Anda di halaman 1dari 33

Makalah Kultur Sel Kultur Sel Hewan

Nano

Liter BioReactor: Long-Term Mammalian Cell Culture at Nanofabricate Scale!

Oleh: Ayu Kamilah/1106013214 Monica Winata/1106020390 Siti Adlina/1106069222 Windy Ris a !/110600""96 #ulianto/1106002116

"rogram Stu i Teknologi Bio#ro$e$ %e#artemen Teknik Kimia &akulta$ Teknik 'ni(er$ita$ )n one$ia %e#ok* +,-.

K/T/ "0N1/NT/R

Se$ala %u&i 'a$i (uhan #an$ Maha )sa ami %an&at an a*ena atas se$ala *ahmat+,ya yan$ 'e*lim%ah ami da%at menyelesai an Ma alah Kultu* Sel -e.an ini (ulisan ini me*u%a an hasil studi lite*atu*e yan$ 'e*sum'e* da*i se'uah &u*nal ilmiah yan$ 'e*&udul Nano Liter BioReactor: Long-Term Mammalian Cell Culture at Nanofabricate Scale/ Ma alah ini di'uat den$an tu&uanuntu he.an dalam s alam yan$ le'ih menda%at an 0o*mulasi 'a$aimana men$ ultu* sel ecil yaitu s ala nano den$an men$$una an ,ano 1ite*

2ioReacto* untu men$em'an$'ia an dan men&a$a %o%ulasi hin$$a *atusan ultu* sel mamalia dalam 3olume o*de ti$a dalam u u*an le'ih ecil da*i standa*/ (im %enulis menyada*i 'ah.a adanya la%o*an ini tida le%as da*i %e*an se*ta 'e*'a$ai %iha 4 te*utama 2a%a 5*/ Sa%to.o 6umali !a*dal dan 7'u 5*/ 5ianu*santi S/(/4 M/(4 sela u dosen Mata Kuliah Kultu* Sel atas sa*an4 *iti 4 dan esediannya untu mem'im'in$ ami4 se*ta teman+teman *e an e*&a yan$ tida 'isa dise'ut an namanya satu+%e*satu/ (a ada $adin$ yan$ ta *eta 4 ami menyada*i 'ah.a tulisan ini mun$ in masih &auh da*i sem%u*na/ Oleh a*ena itu4 ami san$at men$ha*a% an *iti dan sa*an yan$ da%at mem'an$un dan mem'antu ami a$a* da%at men&adi %em'ela&a*an dan %e*'ai an ela / A hi* ata4 tim %enulis 'e*ha*a% a$a* ma alah ini 'e*man0aat 'a$i semua %iha /

5e%o 4 6 ,o3em'e* 2013

(im !enulis

%/&T/R )S)

Kata !en$anta* 888888888888888888888888888888//8//2 5a0ta* 7si8888888888888888888888888888888//8883 2A2 7 !endahuluan8888888888888888888888888888884 1ata* 2ela an$8888888888888888888888888/888///4 Rumusan Masalah8888888888888888888888888/88//9 (u&uan !enulisan88888888888888888888888888/886 Metode !enulisan 888888888888888888888888//888/6 2A2 77 !em'ahasan88888888888888888888888888/8888: 5esain ) s%e*imental dan Metode8888888888888888///8888//: -asil dan !em'ahasan88888888888888//8888888888814 Kesim%ulan88888888888888888888888888888888826 5a0ta* !usta a888888888888/8888888888888888888//2:

B/B ) "0N%/H'L'/N )2- Latar Belakang !ada masa se a*an$ ini4 indust*i 0a*masi dihada% an den$an tantan$an yan$ 'elum %e*nah te*&adi se'elumnya4 yaitu untu men$elola ema&uan da*i pool ta*$et mole ula*4 senya.a 'a*u4 dan tes 'iolo$is yan$ 'e* em'an$ %esat/ Semua ini meman$ 'e*tu&uan untu menemu an dan men$em'an$ an o'at+o'atan 'a*u yan$ le'ih muta hi*/ Selama ini4 metode yan$ se*in$ di$una an untu itu adalah High-Throughput Screening ;-(S< dalam 0o*mat high-density/ 1e'ih &auh la$i4 ada lan$ ah yan$ &elas dalam indust*i 0a*masi dalam men$an$$a%i %enin$ atan emphasis %ada %en$u&ian 'e*'asis sel yan$ mem'utuh an %em*osesan %a*alel da*i 'e'e*a%a 'atch yan$ le'ih ecil da*i 'e*'a$ai macam lini sel yan$ 'e*asal da*i 'e*macam+macam &a*in$an/ Se a*an$ ini $a$asan untu memuncul an *o'ot sel yan$ men$$a'un$ an in u'ato*4 ali*an uda*a lamina*4 %em'i'itan otomatis4 %em'e*ian nut*isi4 trypsinizing4 %emanenan dan %en$hitun$an sel4 yan$ emudian dii uti oleh dis%ensi da*i sel+sel ini e dalam 0o*mat %en$u u*an yan$ coco untu analisis selan&utnya4 telah men&adi enyataan ;Slate*4 2001</ A an teta%i4 screening onten tin$$i yan$ mem0asilitasi 'e'e*a%a analisis %ada sam%el solite* adalah a*ah lain yan$ 'elum di em'an$ an seca*a *inci/ Konse% senso* 'a*u den$an %enin$ atan sensiti3itas imia dan 0isi a yan$ mem0asilitasi miniatu*isasi a an mem%e*'ai i tin$ at *asio sinyal/background4 *e%*odu ti0itas4 emudahan4 dan 'iaya/ Flasks4 dish4 dan well di mana sel+sel di'udidaya an seca*a in 3it*o memili i 3olume anta*a 100 sam%ai 100 m1 u14 ya ni anta*a tu&uh dan se'elas ali li%at le'ih 'esa* da*i%ada 3olume selule* yan$ u*an$ le'ih masih menem%ati u u*an %icolite*/ (elah di%ela&a*i %ula 'ah.a dalam %*oses scaling-up sistem 0luida4 a an te*&adi 'anya physical break-down a*ena si0at+si0at se%e*ti di0usi dan %en$a*uh ine*sia men&adi dominan/ Keti a salah satu %a*amete* 0isi teta%4 hu'un$an den$an %a*amete* lainnya da%at men&adi san$at te*disto*si selama %*oses scaling-up ;Oldshue4 19"3</ Ka*ena itu4 scaling-up %*oses 'io*ea to* hasilnya &ust*u da%at me*u$i an4 misalnya %otensi e*usa an o*$anisme yan$ sensiti0 %ada $ese an

se%e*ti sel mamalia/ Oleh a*ena itu4 %encam%u*an dan %*oses homo$enisasi li=uid ha*us ditin$ at an untu men$hinda*i e*usa an te*se'ut/ !*oses scale-down da*i 'io*ea to* untu sel mamalia indi3idu a an menda%at man0aat da*i s ala simultan da*i etiadaan se&umlah %a*amete* dan 0enomena te* ait 0isi a dan 'iolo$is/ Seca*a husus4 ada se&umlah 0enomena 'iolo$is yan$ te*&adi cu u% ce%at ;10+3+ 10+9 deti < %ada dimensi selule* 10 >m4 namun &auh le'ih lam'at %ada s ala s%asial da*i lin$ un$an ultu* sel ti%i al4 misalnya4 massa diam dan %e*%indahan %anas dalam inte*io* se'uah sel hidu%/ Mes i %*oses+%*oses 'iolo$is den$an onstanta .a tu yan$ *elati0 lama4 se%e*ti *e%li asi 5,A dan sintesis R,A messen$e* ;102+104 s< tida a an menda%at an euntun$an da*i scale-down4 e'anya an %*oses selule* te*&adi di su'+deti 4 milideti 4 dan 'ah an inte*3al mi *odeti / -al ini mem'u ti an 'ah.a %*oses scaling down da*i lin$ un$an 0isi te*masu dan hasil 3a*ia'el 'e*samaan dalam %*oses 'iolo$is analo$ a an mena.a* an %otensi te*'esa*/ 5inami a real-time yan$ mena*i da*i %*oses scale-down ini4 .a tu *ela sasi sistem en?imati 4 inte*a si en?im + su'st*at + inhi'ito*4 dan inte*a si *ese%to* + li$an4 te*li'at dalam *es%on lan$sun$ da*i sel untu *an$san$an 0isi atau imia e ste*nal/ Ka*enanya4 %enelitian ini men$im%lementasi an metode scale-down men$$una an NanoLiterBioReactor ;,2R</ 5alam hal me ani a 0luida continuous- low4 da*i sudut %andan$ te nis ita hanya %e*lu se ita* ti$a %e*u'ahan 3olume isi ,2R untu menca%ai ondisi steady+state ;analo$i untu onse% *ea to* continuous stirred tank dalam *e ayasa *ea si atau ultu* 'e* elan&utan dalam 0isiolo$i mi *o'a</ Kondisi ini memun$ in an untu 'ena*+'ena*

men$$anti an 3olume den$an san$at ce%at eti a 'e*hada%an den$an 3olumes se ecil yan$ di andun$ oleh ,2R/ Oleh a*ena itu sistem ini da%at mela sana an %ena si*an status 0isiolo$is ultu* den$an ce%at setelah ondisi steady state te*ca%ai ; 2*atten et al 4 199:@ Aoo%e*4 1999 </ Ka*enanya4 %ada ma alah ini a an di'ahas le'ih lan&ut men$enai alat4 'ahan4 desain %enelitian4 metode4 dan hasil %en$u&ian yan$ di$una an dalam ultu* sel mamalia den$an NanoLiterBioReactor/ )2+ Rumu$an Ma$alah 1/ A%a ah yan$ dima sud den$an Nano Liter BioReactor dan a%a %e*anannya dalam %*oses ultu* selB

2/ A%a sa&a alat dan 'ahan yan$ di'utuh an untu

ultu* sel mamalia men$$una an Nano ultu* sel

Liter BioReactor dan 'a$aimana desain %enelitiannyaB 3/ Metode dan taha%an a%a sa&a ah yan$ di$una an dalam %en$em'an$an mamalia den$an NanoLiterBioreactorB 4/ 2a$aimana hasil a hi* dan hasil u&i metode Nano Liter BioReactor iniB )2. Tu3uan "enuli$an !enulisan ma alah ini 'e*tu&uanuntu menda%at an 0o*mulasi 'a$aimana men$ ultu* sel he.an dalam s ala yan$ le'ih ecil yaitu s ala nano den$an men$$una an NanoLiterBioReactor untu men$em'an$'ia an dan men&a$a %o%ulasi hin$$a *atusan ultu* sel mamalia dalam 3olume o*de ti$a dalam u u*an le'ih ecil da*i standa*/ 1e'ih &auh la$i4 ma alah ini 'e*tu&uan mem'e*i an %en&elasan seca*a lu$as tentan$ alat4 'ahan4 desain %enelitian4 metode4 dan hasil %en$u&ian yan$ di$una an dalam ultu* sel mamalia den$an NanoLiterBioReactor/ )24 Meto e "enuli$an Metode %enulisan yan$ di$una an dalam suatu ma alah a an san$at menentu an hasil a hi* da*i %enya&ian ma alah te*se'ut/ Oleh a*ena itu4 di%e*lu an metode %enulisan yan$ 'ai dan te*susun seca*a sistematis untu memudah an %em'aca dalam memahaminya/ Metode %enulisan yan$ di$una an dalam %enulisan ma alah ini adalah metode studi lite*atu* yan$ 'e*sum'e* da*i se'uah &u*nal/ 5ata C data tam'ahan yan$ di%e*oleh dalam ma alah ini diam'il da*i 'e*'a$ai sum'e*4 dianta*anya 'u u C 'u u *e0e*ensi lain yan$ 'e*asal da*i inte*net/ ultu* sel4 &u*nal ilmiah se*ta

B/B )) "0MB/H/S/N ))2- %e$ain 0k$#erimental an Meto e Fabrikasi NBR dan integrasi ke dalam perangkat fungsional tunggal Da'*i asi dila u an den$an %en$$unaan so t litography dalam !5MS den$an *asio a*ea dan 3olume yan$ 'e*3a*iasi/ Ensu*+Ensu* mi *o0luida dise$el di%e*lu an modi0i asi sele ti0 %ada su'st*at untu e dalam slide mi *os o% a*a te* hid*o0ili aca %ada on3ensional yan$ 'e*0un$si se'a$ai su'st*at/ Se%e*ti te*lihat %ada data di 'a.ah4 tida mem'e*i an %e*mu aannya/4 mes i%un %ola sele ti0 mun$ in di%e*lu an untu mem'atasi %e*tum'uhan sel e dae*ah te*tentu dalam ,2R/ !en$u&ian dila u an te*hada% 'e'e*a%a on0i$u*asi $eomet*is ;'entu <4 dan range da*i on0i$u*asi sel di dalam 3olume *ea to*/ 5ila u an &u$a %en$u&ian sistem te*inte$*asi te*hada% %em'e*ian ma an sel se*ta %en$am'ilan lim'ah 'uan$/ Fene*asi %e*tama da*i ,2Rs di$una an se'a$ai o -chip supply se*ta %en$am'ilan em'ali nut*isi dan lim'ah/ !e*an$ at ,2R di0a'*i asi seca*a e s lusi0 da*i $elas dan !5MS/ Ka*ena %*oses %*odu sinya dila u an di tem%at itu &u$a4 di *uan$ ultu*4 %en$hu'un$an salu*an mi *o0luida da%at dila u an sesuai %e*mintaan/ Selu*uh ,2R di0a'*i asi den$an men$$una an te ni 1an$ ah+1an$ ah %*odu sinya : !" #ask Fabrication #ask di$am'a* den$an AA5 dan desain diceta 100 G le'ih 'esa* da*i inal mask/ (in$ at ont*as $am'a* %ada mask di u*an$i 100H men$$una an ame*a 39mm/ Setelah di em'an$ an4 0ilm te*se'ut a an di$una an lan$sun$ %ada photolitography/ $" #aster %roduction Men$$una an 0ilm ne$ati0 ti%is da*i photoepo&y yan$ dileta an di su'st*at sili on/ %hotoepo&y seca*a sele ti0 ditun&u an melalui mask dan di em'an$ an/ Relie0 ne$ati0 da%at ditemu an di 'entu da*i ,2R te*se'ut so t litography/

3/ Da'*i asi !e*an$ at 1i=uid !5MS 'e*%e*an menentan$ maste* dan di$una an dalam %enyem'uhan/ !e*an$ at indi3idu di%oton$ da*i 'lo !5MS4 mene an den$an lu'an$ %i%a4 dan te*i at %ada su'st*at den$an a ti3asi %lasma/ !*oses 0a'*i asi master adalah melalui te nolo$i photolithography seca*a on3ensional/ Layout da*i mask disusun %ada Autocad/ 5esain te*se'ut Reproductions )orp" *dimana $am'a* te*se'ut lensa 90mm/ (an%a mem%e*hati an 'entu emudian di i*im e 'entu e 'd(ance emudia dit*ans0e* chrome mask/ onta

Selan&utnya printout da*i desain di ecil an nilai ont*asnya men$$una an ame*a 39mm den$an a.alnya4 mask di$una an dalam photolithigraphy untu men$$ene*asi maste* di SE+" 20294 photoepo&y ne$ati0/Ensu*+Ensu* 0luida di'e*i an %ada Syl$a*d 1"4 !5MS untu ditentan$ an den$an SE+" masters/ !5MS disia% an den$an %encam%u*an %*e%olime* dan atalis den$an %e*'andin$an 19:1/ Aam%u*annya adalah $as den$an ondisi di 'a.ah 3a um ; 20+90 mto**< selama satu &am dan %*oses reco(ery selama 2 &am %ada suhu "0oA/ !5MS yan$ sudah men$alami reco(ery4 di u%as da*i 'a$ian maste* dan di%oton$ dalam 'entu 'lo indi3idual yan$ dilen$ a%i den$an aca/ Entu %aso an dan %ena*i an medium ultu*4 se%e*ti untu %enyemaian sel4 masu an dan elua*an %o*t dite an e 'lo !5MS den$an modi0i asi &a*um sunti 16+$au$e/ 2e'e*a%a %o*t a ses di siliconized den$an Si$ma Aoat ;Si$ma Ahemical Aom%any4 St 1ouis4 MO< untu men$ham'at lam%i*an sel di se ita*nya/ Standa* 1 IG 3I mi *os o%is aca ;Dishe* Scienti0ic4 !itts'u*$4 !A< 'e*%e*an se'a$ai su'st*at sel utama di 'a$ian 'a.ah ,2R te*se'ut/ Ai* %lasma %en$o'atan di$una an untu menutu% 'lo !5MS e aca me*e a su'st*at/ O sidasi o si$en+%lasma ini di enal untu mem%e* enal an $u$us silanol %ada %e*mu aan4 sehin$$a men$a ti0 an si0at %e*e at/ 5i'andin$ an o si$en %lasma4 %en$$unaan simple air %lasma le'ih se*in$ di$una an dan mem%e*oleh i atan hy'*id yan$ uat dalam hy'*id $lass/%e*an$ at !5MS/ Kedua %e*an$ at !5MS dan su'st*at aca ditem%at an e dalam ste*ilisasi %lasma ;-a**ic Scienti0ic Ao*%4 Ossinin$4 ,#< dan te* ena uda*a %lasma selama 20 s/ Kemudian dila u an %en$ha%usan dan ditem%at an %ada *e sa onta 4 sehin$$a i atan yan$ uat i*e3e*si'el te*'entu / A hi*nya4 %o*t a ses yan$ menyelami den$an ta'un$ a%ile* stainless steel 22 $au$e te*hu'un$ e 0le si'el 3inyl tu'in$/ (a'un$ %anas menyusut ;Ad3anced !olime* 7nc4 Salem4 ,-< sehin$$a semua one si %i%a untu memasti an %enye$elan tahan ai* men$$una an Mic*oto*ch M(+10 ;Fu*u

A%%liance Ao*%4 Racine4 W7</ Otomatis &a*um sunti %om%a ;W!74 Sa*atosa4 D1< di%aso ali*an yan$ di ont*ol den$an %e*an$ at mi *o/ (o%o$*a0i atau 0isi o imia su'st*at %ola untu memodulasi 0enoti%e sel dan %e*ila u sel dan 0un$si meman$ 'elum dila u an4 teta%i %enyelidi an te*se'ut mun$ in 'e*man0aat/ !ola to%o$*a0i men$acu %ada mem'an$un 'entu atau te stu* %ola %ada su'st*at4 sedan$ an %ola 0isi o imia men$$a'un$ an imia adhesi4 atau list*i / %en$enaan e uatan 0isi %ada sel ;6un$ et al/4 2001</ 7nte$*asi 0un$sional se%e*ti modul dalam satu %e*an$ at adalah tu&uan da*i total mi *o analisis sistem ;>+(AS<4 dan mun$ in mena.a* an yan$ san$at e0isien4 analisis simultan di $enomi 4 %*oteomi 4 dan meta'olomi ;1ee dan 1ee4 2004</ 5esain 5iamete* *uan$ ci*cula* ,2R adalah "29 um dan ditun&u an %ada Fam'a* 1/ an Ruan$ yan$ te*$a'un$ 2:9 %M %os4 dan diasumsi an 3olume se ita* 20 n1 ;%ada edalaman 49 m</ !e*0usi F*id / Sa*in$an ,2R ;!F+,2R< te*tutu% 3olume yan$ sama4 dan dimasu sa*in$an den$an 'u aan mulai da*i 3 ;Fam'a* 2< sam%ai " %m/ (he Multit*a% ,2R ;M(,2R@Fam'a* 3< di*ancan$ le'ih 'esa* untu men$a omodasi 'anya miniatu* %e*an$ a% yan$ dilen$ a%i den$an sa*in$an/

Gambar 1" Skematik dari +enerasi %ertama )% NBR dengan centra post* tanpa saluran pembibitan

Gambar 2. Skema dari %+-NBR dengan , -m saringan dengan bagian untuk pembibitan

Gambar. 3. Skema dari per used #T-NBRdenga nsaringan multiple trapping Sterilisasi Entu men$u*an$i ontaminasi4 semua %e*alatan ,2R diste*ilisasi den$an cahaya EJ ;A EJ C(i% Aleane*(M< Ra itan ,2R dileta an %ada &a*a 9 cm da*i lam%u me*cu*y dan te*%anca* selama 10 menit den$an daya ma simum/ %a*amete* yan$ di$una an e0e ti0 untu men$hilan$ an 'e'an 'iolo$is den$an men$$una an s%o*a 2/su'tilis dan sel 3e$etati0 se'a$ai 'ioassay/ Sedan$ an4 %en$$unaan EJ dila u an untu mem'e*i an hid*o0ili !5MS/ Kondisi ini mam%i mem'uat *uan$an le'ih lem'a';'asah< dan te*&adi %em'i'itan sel

Peralatan Rakitan Kultu* sel diselen$$a*an dalam 'oH in u'asi yan$ mi*i% den$an desain da*i 2uc cienti0ic/ Kondisi dalam 'oH di&a$a %ada eadaan uda*a 9K AO2dan 3: 0A/ 2oH coco den$an mi *os o% 0luo*esence yan$ dilen$ a%i den$an o'se*3asi lan$sun$ status sel Fluorescence microscopy. Kelan$sun$an hidu% sel ditentu an melalui 2lue (*y%an 4 )thidium '*omide4tes %en$elua*an4 noda dan Jy'*an tm 5il dan mi *os o% 0luo*esense/ Fam'a* yan$ ditan$ a% di catat oleh ame*a AA5 !5MS 'e*si0at t*ans%a*an dalam isa*an 240 hin$$a 1100 nm@ 240 EJ cuto004 untu mi *os o% 0luo*esense P !S and gas permeability. !5MS di etahui 'e*si0at da%at ditem'us $as se%e*ti $as o si$en dan Ao2 yan$ 'e*man0aat untu a%li asi iniL P"ysical c"aracteri#ation$s"ear rate. Nilai Shea* *ates dihitun$ den$an menentu an $eomet*i ,2R untu &a*a / isa*an yan$ di%anca* an untu ali*an medium Garis sel dan media. Media standa* di$una an untu men$olah $a*is sel yaitu Fibroblas tikus .atcc/crl -!0$$12 " Suplemen 3#4# dengan 5m# Liter glutamin yang mengandung !"1g6L natrium bikarbonat dan 5"1 g6L $lu osa4D2S 10K -em D12 medium den$an 0409 +041 m$/ml F41"4D2S 10K -e%atosit ;A(AA M AR1 2294<4 Su%lemen 5M)M D12 Medium 1:1 den$an 249 Mm 1ite* $lutamin yan$ men$andun$ 142 $/1 nat*ium 'i a*'onat4 19 mM -)!)S dan 049 mM nat*ium %i*u3at4 9mi *o $*am/ml insulin49 mi *o$*am/ml t*ans0e**in4 9 n$/ml selenium4 40 n$/ml deHamethasone dan D2S 10K/ -y'*idoma cells ;A(AA AR1+16060<@ 'e'as se*um4 'e'as hyd*olysate 7M5M 0o*mula menentu an ame*a di$ital/ on0i$u*asi ini men$i?in an

Penyemaian NBR" !enyemaian $aya 'e*at ;!o.e*s etal/4 2002<di$una an *utin untu mem%e* enal an sel e ,2R te*se'ut/ Se'elum %em'enihan4 sus%ensi sel yan$ di%e*oleh melalui t*y%sini?ation da*i sto (+la'u4 disa*in$ men&adi 30%M untu men$hilan$ an a$*e$at sel/ !*osedu* ini mence$ah salu*an ,2R dan 0ilte* te*inte$*asi da*i %enyum'atan sel a$*e$at/ Penginderaan Senso* %lana* a**ay te*inte$*asi untu %emantauan ultu* sel dalam ,2R yan$ di0a'*i asi an men$$una an te nolo$i en?im amo'il4 la%isan na0ion4 dan %*insi%+%*insi% ele t*o imia ;Moussy etal4 1994/@ Steeleetal4 1991@ Fe**itsenetal4 2000</ Senso* ditu&u an husus untu monito*in$ %- dan a ti3itas $lu osa/ %es biokompatibilitas ba"an yang digunakan untuk fabrikasi NBR Se'elum ultu* sel dico'a dalam ,2R 4 tes 'io om%ati'ilitas dila u an %ada semua om%osisi 'ahan/ Su'ye %en$u&ian ini te*masu su'st*at aca 4 disem'uh an %olime* !5MS 4 dan semua %otensi mat*i s e st*aselule* ;)AM< om%onen4 te*masu ola$en4 $elatin4 %en$u&ian 0i'*one tin4 laminin dan %oli+lisin/ Standa* mic*o%lates 12C'ai di$una an untu

!5MS/ !5MS di%e* enal an se'a$ai la%isan di 'a$ian 'a.ah %i*in$4 diste*il an den$an mem'antu :0K/ !ela%isan densitas yan$ dite*a% an yaiu "429 4 146: 4 241 4 143" dan 241 >$/cm2 4 masin$+masin$4 sesuai den$an la%isan standa* ;Si$ma</ (i$a 'a*is sel diu&i untu elan$sun$an hidu% dan %*oli0e*asi selama .a tu yan$ lama mulai 'e*umu* 3 sam%ai 9 ha*i/ Kelan$sun$an hidu% dan %*oli0e*asi die3aluasi 'e*dasa* an u&i 5,A melalui neon !icoF*een tes/ (es su'st*at aca dila u an di eight-chamber))$ +lass Slide ;1a'+(e N Aham'e* Sistem 4 ,al$e

,unc 7nt/4 ,a%e*3ille4 71< dan &a*in$an ultu* standa*t polistiren dishes di%e e*&a an se'a$ai ont*ol su'st*at/ Ka*ena ita men$antisi%asi %en$$a'un$an %*oses sili on dalam senso* ,2R masa de%an4 tes tam'ahan 'io om%ati'ilitas dila u an %ada sili on nit*ida dan 'ahan o sida/ Silikon .!002 wa er den$an la%isan te anan ua% imia *endah disim%an ;1o. !*essu*e Ahemical Ja%o* 5e%osited/1!AJ5< sili on nit*ida4 dan ini den$an o sida sili on tum'uh te*mal4 adalah su'ye %enelitian ini/ Wa0e* sili on nit*ida den$an la%isan 1!AJ disedia an oleh Moto*ola4 7nc4

sementa*a me*e a den$an o sida te*mal disia% an di ,o*th Aa*olina State Eni3e*sity/ 10 mm den$an 10 mm sam%el yan$ di%oton$ da*i .a0e* men$$una an u&un$ &u*u 'e*lian/ ) s%e*imen !latin$ ;untu su'st*at aca< dila u an dalam %en$atu*an ultu* standa* untu men$$am'a* an e0e sel %enyemaian densitas %ada 3ia'ilitas sel dan elan$sun$an hidu%/ (es 5,A !icoF*een di$una an untu men$e3aluasi se&auh da*i %e*tum'uhan sel dica%ai dalam 1+9 ha*i setelah %em'enihan/ Pengu&ian desain Nano liter BioReactor kontinyu sel yang dipili" dalam NBR tersebut" (i$a 'a*issel di%ilih untu %en$u&ian *inci: 0i'*o'last4 sel A-O4 dan he%atosit/ 5alam semua asus4 %en$ence*an se*ial ultu* standa* di$una an untu 'enih onten ,2R/ Sel yan$ di%e* enal an e ,2R melalui mode statis untu menca%ai nomo* yan$ diin$in an sel onta %en$ham'atan men&adi ultu* sel in u'ato*4 yan$ %e**ea to*/ !o%ulasi ini di3e*i0i asi den$an mi *os o%/ 5alam semua asus4 sel+sel 'e* em'an$ 'ia sam%ai su'st*at ditutu%i oleh mono laye*4 di mana titi te*lam%i*/ Selama %e*co'aan4 ,2R itu di u*un$ di dalam untu settes/ Medium !e*0usion di0asilitasi oleh Elt*aMic*o !um% 77 nanoin&ecto* yan$ di$e*a an den$an Mic*o 4 ont*ole* ;'ai oleh W!7< / !om%a ini dilen$ a%i den$an ste*il 1 m1 25 &a*um sunti yan$ 'e*0un$si se'a$ai *ese*3oi* menen$ah/ Aai*an Menen$ah dita*i 'atch4 0ed + 'atch4 dan ontinyu e &alu* su%lai dan emudian di i*im e *uan$ ,2R %ada tin$ at yan$ di%e*lu an/ Sistem ini memun$ in an untu on0i$u*asi 0eed4 se*ta dalam standa* situ dan mi *os o% 0luo*esensi da*i ema&uan ultu*/ Media yan$ di3a um $as untu men$hilan$ an $as te*la*ut dan mence$ah %em'entu an $elem'un$/ !om%a ont*ol e ste*nal disedia an otomatis 4 %e*iodi 0eed ultu* dan %ena*i an lim'ah dalam mode o3e*0lo./ Media dan analit disu%lai e sel+sel di *uan$ ,2R melalui mic*ochannels den$an luas %enam%an$ se ita* 290 >m2/ 1im'ah dita*i melalui salu*an da*i dimensi yan$ sama/ Sistem 0luidic mudah disesuai an untu men$atasi dan men$endali an indi3idual setia% *uan$ dalam susunan multi+ ,2R / Selain hitun$an mi *os o%is lan$sun$4 standa* tes 3ia'ilitas sel dila u an untu memantau e s%e*imental ema&uan4 yaitu ineti a %e*tum'uhan sel dan &umlah sel/ !ada u&un$ 'e*%en$a*uh4 dan %e*tum'uhan 'e*henti/ Sel dii?in an untu men$isi onten ,2R se'a$ai sel di%e*tahan an suhu lin$ un$an dan tin$ at $as/ aca tida dio'ati di$una an se'a$ai su'st*at emonstrasi pertumbu"an kultur batc" dan

da*i setia% %e*co'aan4 sel+sel di.a*nai den$an AO/)2O( t*i%an 'i*u4 dan 3ia'ilitas yan$ demi ian dinilai/ A hi* %oint *ite*ia untu e3aluasi %e*tum'uhan ultu* dan a*a te*isti %*oli0e*asi ditentu an oleh 3ia'ilitas sel dan ca u%an %e*mu aan ta*i0/ Protokol dan sistem parameter untuk feed'batc" dan konfigurasi pertumbu"an yang berkelan&utan. Kultu* diu&i di 'a.ah dua ondisi dasa*: %o%ulasi a ti0 tum'uh4 dan ultu* diam yan$ %e*tum'uhannya di'atasi oleh onta %en$ham'atan atau e u*an$an nut*isi/ Kea ti0an %e*tum'uhan ultu* se*in$ diper usi den$an media se$a*/ 1a&u ali*an 3olumet*i untu medium' e* isa* 9+90 n1/min/ 5aya tahan sel mun$ in %entin$ untu *utin di$una an dalam %*o$*am s *inin$ massal/ Keadaan %emeliha*aan diindu si oleh media yan$ memaso den$an ha*$a le'ih *endah4 sehin$$a mem%e*lam'at %e*tum'uhan sel e status sta$nan;(ol'e*t4 19"9</ 2iasanya4 %e*tum'uhan da%at ditan$ a% oleh %en$ha%usan %e*tum'uhan 0a to* ;se*um</ ))2+ Ha$il an "embaha$an (&i Biocompability dengan Berbagai !aterial Berbeda Felas4 !5MS4 %olisti*en ;!S<4 sili on nit*it ;Si3,4<4 dan sili on o sida ;SiO2< diu&i untu ecoco an se'a$ai su'st*ate didalam ,2R/ Di'*o'lasts4 sel A-O4 dan he%atosit %e*tama ali diu&i di su't*ate %ada $elas %olos4 dan $elas yan$ dila%isi den$an %*otein )AM/ !ada ti$a $a*is sel4 $elas %olos cu u% untu untu desain ,2R ultu* sel4 mes i%un 'e'e*a%a %enin$ atan te*lihat &elas %ada $elas di3a*iasi an/ yan$ dila%isi %*otein )AM ;Fam'a* 4 + 6</ !enemuan ini memili i onse uensi yan$ si$ni0i an a*ena mate*ial su'st*at utama adalah $elas yan$ tida Selan&utnya4 'iocom%ati'ilities da*i !5MS dan !S disada*i/ !ada $am'a* : C 9 di'andin$ an hasil yan$ dida%at da*i !5MS diisi den$an 'ai dan !S %olos/ !en$a*uh da*i %ela%isan )AM &u$a san$at &elas/ Entu setia% lini sel yan$ diu&i4 dan tida di%e*la u an den$an !5MS di'u ti an 'ah.a su't*ate men&adi in0e*io* di'andin$ an den$an %olisti*en/ Sementa*a %e*tum'uhan untu sel A-O %ada !5MS %olos4 dila%isi )AM menin$ at an 'iocom%ati'ility/ A hi*nya4 e0e da*i %a%a*an %lasma %ada !5MS diin3esti$asi %ada $am'a* : C 10/ -asilnya te*lihat san$at &elas 'ah.a ada %enin$ at an untu !5MS yan$ di%e*la u an den$an %lasma/ Kita da%at menyim%ul an 'ah.a %e*la uan den$an %lasma da*i elemen 0luida ita tida

menun&u

an e0e ne$ati0 da*i *es%onse selula*/ A hi*nya4 u&i a.al dila u an den$an sili on ditam%il an</ Di'*o'last dan sel A-O ditanam %ada

nit*it dan 'antuan o sidasi ;data tida

e*a%atan 104000/cm2 dan die3aluasi mela.an ont*ol $elas dan !S/ Kesim%ulan setelah ha*i eti$a4 0i'*o'last dida%at an :9K dan 69K da*i ont*ol $elas ; die3aluasi se'a$ai 5,A<@ sel A-O 1" dan 10K da*i ont*ol/

Gambar ) %roli erasi ibroblast pada kaca .dan dilapisi kaca2 dibandingkan dengan %S .legenda7 %Sstandar 8aringan sel budaya kualitas polystyrene* lapisan )9L-kolagen* F:B- ibronektin coating* L'#laminin lapisan* lapisan +4L-gelatin* %LL-poli .lisin2 coating" .3ireproduksi dengan izin dari #aterial Research Societ"2

Gambar * %roli erasi sel )H9 pada kaca .dan dilapisi kaca2 dibandingkan dengan %S .legenda yang sama seperti pada +ambar 52"

Gambar + %roli erasi hepatosit pada kaca .dan dilapisi kaca2 dibandingkan dengan %S .legenda yang sama seperti pada +ambar 52

,erapatan Penyemaian Ke*a%atan %enyemaian yan$ *endah mem%e*lam'at %*oli0e*asi di 'e'e*a%a lini sel a*ena ada a'sen da*i sel C sel yan$ sesuai dan onta den$an sel C )AM/ !e*co'aan e*a%atan %enyemaian untu ti$a lini sel dasa* di ondu si an %ada lin$ un$an ultu* standa* di $elas su'st*at ;Fam'a* 11C13</ Ke*a%atan %enyemaian yan$ san$at *endah ;100 C 200 sel/cm 2< mence$ah %e*tum'uhan yan$ uat dan %*oli0e*asi di'e'e*a%a asus/ Se'a$ai contoh4 %e*tum'uhan he%atosit te* adan$ sensiti0 %ada &umlah 'i&i yan$ *endah ; Michalo%oulos et al/4 19"2</ -asilnya te*lihat &elas 'ah.a e*a%atan *itis minimum di'utuh an untu 'e'e*a%a lini sel untu memulai %e*tum'uhan yan$ sehat/ ,amun se'ali nya4 'e'e*a%a lini sel ;contoh A-O da%at 'e* em'an$ men&adi oloni da*i sel %enyemaian tun$$al ;Kon*ad et al/4 19::@ !a* et al/4 19":@ !om% et al/4 1966@ Michalo%oulos et al/4 19"2</ !en$amatan ini mem'e*i an onse uensi untu memulai %e*tum'uhan sel %ada lin$ un$an ,2R/ Salah satu ca*a untu menin$ at an e0isiensi %enem%atan sel adalah men$$una an )AM4 0a to* %e*tum'uhan4 dan media yan$ di ondisi an/ Kesim%ulannya4 den$an men$$una an ,2Rs untu ultu* sel mamalia mem'u a %a*adi$ma 'a*u dalam 'iolo$i sel4 yan$ selama ini dia'ai an dalam lite*atu*/ -asil diatas mem'e*i an 'e'e*a%a model untu %e*ila u sel dalam ,2R/ Entu A! C ,2R ; lihat di'a.ah<4 94 20 dan 90 sel %e* ,2R 'e*hu'un$an den$an i*a C i*a 1404 2"0 dan 14400 sel/cm2 da*i a*ea ,2R/ 7dealnya4 ita men$$una an 10 C 20 sel %e* 'i&i4 te* adan$ le'ih *endah la$i/

Gambar - %roli erasi sel )H9 pada %3#S .legenda yang sama seperti pada +ambar 52" .3ireproduksi dengan izin dari #aterial Research Society2

Gambar . %roli erasi hepatosit pada %3#S .legenda yang sama seperti pada +ambar 52"

esain NBR / 0P 1 NBR 2 PG 1 NBR2 !% 1 NBR 2e'e*a%a desain ,2R di andun$4 di%*odu si dan di u&i/ Salah satunya dise'ut O lin$ a*an ,2R den$an %os diten$anP ;A! C ,2R<4 yan$ lainnya O &a*in$an %e*0usi ,2RP ;!F C ,2R<4 dan 3e*si eti$a O Multit*a% ,2RP ;M( C ,2R</ A! C ,2R meli'at an ama* ultu* den$an diamete* "29 Qm dan tin$$i 40Qm4 den$an %os diten$ah 'e*diamete* 2:9Qm/ Se'a$ai tam'ahan %os diim%*o3isasi den$an dist*i'usi 0luida yan$ men$hilan$an %o%ulasi dae*ah mati den$an sel non %e*0usi/ Kama* di one si an di inlet dan outlet den$an te*o.on$an 100Qm ; tin$$i 40Qm</ )lemen 0luida ditutu% mela.an su'st*at $elas dimana sel tum'uh/ Kama* A! C ,2R men$andun$ 3olume 'e*sih 20n1/ !e*0usi !F + ,2R sulit untu didesain tan%a e'oco*an sel dianta*a sa*in$an dan su'st*at/ Menu*un an tin$$i 'e'e*a%a hasil yan$ su ses/ ama* men&adi "Qm menun&u an

Re%*odu ti0itas den$an men$$una an desain 'e*i ut tida diu u*/ ,amun hanya eti a desain %os sa*in$an 'e*u'ah untu men&adi le'ih uat4 den$an menam'ah an mate*ial e'a.ah $elas4 ita da%at mem0a'*i asi ,2R tan%a adanya e'oco*an/ M( C ,2R men$i&in an %enyemaian dinami den$an men$hinda*i %enem%elan sel %ada dae*ah yan$ dila%isi su'st*at/

Gambar 3 %roli erasi ibroblast pada dilapisi %3#S dan plasma-diperlakukan %3#S .legenda yang sama seperti pada +ambar 52"

Gambar 14 %engaruh kepadatan plating pada proli erasi ibroblas .perhatikan batas deteksi yang lebih rendah adalah serendah !0 sel2"

(&i ,ultur !e*tum'uhan 'atch den$an ,2( tida mun$ in a*ena 3olume medium san$at ecil4 dan sel da%at mende*ita da*i nut*isi yan$ te*'atas mes i%un dalam taha%an a.al ultu*/ ; 1ihat %e*'edaan %ada lin$ un$an ultu* static T ; lask den$an la%isan media yan$ 'esa* ditam'ah an

sel</ ,amun4 ita men$$una an %enyemaian statis se'a$ai %ilihan untu memulai %*oses in%ut deen$an men$i&in an %enyisi%an sel/ 7dealnya4 0i'*o'last mem'utuh an 2 C 3 &am .a tu %enyisi%an4 sementa*a itu lini sel mem'utuh an .a tu 16 &am/ !e*iode %enyisi%an tida 'e$itu %entin$ dalam asus !F C ,2R a*ena desain mena.a* an *etensi sel total/ Entu ali ini4 hanya 0ed C 'atch dan *ea si ontinyu yan$ yan$ di$una an di !F C ,2R/ 7deadlnya4 sel di%e*0usi den$an ece%atan R e S %ada 3olume ama* %e*menit/ 1a&u %e*0usi yan$ le'ih tin$$i &u$a diu&i4 te*ma sud %em'e*sihan sel mioti menun&u den$an dicu u* seca*a ontinu/ Aa*a ini an ediaman da*i sel yan$ te*sisa ; untu sel A-O < yan$ dida%at an/ 1a&u ali* yan$ an emis inan ha*a%an hidu%/

ondusi0 mem'uat ediaman sel da%at diamati den$an 9n1/menit untu selu*uh lini sel yan$ diamati4 teta%i la&u 0eedin$ le'ih *endah da*i ini yan$ menun&u Entu 3 lini sel4 la&u 3ia'ilitas *ata C *ata 99K di'a.ah *e?im 0eed ontinyu/ San$at &a*an$ %en$u u*an 3ia'ilitas da*i sel mamalia %ada $elas atau su't*at !5MS yan$ sudah dila%o* an ;contoh 3an Kooten et al/4 199"</ ,amun4 %enelitian4 se&alan den$an hasil yan$ didemonst*asi an 'ah.a $elas/ ama* !5MS adalah lin$ un$an 'iocom%ati'le yan$ memuas an/ -al ini ha*us dise'ut an dalam %en$alaman sel yan$ st*ess dicu u* di ,2R den$an *entan$ 9/ 10+9 sam%ai 10+2 dynes/cm2 untu la&u* ali* 9 C 90 n1/menit/ ,ilai ini te*lalu *endah untu mem%en$a*uhi %si olo$i sel ;!*o o% dan 2a&%ai4 1992</ Entu 0i'*o'lasts4 la&u ali* yan$ le'ih 'esa*

men$hasil an elon$asi mo*0olo$i sel dan se'a*is den$an la&u ali* 0luida/ Aontoh yan$ ideal adalah ultu* 0i'*o'lasts dan A-O ;di A! C ,2R< diilust*asi an %ada $am'a* 14 dan 194 contoh %en$$unaan M( C ,2R %ada $am'a* 16/ -e%atosit di ultu* selama 10 ha*i ;Fam'a* 1:</ Kita tida mem'uat a%a C a%a untu men$i uti 0un$si yan$ ada dan tida meneta% an %e*a.atan da*i 0enoti% yan$ 'e*'eda/ Kita sudah memili i 'e'e*a%a %em'ela&a*an untu M( C ,2R4 dimana $*adien nut*isi da%at den$an mudah diteta% an/ Kita &u$a da%at men$hinda*i %en$$unaan a$*e$at he%atosit ;!ea*sonC Win$e*te* dan Sal?man4 1993< se'a$ai mate*ial 'i&i dalam *an$ a meminimal an %enyum'atan da*i te*o.on$an ,2R/ !en$$unaan a$*e$at dimili i hanya oleh desain M( C ,2R/ 2e'e*a%a %e*co'aan men$$una an hi'*idoma/ !F C ,2R husunya memadai dalam mem%e*tahan an sel yan$ ada dan men&a$a 3ia'ilitas didalam taha%an %e*0usi sam%ai diatas 9 ha*i/ 5ilua* .a tu4 3ia'ilitas sel le'ih *endah se'a$ai a ses (*y%an 'lue stain/ !enyesuain husus untu de0o*ma'ilitas sel *ele3an untu desain sa*in$an %ada !F C ,2Rs dan M( C ,2Rs/ Kita men$amati 'ah.a 'e'e*a%a rounded ; o reshly ; trypsinized

cells ; dihasil an da*i ultu* ( C 0las <4 yan$ di$una an se'a$ai 'i&i4 da%at mem%enet*asi %e*0usi da*i sa*in$an dan meme*as seca*a utuh melalui 'e'e*a%a instasi4 mes i%un alat %enya*in$ sudah sem%u*na/ 5iamete* da*i sel te%at dise'elah t*i%sinasasi adalah yan$ dinilai dan ditemu an %ada *entan$ 11C1" Qm untu 0i'*o'last4 11C29 Qm untu A-O dan 16C30 Qm untu he%atosit/ Oleh a*ena itu ita menyim%ul an 'ah.a sa*in$an te*'u a den$an 349 dan " Qm men$i&in an 'e'e*a%a %enet*asi melalui de0o*masi sel/ Kami 'elum mem'ahas o%si %ola sel/ Ka*ena mun$ in tida 'e$itu %entin$ %ada taha% %*oye ini4 mes i%un 'e'e*a%a euntun$an 'isa di3isualisasi an ;misalnya4 salu*an masu dan elua* da*i ,2R 'e'as da*i sel4 ita 'isa men$a ses 'e'e*a%a %en$u u*an tin$ at %enye*a%an meta'olisme di ,2R ini</ Sayan$nya4 tida ada u%aya %ola yan$ %e*nah men$hasil an sel len$ a% tan%a esulitan/ Se'uah solusi %a*sial dica%ai den$an la%isan sili on se%e*ti yan$ dise'ut an se'elumnya/ !entin$nya %ola mi *o di'ahas seca*a le'ih *inci di tem%at lain ;Dolch dan (one*4 2000@/ 6un$ et al4 2001</

Gambar 11 %engaruh kepadatan plating pada proli erasi sel )H9

Gambar 12 %engaruh kepadatan penyemaian pada proli erasi hepatosit

Gambar 13 Fibroblas di )%-NBR* $ budaya hari* benih rendah .$0 sel2* dengan titik adhesi ocal

Gambar 1) Sel )H9 di )%-NBR* 1 hari kultur* sel bentuk spindle dan beberapa sel mitosis bulat" .3ireproduksi dengan izin dari #aterial Research Society2

Gambar 1* Baru diunggulkan sel )H9 di #T-NBR .sel ditangkap dalam perangkap kecil* beberapa terlihat di luar perangkap2"

Gambar 1+ Hepatosit di %+-NBR .budaya 5d tumbuh di agregat* beberapa sel menembus melalui saluran saringan di sebelah kanan2"

Pertumbu"an ruang tertutup !en$amatan %ada inhi'isi onta sel di *uan$ te*'atas a i'at desain sa*in$an ,2R/ mem'atasi e'oco*an sa*in$an den$an Se%e*ti dise'ut an4 'e'e*a%a u%aya dila u an untu

menu*un an etin$$ian *uan$ sam%ai " %m/ Sel4 te*utama yan$ le'ih 'esa* se%e*ti he%atosit4 mo*0olo$i 0eatu*eda Idata*I saat me*e a te*&e%it di anta*a lan$it+lan$it dan lantai ,2R4 dan a*enanya tum'uh dalam u u*an asimet*is/ 5en$an %*oli0e*asi 0itu* yan$ san$at te*'atas dan Sementa*a %e*setu&uan a.al di emas %enuh den$an sel4 se a*an$ ondisi te*se'ut4 semua ti$a 'a*is sel 'e*$e*a selama %e*iode 9 ha*i/ eti a *uan$an eadaan tida

ami adalah 'ah.a utilitas ,2R a an di'atasi ita menyada*i 'ah.a

on0i$u*asi ini mem'e*i an

esem%atan yan$ mena*i untu studi 0isiolo$i di *uan$ te*'atas/ 2ah an4 *uan$ te*tutu% da%at mem'antu untu meni*u %e*ila u onta sel+sel ti$a dimensi/ !ada saat ini4 tida ada u%aya yan$ di'e*i an untu men$ a*a te*isasi eadaan diam da*i sel den$an ca*a mole ul/ Penggunaan ,embali NBR !e*hatian husus di'e*i an e%ada %en$ha%usan sel dan lisis setelah e*&a ,2R te*se'ut/ 5alam u%aya untu menca%ai lisis sel len$ a% dan om%onen )AM da*i inte*io* ,2R4 ami men$u&i 'e'e*a%a *ea$en lisis lem'ut di*ancan$ untu mele%as an asam nu leat dan %*otein/ (*i%sin itu sendi*i se'a$ian e0e ti0/ ,amun4 %uin$+%uin$ sel dan om%onen )AM 'iasanya te*tin$$al dan mencema*i *uan$ ,2R/ Se'uah solusi su ses a an memun$ in an %en$$unaan em'ali ,2R4 mes i%un 'iaya *endah 0a'*i asi mem'uat se'uah %e*an$ at mudah di%a ai/ Penginderaan dalam NBR dan outlook )3aluasi ,ano 2ioReacto* *es%on 0isiolo$is &asmani dan %enentuan sensiti3itas senso* untu inte*3ensi yan$ men$u'ah eadaan homeostatis ti$a 'a*is sel dalam ultu* ontinyu me*u%a an %*o%osisi yan$ mena*i / E%aya %enelitian masa de%an a an 'e* onsent*asi %ada mem%e*luas %e*co'aan ultu* untu memasu an %en$u&ian ada* lo$am/ Kami &u$a 'e*niat untu men$e s%lo*asi e0e da*i te$an$an $ese* dan $*adien %ada 0isiolo$i sel dalam %e*an$ a% multi dan &a*in$an ,2R/ !en$a*uh *etensi sel len$ a% di !F+,2R a an diselidi i le'ih lan&ut4 se%e*ti %en$ha%usan sel mitosis di ,2R melin$ a* den$an lu'an$ te*'u a dan salu*an elua*/ Kami &u$a 'e*niat untu menyem%u*na an emam%uan %en$inde*aan ita ;te*utama untu studi $*adien< melalui ,2R senso* te*inte$*asi/ !enelitian le'ih lan&ut &u$a a an menca u% %e*tim'an$an se%e*ti di0e*ensiasi sel ;e s%*esi 0un$si s%esi0i < 3s %*oli0e*asi/ E%aya ini 'e*tu&uan untu mem%e*oleh %emahaman dasa* %enin$ atan 0isiolo$i sel %ada e%adatan &umlah s ala

ecil ,2R yan$ uat/ Kami 'e*ha*a% untu memun$ in an %e*luasan onse% ini men&adi alat yan$ *asional untu mem%ela&a*i 0enomena 'iolo$i sel dasa*/ iskusi (mum Mi *o dan nano+0a'*i asi dian$$a% se'a$ai te nolo$i yan$ memun$ in an yan$ diha*a% an da%at men$hasil an %*odu /%asa* %eluan$ 'a*u yan$ si$ni0i an melalui inte$*asi ilmu %en$etahuan dan te nolo$i/ Ruan$ lin$ u% 'idan$ ini adalah untu memun$ in an emam%uan 'a*u dalam 'e*'a$ai a%li asi den$an menci%ta an o'&e den$an dimensi dalam isa*an nanomete* dan mi *omete* untu milimete* ;Joldman et al/4 1999</ 2enda+'enda ini st*u tu* yan$ diam atau 'ias 'e*$e*a 4 yaitu *uan$ %e*tum'uhan4 salu*an4 %om%a4 senso*4 dll/ (u&uan utamanya adalah untu me*ancan$ dan men$ont*ol e s%e*imen %ada s ala mi *omete*/ Kemun$ inan a%li asi te*masu 'idan$ 'iolo$i mole ule*4 'io imia4 'iolo$i sel4 %e*alatan medis dan 'iosenso*/ #an$ te*a hi* ti$a as%e seca*a sin$ at te*a hi* dalam 'a$ian ini/ 2ahan su'st*at ;da*i edua 0a'*i asi dan %oin ultu* sel %andan$< se*in$ te*masu 'ahan 'io om%ati'el se%e*ti sili on dio sida dan nit*ida4 aca4 dan %olime* !5MS lainnya/ As%e yan$ memun$ in an te nolo$i mi *o/nano di 'idan$ 'iolo$i yan$ te*'ai dide0inisi an se'a$ai studi tentan$ 0enomena 'iolo$is %ada mi *o dan s ala nano/ 2e'e*a%a hal 'a*u di%e* enal an melalui nano te nolo$i a an di'ahas emudian/ Mani%ulasi da*i dunia 0isi %ada s ala ini den$an ma sud untu mendete si4 memisah an4 dan memani%ulasi ;Tie?iule.ic? et al/4 2003</ !e*u'ahan mo*0olo$i4 detasemen %e*mu aan4 a%o%tosis4 %e*tum'uhan ne *oti 4 dan men$um%ul an %a*ti el adalah e$iatan 0isiolo$is tam'ahan yan$ *ele3an den$an s ala ini/ 5esain husus men$a omodasi $ene*asi $*adien om%le s ;misalnya4 su'st*at4 emo in4 dll< den$an ont*ol s%asial dan tem%o*al/ 2iosenso* da%at te*tanam di dalam %e*an$ at te*se'ut untu memun$ in an %e*an$ at mole ul+ 4 sel+ 4 dan 'e*'asis &a*in$an/ Dun$si 0isiolo$is yan$ da%at mudah di%antau melalui sistem analit multi om%onen te*masu 0lu tuasi %-4 onsumsi o si$en4 %*odu si la tat4 %en$$unaan $lu osa4 dan %otensial *edo s ;Tie?iule.ic? et al / 4 2003< di'an$un den$an tu&uan untu memantau %ende dan 'udaya &an$ a %an&an$ di *uan$ te*'atas/ -anya san$at sedi it %e*an$ at yan$ te*da0ta* dalam ta'el ini memun$ in an untu %en$u u*an 0isiolo$is atau untu m=ode %e*0usi o%e*asi/ Munculnya %e*an$ at te*se'ut4 'a$aimana%un4 %e*nah te*&adi se'elumnya dalam 'e'e*a%a tahun te*a hi*/

7te*asi Masa 5e%an ,2R ha*us memasu

an ca*a+ca*a ;1< otomatis sel %emuatan e

,2R4 ;2< Men$em'an$ an ont*ol loo% tun$$al dan multi+%a*amete* untu 3a*ia'el sistem ,2R4 ;3< O%timal an %a*amete* ont*ol untu setia% 'a*is sel@ ;4< (am'ah an senso* tam'ahan dan ont*ol loo% untu ,2R4 ;9< Mem%e*%an&an$ &umlah 'a*is sel yan$ da%at di'udidaya an seca*a sta'il4 ;6< (entu an du*asi ma simum ultu* sel sta'il dalam ,2R te*se'ut@ ;:< Menin$ at an emam%uan otomatisasi untu men$o%e*asi an 'e'e*a%a ,2R4 ;"< !e*usahaan mi *o 0luida yan$ san$at se*'a$una e ,2R4 te*masu %om%a on+chi% dan atu%4 ;9< Mela u an analisis 0lu s meta'oli yan$ om%*ehensi0 dio%timal an4 se%enuhnya diinst*umentasi ,2R4 dan ;10< (entu an %e*sya*atan untu %em'an$unan ,2R a**ay/ Kami men$antisi%asi 'ah.a ,2R a an menun&u an di*inya se'a$ai te nolo$i yan$ coco untu dimasu an e dalam massal %a*alel4 multi0ase4 onten tin$$i 4 sistem %enya*in$an to si olo$i/

%abel )" Status perangkat kultur sel mikro dan nanoba ricated

K0S)M"'L/N

1. Mi *o dan nano+0a'*i asi dian$$a% se'a$ai te nolo$i yan$ memun$ in an yan$

diha*a% an da%at men$hasil an %*odu /%asa* %eluan$ 'a*u yan$ si$ni0i an melalui inte$*asi ilmu %en$etahuan dan te nolo$i/
2. !e*u'ahan mo*0olo$i4 detasemen %e*mu aan4 a%o%tosis4 %e*tum'uhan ne *oti 4 dan

men$um%ul an %a*ti el adalah e$iatan 0isiolo$is tam'ahan yan$ *ele3an den$an s ala nano atau mi *o
3. 2ahan su'st*at ;da*i 0a'*i asi dan %oin ultu* sel< se*in$ te*masu 'ahan 'io om%ati'el

se%e*ti sili on dio sida dan nit*ida4 aca4 dan %olime* !5MS lainnya/
4. ,2R a an menun&u

an di*inya se'a$ai te nolo$i yan$ coco untu dimasu

an e

dalam massal %a*alel4 multi0ase4 onten tin$$i 4 sistem %enya*in$an to si olo$i/


5. ,2R e de%annya ha*us memasu

an ca*a+ca*a ;1< otomatis sel %emuatan e ,2R4 ;2<

Men$em'an$ an ont*ol loo% tun$$al dan multi+%a*amete* untu 3a*ia'el sistem ,2R4 ;3< O%timal an %a*amete* ont*ol untu setia% 'a*is sel@ ;4< (am'ah an senso* tam'ahan dan ont*ol loo% untu ,2R4 ;9< Mem%e*%an&an$ &umlah 'a*is sel yan$ da%at emam%uan otomatisasi untu men$o%e*asi an 'e'e*a%a di'udidaya an seca*a sta'il4 ;6< (entu an du*asi ma simum ultu* sel sta'il dalam ,2R te*se'ut@ ;:< Menin$ at an ,2R4 ;"< !e*usahaan mi *o 0luida yan$ san$at se*'a$una e ,2R4 te*masu %om%a on+ chi% dan atu%4 ;9< Mela u an analisis 0lu s meta'oli yan$ om%*ehensi0 dio%timal an4 se%enuhnya diinst*umentasi ,2R4 dan ;10< (entu an %e*sya*atan untu %em'an$unan ,2R a**ay

%/&T/R "'ST/K/ 6/W/ Allen and S/,/ 2hatia4 Do*mation o0 steady+state oHy$en $*adients in (itro/ 2iotechnol/ 2ioen$/ 5+4 293 ;2003</ R/R/ 2alca*cel and 1/M/ Ala* 4 Meta'olic sc*eenin$ o0 mammalian cell cultu*es usin$ .ell+ %lates/ 2iotechnol/ !*o$/ -64 9" ;2003</ -/ 2ec e* and A/ Fa*tne*4 !olyme* 'ased mic*o+*eacto*s/ Re3s/ Molec/ 2iotechnol/ 5+4 "9 ;2001</ 6/(/ 2o*enstein4 -/ (e*ai4 K/R/ Kin$4 )/6/ Wein'e*$4 M/R/ Kaa?em%u*Mo0*ad4 and 6/!/ Jacanti4 Mic*o0a'*ication technolo$y 0o* 3ascula*i?ed tissue en$inee*in$/ 2iomed/ Mic*ode3/ 44 16: ;2002</ A/(/ 2*atten4 !/-/ Ao''old4 and 6/M/ Aoo%e*4 Mic*omachinin$ senso*s 0o* elect*ochemical measu*ement in su'nanolite* 3olumes/ Analyt/ Ahem/ 764 293 ;199:</ M/ 2*isch.ein4 )/R/ Mot*escu4 )/ Aa'ala4 A/M/ Otto4 -/ F*othe4 and 2/ Wol04 Dunctional cellula* assays .ith multi%a*amet*ic silicon senso*/ 1a'/ Ahi%/ .4 234 ;2003</ S/A/ Aah*ati and S/A/ Ste*n4 5i00usion o0 $ases in silicone %olyme*s: Molecula* dynamics simulations/ Mac*omol/ .-4 9929 ;199"</ W/+6/ Ahan$4 5/ A in4 M/ Sedla 4 M/R/ 1adisch4 and R/ 2ashi*4 !oly;dimethylsiloHane< ;!5MS< and silicon hy'*id 'iochi% 0o* 'acte*ial cultu*e/ 2iomed/ Mic*ode3/ 74 2"1 ;2003</ 6/M/ Aoo%e*4 (o.a*ds elect*onic !et*i dishes and %icolit*e+scale sin$lecell techni=ues/ (*ends 2iotechnol/ -84 226 ;1999</ )/6/ A*os'y4 4&periments in Transport %henomena ;Wiley4 ,e. #o* 4 1961</ 7/ 5e 2o4 -/ Jan 1an$enho3e4 !/ !*uuost4 6/ 5e ,e3e4 6/ !iete*s4 7/D/6/ Ja elecom4 and )/ 5ic 4 7n3esti$ation o0 the %e*mea'ility and selecti3ity o0 $ases and 3olatile o*$anic com%ounds 0o* %olydimethylsiloHane mem'*anes/ 6/ Mem'*ane/ Sci/ +-94 303 ;2003</ K/ )0imen o4 W/)/ Wallace4 and 6/ Fen?e*4 Su*0ace modi0ication o0 Syl$a*d+1"4 !oly;dimethyl siloHane< net.o* s 'y ult*a3iolet and ult*a3iolet/o?one t*eatment/ 6/ Aoll/ 7nte*0ace Sci/ +944 306 ;2002</

S/)/ ) lund4 5/ (aylo*4 )/ Ko?lo34 A/ !*o o%4 and 5/)/ Ali00el4 A mic*o%hysiomete* 0o* simultaneous measu*ement o0 chan$es in eHt*acellula* $lucose4 lactate4 oHy$en4 and acidi0ication *ate/ Anal/ Ahem/ 874 919 ;2004</ A/ Dolch and M/ (one*4 Mic*oen$inee*in$ o0 cellula* inte*actions/ Ann Re3 2iomed )n$ +4 22: ;2000</ M/ Fe**itsen4 A/ K*os4 J/ S%*a el4 1/A/ 1utte*man4 R/6/M/ ,olte4 and 6/A/ 6ansen4 2iocom%ati'ility e3aluation o0 sol+$el coatin$s 0o* su'cutaneously im%lanta'le $lucose senso*s/ 2iomat/ +-4 :1 ;2000</ A/ Fhanem and M/1/ Shule*4 Aha*acte*i?ation o0 a %e*0usion *eacto* utili?in$ mammalian cells on mic*oca**ie* 'eads/ 2iotechnol/ !*o$*/ -74 4:1 ;2000</ A/F*od*ian46/Met?e4(h/-en el4M/Roth4and6/M/Kohle*4Se$mented 0lo.$ene*ation'ychi%*eacto*s0o*hi$hly%a*alleli?edcellculti3ation/ 7n Biomedical 'pplications o #icro- and Nanoengineering4 edited 'y 5/J/ ,icolau and A/!/ 1ee4 !*oc/ S!7) 46.84 1:4 ;2002</ D/ -a0ne*4 Aytosenso* mic*o%hysiomete*: (echnolo$y and *ecent a%%lications/ 2iosenso*s 2ioelect*/ -94 149 ;2000</ S/ -edi$e*4 A/ Sayah4 6/5/ -o*is'e*$e*4 and M/A/M/ -i&s4 Modula* mic*osystem 0o* e%ithelial cell cultu*e and elect*ical cha*acte*i?ation/ 2iosens/ 2ioelect*/ -74 6"9 ;2001</ W/+-/ -uan$4 W/ Ahan$4 T/ Than$4 5/+W/ !an$4 T/+1/ Wan$4 6/+K/ Ahen$4 and 5/+D/ Aui4 (*ans%o*t4 location4 and =uantal *elease monito*in$ o0 sin$le cells on a mic*o0luidic de3ice/ Anal/ Ahem/ 874 4"3 ;2004</ )/W/-/ 6a$e*4 A/ 7mme*st*and4 K/-/ !ete*son4 K/+)/ Ma$nusson4 7/ 1undst*om4 and O/ 7n$anas4 (he cell clinic: Alosa'le mic*o3ials 0o* sin$le cell studies/ 2iomed Mic*ode3 44 1:: ;2002</ )/A/ 6ohannessen4 6/M/ Wea3e*4 1/ 2ou*o3a4 !/ S3o'oda4 !/-/ Fo''old4 and 6/M/ Aoo%e*4 Mic*omachined nanocalo*imet*ic senso* 0o* ult*a+lo.+3olume cell+'ased assays/ Analyt/ Ahem/ 844 2190 ;2002</ 5/R/ 6un$4 R/ Ka%u*4 (/ Adams4 K/A/ Fiuliano4 M/ M* sich4 -/F/ A*ai$head4and5/1/(aylo*4(o%o$*a%hicaland%hysicochemicalmodi0ication o0 mate*ial su*0ace to ena'le %atte*nin$ o0 li3in$ cells/ A*it/ Re3/ 2iotechnol/ +-4 111 ;2001</ 6/Kim4M/K/Ahaudhu*y4andM/6/O.en4-yd*o%ho'ic*eco3e*yo0%olydimethylsiloHane eH%osed to %a*tial elect*ical discha*$e/ 6/ Aoll/ 7nte*0ace/ Sci/ ++74 231 ;2000</ elastome*

M/W/

Kon*ad4

2/

Sto**ie4

5/A/

Flase*4

and

1/-/

(hom%son4

Alonal

3a*iationincolonymo*%holo$yand$*o.tho0A-Ocellscultu*edona$a*/ Aell -,4 309 ;19::</ )/ 1ecle*c4 #/ Sa ai4 and (/ Du&ii4 Aell cultu*e in 3+dimensional mic*o0luidic st*uctu*e o0 !5MS ;%olydimethylsiloHane</ 2iomed/ Mic*ode3/ 94 109 ;2002</ )/ 1ecle*c4 #/ Sa ai4 and (/ Du&ii4 Mic*o0luidic !5MS ;!olydimethylsiloHane<'io*eacto*0o*la*$e+ scalecultu*eo0he%atocytes/2iotechnol/ !*o$*/ +,4 :90 ;2004</ S/6/ 1ee and S/#/ 1ee4 Mic*o total analysis system ;Q+(AS< in 'iotechnolo$y/ A%%l/ Mic*o'iol/ 2iotechnol/ 744 2"9 ;2004</ M/M/ Maha*'i?4 W/6/ -olt?4 R/(/ -o.e4 and 6/5/ Keaslin$4 Mic*o'io*eacto* a**ays .ith %a*amet*ic cont*ol 0o* hi$h+th*ou$h%ut eH%e*imentation/ 2iotechnol/ 2ioen$/ 594 3:6 ;2004</ A/ Man?4 ,/ F*a'e*4 and -/M/ Widme*4 Miniatu*i?ed total chemical analysis systems: A no3el conce%t 0o* chemical sc*eenin$/ Senso*s Act B-4 244 ;1990</ 6/A/ Mc5onald and F/M/ Whitesides4 !oly;dimethylsiloHane< as a mate*ial 0o* 0a'*icatin$ mic*o0luidic de3ices/ Account Ahem/ Res/ .94 491 ;2002</ (/A/ Me el4 J/7/ 2onda*4 K/ ,a$ai4 2/5/ D*eeman4 and 7/ !innau4 Fas so*%tion4di00usion4and%e*meationin%oly;dimethylsiloHane</6/!olyme*/ Sci/4 !olyme*/ !hys/ 2 .54 419 ;2000</ F/ Michalo%oulos4 -/5/ Aianciulli4 A/R/ ,o3otny4 A/5/ Kli$e*man4 S/A/ St*om4 and R/1/ 6i*tle4 1i3e* *e$ene*ation studies .ith *at he%atocytes in %*ima*y cultu*e/ Aance* Res 4+4 46:3 ;19"2</ M/ Moisan4 6/ 2a*'eau4 S/ Mo*eau4 6/ !elletie*4 M/ (a'*i?ian4 and 1/-/ #ahia4 1o.+tem%e*atu*e ste*ili?ation usin$ $as %lasmas: A *e3ie. o0 the eH%e*iments and an analysis o0 the inacti3ation mechanisms/ 7nt/ 6/ !hamaceut/ ++74 1 ;2001</ D/ Moussy4 5/6/ -a**ison4 and R/J/ Ra&otte4 A miniatu*i?ed ,a0ion+'ased $lucose senso*: :n (itro and in (i(o e3aluation in do$s/ 7nt/ 6/ A*ti0/ O*$ans/ -84 "" ;1994</ A/2/ ,e.man4 (*ans/ Ame*/ 7nst/ Ahem/ )n$/ +84 203 ;1931</ 6/#/Oldshue4Fluid#i&ingTechnology;McF*a.+-ill4,e.#o* 419"3</ A/-/!a* 42/D/Kimle*4and(/K/Smith4Alono$enicassaycom'ined.ith 0lo. cytomet*ic cell so*tin$ 0o* cell+cycle analysis o0 human leu emic colony+0o*min$ cells/ Anticance*/ Res/ 84 129 ;19":</

!/A/ !a*sons+Win$e*te* and W/M/ Salt?man4 F*o.th 3e*sus 0unction in the th*ee+dimensional cultu*e o0 sin$le and a$$*e$ated he%atocytes .ithin colla$en $els/ 2iotechnol/ !*o$*/ 64 600 ;1993</ 6/ !om%4 6/1/ Wi e4 7/6/M/ Ou.e* e* 4 A/ -oo$st*aten4 6/ 53elaa*4 !/7/ Sch*ie*4 6/W/-/ 1ee*4 -/5/ (hames4 and W/A/ 2*oc 4 Aell density de%endent%latin$e00iciencya00ectsoutcomeandinte*%*etationo0colony 0o*min$ assays/ Radiothe*/ Oncol/ 4,4 121 ;1996</ M/6/ !o.e*s4 K/ 5omans y4 M/R/ Kaa?em%u*+Mo0*ad4 A/ Kale?i4 A/ Aa%itano4 A/ E%adhyaya4 !/ Ku*?a.s i4 K/)/ Wac 4 5/2/ Stol?4 R/ Kamm4 and 1/F/ F*i00ith4 A mic*o0a'*icated a**ay 'io*eacto* 0o* %e*0used 35 li3e* cultu*e/ 2iotechnol/ 2ioen$/ 854 29: ;2002</ A/ !*o o% and R/K/ 2a&%ai4 (he sensiti3ity o0 'iocatalysts to hyd*odynamic shea* st*ess/ 7n 'd(ances in 'pplied #icrobiology4 edited 'y A/ 1as in ;Academic !*ess4 ,e. #o* 4 1992<4 3ol/ 3:4 %%/ 169C 232/ A/!*o o%4Systemsanalysisandsynthesisin'iolo$yand'iotechnolo$y/ 7nt/ 6/ Fen/ Syst/ 54 1 ;19"2</ A/ !*o o%4 Ahallen$es in comme*cial 'iotechnolo$y/ !a*t 7: !*oduct4 %*ocess and ma* et disco3e*y/ Ad3an/ A%%l/ Mic*o'iol/ 4,4 99 ;1999</ A/ Sin4 K/A/ Ahin4 M/-/ 6amil4 #/ Kosto34 F/ Rao4 and M/1/ Shulle*4 (he desi$n and 0a'*ication o0 th*ee+cham'e* mic*oscale cell cultu*e de3ices .ith inte$*ated dissol3ed oHy$en senso*s/ 2iotechnol/ !*o$*/ +,4 33" ;2004</ K/ Slate*4 AytotoHicity tests 0o* hi$h+th*ou$h%ut d*u$ disco3e*y/ Au**/ O%in/ 2iotechnol/ -+4 :0 ;2001</
6/

F/Steele4F/6ohnson4W/5/,o**is4and!/A/Ende*.ood4Adhesionand $*o.th o0 cultu*ed human endothelial cells on %e*0luo*osul%honate: Role o0 3it*onectin and 0i'*onectin in cell attachment/ 2iomat/ -+4 931 ;1991</

W/R/ (ol'e*t4 !e*0usion cultu*e systems 0o* %*oduction o0 mammalian cell 'iomolecules/ 7n Large Scale #ammalian )ulture4 edited 'y 6/ Dede* and W/R/ (ol'e*t ;Academic !*ess4 ,e. #o* 4 19"9<4 %%/ 9: C 123/ (/F/ 3an Kooten4 6/D/ Whitesides4 and A/D/ 3on Recum4 7n0luence o0 silicone;!5MS<su*0aceteHtu*eonhumans in0i'*o'last%*oli0e*ation as dete*mined 'y cell cycle analysis/ 6/ 2iomed/ Mate*/ Res/ ; A%%l/ 2iomate*/< 4.4 1 ;199"</
K/ Ji*a3aidya

and M/1/ Shulle*4 7nco*%o*ation o0 3(3+11 cells to mimic 'ioaccumulation in a

mic*oscale cell cultu*e analo$ de3ice 0o* toHicity studies/ 2iotechnol/ !*o$*/ +,4 990 ;2004</

6/ Joldman4 M/1/ F*ay4 and M/A/ Schmidt4 Mic*o0a'*ication in 'iolo$y and medicine/ Annu/ Re3/ 2iomed/ )n$/ -4 401 ;1999</ 2/ Wan$4 T/ A'dulali+Kan&i4 )/ 5od.ell4 6/-/ -o*ton4 and R/5/ Oleschu 4 Su*0ace cha*acte*i?ation usin$ chemical 0o*ce mic*osco%y and the 0lo. %e*0o*mance o0 modi0ied %olydimethylsiloHane 0o* mic*o0luidic de3ice a%%lications/ )let*o%ho*esis +44 1442 ;2003</ K/D/ Wei'e?ahn4 F/ Knedlitsche 4 -/ 5e*tin$e*4 W/ 2ie*4 (h/ Schille*4 and K/ Schu'e*t4 Reconst*uction o0 tissue laye*s in mechanically %*ocessed mic*ost*uctu*es/ 6/ )H%/ Alin/ Aance*/ Res/ -4 ;Su%%l/ 1<4 S41 ;1999</ F/M/ Whitesides4 )/ Ostuni4 S/ (a ayama4 U/ 6ian$4 and 5/)/ 7n$'e*/ So0t litho$*a%hy in 'iolo$y and 'iochemist*y/ Annu/ Re3/ 2iomed/ )n$*/ .4 339 ;2001</ A/R/ Wheele*4 W/R/ (h*ondset4 R/6/ Whelan4 A/M/ 1each4 R/,/ Ta*e4 #/+-/ 1iao4 K/ Da**ell4 7/5/ Man$e*4 and A/ 5a*idon4 Mic*o0luidic de3ice 0o* sin$le+cell analysis/ Anal Ahem 894 3249 ;2003</ #/ #an$ and R/R/ 2alca*cel4 5ete*mination o0 ca*'on dioHide %*oduction *ates 0o* mammalian cells in 24+.ell %lates/ 2io/ (echni=ues/ .74 2"6 ;2004</ A/ Tan?otto4 ,/ S?ita4 !/ 2occa??i4 !/ 1essa*d4 A/6/ Sins ey4 and K/D/ 6ensen4 Mem'*ane+ae*ated mic*o'io*eacto* 0o* hi$h+th*ou$h%ut 'io%*ocessin$/ 2iotechnol/ 2ioen$/ 584 243 ;2004</ (/6/ Tie?iule.ic?4 5/W/ En0*icht4 ,/ -ad&out4 M/A/ 1ynes4 and 5/A/ 1a.*ence4 Sh*in in$ the 'iolo$ic .o*ldV,ano'iotechnolo$ies 0o* toHicolo$y/ (oHicol/ Sci/ 844 239 ;2003</