Anda di halaman 1dari 24

BIOLOGI MOLEKULER

Penelitian Biologi molekuler makin berkembang, sejak penemuan double helix DNA dari WatsonCrick Rekayasa genetika: manipulasi langsung gengen untuk tujuan-tujuan praktis DNA Rekombinan Kloning Gen Transgenik Terapi Gen PCR

gen

DNA Rekombinan
DNA Rekombinan : DNA di mana gen-gen dari 2 sumber yang berbeda terhubung DNA rekombinan digambarkan juga sebagai: molekul yang yang dibangun di luar sel dengan menggabungkan secara alami atau sintetik segmen-segmen DNA menjadi molekul DNA yang dapat mengalami replikasi pada sel hidup

SASARAN DARI REKOMBINAN DNA


Untuk MENGISOLASI dan MENANDAI suatu gen Untuk MEMBUAT PERUBAHAN-PERUBAHAN YANG DIINGINKAN dalam satu gen atau lebih yang telah diisolasi Untuk MENGEMBALIKAN GEN-GEN YANG TELAH DIUBAH UNTUK TINGGAL DI DALAM SEL (atau menjadi bagian dari sel binatang atau tumbuhan) untuk MENGUJI ATAU MENGGUNAKAN EKSPRESI MEREKA

ALAT BANTU UTAMA UNTUK TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN :


A. ENZIM-ENZIM Asam Nukleat: DNA polimerase, reverse transkriptase, DNA ligase, Endonuclease restriksi B. BACTERIAL GENETICS: PLASMIDS, BACTERIOPHAGES (bacterial viruses) C. ANIMAL VIRUSES AND ANIMAL CELL CULTURE TECHNIQUES

Enzim-enzim yang memanipulasi DNA ada empat yaitu : 1. Enzim Nuklease ( yang memotong asam nukleat ) 2. Enzim Ligase ( yang menyambung asam nukleat menjadi satu ) 3. Enzim Polimerase ( yang membuat copy dari molekul DNA) 4. Enzim Modifikasi ( yang menghilangkan gugus kimia )

Restriction endonucleases
Also called restriction enzymes: digest DNA at specific sequences

Sequence Recognition
Restriction endonucleases -memotong double strand DNA pada urutan yang spesifik, perlindungan melawan terhadap virus-virus di dalam bakteri.

Sequences often palindromes: suatu urutan yang sama ketika dibaca dari arah manapun

DNA Cloning
Langkah langkah: Isolasi vektor pengklonan (plasmid bakteri) & sumber gen DNA (gen yang diminati) Penyisipan sumber gen DNA ke dalam vektor pengklonan menggunakan enzim pemotong yang sama; mengiikat fragmen DNA dengan DNA ligase Pengenalan vektor pengklonan ke dalam sel (perubahan bentuk oleh sel bakteri) Pengklonan sel-sel (dan gen-gen asing) Identifikasi klon sel yang membawa gen yang diminati

DNA Analysis & Genomics


PCR (polymerase chain reaction) Gel electrophoresis Restriction fragment analysis (RFLPs) Southern blotting DNA sequencing Human genome project

Polymerase chain reaction (PCR)


Amplification : memperbanyak jumlah potongan dari DNA di luar sel (in vitro) Materials: heat, DNA polymerase, nucleotides, single-stranded DNA primers Applications: fossils, forensics, prenatal diagnosis, etc.

DNA Analysis
Gel electrophoresis: memisahkan asam nukleat atau protein-protein atas dasar ukuran yang menghasilkan ikatan DNA yang panjangnya sama

Restriction fragment analysis


Restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) Southern blotting: transfer DNA DNA Fingerprinting

DNA Sequencing
Determination of nucleotide sequences (Sanger method, sequencing machine) Genomics: the study of genomes based on DNA sequences Human Genome Project

Cloning
Mechanisms Megan, Morag, Dolly and Polly The uses and problems of cloning Therapeutic cloning

What is a clone?
A clone is an individual that is genetically identical to another individual

Mechanisms of cloning Natural Embryo splitting Reprogramming somatic cells Nuclear transfer

Transgenik
Tanaman atau hewan hasil rekayasa dengan cara disisipi satu atau sejumlah gen. Gen yang dimasukkan - disebut transgene - bisa diisolasi dari tanaman atau hewan tidak sekerabat atau spesies lain sama sekali. Karena berisi transgene, organisme tersebut disebut organisme yang mengalami rekayasa genetika (genetically modified organisms, GMOs).

Tanaman transgenik

Terapi Gen
Digunakan untuk perlakuan penyakit genetik Transfer allel yang normal ke dalam sel somatik yang mengalami mutasi Vectors digunakan untuk transfer DNA ke dalam sel biasanya menggunakan virus virus mengambil alih tugas sel dengan menyisipkan gen mereka kedalam genom dari penderita

Dua cara untuk terapi gen pada manusia:

ex vivo : sel somatik dipindahkan dari


pasien, diubah dengan gen terapi dan dikembalikan ke pasien. in vivo : virus digunakan untuk menginfeksi jaringan pasien secara langsung

In Vivo and Ex Vivo Gene Therapy Approaches

Practical DNA Technology Uses


Diagnosis of disease Human gene therapy Pharmaceutical products (vaccines) Forensics Animal husbandry (transgenic organisms) Genetic engineering in plants Ethical concerns?