LAPORAN PRAKTIKUM BIOREGULATOR Pengamatan Aktivitas Enzim Amilase pada Kecam a!

Kacang "i#a$%

Oleh : Yuda Anggi Pradista Heksa Desi Amalia Yeni Patma ati "ardatul #aedh$% (101810301025) (101810301026) (10181030102!) (1018103010&5)

&$'$san Kimia (ak$ltas Matematika dan Ilm$ Pengeta!$an Alam Unive'sitas &em e' )*+)

' 1 ''

T$#$an (engetahui akti)itas ker*a en+im amilase ,ada ke-am.ah ka-ang hi*au Ke'angka Be'piki'
Amilase Amilum Kecambah Kacang Hijau

Absorbansi

Konsentrasi protein Aktivitas Enzim

'''

Tin#a$an P$staka Enzim amilase adalah enzim yang mengkatalisis reaksi pemecahan

amilum yang meruapakan suatu polisakarida yang terdiri atas amilosa dan amilopektin menjadi gula disakarida. Enzim -amilase meruapakan enzim yang mengkatalisis pemutusan ikatan glikosida -1 ! m$lekul amilum se-ara a-ak/ Enzim -amilase memiliki nama lain - 10&1D1glu-anglu-an$h2dr$lase0 end$am2lase0 34 3/2/1/1/ 3n+im ini dapat ditemukan pada mikroorganisme tumbuhan dan organism tingkat tinggi lainnya. -amilase dimiliki oleh "amily endo-amylase 2ang mengkatalis a al hidr$lisis ,ati men*adi $lig$sakarida 2ang

lebih pendek melalui pemecahan ikatan -#-$1-!% glikosidik. 3n+im am2lase tersusun dari 512 asam amin$ ,ada rantai tunggal $lig$sakarida dengan .erat m$lekul 5506 kDa (#i$gen0 2008)/ 6isi akti7 al,ha1amilase .erisi tiga kel$m,$k asam (.er arna ,utih dan merah) 2ang melakukan se.agian .esar ,eker*aan/ Pada struktur 2ang ditam,ilkan di atas glutamat 2330 as,artat 15! dan as,artat 28! .eker*a sama untuk mem.elah hu.ungan antara dua gula dalam rantai ,ati/ 6truktur ini mengandung rantai ,endek dari lima unit gula (.er arna kuning dan $ran2e) terikat di situs akti7/

Enzim -amilase banyak terdapat pada kecambah kacang-ka-angan0 se,erti haln2a ka-ang hi*au. Enzim -amilase termasuk ekstraselular sehingga mengekstraknya relati" mudah. Enzim ini dalam biji dibentuk pada &aktu a&al perkecambahan oleh asam giberilik. Asam giberilik adalah suatu senya&a organik yang sangat ,enting dalam ,r$ses ,erke-am.ahan suatu .i*i karena .ersi7at se.agai ,eng$ntr$l ,erke-am.ahan terse.ut ("inarn$0 1!83)/ Akti)italisme di,engaruhi $leh garam1garam an$rganik0 ,H0 suhu dan -aha2a/ ,H $,timum dari amilase menurut H$,skin 4$le dan 8reen adalah &05 9 &05 ("hita-kr0 1!!&)/ :arutan .u77er adalah larutan 2ang tahan terhada, ,eru.ahan ,H dengan ,enam.ahan asam atau .asa/ :arutan se,erti itu digunakan dalam .er.agai ,er-$.aan .i$kimia dimana di.utuhkan ,H 2ang terk$ntr$l dan te,at ( ;ardia+0 1!!2 )/ :arutan .u77er .erman7aat untuk melarutkan k$t$ran 2ang masih terikut di dalam enda,an en+im terse.ut sekaligus .isa men-egah en+im dari denaturasi dan kehilangan 7ungsi .i$l$gisn2a ( ;$<0 1!!1 )/ #u77er da,at mem,ertahankan k$ndisi en+im ,resi,itat agar tidak ter*adi ,eru.ahan ,H dan men-egah agar en+im tidak mengalami inakti)asi ("inarn$0 1!!5 )/

'=

Met,de pe'c, aan

-.+ Alat dan Ba!an -.+.+ Alat 1 2 3 & 5 6 5 8 ! 10 11 12 13 1& 15 16 15 18 -.+.) Ba!an 1 2 3 & 5 6 5 8 ! >e-am.ah ka-ang hi*au 6tar-hBAmilum ACuades Deagen #rad7$rd dan =$rte</ :arutan 6tandart #6A/ #u77er Ph$s,at ,H 5 >ristal am$nium sul7at Deagen arsen$m$li.dat Deagen nels$n s$m$g2 3 .uah 8elas kimia 50 m: :a.u ukur 250 50 dan 100 m: #atang ,engaduk ($rtar dan ,astel 6 .uah ta.ung sentri7ius >u)et ukuran 1 -m 6,ektr$meter ?= ='6 6t$, at-h Pi,et tetes 3 .uah Pi,et m$hr 10 m: 6tirrer Pemanas Pen*e,it @erm$meter ,H meter >ertas saring #$t$l ka-a 5 .uah Aam,an ,lastik untuk ,erke-am.ahan

#erikut ini taha,an ,raktikum 2ang akan di lakukan :

a . d e A i

Persia,an .ahan Persia,an dan ,erlakuan sam,el 3kstraksi sam,el Pemisahan en+im Pengu*ian en+im Pe'siapan a!an Perke-am.ahan ka-ang hi*au 1 #ahan 2ang digunakan ,ada ,raktikum ini adalah .i*i ka-ang hi*au 2ang sia, mengalami ,erke-am.ahan ( Di,ilih .i*i dengan ukuran 2ang .esar)/ 2 3 6ia,kan adah untuk tem,at ,erendaman ka-ang hi*au >a-ang hi*au 2ang telah disia,kan0 kemudian direndam di dalam terse.ut selama tiga hari dalam air 25E4 & 6etelah men-a,ai aktu 2ang ditentukan0 .i*i rendaman terse.ut kemudian adah

diangkat dan dise.arkan diatas kertas k$ran .asah dalam adah/ 5 #i*i ka-ang hi*au kemudian diletakkan dalam ruang lem.a. dan tidak terkena -aha2a matahari se-ara langsung selama tiga hari/ 6etia, hari sem,r$t .i*i terse.ut dengan dengan air (s,ra2)/ 6 >e-am.ah ka-ang hi*au sia, di,anen sesuai )ariasi umur ,erke-am.ahan/ Pada ,raktikum kali ini diam.il ke-am.ah 2ang .erumur 3 hari/ 6elan*utn2a0 ke-am.ah di ekstraki dan diis$lasi/ ii Pem.uatan :arutan 6t$k Amilum 1 2 005 gram amilum dilarutkan dalam 50 m: aCuades0 di,anaskan ,erlahan sam.il diaduk dengan stirer sam,ai ter.entuk larutan *ernih/ :arutan amilum dimasukkan dalam la.u ukur 100 m: se-ara kuantitati7 dan ditam.ah dengan aCuades sam,ai tanda .atas/

Dari larutan st$k ini di.uat larutan amilum standart dengan mengen-erkan sam,ai k$nsentrasi 0/1F/

iii

Pem.uatan .u77er ,h$s,hate 1 2 3 :arutan A : 002 ( larutan Aa1Ph$s,hate m$n$.asis (2508 gr dalam 1000 ml) :arutan # : 002 ( larutan Aa1Ph$s,hate di.asis ( 52065 gr Aa2HPO&/5H2O) atau 5105 gr Aa2HPO&/12H2O dalam 1000 ml/ :arutan A 1!5 m: G 305 m: larutan #0 en-erkan sam,ai 1000 m:

i) 1

Pem.uatan reagen nels$n s$m$g2 Deagen Aels$n A : :arutkan 1205 gr Aatrium >ar.$nat Anhidrat0 1205 gr D$-helle0 10 gr Aatrium #ikar.$nat dan 100 gr Aatrium sul7at anhidrat dalam 350 ml air suling/ 3n-erkan sam,ai 500 ml 2 3 Deagen Aels$n # : :arutkan 505 gr 4u6O &/ 5 H2O dalam 50 ml air suling dan tam.ahkan 1 tetes asam sul7at ,ekat/ Deagen Aels$n di.uat dengan -ara men-am,ur 25 .agian reagensia Aels$n A dan 1 .agian Deagensia Aels$n #/ 4am,uran diker*akan setia, akan digunakan/

Pem.uatan reagen arsen$m$l2.dat 1 2 3 & 5 *am 6 Deagensia ini .aru .isa digunakan setelah masa inku.asi terse.ut0 reagensia ini .er arna kuning/ :arutkan 25 gr am$nium m$l2.dat dalam &50 ml air suling @am.ahkan 25 ml asam sul7at ,ekat :arutkan ,ada tem,at 2ang lain 3 gr AaHAsO&/5H2O dalam 25 ml air suling >emudian tuanglah larutan ini kedalam larutan 2ang ,ertama 6im,an dalam .$t$l arna -$klat dan diinku.asi ,ada suhu 35H4 selama 2&

)i

Pengen-eran larutan standart #6A : 1 6e.an2ak 0025 : 005 I 1 I 2 I 3 I & Jl dien-erkan ,ada erlenme2er 10 ml/ 6ehingga di,er$leh k$nsentrasi #6A 25I50I100I200I300 dan &00 ,,m # 1 2 Pe'siapan sampel dan pe'lak$an sampel Disia,kan ke-am.ah 2ang telah .erumur 2 hari Diam.il ,$t$ngan ke-am.ah se,an*ang 1 -m dari titik tum.uh

Dihaluskan 20 gram ke-am.ah dengan m$rtar0 hingga dida,atkan .u.ur ke-am.ah/

& 4 1

Ditam.ah 25 ml Aa4l 5F0 kemudian dih$m$genkan dengan .u.ur ke-am.ah Pemisa!an enzim Pemisahan en+im didasarkan #( 2ang mengenda, dalam medium tertentu0 selan*utn2a diu*i akti)itasn2a/

:arutan .u.ur ke-am.ah dimasukkan ke dalam ku)et dan disentri7ius dengan ke-e,atan &000 r,m 5 menit

Di,isahkan su,ernatan dan ,ellet sehingga dida,atkan ekstrak en+im kasar (6u,ernatan)/

&

6u,ernatan 2ang dida,atkan di tam.ahkan (AH&)26O& 1805F0 dan disentri7ius dengan ke-e,atan &000 r,m0 5 menit

5 6

Di,isahkan su,ernatant dan ,ellet 1 6u,ernatan di,indahkan kedalam ta.ung dan selan*utn2a ditam.ahkan lagi (AH&)26O& men*adi 28F

5 8

Di,isahkan su,ernatant dan ,ellet 2 6u,ernatan (en+im kasar)0 ,ellet 1 dan ,ellet 2 ditem,atkan dalam tertutu, untuk diukur dengan s,e-tr$meter/ adah

D I

Peng$#ian enzim Dasar ,engu*ian I $ I 3 G 6 36

Ailai >m didasarkan ,eru.ahan k$nsentrasi en+im akti7 terhada, -aha2a ?=

Alat 2ang digunakan adalah s,ektr$7$t$meter ?=0 ,engu*ian menggunakan )ariasi larutan standard amilum 2ang telah disia,kan/

ii

Pengukuran Akti)itas 3n+im

=ariasi suhu 1 2 3 Disia,kan 3 ta.ung reaksi Diisi tia, ta.ung reaksi dengan 1 m: 3kstrak en+im @a.ung 102 dan 3 diinku.asi ,ada suhu .erturut 9 turut 30 $40 38 $4 dan &5 $4 selama 5 menit & Diukur a.s$r.ansin2a dari masing 9 masing ta.ung reaksi dengan ,an*ang gel$m.ang 280 nm 9 2!0 nm menggunakan s,ektr$meter ?= 5 Di-atat nilai a.s$r.ansi dan aktu 2ang di.utuhkan hingga dida,atkan ,eru.ahan nilai 2ang k$nstan

. 1 2 3 &

=ariasi ,H Disia,kan 3 ta.ung reaksi Diisi tia, ta.ung reaksi dengan 1 m: 3kstrak en+im @a.ung 102 dan 3 diatur ,H larutan .erturut 9 turut ,ada ,H 30 & dan 5 Diukur a.s$r.ansin2a dari masing 9 masing ta.ung reaksi dengan ,an*ang gel$m.ang 280 nm 9 2!0 nm menggunakan s,ektr$meter ?= 5 Di-atat nilai a.s$r.ansi dan aktu 2ang di.utuhkan hingga dida,atkan ,eru.ahan nilai 2ang k$nstan

=ariasi k$nsentrasi su.strat 1 2 3 Disia,kan 3 ta.ung reaksi Diisi tia, ta.ung reaksi dengan 1 m: 3kstrak en+im @a.ung 10 2 dan 3 ditam.ahkan 001 m: su.strat dengan )ariasi k$nsentrasi su.strat masing 9 masing 001 F0 005 F dan 1 F & Diukur a.s$r.ansin2a dari masing 9 masing ta.ung reaksi dengan ,an*ang gel$m.ang 280 nm 9 2!0 nm menggunakan s,ektr$meter ?=

Di-atat nilai a.s$r.ansi dan aktu 2ang di.utuhkan hingga dida,atkan ,eru.ahan nilai 2ang k$nstan