Kromatografi
Kromatografi
Syarif Hamdani
http://www.catatankimia.com
Kromatografi
Adalah teknik pemisahan fisik suatu campuran zat-zat kimia yang berdasar pada perbedaan migrasi dari masing-masing komponen campuran yang terpisah pada fase diam di bawah pengaruh pergerakan fase gerak
http://www.catatankimia.com
Sejarah kromatografi
Pertama kali diperkenalkan oleh W. Ramsey pada tahun 1905 Istilah kromatografi (artinya penulisan warna) pertama kali diberikan oleh Mikhail Semenovic Tswett pada tahun 1908 KLT diperkenalkan oleh Izamailov dan Shraiber pada tahun 1938
http://www.catatankimia.com
2.
3.
4.
Kromatografi dengan asas adsorpsi, memakai fase diam padat dan fase gerak cair atau gas Kromatografi dengan asas partisi, memakai fase diam cair dan fase gerak cair Kromatografi dengan asas fitrasi, memakai fase diam padat yang mempunyai sifat fitrasi dan fase gerak cairan Kromatografi dengan asas suhu kritik, memakai CO2 dalam keadaan superkritik
http://www.catatankimia.com
Klasifikasi kromatografi
kromatografi gas SFC liquid
GSC
GLC
LSC LLC BPC IEC EC
colomn
planar
TLC PC
GPC
http://www.catatankimia.com
GFC
Kromatografi Gas
Macamnya : Kromatografi gas padat : fase diam adalah butiran-butiran adsorben dan fase gerak adalah gas Kromatografi gas cair : fase diam adalah cairan yang disalutkan pada permukaan tipis butiran padat dan fase gerak adalah gas
http://www.catatankimia.com
Kromatografi gas
Sampel berupa gas. Untuk senyawa yang bukan gas dibuat turunan esternya. Gas pembawa : He, Ar, N2 atau campuran He dan CH4 Detektor terdiri dari berbagai macam tergantung keperluan diantaranya : TCD, FID,ECD, NPD, FPD, IRD, TID, dll. Analisis kualitatif dibandingkan terhadap BANK DATA
http://www.catatankimia.com
Identitas komponen dijabarkan dalam harga Rf (retardation factor) yang dalam penentuan kualitatif dibandingkan dengan standar Untuk tujuan kuantitatif digunakan KLT preparatif (dikerok lalu senyawa diisolasi dalam pelarutnya)
http://www.catatankimia.com
Kromatografi Kertas
Prinsip sama dengan KLT Fase diam adalah air yang didukung oleh pelat serat selulosa, fase mobil air dicampur pelarut organik Lebih banyak digunakan untuk pemisahan senyawa non polar, karena selulosa (kertas) bersifat polar Banyak digunakan untuk pemisahan senyawa bahan alam Kekurangan : lebih lama karena panjang kertas bisa sampai 50 cm.
http://www.catatankimia.com
Kromatografi Kolom
Digunakan untuk isolasi senyawa dari sample Merupakan kelanjutan dari KLT Prinsip pemisahan, fase diam dan fase gerak sama dengan KLT
http://www.catatankimia.com
Dimaksudkan untuk mendapatkan pemisahan dan hasil analisa kuantitatif yang baik dengan waktu singkat Pelarut pengembang harus dipilih dengan seksama Kolom harus sesuai Detektor harus memadai Sample berupa larutan
http://www.catatankimia.com
HPLC
Liquid Chromatography
http://www.catatankimia.com
The original development of HPLC used higher pressures than previously used ----High Pressure Liquid Chromatography
However, over the years the preferred term has become: High Performance Liquid Chromatography
http://www.catatankimia.com
Advantages of HPLC
High resolution Speed Re-usable columns Great reproducibility Control of physical parameters flow rate, polarity, packing efficiency, and particle size. Easy automation of instrument and data analysis.
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
SOLVENTS
Includes both liquid phase and solid materials (Buffers) dissolved in the liquid.
http://www.catatankimia.com
Solvent properties affecting detection Solvent properties affecting separation Solvent properties affecting flow Viscosity Miscibility
http://www.catatankimia.com
BUFFERS
1)Buffers are needed to control the pH differences caused by the sample matrix.
2)Buffers are used to control the ionization of compounds and therefore their retention by the column.
http://www.catatankimia.com
partially charged
Basic Compound
fully charged
pKa
6 pH
http://www.catatankimia.com
SOLVENT SELECTIVITY
The less time a compound spends in the stationary phase, the faster it will move through the column (less retention time). If two compounds are added to the column, the ratio of their retention times is called the selectivity. The higher the selectivity, the better the separation. Selectivity can be increased by adjustment of the mobile and stationary phases.
http://www.catatankimia.com
1) Each dot in the triangle represent a different solvent 2) Solvents can be grouped based on their type of polarity 3) Solvents and solvent mixtures are available for just about any separation you may desire.
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
P = 250 L F / Dp Dc
2
Where P = pressure drop in psi. L = column length (cm) = solvent viscosity (cP)
http://www.catatankimia.com
EXAMPLE
P = 250 L F / Dp2 Dc2
column length = 15 cm, column diameter =.5 cm, particle diameter = 5 m, flowrate = 2.0 mL/min
For water n = 1.0 250 x 15 x 1.0 x 2 / 52 x .52 = 7125/6.25 = 1200 psi For methanol n = 0.54 250 x 15 x .54 x 2 / 52 x .52 = 2025/6.25 = 648 psi For 60% water n = 1.9 250 x 15 x 1.9 x 2 / 52 x .52 = 7125/6.25 = 2280 psi 40% methanol
http://www.catatankimia.com
SOLVENTS
UV Cutoff
--Y Y Y Y N N N
http://www.catatankimia.com
Peripheral Properties
Toxicity Flammability Reactivity solvent should not react with sample Cost Disposal can be more than purchase cost
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com
N=L/H
where N is number of plates, H is plate height and L is Column Length Therefore, doubling the column length will double N but this will double analysis time and pressure!
http://www.catatankimia.com
What is the effect of column geometry on Theoretical Plates? Decreasing column diameter by half
For comparison purposes, lets keep the mobile phase velocity constant. Therefore, flow would be reduced 4X and analysis wont take any longer! halving the column diameter can also increase N slightly This reduces the amount of solvent used by 4X but also reduces the amount of sample that can be injected by 4X.
http://www.catatankimia.com
What is the effect of column geometry on Theoretical Plates? Decreasing particle size by half
Will increase pressure by 4X
However, halving the particle size can double N Decreasing particle size and making the column half as long will keep N the same but cut sample time in half and solvent use in half.
http://www.catatankimia.com
In general small diameter columns with small particles are best for rapid separation, .but require higher pressures, smaller samples, and can plug easier. The problem with plugging should not be underestimated and care should be exercised in keeping the sample, mobile phases, and columns CLEAN!
http://www.catatankimia.com
http://www.catatankimia.com