PRINSIP DAN JENIS KROMATOGRAFI

By : YUDI PURNOMO, M.KES., APT.

PENGERTIAN KROMATOGRAFI

Teknik pemisahan fisika-kimia suatu campuran zat kimia berdasarkan perbedaan migrasi dari masingmasing komponen campuran yang terpisah pada fase diam dibawah pengaruh fase gerak Pemisahan zat terlarut oleh suatu proses migrasi diferensial dinamis dalam sistem yang terdiri dari 2 fase /lebih, salah satunya bergerak secara berkesinambungan dalam arah tertentu dan didalamnya zat itu menunjukkan perbedaan dalam adsorpsi, partisi, kelarutan, tekanan uap, ukuran molekul atau kerapatan muatan ion (F.I edisi. 4)

TUJUAN KROMATOGRAFI

Memisahkan komponen dari matriks (campurannya) dan tetap dibiarkan dalam fase diam kemudian ditentukan untuk keperluan : 1. Analisa (kualitatif dan kuantitatif) 2. Isolasi atau pemurnian 3. Tujuan produksi (preparatif)

ASAS KROMATOGRAFI

Asas terjadinya proses pemisahan pada kromatografi : 1. Partisi : Fs diam padat dan Fs gerak cair (perbedaan polaritas) 2. Adsorpsi : Fs diam dan Fs gerak cair (perbedaan Kd=koefisien distribusi) 3. Filtrasi : Fs gerak cair dan Fs diam padat yg mpy sifat filtrasi thd analit ber Mr tinggi, (perbedaan stuktur dan ukuran molekul) 4. Suhu kritik : Fs gerak CO2 dalam keadaan super kritik

KEUNTUNGAN METODE KROMATOGRAFI

Proses berlipat ganda thd analit yang dipisahkan Jangkauan analisa kualitatif dan kuantitatif Tujuan produksi atau preparatif Dapat dikerjakan dengan mudah dan cepat Biaya relatif murah & eluen dapat dipakai ulang Ketelitian dan ketepatan memadai

PENERAPAN METODE KROMATOGRAFI

Isolasi atau pemurnian Identifikasi Penentuan kadar Pemisahan analit dari matriks atau campuran Produksi atau preparatif

KLASIFIKASI KROMATOGRAFI A. Berdasarkan asas Pemisahan

1. Kromatografi dengan asas Adsorpsi (PC, TLC, IEC, GSC, HPLC, CC) 2. Kromatografi dengan asas Partisi (CC, PC, GLC, HPLC) 3. Kromatografi dengan asas Filtrasi (GFC) 4. Kromatografi dengan asas Suhu Kritik (SFC)

B. Berdasarkan Jenis fase

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Gas Padat : GSC Gas Cair : GLC Cair Padat : HPLC, TLC Cair Cair : PC, HPLC Gas/Cair Cair : SFC Cair Resin Pertukaran ion : IEC Cair Permiasi Gel : GPC Cair Filtrasi Gel : GFC

ELUASI KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

KROMATOGRAFI KOLOM

KROMATOGRAFI GAS

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (HPLC)

ELEKTROFORESA

HASIL ELEKTROFORESA

IMMUNOBLOTHING

BAND PROTEIN