CLULA I/ Mitocondrias y Respiracin Celular Gonzalo Vzquez Palacios UACM-SLT

5. ORGANELOS TRANSDUCTORES DE ENERGA: MITOCONDRIAS Y RESPIRACIN CELULAR

MITOCONDRIAS Las clulas eucariticas contienen complejos organelos denominados mitocondrias, estructuras que constituyen el sitio donde ocurren la mayor parte de las reacciones qumicas que convierten la energa qumica de los nutrientes en otro tipo de energa qumica: el trifosfato de adenosina (ATP). En una clula muy activa se pueden encontrar numerosas mitocondrias. En una clula del hgado se han contado hasta 1000 mitocondrias, pero este nmero vara con los diferentes tipos de clulas. Las mitocondrias tienen un tamao variable: de 2 a 8 m de longitud y de 0,5 a 1 m de dimetro, pudiendo adems cambiar de tamao y forma en muy breve lapso. Cada mitocondria est delimitada por una doble membrana que crea dos compartimientos distintos dentro del organelo. El espacio intermembranoso es el compartimiento que se forma entre las membranas interna y externa, en tanto que la matriz est delimitada por la membrana interna. La membrana externa de la mitocondria es lisa, y en cierta forma es como un colador, ya que permite el paso de muchas molculas pequeas (hasta 5 kDa). Contiene mltiples copias de un tipo de protena denominada porina, que se caracteriza por adoptar una forma de barril 1. La membrana externa tambin contiene enzimas involucradas en la sntesis de lpidos mitocondriales y de otras que convierten los nutrientes lipdicos (cidos grasos de los triglicridos) en formas que son luego metabolizadas en la matriz. En contraste, la membrana interna regula estrictamente los tipos de molculas que pueden pasar a travs de ella. Esta membrana est plegada repetidamente formando crestas, que sirven para incrementar el rea de superficie interior. La membrana interna de la mitocondria contiene series complejas de enzimas y otras protenas que intervienen en la transformacin de la energa de las molculas de nutrientes en diferentes formas de energa qumica, almacenada en el ATP. El espacio intermembranoso contiene varias enzimas que usan el ATP que proviene de la matriz para fosforilar otros nucletidos. Finalmente, la matriz contiene una variedad de enzimas,
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Motivo predominante de hoja plegada en la que las lminas antiparalelas se disponen dejando un espacio central; las lminas son predominantemente hidrofbicas y de esa forma se forma una estructura cilndrica que interacta con los fosfolpidos de la membrana, en tanto que algunas cadenas polares quedan hacia el centro del barril, a modo de poros acuosos.

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esencialmente las que se utilizan para la oxidacin del piruvato y de los cidos grasos y las enzimas que intervienen en el ciclo del cido ctrico. En la matriz tambin hay ADN (circular, como el de los procariotes) que constituye el genoma mitocondrial, ribosomas especiales, ARNt y varias protenas requeridas para la expresin de los genes mitocondriales. Transporte de protenas en mitocondrias Aunque casi todo el ADN de las clulas eucariticas se encuentra en el ncleo, las mitocondrias (al igual que los cloroplastos en las clulas vegetales) contienen molculas de ADN en sus compartimientos internos, as como ribosomas, lo que les permite producir un pequeo nmero de las protenas que se encuentran en estos organelos. Sin embargo, la mayor parte de las protenas de las mitocondrias las fabrican los ribosomas libres del citoplasma, que despus se transportan al sitio adecuado del organelo. Las relativamente pocas protenas codificadas por el genoma mitocondrial se ubican en la membrana interna de las mitocondrias.

Las protenas sintetizadas en el citosol que estn destinadas a la matriz mitocondrial son orientadas hacia la mitocondria por secuencias de seal especficas. Las protenas con destino mitocondrial son transportadas desde el citosol por medio de protenas chaperonas2. La secuencia de seal tiene que ser reconocida por una protena de membrana y luego la protena atraviesa al mismo tiempo ambas membranas y pasa a la matriz, donde una peptidasa corta la secuencia de seal. La protena es entonces tomada por otra protena chaperona ubicada en la matriz mitocondrial, y llevada a su forma tridimensional funcional. Si las protenas citoslicas estaban destinadas a anclarse en la membrana mitocondrial interna o en el espacio mitocondrial, una segunda secuencia de seal, de tipo hidrofbico, reorienta la protena que ya haba entrado a la matriz. Si la protena est destinada al espacio intermembranal, una segunda peptidasa separar la secuencia hidrofbica. El genoma mitocondrial es muy simple La mayora de las protenas presentes en las mitocondrias son codificadas por el ADN nuclear y, como se ha dicho, sintetizadas en el citosol, pero una parte menor de las mismas se sintetizan en los propios organelos. La informacin para su sntesis se encuentra en el ADN mitocondrial y tambin existen ribosomas propios dentro de la matriz mitocondrial. Las mitocondrias no se hacen de novo: siempre provienen de la divisin de mitocondrias ya existentes y esta divisin no necesariamente est en fase con la divisin celular. Antes de la divisin debe
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Las chaperonas se unen a las protenas destinadas a las mitocondrias e impiden su plegamiento, con lo que favorecen su ingreso al organelo.

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dividirse el ADN mitocondrial, de modo que las clulas hijas posean una cantidad de mitocondrias equivalente a la que posea la clula madre. La divisin ocurre por fisin binaria, como en las bacterias. El ADN mitocondrial es bastante simple y salvo unas pocas excepciones (algunas algas y protozoarios) es de tipo circular y (tal como ocurre en las bacterias) no contiene histonas asociadas. La existencia de un juego separado de molculas de ADN en mitocondrias, junto con otras caractersticas semejantes a las de clulas procariticas (los ribosomas mitocondriales son tambin semejantes a los de las bacterias) han sido un importante apoyo a la teora endosimbitica mencionada anteriormente, que establece que estos organelos evolucionaron a partir de organismos procariticos que originalmente vivan dentro de clulas de mayor tamao (los precursores de los organismos eucariontes). OXIDACIN DE NUTRIENTES Y PRODUCCIN DE ENERGIA Los tomos de C y de H que forman parte de las molculas de los alimentos pueden ser utilizados como fuentes energticas porque no se encuentran en su estado ms estable. La atmsfera contiene una gran cantidad de oxgeno (21%), en presencia del cual las formas ms estables del C y del H son el CO 2 y el H2O, respectivamente. La clula puede obtener energa a partir de la glucosa o de otros nutrientes porque en presencia de oxgeno los convierte en dixido de carbono y agua, las formas en las que el carbono y el hidrgeno presentan mayor estabilidad. C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O 3

Pero la clula no oxida a las molculas orgnicas en un solo paso, como ocurre en un incendio, sino que lo hace en una serie de pasos que generalmente no implican la adicin directa de oxgeno. La oxidacin no implica necesariamente la participacin del oxgeno en una reaccin, sino que se refiere al concepto ms general de transferencia de electrones de un tomo a otro. A menudo, cuando una molcula toma un electrn, toma al mismo tiempo un protn (H+) del medio acuoso que conforma el citoplasma, con lo que el efecto neto es la incorporacin de un tomo de hidrgeno: A + e + H+ AH

As, aunque un electrn ms un protn estn involucrados, en lugar de slo un electrn, las reacciones de hidrogenacin son reducciones, as como las reacciones de deshidrogenacin son oxidaciones. La reduccin es un proceso qumico en el cual una sustancia gana electrones. Los electrones liberados durante una reaccin de oxidacin no existen en las clulas en forma libre. Por esta razn, toda reaccin de oxidacin debe acompaarse por una reaccin de reduccin, en la cual los electrones son aceptados por otro tomo o molcula. La oxidacin de una molcula produce energa, (que si no es aprovechada se disipa como calor); NAD+ oxidado NADH reducido en tanto que la reduccin de una molcula en general requiere energa. Las reacciones de oxidorreduccin, llamadas reacciones redox, son una parte esencial de la respiracin celular, de la fotosntesis y de otros aspectos Nicotinamida del metabolismo. Transferencia de hidrgeno y de electrones Al eliminar tomos de hidrgeno de un Adenosina Adenosina compuesto orgnico stos con frecuencia se llevan consigo parte de la energa que estaba almacenada en los enlaces qumicos. El hidrgeno, junto con su energa, se transfiere a una molcula aceptora de hidrgeno, que suele ser una coenzima. Uno de los aceptores de hidrgeno que se encuentran con mayor frecuencia es el dinucletido
Ribosa Ribosa

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de nicotinamida y adenina, representado por las siglas NAD. Esta coenzima empaqueta temporalmente grandes cantidades de energa. La siguiente ecuacin ejemplifica la transferencia de hidrgeno desde un compuesto XH 2, que pierde hidrgeno y se oxida a X, hacia la molcula de NAD (en realidad NAD+ , porque al unirse con la ribosa, la nicotinamida adquiere una carga positiva en el nitrgeno que participa en la unin, ver la frmula): XH2 + NAD X + NADH + H Ntese que el NAD se reduce cuando se combina con el hidrgeno. Antes de ser reducido, el NAD es un ion con una carga neta positiva. Cuando se agrega el hidrgeno, la carga se neutraliza. La forma reducida del compuesto, la molcula de NADH, es elctricamente neutra. Parte de la energa de los enlaces que sostenan al hidrgeno con la molcula X se transfiere, por medio de esta reaccin, al NADH. As, esta energa se usa en los procesos metablicos, o puede transferirse al ATP mediante una serie de complicadas reacciones. Otro importante aceptor de hidrgeno es el dinucletido de flavina y adenina (FAD), que al aceptar un par de tomos de hidrgeno y sus electrones se convierte en FADH2. Las clulas obtienen energa til de la "combustin" de la glucosa o de otros nutrientes slo porque lo hacen de una manera controlada. Las reacciones catablicas que producen energa estn estrechamente asociadas ("acopladas") a las reacciones anablicas, que son las responsables de la sntesis de nuevos compuestos. Todas las clulas vivas deben extraer energa de las molculas de nutrientes orgnicos que capturan del ambiente. Estos nutrientes se metabolizan y parte de su energa qumica se transfiere al trifosfato de adenosina (ATP), que luego se emplear en el trabajo celular. El metabolismo resulta entonces estar compuesto de dos procesos opuestos: a) el catabolismo, que consiste en la ruptura de molculas grandes hasta convertirse en otras ms pequeas, que habitualmente es generador de energa, y b) el anabolismo, responsable de la sntesis de las sustancias que requiere el medio celular y que usualmente requiere de aporte energtico. RESPIRACIN CELULAR El mecanismo utilizado por la clula para degradar nutrientes depende del tipo de ambiente en que dicha clula vive. Las clulas que habitan en un ambiente rico en oxgeno utilizan el eficiente mecanismo aerobio, que requiere de oxgeno molecular. En cambio, las clulas que habitan en el suelo o en aguas contaminadas, donde el oxgeno es escaso, se adaptan a utilizar el mecanismo anaerobio, que aunque es menos eficiente, no requiere de oxgeno. La respiracin celular es por lo general aerobia; es decir, requiere de oxgeno. Durante la respiracin aerobia completa, los nutrientes se catabolizan hasta convertirse en dixido de carbono y agua. Una de las vas ms comunes de la respiracin celular aerobia implica la degradacin del nutriente comn, la glucosa.

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Las reacciones qumicas de la respiracin celular se agrupan en cuatro fases: 1. Gluclisis Implica la conversin de la glucosa (seis carbonos) en dos molculas de tres carbonos (C3), el cido pirvico (usualmente en forma de piruvato), con la formacin de dos molculas de ATP y produccin de dos molculas de NADH. 2. Formacin de la acetil-coenzima A (decarboxilacin oxidativa del piruvato) Las dos molculas de piruvato (C3) se decarboxilan (pierden el grupo cido liberando dixido de carbono) y se transforman en dos molculas de dos carbonos (acetilo) que se combinan con la coenzima A para formar dos molculas de acetil-coenzima A. En el proceso, como se dijo, se liberan las dos primeras molculas de CO2 y se producen 2 NADH adicionales (no hay generacin de ATP en esta etapa). 3. Ciclo del cido ctrico (ciclo de Krebs) Convierte los dos restos acetilo (C2) de la acetil coenzima A en 4 molculas de dixido de carbono y elimina electrones e hidrgenos, con una produccin neta de 2 ATP y generacin de 6 NADH y 2 FADH 2. El ciclo se inicia con la reaccin del cido oxalactico (C4) con el resto acetilo (C2) de la acetil-coenzima A. La subsiguiente liberacin de la coenzima A genera la energa que permite la formacin del cido ctrico (C6). En el proceso hay cuatro reacciones de oxidacin, la produccin de una molcula de ATP y la liberacin de dos molculas de CO2 antes de volver al punto inicial. Dado que ingresaron dos restos acetilo, el ciclo debe recorrerse dos veces, con lo que el resultado es el que se mencion ms arriba. 4. Sistema de transporte de electrones y fosforilacin oxidativa (cadena respiratoria) Los electrones e hidrgeno tomados de la molcula de combustible durante las fases precedentes se transfieren a lo largo de la cadena de aceptores de electrones situada en las crestas mitocondriales (membrana interna). Al tiempo que los electrones pasan de un aceptor a otro, se bombean protones desde la matriz mitocondrial, a travs de la membrana mitocondrial interna, al espacio intermembranoso, con lo que se genera un gradiente protnico, que representa un potencial de energa. Finalmente los protones regresan a la matriz mitocondrial a travs de canales especficos localizados en la membrana interna, que se encuentran formando parte de la ATP sintetasa, enzima que aprovecha la energa generada por el reingreso de los protones para unir el fosfato inorgnico al ADP y formar ATP. Cuando los protones se mueven a travs de estos canales a favor de un gradiente de energa, la energa liberada se utiliza para operar la sntesis de ATP. Este gradiente de protones a travs de la membrana mitocondrial interna acopla la fosforilacin (del ADP para formar ATP) con la oxidacin de la molcula de glucosa producida a lo largo de la serie de reacciones que tuvieron lugar inicialmente en el citoplasma durante la gluclisis y luego en las mitocondrias al producirse primero la decarboxilacin oxidativa del cido pirvico (con formacin de acetil-coenzima A) y luego el ciclo de Krebs.

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GLUCLISIS La gluclisis (literalmente "ruptura de la glucosa") es la secuencia de reacciones que convierten una molcula de glucosa (compuesto de seis carbonos) en dos molculas de piruvato (compuesto de tres carbonos ms oxidado) produciendo ATP. Cada reaccin es regulada por una enzima especfica y en el proceso total hay una ganancia neta de dos molculas de ATP . Las reacciones de la gluclisis se llevan a cabo en el citoplasma. Los ingredientes necesarios, como ADP, NAD+ y fosfato, se encuentran libremente en el citoplasma y se utilizan conforme se hace necesario. La gluclisis no requiere de oxgeno y puede realizarse tanto en condiciones aerobias como anaerobias .

La gluclisis se realiza en dos etapas. En la fase preparatoria hay una inversin inicial de energa para facilitar la degradacin. Se gasta una molcula de ATP para fosforilar inicialmente a la glucosa, que pasa a glucosa-6-fosfato y luego es transformada en su ismero fosfatado (fructosa-6-fostato); una segunda molcula de ATP convierte a la fructosa-6-fosfato en fructosa-1,6-difosfato, que luego se desdobla en dos molculas de triosa fosfato que son interconvertibles: la dihidroxiacetona fosfato (DHAP) y el gliceraldehdo 3-fosfato (GALP). En resumen, esta es una etapa en la que se invierten dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa que comienza a ser degradada y se obtienen dos molculas de tres tomos de carbono conteniendo grupos fosfato. El proceso involucra cinco reacciones enzimticas acopladas.

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El retorno energtico tiene lugar en la fase de beneficio, que implica otras cinco reacciones y que comienza con la oxidacin y fosforilacin de las dos molculas de GALP producidas en la fase anterior, las que se convierten finalmente en dos molculas de cido 1,3-difosfoglicrico, lo que genera dos molculas de NADH. La energa producida por la oxidacin es aprovechada para incorporar fosfato inorgnico del medio (Pi) en una unin de alta energa (representada por el smbolo ), que en el siguiente paso se rompe y permite fabricar ATP a expensas de ADP (fosforilacin a nivel de sustrato). El cido 3 fosfoglicrico as formado pasa a una forma isomrica (2-fosfo-glicrico), pierde agua para formar el cido fosfo-enol pirvico y finalmente pasa cido pirvico con una nueva ganancia de ATP (segunda fosforilacin a nivel de sustrato). El resultado neto de esta etapa es la produccin de 4 molculas de ATP por cada molcula de glucosa, con lo que el balance energtico de la gluclisis es positivo (+ 2 ATP). El proceso se puede resumir en la siguiente ecuacin: Glucosa (C6)+ 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 piruvato (C3) + 2 NADH + 2 H+ + 2 ATP

Como puede verse, todos los productos intermedios entre la glucosa y el piruvato estn fosforilados. Ello se debe a que al valor del pH celular los grupos fosfato estn ionizados y en consecuencia poseen carga negativa. Dado que la membrana plasmtica es impermeable a las molculas cargadas, los intermediarios fosforilados no pueden difundir al exterior, con lo que se asegura su permanencia dentro de la clula Eficiencia del proceso de gluclisis Aunque las enzimas de la gluclisis se describen como solubles en el citosol, existen cada vez ms pruebas de que estn formando complejos multienzimticos, de modo que el producto de una reaccin catalizada por una enzima pasa automticamente a ser el reactivo de la otra enzima que es vecina a ella. Algunas de las enzimas glucolticas estn fijadas a filamentos de actina o a microtbulos, que favoreceran el acercamiento de las enzimas que catalizan pasos sucesivos. Adems, la enzima responsable de fosforilar la glucosa (hexoquinasa) apenas sta entra a la clula est fijada a la cara externa de la membrana de las mitocondrias, de modo que el ATP fabricado en este organelo pase directamente a ella, sin que tenga posibilidades de diluirse en el citosol. Todo ello conduce a incrementar la eficiencia del proceso glucoltico. Destino del piruvato en anaerobiosis. Fermentaciones En condiciones aerbicas el cido pirvico se oxida a dixido de carbono y agua a travs del pasaje a acetil-coenzima A y posterior ingreso en el ciclo de Krebs. Pero en condiciones de anaerobiosis (falta de oxgeno) el cido pirvico es reducido a cido lctico, se libera una molcula de dixido de carbono y en el proceso el NADH vuelve a transformarse en NAD , necesario para seguir procesando ms molculas de glucosa. Durante una actividad fsica extenuante, como correr, la cantidad de oxgeno que llega a las clulas musculares puede ser insuficiente para mantener la acelerada tasa de oxidacin de combustibles. En estas condiciones, las clulas musculares forman cido lctico, que al acumularse contribuye a producir la fatiga muscular (calambres).

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Muchos microorganismos fermentan la glucosa a cido lctico, como ocurre en el caso de los lactobacilos, que son utilizados en el proceso de obtencin de quesos y yogures, o en la obtencin de repollo agrio ("chucrut") en lo que constituye la fermentacin lctica. Las levaduras (que son hongos unicelulares) llevan a cabo la fermentacin alcohlica. Cuando son privadas de oxgeno, las levaduras separan el dixido de carbono del piruvato y forman un compuesto de dos carbonos llamado acetaldehdo. El hidrgeno del NADH producido en la gluclisis se transfiere al acetaldehdo para reducirlo a etanol (el alcohol comn). Estas reacciones anaerobias son la base de la produccin de la cerveza, el vino y otras bebidas alcohlicas. Las clulas de levadura tambin se utilizan en la industria del pan porque el dixido de carbono generado provoca que la masa se levante (leudado). El metabolismo anaerobio es muy ineficiente porque el combustible slo se oxida en parte . El alcohol, producto final de la fermentacin de las clulas de levadura, puede quemarse (de hecho puede utilizarse como combustible). Como es evidente, contiene una gran cantidad de energa que las clulas de levadura son incapaces de extraer utilizando mtodos anaerobios. El lactato, compuesto de tres carbonos, contiene an ms energa que el alcohol de dos carbonos. La ineficiencia del metabolismo anaerobio requiere de un gran suministro de glucosa. Por lo tanto, las clulas que funcionan en anaerobiosis degradan rpidamente muchas molculas de combustible ("efecto Pasteur": las molculas de glucosa son consumidas por la levadura mucho ms rpidamente en anaerobiosis que en presencia de oxgeno) y con ello compensan la pequea cantidad de energa que obtienen de cada una de ellas. Para realizar la misma cantidad de trabajo que una clula aerobia, una clula anaerobia necesita veinte veces la cantidad de glucosa que utiliza sta, lo que resulta beneficioso desde el punto de vista biotecnolgico, porque la cantidad de producto (cido lctico o etanol, segn el caso) es mucho mayor. FORMACIN DE LA ACETIL-COENZIMA A (DECARBOXILACIN OXIDATIVA DEL PIRUVATO) El piruvato, producto final de la gluclisis, contiene la mayor parte de la energa total de la molcula original de glucosa. Como acabamos de mencionar, cuando no hay oxgeno disponible la clula utiliza la va de la fermentacin. El piruvato acepta electrones del NADH y se convierte en cido lctico o alcohol etlico. Estas reacciones se realizan en el citoplasma. En presencia de oxgeno, las molculas de piruvato se desplazan hacia el interior de la mitocondria, en donde se llevan a cabo las reacciones subsecuentes de la respiracin celular. Una vez que la molcula de piruvato entra en la mitocondria, se convierte en acetil-coenzima A (acetil CoA), un compuesto que puede entrar en el ciclo del cido ctrico. En esta complicada reaccin, el piruvato es sometido a un proceso de decarboxilacin oxidativa como consecuencia de la accin de un complejo enzimtico en el que participan tres enzimas y cinco coenzimas: el complejo piruvato deshidrogenasa, localizado en el interior de las mitocondrias de las clulas eucariotas y en el citosol de las procariotas. La reaccin transcurre en varios pasos, a travs de los cuales el piruvato es primero decarboxilado con produccin de CO2 y generacin de un aldehdo de C2 (acetaldehdo), que es oxidado a cido y unido a la coenzima A, formando acetilcoenzima A, que luego ingresar en el ciclo del cido ctrico. Como consecuencia de la oxidacin del acetaldehdo se liberan hidrgenos que son

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tomados por el NAD+, con produccin de NADH. No hay en esta etapa produccin directa de ATP. Debe tenerse en cuenta que a travs de la gluclisis una molcula de glucosa genera dos molculas de piruvato y que en consecuencia el resultado neto de esta etapa es doble: se liberan 2 molculas de CO2 y dos de NADH, con produccin de dos molculas de acetil-coenzima A que ingresan a continuacin al ciclo del cido ctrico. CICLO DEL CIDO CTRICO (CICLO DE KREBS O DE LOS CIDOS TRICARBOXLICOS) La primera observacin a hacer es que mientras la gluclisis es una secuencia lineal de reacciones, las del cido ctrico componen un ciclo, por lo que los reactivos no se "gastan" (tericamente, una nica molcula de oxalacetato, que comienza el ciclo, sera suficiente para procesar todas las molculas de acetilcoenzima A de una clula). En cada vuelta entran dos carbonos (los del acetato) y salen dos molculas de un carbono (CO2). Cuatro de los pasos del proceso implican oxidaciones en las que la energa se conserva en forma de NADH y FADH2, en tanto que una molcula de ATP se produce en forma directa (fosforilacin a nivel de sustrato). El ciclo del cido ctrico tambin se llama ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA) o ciclo de Krebs, en honor de Sir Hans Krebs, quien trabaj en l durante el decenio de 1930. Este ciclo es la ruta final de la oxidacin del piruvato, cidos grasos y cadenas de carbono de los aminocidos. Dicho ciclo se lleva a cabo en la mitocondria y consta de varios pasos, en los que cada reaccin es catalizada por una enzima especfica. En la mayora de los procariotes las enzimas del ciclo se localizan en el citosol, en tanto que en los eucariotes estn dentro de las mitocondrias. Aunque el ciclo genera en forma directa un slo ATP por vuelta, en el mismo se producen cuatro oxidaciones que dan lugar a 3 molculas de NADH y 1 de FADH 2, que sern canalizados a travs de la cadena respiratoria. Teniendo en cuenta que por cada molcula de glucosa son dos los restos de acetilo (en forma de acetil-coenzima A) que entran al ciclo, el rendimiento total se eleva a 2 molculas de ATP (fosforilacin a nivel de sustrato), 6 de NADH y 2 de FADH2. Cabe preguntarse si se justifica un ciclo de varias reacciones para procesar una molcula de dos carbonos, que aparece como contradictorio con el principio de mxima economa de la lgica molecular de las clulas vivas. Ocurre que el papel del ciclo no se reduce a la oxidacin del acetato, sino que constituye el ncleo del metabolismo intermedio, llamado as porque a l confluyen productos finales de 4 y 5 tomos de carbono que provienen de otras fuentes (grasas y protenas) y que sirven como combustibles. Por otra parte, algunos intermedios pueden ser retirados del ciclo para actuar como precursores de otras vas biosintticas. El ciclo de Krebs no representa necesariamente la va ms corta desde el acetato hasta el CO2, sino aquella que ha conferido mayores ventajas selectivas durante la evolucin a los organismos que la posean. En los organismos aerobios, el ciclo es una va anfiblica (es decir, se usa tanto en procesos anablicos como catablicos). Funciona no solamente en el catabolismo oxidativo de glcidos, cidos grasos y aminocidos, sino que tambin genera precursores de aminocidos o de nucletidos.

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CATABOLISMO DE OTROS NUTRIENTES Muchos organismos dependen de otros nutrientes, adems o en lugar de la glucosa. Los seres humanos y otros animales obtienen ms energa mediante la oxidacin de los cidos grasos provenientes de los triglicridos (aceites o grasas) que de la oxidacin de la glucosa. En algunos casos tambin los aminocidos de las protenas pueden ser utilizados como combustible. Estos nutrientes se transforman en alguno de los intermediarios que intervienen en la gluclisis o en el ciclo del cido ctrico. Oxidacin de cidos grasos Cada gramo de triglicrido contiene ms del doble de caloras que 1 g de glucosa o de aminocidos. Las grasas son ricas en caloras porque contienen un gran nmero de tomos de hidrgeno. Tanto el glicerol como los cidos grasos de las grasas neutras pueden utilizarse como combustible. El glicerol es fosforilado y luego oxidado a PGAL y entonces sigue la ruta de la gluclisis, pero el 95% de la energa de las grasas reside en los cidos grasos. Los cidos grasos son convertidos en unidades de acetil-coenzima A en un proceso que se denomina -oxidacin porque el carbono destinado a ser oxidado es el carbono (el carbono siguiente al , que es el vecino al grupo cido).

Los cidos grasos deben ser activados mediante s u unin a la coenzima A (acil-CoA) y luego en cuatro pasos sucesivos y dos oxidaciones producen acetil-coenzima A y un cido dos carbonos ms corto, que se mantiene unido a la coenzima A y repite el ciclo hasta que todo el cido graso se transforme en acetil-coenzima A. En general los cidos grasos de los triglicridos tienen nmero par de tomos de carbono, por lo que el nmero de molculas de coenzima A producidas es igual a la mitad del nmero de tomos de carbono del cido graso sometido a -oxidacin. Oxidacin de aminocidos En las protenas hay 20 aminocidos con diversos esqueletos carbonados, por lo que hay 20 rutas catablicas distintas para la degradacin de los aminocidos. De todos modos, estas veinte rutas catablicas de los aminocidos convergen el ciclo de Krebs. En el ser humano los aminocidos slo

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aportan del 10% al 15% de la produccin energtica corporal, por lo que las rutas degradativas individuales de las protenas son mucho menos activas que la gluclisis y la oxidacin de los cidos grasos. Los animales carnvoros pueden obtener hasta el 90% de sus necesidades energticas a partir de la oxidacin de los aminocidos ingeridos. Los herbvoros estn mucho ms limitados, en tanto que los microorganismos pueden incorporar aminocidos si stos se encuentran en el entorno. Finalmente, las plantas difcilmente oxidan aminocidos, si es que lo hacen alguna vez, para obtener energa (la costosa incorporacin de nitrgeno a travs de la absorcin de nitratos por las races y la disponibilidad de almidn y otros carbohidratos mediante la fotosntesis no permiten semejante despilfarro). De todos modos, las rutas metablicas son esencialmente similares en la mayora de los organismos. En los animales, la degradacin de aminocidos puede deberse a tres causas: a) que durante el recambio proteico normal algunos de los aminocidos no se necesiten para la sntesis de nuevas protenas, b) que la dieta sea muy rica en protenas y c) que el organismo se encuentre en estado de inanicin, recurriendo entonces a todas sus reservas. FOSFORILACIN OXIDATIVA (CADENA RESPIRATORIA) La fosforilacin oxidativa (sntesis de ATP impulsada por la transferencia de los electrones al oxgeno) es la culminacin del metabolismo productor de energa en los organismos aerbicos. Todos los pasos enzimticos de la degradacin oxidativa de glcidos, grasas y aminocidos en las clulas aerbicas convergen en esta etapa final de la respiracin celular, en la que los electrones fluyen desde intermedios catablicos al O2 produciendo energa para la generacin de ATP a partir del ADP y el fosfato inorgnico (Pi). Nuestros conocimientos actuales sobre la sntesis del ATP en la mitocondria y en los cloroplastos se basan en una hiptesis formulada por Peter Mitchell en 1961 y que le valiera el premio Nobel en 1978. Mitchell propuso que el transporte de electrones y la sntesis de ATP se acoplan mediante un gradiente protnico a travs de la membrana mitocondrial. La hiptesis ha recibido fuerte apoyo desde entonces y se ha convertido en la teora quimiosmtica. La membrana mitocondrial externa es fcilmente permeable a pequeas molculas e iones gracias a los canales que forma la protena porina, que permite el pasaje de molculas de hasta 5 kDa. La membrana interna es impermeable a la mayora de las molculas pequeas e iones, incluidos los protones. Las nicas especies qumicas que atraviesan la membrana son aquellas que cruzan la membrana interna a travs de protenas transportadoras especficas. Recurdese que la matriz mitocondrial contiene el complejo de la piruvato deshidrogenasa y las enzimas del ciclo del cido ctrico, de la ruta de la -oxidacin de los cidos grasos y de las rutas de oxidacin de los aminocidos, es decir todas las rutas de oxidacin de combustibles, excepto la gluclisis, que tiene lugar en el citosol. Los electrones que entran en la cadena respiratoria son en su mayora provenientes de la accin de deshidrogenasas que captan electrones de las reacciones oxidativas del complejo de la piruvato

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deshidrogenasa, del ciclo del cido ctrico, de la ruta de la -oxidacin y de los pasos oxidativos del catabolismo de los aminocidos. La mayora de las deshidrogenasas son especficas para el NAD y las restantes utilizan el FAD. La cadena respiratoria mitocondrial consta de una serie de transportadores electrnicos, la mayora protenas integrales de membrana, con grupos prostticos capaces de aceptar y donar uno o dos electrones. Estos transportadores electrnicos funcionan dentro de complejos ordenados en serie (I a III), que van transfiriendo los electrones hasta el oxgeno molecular, que es el aceptor final de los mismos. El flujo de electrones va acompaado de un pasaje de protones desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembranal. Las pruebas experimentales que se han realizado permiten suponer que se bombean unos diez protones por cada par de electrones que son transferidos desde el NADH hasta el O 2. El resultado es un estado estacionario con una diferencia de aproximadamente una unidad de pH entre la matriz y el medio, siendo el interior (la matriz) alcalino. La transferencia de electrones a travs de la cadena respiratoria libera energa ms que suficiente para canalizar la sntesis de ATP a expensas de ADP y Pi. Determinaciones cuidadosas revelan que con el NADH como dador electrnico se producen 3 ATP por par de electrones transferidos al oxgeno y que con el FADH2 se obtienen 2 ATP en las mismas condiciones. La sntesis del ATP en la mitocondria es responsabilidad de un complejo membrana-protena de gran tamao, la ATP sintetasa, un complejo de protena perifrica de membrana que se mantiene unida con una protena integral. Esta ltima forma un canal transmembrana a travs del cual pasan los protones. La energa generada como consecuencia del reingreso de los protones a la matriz mitocondrial es utilizada por la ATP sintetasa para unir el ADP al Pi y formar ATP. Balance energtico de la respiracin La generacin de molculas de ATP a expensas del proceso de oxidacin de la glucosa a dixido de carbono y agua tiene, como hemos visto, dos vertientes: (a) la fosforilacin a nivel de sustrato, es decir la produccin de ATP como consecuencia de reacciones de fosforilacin asociadas a oxidaciones y (b) la fosforilacin oxidativa, donde el ATP es el resultado del flujo de protones a travs de la membrana interna mitocondrial. El siguiente cuadro resume estos hechos
Etapa Fosforilacin a nivel de sustrato Transportadores de electrones NADH FADH2 gluclisis 2 ATP 2 NADH Decarboxlacin oxidativa del piruvato 2 NADH Ciclo del cido ctrico 2 ATP 6 NADH 2 FADH2 TOTALES 4 ATP 10 NADH 2 FADH2

Teniendo en cuenta que la produccin de ATP a partir de los transportadores de electrones se basa en que por cada NADH se producen 3 molculas de ATP y que por cada FADH2 se producen 2 molculas de ATP, tendramos 4 ATP producidos por fosforilaciones a nivel de sustrato, 30 ATP provenientes del transporte de electrones por intermedio de NADH y 4 ATP a travs del FADH 2, lo que hace un total de 38 molculas de ATP generadas como consecuencia de la respiracin aerobia de una molcula de glucosa. Se requieren sistemas de lanzadera para la oxidacin mitocondrial del NADH citoslico La membrana mitocondrial interna no es permeable al NADH, que es una molcula grande. El NADH producido en el citoplasma por la deshidrogenacin en la gluclisis no puede entrar por difusin en la mitocondria y as transferir sus protones y electrones al sistema de transporte electrnico. A diferencia del ATP y del ADP, el NADH no cuenta con una protena acarreadora para su transporte a travs de la membrana. En cambio, se han desarrollado varios sistemas para transferir los electrones del NADH (no las molculas de NADH) hacia el interior de la mitocondria.

CLULA I/ Mitocondrias y Respiracin Celular Gonzalo Vzquez Palacios UACM-SLT

En las clulas de hgado y rin humanas, as como en las clulas cardacas, un sistema especial llamado sistema de lanzadera malatoaspartato transfiere electrones del NADH citoslico a travs de la membrana mitocondrial interna a una molcula de NAD que se encuentra en la matriz. En este caso el potencial del NADH de origen citoslico se conserva, ya que dentro de la matriz mitocondrial aparece otra molcula de NADH. En las clulas del msculo esqueltico, cerebro y algunos otros rganos, opera un sistema distinto que es el sistema de lanzadera del Representacin del sistema de la lanzadera de malato-aspartato glicerol-3-fosfato. Difiere del anterior en que cede los electrones al FAD, con lo que en la matriz se genera FADH2 y no NADH. Dado que el rendimiento de la fosforilacin oxidativa es menor cuando el transportador es el FADH2 (2 molculas de ATP en lugar de las 3 que produce el NADH) el nmero de molculas de ATP producidas por la oxidacin completa de 1 mol de glucosa en las clulas del msculo esqueltico y en las que tienen este tipo de lanzadera es de 36 ATP en lugar de 38.

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Representacin del sistema de la lanzadera del glicerol-3-fosfato CUESTIONARIO TRICO 1) Las mitocondrias contienen varias copias de ADN en su interior. Qu funcin cumple? Esto le permite a la mitocondria prescindir de la informacin del ADN nuclear? 2) Cmo realizan la respiracin celular aerbica algunas bacterias si carecen de mitocondrias? 3) A qu se llama metabolismo? Bajo qu criterio y cmo cla sificara las reacciones que lo componen? 4) Qu entiende por Compuesto Reducido y Compuesto Oxidado?. 5) Que entiende por Reacciones Acopladas? 6) Cules son las etapas del Catabolismo en eucariotes aerobios? Dnde ocurre cada una de ellas? 7) A qu se llama Respiracin Celular? Cul es su funcin y cmo se la divide para su estudio? 8) Qu entiende por Gluclisis? Dnde se lleva a cabo? 9) A qu se llama Fosforilacin a Nivel de Sustrato? 10) Cul es el rendimiento energtico de la Gluclisis respecto a la combustin de una molcula de Glucosa? 11) A qu proceso se lo denomina Fermentacin? 12) Realice un cuadro comparativo entre la Gluclisis y la Fermentacin indicando: produccin de ATP, productos finales y organismos que la desarrollan. 13) Sabemos que las clulas animales tienen la capacidad de realizar fermentacin lctica y respiracin aerbica. Sin embargo estas clulas mueren rpidamente en ausencia de oxgeno. A qu se debe?

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14) De dnde provienen las molculas de Glucosa que se degradan en la Gluclisis en animales, plantas y bacterias? 15) A qu se llama Descarboxilacin Oxidativa? Dnde ocurre? 16) Qu es el Ciclo del cido Ctrico? Dnde se lleva a cabo? 17) Durante el Ciclo del cido Ctrico no se requiere directamente oxigeno. Sin embargo, en su ausencia el ciclo se interrumpe. A qu se debe ello? 18) Cul es la importancia de ste proceso como centro integrador del Metabolismo? Por qu se dice que es una Va Anfiblica? 19) A qu se denomina Fosforilacin Oxidativa? Dnde Ocurre? 20) Explique conceptualmente la Teora Quimiosmtica. 21) Qu son los sistemas de Lanzaderas y para qu sirven? 22) Cul es el balance energtico final de la degradacin total de una molcula de Glucosa? Cmo se integran otros nutrientes (cidos Grasos y Aminocidos) a ste esquema catablico? 23) Qu entiende por beta-Oxidacin. Dnde se lleva a cabo? REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ALBERTS, B., D. BRAY, A. JOHNSON, J. LEWIS, M. RAFF, K. ROBERTS Y P. WALTER (1998) Essential Cell Biology. An Introduction to the Molecular Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc., New York & London. LEHNINGER, A.L., D.L. NELSON Y M.M. COX (1993) Principios de Bioqumica, Ediciones Omega, Barcelona, 2. edicin (traducido de la segunda edicin inglesa. 1993). LODISH, H., A. BERK, S.L. ZIPURSKY, P. MATSUDAIRA, D. BALTIMORE & J. DARNELL. Biologa Celular y Molecular, Editorial Mdica PANAMERICANA, 2002. PURVES, K.W., D. SADAVA, G.H. ORIANS & H.C. HELLER (2003) Vida. La Ciencia de la Biologa, 6. Edicin. Editorial Mdica Panameicana (traducido de la 6 edicin inglesa, 2001). COOPER, G.M. (2002). La Clula. 2 edicin. Marbn Libros, S.L., Espaa. (traducido de la 2 edicin inglesa, 2000).