RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS Y GLOBULOS BLANCOS

OBJETIVO
Aprender a realizar y aplicar la metodologa para un recuento de Leucocitos por milmetro cbico de sangre e interpretar el resultado.

RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS

Para el conteo de leucocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales.

Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases:

Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen

MATERIALES:

Cmara de Neubauer Pipetas de Thoma Diluyente TURK Microscopio Contador para recuento.

CMARA DE NEUBAUER

Esta hecha de vidrio ptico. Especial de precisin. Base rectangular y gruesa. En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales. La superficie del puente central es ms profunda que los dos puentes exteriores. En el puente central (fondo de la cmara) estn grabadas las redes de conteo.

Para el recuento de leucocitos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9.

PIPETA DE THOMA

Pipetas de leucocitos perla blanca

0.5 11

Para su dilucin, se emplea la pipeta de blancos, de modo que la solucin que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el lquido de TURK. El lquido de TURK es hipotnico de modo que se destruyen los hemates y as no entorpecen en el recuento. El lquido de TURK consta de cido actico glaciar 2ml, violeta de genciana 1ml y agua destilada 1000ml. Deber filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

PROCEDIMIENTO

Toma de muestra: se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

Llenar la pipeta de glbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

0.5

11

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de TURK) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

0.5

11

Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

Montar la laminilla de vidrio en la cmara para recuento. Debe estar limpia y seca.

Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente.

Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten

Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4 cuadrados.

En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho.

CALCULO DEL N DE LEUCOCITOS

N de leucocitos x mm3 = N de leucocitos contados

x 50
EJEMPLO:
En el anlisis hecho, los resultados de la cuenta de clulas quedaron as por casilla:
N de leucocitos x mm3 = altura x dilucin x rea N de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000 N de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50 N de leucocitos x mm3 = N de leucocitos contados x 50

El nmero de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un ndice normal

VALORES DE REFERENCIA
Hombres y Mujeres:.5 000-10 000 leucocitos/mm3 Recin Nacidos..10 000-12 000 La cuantificacin o recuento de leucocitos es muy importante para el diagnstico de leucocitos/mm3

enfermedades. Un bajo nmero de glbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a: Insuficiencia de la mdula sea (por ejemplo: debido a infeccin, tumor o cicatrizacin anormal). Enfermedades vasculares del colgeno (como el lupus eritematoso sistmico). Enfermedad del hgado o el bazo. Radioterapia o exposicin a la radiacin. Un alto nmero de glbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a: Anemia. Tumores de la mdula sea. Enfermedades infecciosas. Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia). Leucemia. Estrs emocional o fsico intensos.

RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

Para el conteo de eritrocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen

OBJETIVO

Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milmetro cbico de sangre, interpretar el resultado, as como adiestrarse en el manejo de la cmara de Neubauer y la pipeta de Thoma

MATERIALES:

Cmara de Neubauer

Pipeta de Thoma para glbulos rojos (perla roja)

Diluyente HAYEM Microscopio Contador para recuento.

PROCEDIMIENTO

Toma de muestra: se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (HAYEM) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de 101
Liquido de Hayem, el cual est formado de 5g de NaCl, 2.5g de Na2SO4, 2.5g de MgCl2 y agua destilada para un litro. Este ltimo es el ms usado. Es muy importante observar que en la cmara de Neubauer las reas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes.

PIPETAS THOMA

Pipetas de rojos perla roja

0.5

101

Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten

Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cmara solo en 5 cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total)

En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho.

CALCULO DEL N DE ERITROCITOS

N de hemates x mm3 = hemates contados x 10 000
N de hemates x mm3 = altura x dilucin x rea N de hemates x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000 N de hemates x mm3 = hemates contados x 10 000

EJEMPLO:
En el anlisis hecho, el nmero de eritrocitos fue de

491, que al multiplicarse por 10 000 daba como resultado 4 910 000/mm3, lo que indica un ndice normal.

VALORES DE REFERENCIA
(Millones de clulas/mm3) Hombres:....4 500 000 - 5 500 000 Mujeres:......4 000 000 - 5 000 000 Nios (4 aos):.........................4 200 000 - 5 200 000 Lactantes (1-6 meses):......3 800 000 - 5 200 000 Recin nacidos:...5 000 000 - 6 000 000

Es importante conocer el numero de eritrocitos se halla concentraciones bajas : en pacientes con anemia causada por perdida de eritrocitos o hemolisis . concentraciones elevadas: en pacientes con deshidratacin o con policitemia,etc

OBSERVACIONES

Diafragma del condensador cerrado en su mayora Diferencia < 10 clulas entre cuadrantes Realizar dobles determinaciones Tener en cuenta que la cmara no est reseca Cmara limpia Cubrecmara colocada correctamente No tener burbujas de aire en el relleno de la cmara/pipeta Cmara sobrellenada Tiempo de sedimentacin corto