Estructura

La cianocobalamina o vitamina B12 es un complejo hexacoordinado de cobalto. Cuatro posiciones de coordinacin estn ocupadas por un macro ciclo de corrina. Una de las posiciones axiales se completa con un grupo cianuro (CN-). Una cadena lateral del anillo de corrina compuesta por una amida, un grupo fosfato, una ribosa y un nucletido completa la coordinacin a travs del resto 5,6-dimetilbenzimidazol en su extremo. La corrina, el grupo fosfato y el CN- proporciona cada uno una carga negativa, presentndose el cobalto en estado de oxidacin +3. El complejo resulta ser de bajo espn.

ESTRUCTURA QUMICA El trmino cobalamina se refiere a una familia de compuestos con una estructura determinada. La vitamina B12 es una cobalamina (PM 1,355) que resulta de la unin asimtrica de 4 anillos pirrlicos, formando un grupo macrocclico casi planar (ncleo corrina) en torno a un tomo central de cobalto (Co). El anillo corrina es parecido al anillo porfirnico y se diferencia de ste por el carcter asimtrico de las uniones entre los grupos pirrlicos. En esta estructura, el Co posee 6 valencias de coordinacin, 4 de las cuales establecen enlace covalente con los correspondientes nitrgenos (N) de losanillos pirrlicos. La quinta valencia de coordinacin se halla siempre unida a un seudonucletido complejo, el 5,6 dimetilbencimidazol, casi perpendicular al ncleo y la sexta valencia al unirse a diferentes radicales originan los diversos derivados de la cobalamina La hidroxicobalamina y la cianocobalamina (vitamina B12) son formas no fisiolgicas de la cobalamina; en el organismo se transforman de forma espontnea en metil y 5' desoxiadenosil que son las formas fisiolgicamente activas o coenzimas de la vitamina B12. La cianocobalamina por exposicin a la luz y a los agentes reductores pasa rpidamente a la forma de hidroxicobalamina.4

Es bien conocido que la hidroxicobalamina es un antdoto con alta afinidad por el cianuro, que forma cianocobalamina en una relacin molar, por lo que es posible que participe en la eliminacin de esta toxina en los seres humanos.32 El tabaco y ciertos alimentos como frutas, frijoles y algunos tubrculos contienen cianuros que pudieran ser neutralizados por las cobalaminas.

Tipos de formas moleculares La cobalamina tiene formas moleculares como cianocobalamina, hidroxicobalamina y nitrocobalamina . Adems se sabe que: la cobalamina est constituido por un nucleo tetrapirrolico (anillo de la corrina, semejantes a la porfirinas), con un atomo de cobalto en el centro del anillo corrinoide unido a los 4 nitrogenos tetrapirrolicos. El quinto enlace, se realiza con un nitrgeno de un nucleo benzimidazolico. El sexto enlace tiene origen a las distintas formas de la cobalamina: 1234Un ion cianuro (cianocobalamina) Un grupo hidroxilo (hidroxicobalamina) Un grupo metilo (metilcobalamina) Un resto 5 desoxiadenosilo (desoxiadenosilcobalamina)

ABSORCIN El tracto gastrointestinal humano est provisto de un complejo sistema para la absorcin eficiente de las mnimas cantidades de vitamina B12 de la dieta, el cual consta de 5 pasos: Liberacin de las cobalaminas de los alimentos. Unin de las cobalaminas y sus anlogos por las cobalofilinas del estmago. Digestin de las cobalofilinas en la parte alta del intestino por las proteasas pancreticas con transferencia solamente de las cobalaminas al factor intrnseco (FI). Adhesin del complejo vitamina B12- FI al receptor especfico en el leon. Endocitosis y unin intracelular a la transcobalamina II (TcII) En el estmago la vitamina B12 es liberada del alimento por digestin pptica, proceso esencial para la absorcin normal de sta. Una vez liberadas del alimento, las cobalaminas y sus anlogos son unidas por las cobalofilinas, tambin llamadas haptocorrinas o protenas R, que son glicoprotenas de 66 KD de peso molecular con una elevada afinidad de unin al pH cido de las secreciones gstricas. Estas protenas R constituyen un grupo inmunolgicamente relacionado compuesto por un polipptido simple variable sustituido con oligosacridos que terminan con diferentes cantidades de cido silico. Se encuentran en la leche, el plasma, la saliva, el jugo gstrico y otros fluidos corporales y se plantea que son sintetizadas por los rganos que las secretan y por los fagocitos, pero son incapaces de promover la absorcin intestinal de la vitamina B12. En el estmago adems se produce la secrecin, por las clulas parietales del fundus y el cardias, del FI, que es una glicoprotena termolbil, estable en medio alcalino y resistente a la digestin proteoltica, que une cobalaminas con alta afinidad (Ka=1010/mol) y especificidad (no une los anlogos de la cobalamina). Es un monmero de aproximadamente 45 KD de peso molecular codificado por un gen en el cromosoma 11,16 compuesto aproximadamente por el 15 % de carbohidratos y unos 350 residuos

aminoacdicos en su porcin proteica.12 Cuenta en su estructura con 2 sitios especficos de unin: uno para la cobalamina, situado cerca del extremo carboxilo terminal y el segundo para un receptor especfico ileal, ubicado cerca del extremo amino terminal de la molcula. En presencia de cobalamina, 2 molculas del monmero se combinan rpidamente para formar un dmero que une 2 molculas de vitamina B12. Cada miligramo de FI une aproximadamente 30 g de cobalamina y la cantidad de esta protena secretada diariamente es suficiente para unir de 40 a 80 g de vitamina B12.12 La secrecin de FI est a cargo de las mismas clulas que producen al cido clorhdrico, por lo que es estimulada por la presencia de alimentos en el estmago, por la gastrina e histamina, y se encuentra bajo control vagal parcial. Adems es inhibida por atropina y vagotoma, somatostatina y por bloqueadores del receptor H2 de la histamina como la cimetidina y el omeprazol. Cuando los complejos protena R- vitamina B12 pasan al duodeno, son expuestos a las proteasas pancreticas, al pH alcalino del intestino, la protena R es degradada y la vitamina B12 es liberada del complejo y se une al FI para formar el complejo vitamina B12-FI.3 Estos complejos son muy resistentes a la digestin, por lo que transitan a travs del intestino delgado hasta llegar al leon, que es el sitio de absorcin de la cobalamina, ya que los enterocitos ileales son altamente especficos para esta funcin. Al alcanzar el leon, los complejos vitamina B12-FI comienzan a unirse a receptores especficos de la membrana de las microvellosidades de la clula mucosa, proceso que se verifica a pH entre 6,4 y 8,4 y requiere la presencia de cationes divalentes, especialmente calcio (Ca2+), pero no necesita energa metablica. La presencia de estos receptores aumenta en frecuencia al aproximarse al leon terminal, siendo su densidad mxima en la vecindad de la vlvula leo- cecal. Este receptor consta de 2 subunidades y tiene una secuencia aminoacdica muy semejante al FI, lo que sugiere un origen evolutivo por duplicacin de genes. Posteriormente, el receptor unido al complejo vitamina B12-FI es internalizado por endocitosis, pasando a los lisosomas, donde despus de un perodo de 4 a 5 horas se libera la cobalamina. Las molculas de receptores reciclan hacia las microvellosidades para la captacin de nuevos complejos vitamina B12-FI. Por su parte, la vitamina B12 libre en el citosol del enterocito se une a la transcobalamina II, glicoprotena de transporte que se encarga de su distribucin a los tejidos y los hemates, y pasa al sistema portal. Este proceso dura varias horas y el mximo de la vitamina en sangre se alcanza aproximadamente 8 horas despus de la ingestin. Cuando llegan al intestino cantidades fisiolgicas de vitamina B12 el FI es imprescindible para su absorcin, pero cuando alcanzan la luz intestinal grandes cantidades, dosis farmacolgicas del orden de 1 o ms miligramos, la cobalamina atraviesa la barrera entrica por simple difusin y puede aparecer en sangre antes que en el caso de la ingestin de cantidades fisiolgicas. Esta ventaja es utilizada en individuos en los que se desee evitar el empleo de la va parenteral para la administracin del tratamiento. Como los folatos, la cobalamina participa en una circulacin enteroheptica. Entre 0,5 y 9 g de cobalamina son secretados diariamente en la bilis unidos a una protena R. Estos complejos cobalamina-protena R son tratados en el intestino exactamente igual que aquellos que provienen del estmago, o sea, la cobalamina es liberada por digestin de la protena R por las proteasas pancreticas y entonces es tomada por el FI y reabsorbida. Se ha estimado que del 65 al 75 % de la cobalamina biliar es reabsorbida por este mecanismo. Esta circulacin enteroheptica genera un importante ahorro de vitamina B12 y permite comprender que cuando la carencia es por una insuficiencia diettica pura, el dficit se manifiesta ms tardamente (entre 3 y 4 aos).

Vitamina B12, "la llave del cerebro humano" La historia del descubrimiento de la vitamina B12 es la historia de una continua dificultad, comenz cuando entre 1824 y 1855 Combe y Addison publicaron varias descripciones de casos de una misteriosa enfermedad, la anemia megaloblstica (es decir, una anemia en la que los glbulos rojos aunque eran poco numerosos tenan un tamao anormalmente grande). Unos aos ms tarde, en 1860, Flint comprob que en estos pacientes era frecuente una alteracin del estmago que consista en una severa atrofia. Relacion as la enfermedad con trastornos digestivos, una relacin que se confirmara y ampliara en trabajos posteriores. En 1872, Biermer bautiz la enfermedad con el nombre que ha persistido hasta hoy, anemia perniciosa, una enfermedad incurable y progresiva que no slo afectaba a la sangre y al sistema digestivo, sino que en sus fases avanzadas daaba tambin al sistema nervioso, llegando a causar una demencia irreversible. Pas ms de un siglo sin que se pudiera hacer nada por curar a estos enfermos, cuyo desenlace era realmente desgraciado, pues al entrar en las psicosis que lentamente les llevaran al estado demencial entraban tambin en los manicomios, donde eran tratado por la psiquiatra del momento, incapaz ni siquiera de aliviar sus sufrimientos. En 1925, George Whipple realiza una observacin que iba a resultar muy provechosa. Whipple se haba dedicado a producir anemia mediante sangrado a perros en su laboratorio y proporcionarles despus las dietas que l supona que les serviran para recuperar ms rpidamente la prdida de hemoglobina, lleg a la conclusin de que el alimento que permita a los perros reponer hemoglobina en menos tiempo era el hgado de vaca. Estos experimentos, llevaron a dos mdicos de Boston, George Minot y William Murphy en 1926, a sugerir la conveniencia de utilizar el hgado de vaca para intentar tratar a los pacientes con anemia perniciosa, que sufran falta de glbulos rojos. El resultado que obtuvieron fue no slo la atenuacin de la anemia, sino el restablecimiento absoluto. En 1929, Castle haba demostrado que si los enfermos de anemia perniciosa ingeran carne previamente digerida por jugo gstrico de sujetos normales, notaban efectos beneficiosos comparables a los de la ingestin de hgado de vaca. De lo que dedujo la necesidad de la existencia de un factor intrnseco, que sera secretado al jugo gstrico por las clulas del estmago y que reaccionara sobre la nueva vitamina o factor extrnseco contenido en los alimentos formando el principio antianmico, cuya falta, por alteracin de uno de los dos factores o ambos, originara la anemia perniciosa. En 1948, en los laboratorios de la compaa Merck, Rickes y Folkers aislaron la tan buscada vitamina, que ya haba recibido el nombre de vitamina B12 antes de ser identificada, porque mostraba algunas propiedades similares a las de otras vitaminas del grupo B. Y a la que ellos llamaron cianocobalamina, pues al quemar sus muestras puras, en las cenizas aparecan restos de cobalto. Su obtencin es relativamente sencilla y barata, gracias a la observacin de Mary Shorb en 1947 de que los lquidos de fermentacin de la bacteria Lactobacillus Lactis contenan vitamina B12.

METABOLISMO

Para ser til a la clula, la cianocobalamina y la hidroxicobalamina deben ser convertidas en 5' desoxiadenosil y metilcobalamina, las formas coenzimticamente activas de la cobalamina. Esto se logra por reduccin y alquilacin de las formas farmacolgicas antes mencionadas La cianocobalamina y la hidroxicobalamina son primero reducidas a Co2+ (cob(II)alamina) (fig. 2,[10]) por reductasas dependientes de NADPH y NADH, que estn presentes en las mitocondrias y los microsomas. Durante esta reduccin, el cianuro y el hidroxilo son desplazados del metal. Una parte de las cobalaminas(II) son reducidas en la mitocondria a la forma intensamente reducida Co+ (cobalamina) (I) (fig. 2,[11]), la cual es alquilada por el ATP para formar 5' desoxiadenosilcobalamina en una reaccin en la que la porcin 5' desoxiadenosil del ATP es transferida a la cobalamina y los 3 fosfatos son liberados como trifosfato inorgnico (fig. 2,[12]). El resto de la cobalamina se une a la N5 metiltetrahidrofolato- homocistena metiltransferasa citoslica, donde es convertida en metil cobalamina (fig. 2,[15 y 16]). Cualquier alteracin en estos pasos metablicos puede producir defectos hereditarios del metabolismo de la vitamina B12. Las reacciones bioqumicas bsicas iniciales en las que intervienen la vitamina B12 o sus derivados son:

La 5-desoxiadenosilcobalamina acta como coenzima activo catalizando la reaccin en la que el enzima metilmalonil CoA mutasa realiza un reordenamiento qumico, la conversin de L-metilmalonil CoA en succinil CoA. La ausencia de 5-desoxiadenosilcobalamina causa la interrupcin de esta reaccin bioqumica y consecuentemente de toda la va, de forma que el L-metilmalonil CoA, al no poder ser transformado en succinil CoA, se estanca y acumula en forma de metilmalonato. Se produce as una enfermedad metablica caracterstica.

La cobalamina hace el papel de aceptor en la transferencia de grupos metilo a partir de N5metiltetrahidrofolato, el anlogo de la vitamina B9, suministrado por la sangre a las clulas, que en esta reaccin se convierte en tetrahidrofolato. El tetrahidrofolato es el precursor o sustrato a partir del que se formarn los folilpoliglutamatos intracelulares, para lo cual le hacen falta grupos monocarbnicos procedentes de la metionina, pero la produccin de metionina depende de la actuacin de la metilcobalamina. De manera que si se produce una deficiencia de cobalamina en la clula, la disponibilidad de tetrahidrofolato se ver reducida, impidiendo la fabricacin de ADN en las cantidades habituales, especialmente en las clulas que se dividen con ms frecuencia, como son las clulas hematopoyticas de la medula sea, que construyen los glbulos rojos. La primera consecuencia de ello es que se construyen pocos glbulos rojos, y se produce as una anemia; la segunda es que los glbulos rojos que salen de la mdula sea son morfolgicamente defectuosos, ya que su ncleo es muy grande como consecuencia de que el ADN que contiene no ha podido dividirse correctamente.

La metilcobalamina es el coenzima activo que colabora con el coenzima homocistena transmetilasa en la reaccin bioqumica que permite la transformacin de homocistena en metionina, en la que el grupo metil de la metilcobalamina pasa a la homocistena. Para regenerar la metilcobalamina es necesario el aporte de otro grupo metil, que es suministrado por el N5-metiltetrahidrofolato. A partir de la metionina obtenida se forma con facilidad S-adenosilmetionina, al ser transferido el grupo adenosilo del ATP, al tomo de azufre de la metionina. La importancia de la S-adenosilmetionina reside en que al poseer un elevado potencial de transferencia de grupos metil, est en condiciones ventajosas para cederlo a toda una gama de posibles aceptores. Por ello se considera que la reaccin controlada por la metilcobalamina es fundamental para el desarrollo de numerosos procesos de biosntesis, que en su ausencia no se podran llevar a cabo.

En 1948, despus de mltiples trabajos que aparentemente no produjeron resultados, aparece casi simultneamente dos comunicaciones que anuncian haber completado el aislamiento, la primera de ellas por el cientficos de la compaa Merck de Estados Unidos, y la segunda por dos cientficos britnicos, Smith y Parker. El producto obtenido se describe como un compuesto rojo cristalino que produce respuesta hematolgica en pacientes con anemia, y que por medio de anlisis espectrografico queda identificado como un complejo de Cobalto que contiene Fosforo y Nitrgeno y carece de Azufre. FUENTES NATURALES DE OBTENCIN

La vitamina B12 se encuentra en los tres grandes reinos de la naturaleza, distribuida nicamente en el reino animal, de ah que uno de sus primeros nombres fuera el de factor animal. Se ha reportado la presencia de vitamina B12 en algunas algas, sin embargo, se tiene la creencia de que la vitamina en si no es producida por las algas sino por algunos tipos de bacterias que viven en ellas. A pesar de encontrarse la vitamina en tejidos animales, la creencia general es que sta producida nicamente por fermentacin microbiana, y que ha sido ingerida o bien sintetizada dentro del animal, por su misma flora intestinal y posteriormente asimilada.los microorganismos que habitan en el suelo aparecen como fuente primaria de vitamina, encontrndose que el estircol, al fango y el lodo de alcantarillas son fuentes muy ricas en cuanto a su contenido vitamnico.

La vitamina B12 fue descubierta en 1948, se distingue por su color rojo y por la presencia en su molcula de cobalto y de fsforo. Es adems la nica vitamina que las plantas superiores son incapaces de sintetizar. La manifestacin ms importante de la carencia de vitamina B12 es la anemia perniciosa de Addison. Se conoca desde haca mucho tiempo la anemia perniciosa. Era una enfermedad que no responda ante ningn tratamiento y terminaba por la muerte. En 1926, se descubri que grandes cantidades de hgado restauraban el nivel normal de glbulos rojos en los enfermos. Luego la enfermedad poda estar relacionada con factores nutricionales. En 1948, un equipo de Merck and col., New Jersey, anunci el aislamiento a partir de un concentrado de hgado de un pigmento rojo cristalino bautizado vitamina B12. Poco despus, se suministr la prueba que unas inyecciones producan una mejora drstica de los enfermos de anemia perniciosa.

Terapias de Desintoxicacin En el autismo yTGD, hay rutas metablicas de desintoxicacin muy afectadas o bloqueadas (en parte por los metales txicos y en parte por la falta de vitaminas y minerales necesarios para llevar a cabo estos procesos). Una de las principales rutas bloqueadas son la de la metilacin y sulfo-detoxificacin. Estos dos procesos, adems de ser esenciales para la clula, son interdependientes entre si y requieren el mismo sustrato: homocisteina.

Metilacin Bloqueada En los nios con trastornos del desarrollo, suele estar muy afectada un tipo especial de metilacin (debido a la accin bloqueadora del mercurio, antimonio, plomo, arsnico, pesticidas organofosforados y citokinas inflamatorias). Debido a este bloqueo, el ciclo de la metionina (metionina SAMe SAH homocisteina metionina SAMe, etc.) va lento y tiene retenciones, lo que conlleva a un bajo suministro a las neuronas y afectando as su funcionamiento y coordinacin. Un aumento de la homocistena urinaria podra reflejar este defecto de metilacin. Para desbloquear la metilacin y recuperar la normalidad del ciclo de la metionina, mejorando asi la operatividad y coordinacin neuronal, se ha demostrado muy eficaz:

El uso de los siguientes compuestos ortomoleculares (cada paciente segn sus propios dficits) :
o

Metilcobalamina (mediante inyecciones subcutneas) - es el nico metilador que trabaja en las clulas cerebrales (de ah su importancia en estos nios).