Aeromonas hydrophila adalah heterotrofik , bakteri gram negatif yang merupakan penyebab primer atau sekunder dari borok

, busuk sirip , busuk ekor , dan septikemia hemoragik pada ikan . Pengobatan untuk infeksi ini hanya terbatas pada beberapa antibiotik . Jadi , bahan novel yang sedang dicari untuk memerangi infeksi bakteri dan konsekuensi yang dihasilkan . Dalam penelitian ini , nanopartikel perak disintesis kimia & biologis dan ditandai dengan spektrofotometer UV - Visible dan mikroskop elektron transmisi ( TEM ) . Kegiatan antimikroba nanopartikel perak , disintesis oleh kedua metode diperiksa oleh difusi baik dan turbidometric metode ( spektrofotometri ) . Keduanya disintesis nanopartikel biologis dan kimiawi dipamerkan khasiat antimikroba mereka baik dalam tes penghambatan standar, namun partikel kimia sintesis yang juga lebih kecil dalam ukuran , dipamerkan efek yang lebih penghambatan dari nanopartikel biologis disintesis . Hasil ini dengan demikian memberikan ruang lingkup untuk penelitian lebih lanjut pada penerapan nanopartikel perak sebagai desinfektan dan / atau antibiotik dalam industri perikanan

Pendahuluan Ikan merupakan komponen penting dari diet manusia dan salah satu sumber termurah kualitas protein hewani yang tersedia bagi jutaan orang di seluruh dunia . Ikan berfungsi sebagai makanan kesehatan karena besar protein , lemak menguntungkan tinggi dan berbagai nutrisi mikro . Selain itu, selama beberapa dekade terakhir dan perikanan budidaya berkontribusi terhadap keamanan global pangan, pengentasan kemiskinan, mata pencaharian pedesaan, pekerjaan dan penghasilan [ 1 ] . Penyakit Ikan merupakan salah satu ancaman utama terhadap pembangunan berkelanjutan akuakultur menyebabkan hilangnya jutaan dolar per tahun . Aeromonas hydrophila adalah bakteri gram negatif yang dapat tumbuh baik pada kondisi aerob dan anaerob dan menyebabkan berbagai penyakit pada ikan dan populasi manusia . Ada bertentangan pandangan tentang apakah mikroba merupakan penyebab utama dari penyakit atau oportunistik yang menyebabkan penyakit untuk host yang kekebalan dan menekankan [ 3 ] . Namun, patogen ini telah ditemukan menyebabkan bisul , busuk sirip , busuk ekor , dan hemoragik septikemia dan epidemi sindrom ulseratif ( EUS ) pada ikan [ 4 , 5 ] . Di mana-mana sifat bakteri dalam lingkungan perairan memberikan peluang yang sangat besar untuk hewan , terutama ikan dan amfibi untuk menghubungi dan menelan organisme [ 6 ] . Pengobatan untuk infeksi bakteri terbatas pada sangat sedikit antibiotik seperti Tetracycline dan remet - 30 . Selain itu bakteri kebal terhadap antibiotik tersedia karena penggunaan jangka panjang dan senyawa baru untuk memerangi penyakit bakteri yang ditularkan sedang dicari . Nanoteknologi adalah bidang ilmiah yang muncul dan dianggap memiliki potensi untuk menghasilkan bahan baru dan inovatif . Nanoteknologi memberikan kemampuan untuk insinyur sifat bahan dengan mengendalikan ukuran mereka dan ini telah mendorong penelitian ke arah banyak kegunaan potensial untuk Nanomaterials [ 7 ] . Nanopartikel menunjukkan optik , termal , kimia dan sifat fisik yang berbeda dari yang dari bahan massal karena luas permukaan yang lebih tinggi untuk volume.

Nanopartikel perak telah ditemukan banyak aplikasi dalam diagnostik [ 8 ] , terapi [ 9 ] , salep antimikroba [ 10 ] , katalisis , mikroelektronika [ 11 ] dan biosensing perangkat [ 12 ] karena sifat mereka yang unik . Sebuah array proses fisiko-kimia untuk sintesis nanoparicles seperti terbalik misel , sol-gel , presipitasi kimia, hidrotermal , pirolisis , deposisi uap kimia telah dilaporkan [ 13 ] . Tapi sintesis nanopartikel perak dengan metode reduksi kimia adalah salah satu metode yang paling umum digunakan . Sintesis biologis nanopartikel perak adalah metode baru yang dianggap aman , ramah lingkungan dan alternatif untuk metode fisik dan kimia konvensional . Rute biologis untuk sintesis partikel-partikel ini telah diusulkan oleh mikroorganisme mengeksploitasi dan oleh tanaman vaskular . Sintesis nanopartikel logam dengan menggunakan ekstrak tanaman adalah prosedur yang relatif lebih cepat dibandingkan dengan menggunakan mikroba . Apalagi sintesis nanopartikel perak menggunakan ekstrak tumbuhan mengurangi biaya karena tidak memerlukan media kultur khusus dan teknik isolasi [ 14 ] . Di sini , percobaan dilakukan untuk menguji potensi penghambatan nanopartikel perak terhadap patogen ikan utama , A. hydrophila mana nanopartikel disintesis dari kedua kimia dan biologi rute . Analisis dampak komparatif dari nanopartikel disintesis oleh kedua metode dilakukan oleh tes standar seperti metode difusi baik dan metode turbidometric . Bahan dan metode Biosintesis nanopartikel perak Daun Cedrus deodar dikumpulkan dan dicuci sampai bersih untuk menghilangkan debu. Daun kemudian dikeringkan untuk menghilangkan jejak air. Kaldu daun disiapkan dengan mengambil 4 gram daun dalam 100 mL air dan memanaskannya pada 55 C selama 30 menit. Ekstrak dikumpulkan dengan penuangan, dan ditambahkan ke 1 mM larutan AgNO3 (perak nitrat) di 1:10 v / v rasio. Campuran reaksi disimpan pada suhu kamar selama 24 jam sampai warna campuran reaksi berubah menjadi coklat. Sintesis kimia nanopartikel perak 1 mL AgNO3 5mm ditambahkan ke 4 mL Asam Acrylic Poli (10% W / V) dan 2 mL larutan trisodium sitrat. Kemudian 6 mL 25mm Sodium dodesil sulfat ditambahkan ke campuran ini. Campuran diaduk dengan manik-manik magnetik selama 10 minutes.Then 4 mL Amonium hidroksida (25% W / V) ditambahkan ke campuran dan konstan pengadukan dilanjutkan selama 10 menit. Kemudian 10mm Sodium borohidrida adalah penurunan bijaksana ditambahkan sampai warna campuran menjadi kecoklatan. Analisis spektra UV-Vis Pengurangan ion Ag + dipantau dengan mengukur densitas optik dari campuran reaksi setelah 24 jam dalam rentang panjang gelombang 350-700 nm dari dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis (UV-1800, Shimadzu, Singapura). Transmisi Elektron Microscopy (TEM) Analisis TEM dari nanopartikel perak dilakukan oleh penurunan lapisan perak solusi nanopartikel karbon grid dilapisi tembaga. Sampel dikeringkan dan disimpan di bawah vakum dalam desikator sebelum loading mereka ke pemegang spesimen. Ukuran-ukuran nanopartikel perak diukur dengan menggunakan TEM (Fei Technai G2) yang beroperasi pada 200 kV. Uji antimikroba dengan metode difusi sumur perak nanopartikel disintesis dari dua sumber yang berbeda diuji aktivitas antimikroba dengan metode difusi sumur terhadap A. hydrophila . Kebudayaan A. hydrophila dikumpulkan dari " Ikan divisi manajemen kesehatan " , Central Institute of Budidaya Air Tawar , Kausalyaganga , Bhubaneswar , Odisha dan dihidupkan kembali dengan

menggunakan kaldu LB . Kemudian bakteri dikultur pada piring Agar LB . 5 sumur masing-masing berdiameter 6mm dibuat di piring dengan steril gel penggerek . Ekstrak daun diambil sebagai kontrol untuk nanopartikel biosynthesized dan lainnya 4 sumur yang dimuat dengan 50 uL nanopartikel perak 153,6 ug / ml , 76,8 mg / ml , 30,7 mg / ml , dan 15,3 mg / ml konsentrasi . Untuk nanopartikel perak kimia disintesis , air suling steril diambil sebagai kontrol . Pengenceran yang sama dipertahankan untuk nanopartikel perak kimia disintesis . Percobaan diulang sebanyak 3 kali dan nilai-nilai adalah sebagai rata-rata standar deviasi . antimikroba dengan analisis kurva pertumbuhan Aktivitas antimikroba dari nanopartikel perak terhadap Aeromonas hydrophila telah dikonfirmasi dengan analisis kurva pertumbuhan. 5 ml kaldu LB diinokulasi dengan Aeromonas hydrophila. Media ini dilengkapi dengan 7,6 ug nanopartikel disintesis oleh kedua kimia dan biologi metode. Pertumbuhan mikroba tersebut dipantau dengan mengukur densitas optik pada 600 nm secara berkala dengan menggunakan spektrofotometer yang sama, sedangkan kontrol tidak mengandung nanopartikel apapun. Percobaan dilakukan dalam tiga ulangan dan nilai densitas optik dinyatakan sebagai rata-rata standar deviasi. Hasil & Diskusi Karakterisasi nanopartikel perak Perubahan warna Ini adalah fakta yang diketahui bahwa nanopartikel perak menunjukkan warna coklat dalam larutan air akibat eksitasi plasmon permukaan getaran dalam nanopartikel perak . Sebagai ekstrak daun dicampur dengan larutan perak nitrat 1.mM dan diinkubasi selama 24 jam , warna campuran secara bertahap berubah menjadi kecoklatan ( Gambar 1) , sedangkan pada sintesis nanopartikel perak dengan metode reduksi kimia , kecoklatan yang warna muncul selama penambahan borohidrida natrium (Gambar 2 ) . Dari penelitian ini , dapat diceritakan bahwa ekstrak daun Cedrus deodar memiliki potensi untuk mengurangi larutan perak nitrat . Daun mengandung senyawa yang berbeda memiliki poliol seperti flavon hidroksil , catechin dll Senyawa ini mengurangi ion perak dan mendapatkan diri mereka dioksidasi menjadi gugus karbonil tak jenuh [ 15 ] . Tanaman daun juga mengandung agen capping alami yang menstabilkan nanopartikel perak . Untuk nanopartikel perak kimia disintesis , natrium borohidrida bertindak sebagai agen mengurangi . Konversi berwarna larutan perak nitrat sampai coklat di kedua metode sintesis terjadi karena eksitasi plasmon resonansi permukaan [ 16 ] Analisis spektroskopi UV-Visible Para sintesis nanopartikel perak dikonfirmasi dari analisis spektral UV-Vis dari campuran reaksi. Nanopartikel perak kimia disintesis menunjukkan serapan maksimum pada 430 nm mana sebagai nanopartikel perak biologis disintesis menunjukkan serapan maksimum pada 442 nm karena eksitasi permukaan plasmon resonansi dalam kisaran ini [17]. Perluasan puncak menunjukkan bahwa nanopartikel disintesis dalam kedua metode yang poli-bubar (Gambar 3) [17]. Transmisi Elektron Microscopy (TEM) Analisis TEM mikrograf dari nanopartikel menunjukkan bahwa ukuran rata-rata nanopartikel biologis disintesis adalah sekitar 50 nm sedangkan disintesis dengan metode kimia adalah sekitar 20 nm seperti ditunjukkan pada Gambar. 4 (a & b). Ukuran yang lebih besar dari nanopartikel perak biosynthesized dapat disebabkan oleh adanya senyawa polifenol yang tampaknya menjadi agen

utama dalam mengurangi sintesis biologis sebagai kehadiran senyawa polifenol yang tinggi dalam biji telah dilaporkan untuk memainkan peran penting dalam sintesis nanopartikel perak di ekstrak [18] Aloe Vera tanaman. Uji antimikroba dengan metode difusi sumur Kedua nanopartikel perak biologis dan kimiawi disintesis menunjukkan aktivitas antimikroba yang besar terhadap A. hydrophila . Nanopartikel perak kimia disintesis menunjukkan aktivitas antimikroba yang lebih besar maka dari nanopartikel disintesis menggunakan ekstrak daun . Nanopartikel kimia disintesis menunjukkan aktivitas antimikroba pada konsentrasi 153,6 ug / ml , 76,8 mg / mL , dan 30,7 mg / mL sedangkan disintesis menggunakan ekstrak daun Cedrus deodar menimbulkan aktivitas antimikroba pada konsentrasi 153,6 ug / ml , 76,8 mg / ml . Dari perbandingan , teramati bahwa nanopartikel perak kimia disintesis memiliki efek yang lebih mematikan daripada yang disintesis secara biologis ( Tabel. 1 ) . Hal ini mengamati bahwa nanopartikel perak disintesis menunjukkan aktivitas antimikroba yang besar terhadap Aeromonas hydrophila oleh kedua metode difusi baik dan analisis kurva pertumbuhan . Efek penghambatan nanopartikel perak adalah efek kumulatif dari berbagai mekanisme yang berbeda . Berbagai studi menunjukkan bahwa ion perak bereaksi dengan kelompok - SH protein . Nanopartikel perak transpor elektron pernapasan uncouple dari fosforilasi oksidatif , yang menghambat enzim rantai pernapasan atau mengganggu permeabilitas membran proton dan fosfat [ 19 ] . Schreurs dan Rosenberg , 1982 [ 20 ] melaporkan bahwa Ag + menghambat serapan fosfat dan pertukaran pada Escherichia coli dan penyebab penghabisan akumulasi fosfat serta manitol , suksinat , glutamin , dan prolin . Hal ini juga mengamati bahwa nanopartikel perak kimia disintesis memiliki aktivitas antimikroba yang lebih maka nanopartikel perak biologis disintesis . Hal ini karena ukuran nanopartikel perak kimia disintesis lebih kecil dari yang disintesis dengan metode biologis. Pengikatan nanopartikel perak tergantung pada luas permukaan yang tersedia dari nanopartikel dan nanopartikel lebih kecil dengan luas permukaan yang tinggi terhadap volume yang lebih mematikan karena ketersediaan luas permukaan untuk interaksi [ 21 ] . Dalam skenario ini, efektivitas antimikroba dari nanopartikel perak terhadap ikan utama patogen Aeromonas hydrophila menghasilkan harapan untuk aplikasi mungkin sebagai desinfektan atau agen antimikroba untuk manajemen kesehatan ikan yang lebih baik. Namun, lebih lanjut dalam percobaan in vivo harus dilakukan untuk penilaian keselamatan nanopartikel perak sebelum aplikasi skala besar

Aeromonas hydrophila merupakan bakteri gram negatif yang bersifat heterofilik, merupakan penyebab dari borok, pembusukan sirip , ekor dan septikemia hemoragik pada ikan. Pengobatan untuk infeksi ii terbatas terhadap beberapa antibiotik.