) 150 mM to 1 liter PBS to vol Tween 20 1% (v/v) PBT Potassium chloride 4 g NaCl 160 g Tris buffer (10 mM, pH 7.5) to 1 liter TBS

D. CACODYLATE BUFFER; PH 5.07.4, PKA = 6.27 Sodium cacodylate buffer [Na(CH3)2 AsO2 3H2O] adalah alternatif dari Srensens phosphate buffer. Mempunyai kapasitas buffer yang baik pada range pH 5.07.4. Cacodylate digunakan untuk aplikasi mikroskop elektron sebagai metode untuk menghindari penambahan phosphate saat sample preparasi. Mitochondria dan arganela lainnya dapat rusak jika terkena konsentrasi phosphate berlebih yang terdapat dalam Srensens buffers. Siapkan 0.2 M sodium cacodylate stock solution dalam air (4.28 g/100 ml). Tambahkan x ml 0.2 N HCL per 100 ml cacodylate stock solution, diikuti denga penambahan air demin sampai volume 400 ml hingga diperoleh 0.05 M cacodylate buffer pada pH yang diinginkan.

0.2 M HCl 94.0 90.0 86.0 78.4 69.6 59.2 47.6 36.6 26.6 18.6 12.6 8.4 5.4

pH 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4

E. CITRATE BUFFER; PH 3.06.2, PKA = 6.40 Citrate buffer stock solutions: A: 0.1 M citric acid; B: 0.1 M sodium citrate. Campurkan kedua larutan dengan perbandingan volume dan encerkan dengan air sampai 100 ml untuk membuat pH yang diinginkan. 0.1 M citric acid 46.5 43.7 40.0 37.0 35.0 33.0 31.5 28.0 25.5 23.0 20.5 18.0 16.0 13.7 11.8 0.1 M sodium citrate 3.5 6.3 10.0 13.0 15.0 17.0 18.5 22.0 24.5 27.0 29.5 32.0 34.0 36.3 38.2 pH 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8

9.5 7.2

41.5 42.8

6.0 6.2

F. SRENSENS PHOSPHATE BUFFER; PH 5.88.0, PKA = 7.20 Campur sejumlah tertentu stock solution dan tambahkan air suling untuk mendapatkan 100 ml larutan Srensens phosphate buffer 0.1 M. Ingat, konsentrasi phosphate yang tinnggi dapat bersifat toksik bagi sel tanaman. Stock solutions: A 0.2 M NaH2PO4 B 0.2 M Na2HPO4

A (ml) 92.0 87.7 81.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 8.5 5.3

B (ml) 8.0 12.3 18.5 31.5 37.5 43.5 49.0 55.0 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 91.5 94.7

pH 5.8 6.0 6.2 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.8 8.0

G. PHOSPHATECITRATE BUFFER; PH 2.28.0, PKA = 7.20/6.40 Untuk membuat 100 ml larutan buffer phosphat-citrate. Stock solutions:

0.2 M dibasic sodium phosphate 0.1 M citric acid 0.2 M Na2HPO4 (ml) 5.4 7.8 10.2 12.3 14.1 16.1 17.7 19.3 20.6 22.2 23.3 24.8 25.7 26.7 27.8 29.0 30.3 32.1 33.1 34.6 36.4 40.9 43.6 0.1 M citrate (ml) 44.6 42.2 39.8 37.7 35.9 33.9 32.3 30.7 29.4 27.8 26.7 25.2 24.3 23.3 22.2 21.0 19.7 17.9 16.9 15.4 13.6 9.1 6.5 pH 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0

H. BARBITAL BUFFER; PH 6.89.2, PKA = 7.98 Untuk membuat 200 ml larutan buffer. Kedalam 50 ml Sodium barbital 0.2 M, tambahkan x ml 0.2 M HCl. Tambahkan air suling hingga volume 200 ml. 0.2 M HCl (x ml) 1.5 2.5 4.0 pH 9.2 9.0 8.8

6.0 9.0 12.7 17.5 22.5 27.5 32.5 39.0 43.0 45.0

8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8

I. TRIS BUFFERS

Solution Preparation Tris, 1 M stock Tris base DI Dissolve and adjust pH with the following approximate amount of HCl: pH 7.4 pH 7.6 pH 8.0

121.1 g 800 ml; 70 ml, 60 ml, 42 ml

EDTA, 0.5 M

SSC, 20x

Disodium ethylene diamine tetraacetate Adjust pH to approx. 8.0 and stir until dissolved NaCl NaCitrate DI Adjust pH to 7.0 with NaOH then add DI to 1 liter

186.1 g

175.3 g 88.2 g 800 ml

SSPE, 20x

NaCl NaH2PO4 H2O EDTA DI 174 g 27.6 g 7.4 g 800 Adjust pH to 7.4 with NaOH then add ml DI to 1 liter Tris EDTA Adjust pH using Tris stock 10 mM 1 mM solution Tris NaCl EDTA Adjust pH to 8.0 using Tris stock solution 10 mM 100 mM 1 mM

TE

STE (TNE)

J. GLYCINE NaOH BUFFER; PH 8.610.6, PKA = 9.78 Stock solutions: 0.2 M glycine 0.2 M NaOH Campur 25 ml glycine stock solution dengan x ml 0.2 M NaOH dan encerkan dengan air suling hingga volume 100 ml. x ml 0.2 M NaOH 2.0 3.0 4.4 6.0 8.4 11.2 13.6 19.3 22.75 pH 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 9.8 10.4 10.6

Demikian beberapa buffer yang bisa dijadikan pilihan untuk digunakan. Perlu diingat, bahwa larutan buffer hanya berfungsi untuk mempertahankan pH. Tidak berarti bahwa pH tidak akan berubah. Perubahan dan gangguan yang cukup besar dalam sistem dapat merubah pH meskipun telah ditambahkan buffer ke dalamnya. Hal ini karena buffer hanya menjaga agar pH tidak terlalu berubah signifikan dengan adanya sedikit perubahan konsentrasi ion hidrogen dalam sistem.