Anda di halaman 1dari 11

Penerapan Metode DNA di dalam Forensik Entomologi Abstrak Sebuah forensik entomologis investigasi bisa mendapatkan keuntungan dari

berbagai metode genotip molekul dipraktekkan secara luas. Yang paling umum digunakan adalah identifikasi spesimen berbasis DNA. Aplikasi lain termasuk identifikasi isi usus serangga dan karakterisasi struktur genetik populasi suatu spesies serangga forensik penting. Aplikasi ang tepat dari prosedur ini menuntut bah!a analis secara teknis ahli. Namun" kita #uga harus men adari dari daftar pan#ang standar dan harapan bah!a ban ak sistem hukum telah dikembangkan untuk analisis DNA forensik. $ami meringkas teknik DNA ang saat ini digunakan dalam" atau telah diusulkan untuk" forensik entomologi dan revie! didirikan analisis genetik dari bidang ilmiah lainn a ang membahas pertan aan%pertan aan serupa dengan ang ada di forensik entomologi. $ami men#elaskan bagaimana standar ang diterima untuk praktek forensik DNA dan validasi metode cenderung untuk menerapkan bukti serangga digunakan dalam kematian atau forensik entomologis investigasi lainn a. PENDA&'('AN Acara televisi populer pendaftaran dalam program pelatihan ilmu forensik universitas di Amerika Serikat dan Eropa menun#ukkan da a tarik ang luas dengan dan mengagumi bagaimana para ilmu!an membantu mengatasi ke#ahatan )*+" *," -+.. /eknologi terus meningkatkan #enis bukti ang membutuhkan kesaksian ahli di pengadilan )*-" 01" ,2.. Pada saat ang sama" para ilmu!an dan anggota dari sistem hukum ang terlibat dalam proses ang sulit untuk membantu hakim membedakan antara baik dan buruk kesaksian mantan nakal. 'pa a ini sangat con%tentious ketika metode tradisional ang telah digunakan dalam kasus%kasus ang tak terhitung #umlahn a diperiksa dalam retrospeksi. Namun" keputusan hukum terbaru )-3. dan demonstrasi oleh tes DNA dari ke akinan ang salah )1,. harus menginspirasi semua ilmu!an forensik untuk mengu#i kembali metode mereka )34" -3.. Seperti dengan sebagian besar ilmu kehidupan" forensik entomologi semakin meliputi alat%alat biologi molekuler dengan efek bermanfaat untuk menarik orang% orang baru dan dana penelitian ke lapangan. Dalam pengalaman kami staf laboratorium DNA forensik ang khas tidak akan analisis genetik con%duct pada #aringan ang dianggap non%manusia )tapi lihat 5eferensi ++" ,0" 62," dan 624.. Akibatn a" seorang peneliti cenderung beralih ke seorang ilmu!an akademik untuk bantuan. &ampir semua universitas riset memiliki seseorang ang kompeten dapat melakukan forensik teknik ge%netic standar seperti mikrosatelit 7#uga disebut ulangi tandem pendek )S/5. alel si8%ing dan mitokondria DNA )mtDNA. se%9uencing pada berbagai spesies he!an. :an ak protokol genotip sekarang secara rutin dilakukan dengan menggunakan kit komersial dengan instruksi ang relatif sederhana. Namun" scien%tist harus tahu lebih dari cara menggunakan genotip kit sebelum men#adi terlibat dalam ker#a kasus forensik. $ami menin#au sini metode berbasis DNA ang telah dikembangkan untuk

forensik entomologi" dan mencoba untuk men orot khusus con%cerns untuk seorang ilmu!an ang menerapkan metode ini dalam penelitian forensik atau ker#a kasus. $ami #uga mempertimbangkan perkembangan terakhir di bidang%bidang seperti analisis DNA forensik konvensional dan genetika konservasi ang cenderung mengarah pada penggunaan%ful forensik entomologis aplikasi. AP(;$AS; 'N/'$ DNA F<5ENS;$ EN/<M<(<=; Penentuan spesies Determinasi spesies adalah satu%satun a aplikasi genotip sekarang secara rutin digunakan oleh forensik en%tomologists. ;dentifikasi akurat dari spesimen%sekte biasan a merupakan langkah pertama ang penting dalam analisis forensik entomologis )41.. Spesies bangkai Erat terkait bisa secara substansial berbeda%fer dalam tingkat pertumbuhan )02." respon diapause ),." atau kebiasaan ekologis )0*.. $arakter anatomi Spesies%diagnostik tidak dikenal untuk tahap belum matang ban ak forensik serangga impor%tant" dan tombol ang ada mungkin dalam%lengkap atau sulit untuk nonspecialists untuk digunakan. Sperling et al. )40. adalah ang pertama untuk n arankan%gest tes berbasis DNA untuk tu#uan ini" dan ban ak ang mengikutin a )-" 6-" 30" 13" 1*" +3" ,+" 42" 43" 622" 666" 66-" 633 " 63-" 630" 6*-.. Pendekatan ini se#a#ar daerah lain ilmu forensik" di mana mengidentifikasi tis%sue sampel bantu dalam penegakan hukum berburu dan konservasi )*3" *1." penipuan keprihatinan%ing bernilai tinggi makanan )6," +6." identifikasi perut ma at isi )6*1." dan situasi numer%ous di mana manusia membedakan dari nonmanusia berguna )64.. Sebagaimana dengan begitu ban ak molekul he!an s s%tematics )4." mtDNA telah memainkan peran utama dalam studi genom serangga. /inggi cop num%ber" haploid " dan ketersediaan primer mtDNA dilestarikan untuk lebih dari satu dekade )4*. membuatn a mudah untuk mendapatkan data sekuens mtDNA dari ban ak spesies serangga sebelumn a !a#ar. &asiln a adalah pertumbuhan eksplosif dalam data sekuens mtDNA )31.. Makalah serangga ang paling forensik spesies%diagnostik berfokus pada beberapa bagian dari gen untuk sitokrom c oksidase subunit satu dan dua )><; ? ;;. )+3" 40" 666" 66-" 633" 63-.. $ebetulan" 1 menit akhir ><; #uga merupakan situs ang diusulkan ang universal barcode DNA he!an )10" 63,.. Namun" tidak ada satu disepakati lokus untuk identifikasi berbasis DNA Forensik serangga" dan tidak #elas bah!a mungkin ada. :aha a mengandalkan satu lokus baik diilustrasikan oleh beberapa penelitian%penelitian baru%baru ini )62*" 631.. Disarankan target selain ><; ? ;; termasuk diperkuat acak DNA poli%morphic )5APDs. )6-" 4-" 4," 44." gen untuk 3,S ribosom 5NA )622." internal daerah spacer ditranskripsi ribosom Somal ),+." dan NAD& dehidrogenase subunit 1 )6*-.. :eberapa penulis telah memasukkan lebih dari satu lo%cus dalam analisis tunggal )626" 62*" 661.. &ampir semua metode berbasis DNA ang diusulkan untuk mengidentifikasi serangga forensik telah menggunakan di%rect se9uencing atau teknik P>5%5F(P. :aru%baru ini mengembangkan spesies%diagnostik metode" seperti p rose9uencing )62." analisis heterodu%ple@ )60." real%time P>5 )63+." atau

microarra )6*." ang digunakan untuk taksa noninsect" dan kami menduga bah!a metode tersebut akan memainkan peran lebih besar dalam forensik entomologi. :e% men ebabkan berbagai probe oligonukleotida dapat ditempatkan pada sebuah chip microarra tunggal" microarra tunggal dapat diproduksi ang mampu melakukan hampir setiap tugas genotipe diperlukan untuk spesimen serangga forensik. Populasi Metode genetik dan ;su Analitis =enotipe h pervariable" aitu" ang didasarkan pada lokus cenderung bervariasi antara individu dari spesies ang sama" ban ak digunakan oleh para ahli biologi untuk men impulkan hal%hal seperti peristi!a evolusi masa lalu dan perilaku tingkat populasi saat ini )664.. :an ak literatur entomologi forensik tampakn a berasumsi bah!a spesies serangga mobil%rion sangat mobile" seperti lalat pukulan" ada sebagai populasi seragam di mana individu%individu secara acak campuran. $ami saat ini terbatas di ba!ah%berdiri apa serangga bangkai tidak ketika #auh dari ma at ini segera mungkin untuk revisi kembali 9uire" sebagai pen idik telah mulai beradaptasi alat genetika populasi taksa tersebut. Mendeteksi dan menggunakan variasi geografis. ;nformasi biologis dasar forensik spesies di%sekte" seperti hubungan suhu dan pengembangan tingkat men#adi%t!een" telah di hampir setiap contoh diperoleh dari seperangkat terbatas lokasi geografis )636.. Aariasi geografis dalam fenotip untuk spesies luas" mungkin berhubungan dengan variasi genetik" akan menarik bagi ahli entomologi forensik untuk setidakn a dua alasan. Pertama" mungkin perlu untuk mengulang ban ak eksperimen di lokasi baru karena data referensi dikembangkan di satu tempat tidak berlaku untuk pen elidikan kematian di tempat berbeda%beda. $edua" geografis populasi struktur ge%netic bisa memungkinkan untuk men impulkan relokasi postmortem ma at #ika serangga di dalamn a menun#ukkan genotipe nonlokal. :eberapa besar spesies lalat bangkai ang paling sering digunakan dalam pen elidikan kematian telah diamati untuk membubarkan beberapa kilometer dalam satu hari )63" -," ,6.. Mereka tampakn a akan men#adi kandidat miskin untuk isolasi genetik menurut #arak pada skala setidakn a ratusan kilometer. /entu sa#a adaptasi terhadap lingkungan lokal mungkin ter#adi" dan pada ken ataann a kemerosotan lintang dalam menanggapi diapause telah didokumentasikan selama sarcophagids )0-.. Namun" : rne et al. )3*. melaporkan diferensiasi pop%modulasi pada skala geografis baik untuk luas calliphorid Phormia regina. Dalam hal ini" penulis mengukur profil hidrokarbon cu%khususn a" fenotipe ang hampir seluruhn a ditentukan oleh genotipe. : rne et al. mampu membedakan antara P. regina dari dua daerah sekitar +2 km di bagian tenggara negara bagian Bashington. &asil ini menge#utkan mengingat mobilitas ang luar biasa dari serangga ini )636.. :eberapa survei daerah molekuler genetik ang telah dilakukan pada >alliphoridae tidak men arankan penghalang untuk aliran gen lebih dari #arak ribuan kilometer )623" 62-" 66*" 630." namun" studi ini sebagian besar didasarkan pada mtDNA%coding daerah" ang mungkin terlalu dilestarikan untuk mendeteksi apa pun selain isolasi

se#arah ang ekstrim. Ba#ib para%sitism tampakn a untuk mempromosikan mekanisme ang berbeda aliran gen di calliphorids" mengingat bah!a survei mtDNA sama menemukan variasi regional dalam scre!!orm primer lalat >ochliom ia ho% minivora@ dan >hr som a be88iana )-4" 62-" 662.. Pen elidikan dari populasi =enetik serangga forensik penting adalah di dalam% me!ah meskipun praktis pentingn a sub#ek. $arena penelitian tersebut mungkin oc% skr di masa depan" kami ingin menarik di%inginann a untuk bidang ang sama penelitian biologi" khususn a di bidang populasi =enet%ics" pengendalian hama" dan biologi konservasi. Alat%alat untuk melakukan analisis tersebut adalah sia%sia%bisa untuk berbagai arthropoda" ter%masuk beberapa relevansi forensik. ;ni termasuk mikrosatelit )-2" --" 620" 62+" 66,." ampli%fied pan#ang fragmen pol morphism )AF(P. )66." 5APDs )4," 44." dan polimorfisme nukleotida tunggal )03" 04.. :erdasarkan atau%ganisms ang beberapa perpustakaan microsatel%lite telah dikembangkan )terutama calliphorids." identifikasi tingkat populasi pukulan lalat menggunakan teknik ini sekarang harus mungkin )lihat di ba!ah.. Meskipun mudah gen%erated dari genom baru" profil 5APD telah terbukti sulit untuk mereproduksi )+2" ,-.. Metode AF(P )663. sekarang digunakan pada berbagai taksa" termasuk calliphorids parasit )66.. Penelitian #auh lebih sedikit telah dilakukan pada serangga polimorfisme nukleotida tunggal. Penggunaan lokus mikrosatelit kini telah men#adi didirikan di ban ak ilmiah murid%plines sebagai standar emas untuk men#elaskan tingkat populasi variasi genetik. Salah satu keuntungan utama menggunakan lokus mikrosatelit atas beberapa teknik lainn a adalah kemampuan untuk kembali liabl mengenali alel dan )memberikan kondisi tertentu terpenuhi. untuk menafsirkan data genetik hasil%ing menggunakan analisis Mendel C &ard %Beinberg berbasis konvensional kuat. Disiplin di mana data mikrosatelit telah terbukti berharga dalam menggambarkan populasi organisme termasuk biologi konservasi dan pengelolaan perikanan" dan beberapa metode ang dikembangkan dalam disiplin ilmu ini bisa dengan mudah memin#amkan diri untuk analisis tingkat populasi serangga kepentingan forensik. $epentingan tertentu adalah tugas teknik%teknik ang digunakan dalam biologi perikanan salmon sebagai%tanda ikan ang tidak diketahui asaln a tertangkap di laut ke sungai natal asaln a )untuk rincian lebih lan#ut" lihat 5eferensi *4" 06" dan ,1.. Dalam murid%Pline" sebagian besar didorong oleh kebutuhan data konservasi stok ikan akurat dan isu%isu politis terkait" ikan bermigrasi individu dapat ditugaskan untuk sungai natal mereka dalam DAS )misaln a" Sungai Penobscot" Maine" 4+.. Dalam konteks forensik entomologi" contoh analog mungkin menugaskan spesimen serangga untuk populasi geografis tertentu. Perkembangan genetik metode menetapkan%ment )+*. berarti bah!a tes sekarang dapat mengidentifikasi dengan dera#at didefinisikan dari con%fidence ketika seorang individu ang tidak diketahui asaln a dapat dikecualikan dari memiliki berasal dari salah satu populasi termasuk dalam baseline populasi diduga )*2.. $ritis" dari sudut pandang forensik" ini berarti bah!a bahkan #ika populasi asal belum dimasukkan dalam analisis a!al" serangga ang tidak diketahui asaln a tidak akan keliru ditugaskan dan dapat dikecualikan dari para penduduk ang telah dianalisis. Memberikan tugas adalah statistik ang kuat" kemampuan untuk menentukan asal ge%ographic mena!arkan tambahan ang kuat

untuk setiap forensik entomologi toolbo@. Disiplin lain di mana analisis mi%crosatellite lokus telah digunakan secara luas untuk menilai tingkat lokal keanekaragaman ha ati subspecific dan untuk melacak gerakan serangga biologi konservasi dan pengelolaan hama serangga. Dalam konservasi serangga sampai saat ini" penelitian telah sering berfokus pada kelompok karismatik ang lebih besar di%sekte" termasuk (epidoptera )+. dan <donata )66,." dan studi tentang hama tanaman sering berfokus pada hama tanaman ang bernilai lebih tinggi" misaln a buah )6+" 660. dan kapas )14.. :arangkali relevansi paling langsung ke dis% cipline forensik entomologi adalah studi tingkat populasi ang sedang berlangsung dari Ne! Borld scre!!orm" >. hominivora@" di Amerika Selatan dan /engah )620" 62+." dan suite lokus mikrosatelit diidentifikasi oleh Florin D = llenstrand )--. untuk pukulan lalat (ucilia ser%icata dan (ucilia illustris. Dengan demikian" alat%alat ang tersedia" dan pertan aan utama masih beredar adalah" Apa ang merupakan ukuran sampel a!al ang cocok untuk memastikan tugas sta%tisticall kuat diketahui spesimen ang ke populasi asal merekaE Sekali lagi" #a!aban atas pertan aan ini tergantung pada num%ber faktor termasuk tingkat imigrasi dan emigrasi" !aktu generasi" dan popu%lation ukuran. Sekali lagi" biologi perikanan tampakn a men#adi salah satu dari beberapa daerah di mana faktor%faktor ini telah resmi ditangani. Menggunakan data dari koleksi besar larva cod )=adus morhua. dari daerah tunggal" 5u88ante ),4. un%dertook studi simulasi untuk mengu#i ef%fect ukuran sampel pada tu#uh metrik #arak genetik dan dua metrik struktur berdasarkan data lokus mikrosatelit dan datang ke con clusion bah!a ikan ini ukuran sampel spesies antara 12 dan 622 individu per kependudukan umumn a diperlukan untuk tepat es%timation #arak genetik. Selain itu" #umlah orang ang dibutuhkan tergantung pada #umlah lokus" #umlah alel" dan berbagai ukuran alel pada populasi a!alF ukuran sampel ang kecil menghasilkan bias ang signifikan dalam #arak genetik. Simulasi selan#utn a untuk menilai karakteristik metode #arak dan kemungkinan )termasuk metode :a esian. oleh >ornuet et al. )*2. menun#ukkan bah!a lokus tambahan meningkatkan kemampuan untuk menetapkan individu benar untuk suatu tingkat diferensiasi antara populasi. Gadi" semua hal lain dianggap sama" kekuatan tugas meningkat dengan setiap lokus tambahan ang ditambahkan ke panel lokus digunakan untuk menandai satu set data dasar dan" kemudian" untuk menetapkan individu%als asal tidak diketahui. Sa angn a" dari studi ang dilakukan sampai saat ini ang memungkinkan masalah ini untuk disikapi )12" 14" +4." tampak bah!a genom arthro%pod mungkin berisi frekuensi ang lebih rendah dari urutan mikrosatelit daripada genom vertebrata. Akibatn a" isolasi lokus mikrosatelit digunakan dari serangga ini tidak semudah seperti ang telah untuk" misaln a" biologi perikanan" dimana peneliti memiliki keme!ahan untuk memilih dari ribuan lokus tersedia dan primer set ang dikaitkan. Misaln a" di pondok boll!orm" &elicoverpa armigera" over%semua efisiensi mikrosatelit%kloning han a 3"1H" ang kira%kira delapan kali lipat lebih rendah dari itu untuk ikan gadoid )32H. menggunakan protokol penga aan ang sama )14.. =enotip ;si =ut Serangga Analisis genetik Forensik usus serangga con%tenda memiliki beberapa kegunaan potensial )3-.. GDB telah menerapkan pendekatan ini dalam kematian

beberapa investigasi%ke!a#iban. Sebuah genotipe manusia dapat pulih dari makan n amuk )*6." dan informasi ini bisa menempatkan tersangka di lokasi di mana n amuk ditemukan. Demikian pula" darah di kutu ditransfer selama serangan seksual dapat mengidentifikasi pen erang )0," +0" ,,.. Meskipun pencernaan preoral parsial mereka" bangkai lalat belatung isi usus dapat cocok untuk semua tipikal kal identitas prosedur genetik manusia )3+" 00" 0+" 46" 632" 6**.. Sebagaimana disebutkan di atas" tubuh kadang%kadang pindah setelah kematian" dan mag%harus ditinggalkan dapat mengungkapkan identitas dari almarhum )632.. Pertan aan lain #uga bisa di#a!ab oleh genotipe konten usus )3-.. Suatu pers aratan penting untuk memulihkan DNA vertebrata dari serangga hidup adalah bah!a pencernaan proses dihentikan sesegera mungkin dengan membunuh dan melestarikan spesimen. Setelah makan telah berhenti" usus dari hematophagous atau bangkai%makan serangga dapat dikosongkan dari kita%mampu DNA dalam !aktu kurang dari 3- #am )*6" 00.. Namun" penelitian DNA forensik terus improvisasi%ing kemampuan untuk andal ciri de%dinilai dan C atau men alin rendah DNA template )*-.. Seperti begitu ban ak lainn a forensik biologis ev%idence" isi usus serangga sebelumn a unsuit%mampu untuk analisis mungkin sekarang atau dalam !aktu dekat akan berhasil genotipe. MASA(A& $&'S'S 'N/'$ ME(A$'$AN F<5ENS;$ DNA Pedoman ekstensif telah dikembangkan untuk identitas manusia berbasis DNA dan pengu#ian paternitas di Amerika Serikat )*" 36" 33" +,.. Sebagaimana din atakan di atas" seorang analis ang bukan anggota komunitas DNA forensik utama mungkin diminta untuk melakukan analisis DNA forensik serangga. ;ni mungkin tidak dimungkinkan atau diperlukan agar sesuai dengan setiap standar pengu#ian manusia ketika menganalisis #aringan bukan manusia" namun perlu men adari isu penting bah!a alamat standar dan dari e@pec%sultasi anggota mas arakat hukum mungkin memiliki dari seorang analis DNA forensik. Iualit >ontrol Selain metode validasi dan data isu%terpretation" mendokumentasikan lacak balak dan men#aga keamanan fisik dari sampel sangat penting. DNA Prosedur ekstraksi%tion harus mencakup negatif kendali" dan prosedur harus genotip mencakup kontrol positif dan negatif. Gika mungkin" sebagian dari #aringan asli harus disimpan sehingga tersedia untuk pengu#ian independen. Memilih Metode Aalid Fitur inti validasi metode adalah bah!a prosedur ini harus ditun#ukkan oleh masa lalu e@pe%rience dapat diandalkan. :ukti untuk keandalan meliputi catatan ekstensif reproducibil%it di ba!ah kondisi ker#a tertentu" baik ketika dilakukan oleh analis ang sama dan oleh para analis ang berbeda. (angkah%langkah rumit ang diambil untuk memvalidasi tes DNA forensik manusia di Amerika Serikat )621. mungkin tidak ang praktis untuk sampel serangga. Namun" masih es%sential bah!a kehandalan metode ini akan dinilai untuk kepentingan analis dan sistem hukum. Sebuah metode baru ang men#an#ikan dapat men#adi kekece!aan. Misaln a" 5APD sempat dianggap metode geno%mengetik semua tu#uan ang dapat diterapkan untuk

setiap organisme )634." tetapi genotipe he!an 5APD dengan cepat dilaporkan sulit untuk repro%Duce )+2" ,-.. Sebuah metode ang telah ban ak digunakan oleh para ilmu!an selama bertahun%tahun dan pada berbagai #enis sampel harus dipilih #ika memungkinkan. Analis harus memiliki pengalaman mempertimbangkan%mampu dengan metode genot p%ing tertentu" sebaikn a dengan catatan ac%complishment seperti publikasi ilmiah ang didasarkan pada #enis ang sama analisis. Sebuah deskripsi tion semua aspek laboratorium protokol ang digunakan )misaln a" urutan primer P>5. harus disediakan dalam menanggapi permintaan ang masuk akal. Perhitungan probabilitas Aplikasi khas probabilitas dan statistik untuk data genetik forensik terfokus pada men impulkan identitas )misaln a" (akukan dua atau lebih sampel tis%sue berasal dari individu ang samaE. Atau kekerabatan )-6.. Sedikit perhatian tampakn a telah diba arkan kepada aplikasi ang paling com%mon di forensik entomologiJ spesies diagnosa. &al ini sangat disa angkan karena tanpa kerangka statistical mungkin sulit untuk mengetahui #ika penelitian dasar ang mendukung metode telah memadai untuk masalah ang dihadapi. :eberapa makalah telah mengan#urkan forensik serangga identifikasi spesies dengan filogenetik analisi%sis data sekuens )1*" 622" 66-" 633" 63-.. Meskipun ukuran kuat dukungan" seperti nilai bootstrap )-*. untuk cabang ang menghubungkan spesimen bukti untuk spesimen referensi diketahui" mungkin tampakn a menun#ukkan tes ang handal" hasil ini mengatakan apa%apa tentang seberapa baik analisis ang sama kemungkinan untuk beker#a dengan spesimen masa depan. ;ni adalah pertan aan ini ang harus de%tapkan apakah tes diagnostik spesies telah divalidasi. :erapa ukuran sampel penelitian memadai untuk u#i spesies%diagnostik untuk digunakan di pengadilanE Meskipun penelitian lebih lan#ut diperlukan pertan aan ini statistik" kami sarankan panduan heuristik berikut untuk mengestimasi min%;mum validasi ukuran sampel penelitian. Masalah adalah salah satu memperkirakan proporsi populasi ang relevan ang akan misidentified menggunakan prosedur ang diusulkan. Selama u#i validasi" sebuah KdikenalK spesimen" t p%turun ta#am serangga de!asa ang diidentifikasi oleh morfologi" dianalisis seolah%olah sebuah Ktidak dikenalK )630.. ;ni men a#ikan binomial out%datang. Spesimen baik benar atau salah diidentifikasi menggunakan kriteria u#i. Mengingat sampel acak dari populasi" interval ke akinan binomial )3,. dapat digunakan untuk memperkirakan proporsi dari individuals dalam suatu populasi ang akan menghasilkan baik hasil. Misaln a" #ika 622 diketahui spesimen sampel dan semua menghasilkan genotipe ang akan diidentifikasi dengan benar" maka setiap genotipe hipotetis )s. ang akan salah mengartikann a diamati 2C622 kali. A 41H confidence interval binomial tentang proporsi sebenarn a dari hasil diamati 2C622 kali adalah 2"2341. $ata lain" #ika kemungkinan metode gagal adalah sebagai besar sebagai 2"2341" maka akan tidak mungkin untuk ob%mela ani 2C622 kegagalan selama studi validasi. Dengan pendekatan ini kita dapat memilih ukuran sampel sesuai dengan apa pun ang menganggap probabilitas diterima kegagalan. Diakui" logika ini sederhana dan tidak mempertimbangkan kemungkinan faktor ang dapat meningkatkan ukuran sampel de%bapak seperti variasi geografis. Namun" kami perca a bah!a para peneliti tidak harus bergantung pada sampel

validasi ang lebih kecil daripada ang ditun#ukkan oleh perhitungan ini. Meskipun forensik entomologi belum men ertakan identitas genetik atau pengu#ian kekerabatan DNA serangga" ini mungkin ter#adi dan valida%tion akan diperlukan. 'ntuk aplikasi ini perhitungan statistik biasan a termasuk es%timates proporsi alel dan setiap pen impangan dari keseimbangan &ard %Beinberg )&BE. atau linkage ekuilibrium )(E. )-6" +,.. :ahkan #ika kondisi &BE dan (E berlaku" maka probabilitas tadin a relatif kecil bah!a dua individu ang tidak berhubungan akan memiliki genotipe ang sama dapat dihitung secara konservatif tanpa proporsi alel memperkirakan #ika kita memeriksa se#umlah besar lokus hetero8igot )+-.. :agaimana%pernah" se#arah analisis forensik dari kubah%tic pet DNA di Amerika Serikat n arankan%gests bah!a sistem hukum sekarang akrab dengan se#umlah besar data kependudukan ang mendasari analisis S/5 manusia cenderung mengharapkan dukungan serupa untuk analisis DNA bukan manusia . $esaksian perintis dalam kasus pembunuhan an#ing ang berkenaan probabilitas genotipe berdasarkan sampel populasi ang tidak dipublikasikan dari sekitar 622 orang ditemukan tidak dapat diterima )66+." mendorong publikasi sampel ang #auh lebih luas dari lokus dan berkembang biak )**.. Beir )664. men#elaskan metode untuk memperkirakan proporsi alel dari data populasi. $esalahan umum dalam DNA :erbasis Spesies ;dentifikasi Dalam rangka upa a kami untuk mengembangkan dan menggunakan metode identifikasi berbasis mtDNA untuk serangga forensik penting" kita memiliki ampli% fied apa itu rupan a pseudogene ketika menggunakan primer dikembangkan untuk #auh hubungan%tive" menemukan bah!a spesimen untuk sebuah pub%likasikan dan merekam urutan sering dikutip telah salah diidentifikasi )63*." dan menemukan bah!a lokus ang muncul untuk membedakan antara kerabat dekat setelah pengambilan sampel tambahan tidak cocok untuk tu#uan ini )lihat di ba!ah.. Perangkap potensial mencoba serangga identifikasi spesies forensik berdasarkan DNA es%peciall ban ak mengingat bah!a ban ak keterampilan laboratorium ba%sic begitu ban ak dipraktekkan oleh para ilmu!an lain terbiasa dengan masalah interpretasi data penting. Mungkin salah mengambil amatir paling umum adalah identifikasi spesies oleh pencarian :(AS/ kritis dari besar dan mudah tan a =en:ank C EM:( C DD:G urutan database ),*.. Pencarian tersebut mengembalikan catatan dengan persen kesamaan tertinggi dengan urutan pertan aan disebutkan. Sebuah pencarian :(AS/ adalah cara con%venient untuk mendapatkan gambaran umum tentang apa ang mungkin men#adi sampel" tetapi dengan sendirin a merupakan metode unreli%bisa karena kesen#angan dan kesalahan dalam database. Analis harus cukup akrab dengan taksonomi dan biologi dari organisme ang relevan untuk mengetahui apakah calon spesies" misaln a" salah satu bah!a sampel bukti mungkin" mengingat hasil genetik dan keadaan koleksin a" hilang dari database. Sampai aspek database referensi complete" seseorang tidak bisa memastikan bah!a semua kerabat dekat dapat dibedakan dengan menggunakan tes genetik tertentu. Peneliti individu men erahkan mereka%hasil ke =en:ank. Meskipun beberapa kesalahan kotor secara otomatis terdeteksi" misaln a" proteincoding gen dengan

kodon berhenti di center akan langsung ditolak" terserah kepada Pengirim individu untuk menghindari kesalahan urutan lain dan untuk benar mengidentifikasi organisme. Menerbitkan rekor untuk lokus noncoding seperti daerah kontrol mtDNA sangat penuh dengan kesalahan )16"6*3.. :ahkan manusia mtDNA >ambridge 5eferensi Se9uence )1." standar ang digunakan untuk pelaporan haplot pe manusia dalam ker#a kasus forensik" kemudian diubah )0.. :an ak kesalahan =en:ank lainn a #uga telah diidentifikasi )32.. <leh karena itu" sumber referensi genotipe harus diketahui sebelum dapat diperca a" dan ini biasan a membutuhkan penga!asan dari pub%lication dari mana ia diambil. Apakah seorang ahli /a@oekonomi mengidentifikasi spesimenE Apakah peker#aan direplikasiE Apakah materi voucher telah disimpan untuk analisis masa depan konfirmasi independenE Apakah ada kesepakatan antara penga#uan independen dikaitkan dengan spesies ang samaE Sebuah contoh dari kontrol kualitas untuk identifikasi berbasis urutan Saksi untuk situs Beb Paus )*0.. 'rutan mtDNA dalam arsip ini semua dari spesimen ahli diidentifikasi" dan daftar spesies lengkap. :eberapa ilmu!an ang mengembangkan data referensi mereka sendiri ditetapkan untuk tu#uan identifikasi forensik serangga diabaikan untuk mempertimbangkan apakah pemilihan spesies bisa log%turun ta#am mendukung seperti tes. Misaln a" 5atcliffe dkk. ),+. men atakan bah!a P>5%5F(P dari daerah internal transcribed spacer memberikan Kidentifikasi akurat forensi%>all penting 7terbangL spesies.K ;ni kesimpulan ang didasarkan pada demonstrasi mereka bah!a masing%masing 62 spesies forensik penting menghasilkan P>5 unik %5F(P pola. :agaimana%pernah" 5atcliffe dkk. ),+. tidak mengevaluasi sev%eral umum dan forensik penting kerabat dekat dari spesies studi mereka" termasuk kerabat dekat ang dapat co%ter#adi dengan lalat mereka men elidiki. &al ini tidak diketahui apakah mereka prosedur%dure membedakan antara spesies mereka mantan amined" misaln a" >alliphora vicina" dan satu mereka tidak memeriksa ang mungkin mudah ditemukan di ma at ang sama" misaln a" >alliphora vomitoria. Al%meskipun metode mereka dapat membuktikan berharga untuk tu#uan ini" seseorang tidak bisa mengatakan dari hasil penelitian ini tertentu. mtDNA filogeni terkenal untuk mengungkapkan paraph l sehubungan dengan spesies ang dekat kekerabatann a )-1.. Setiap pen impangan dari timbal balik monoph l )+1. dengan lokus u#i bermasalah untuk diagnosis spesies )630.. Al% meskipun timbal balik monoph l harus mengembangkan lebih cepat di mtDNA dari lo%cus nuklir ),3" tapi lihat 1+." pengalaman han a akan menun#ukkan apakah hal ini ter#adi. :erikut mantan amples dimaksudkan untuk menun#ukkan bagaimana metode a!aln a men#an#ikan mungkin atau mungkin tidak menahan dicermati lebih lan#ut. $edua contoh didasarkan setidakn a sebagian pada penggunaan filogenetik anal% sis urutan ><; untuk mengidentifikasi anggota dari garis keturunan ang calliphorid. /he subfamili >hr som inae termasuk scre!!orms dan kerabat dekat mereka )-,.. Se9uencing inisial dari satu atau dua orang dari masing%masing spesies forensik penting dari $anada dan Amerika Serikat tidak menemukan haplot pe dibagi antara spesies dan persentase pen impangan dis%tinctl besar antara spesies daripada di dalam spesies )63-.. Perbandingan berikutn a homolog urutan per!akilan%senting ratusan spesimen chr som ine dan se#umlah kecil per!akilan spesimen luar kelompok dikonfirmasi pola ini" dengan tidak ada hubungan positif palsu atau

negatif%palsu dari salah satu KtesK haplot pe dengan haplot pe meru#uk%ence )630.. &al ini dapat dibandingkan dengan a!al" tapi masih cukup besar )dibandingkan dengan keban akan studi." sampel greenbottle lalat )(uciliinae. difokuskan pada luas dan penting adik spesies (ucilia sericata dan (u%silia cuprina. Sebuah sampel global ang diproduksi filogeni sur%pri8ing" tapi tidak satu mendorong kami untuk kembali b ek penggunaan ><; untuk membedakan spesies ini. Filogeni berdasarkan DNA ribosom 3,S dan ><; dari sampel global spesimen ang sumbang )62*.. (. sericata dan (. cuprina masing%masing monofiletik untuk 3,S tapi paraph letic untuk ><;. Namun" ><; pat%tern tampakn a lebih bermakna daripada kurangn a sederhana keturunan pen ortiran oleh (. cuprina haplotipe. Monoph l (. cuprina ><; dilanggar oleh keturunan &a!aii ang monofiletik itu sendiri dan berbeda )=ambar 6.. $ami men impulkan bah!a &a!aii mtDNA silsilah adalah unik ke pulau%pulau" dan bah!a setelah pengakuan tes berbasis ><; akan cor%secara tidak langsung mengidentifikasi satu spesies ini baik sebagai (. sericata" (. cuprina &a!aii" atau (. cuprina non%&a!aii. Sebagai tambahan =en:ank catatan untuk spesies hi#au botol telah muncul" namun" mereka termasuk Asia ><; catatan untuk (. cuprina dan &emip relia ligurriens ang sangat mirip urutan &a!aii kami" dan ada contoh dari monoph l timbal balik antara spesies adik telah ditemukan )631. )=ambar 3.. Meskipun tes diagnostik spesies%berbasis ><; mungkin masih berguna untuk lalat greenbottle dalam kondisi tertentu" seperti #ika han a spesies greenbottle dis%tantl terkait beberapa ter#adi di daerah penelitian" semakin besar pola filogenetik untuk lokus ini membutuhkan sampel besar sebelum metode tersebut dapat dianggap sah. $ES;MP'(AN $ami perca a bah!a metode berbasis DNA ang di#elaskan dalam ka#ian ini akan semakin digunakan dalam forensik entomologi penelitian dan kasus%peker#aan di seluruh dunia. :an ak kesempatan" hubungan ang ada bagi para ilmu!an dengan keterampilan biologi molekuler untuk terlibat dalam bidang ini menarik" ang menghadapkan substansial dunia n ata prob%masalah. Yang paling penting" untuk menghindari keguguran keadilan" tetapi #uga untuk mempromosikan penerimaan oleh pengadilan metode%metode baru" kami mendesak para ilmu!an tertarik untuk membiasakan diri dengan standar lokal untuk kesaksian ahli dan literatur ang diterbitkan substansial keprihatinan%ing validasi ilmu forensik. PE5NYA/AAN PEN='N=$APAN $ES;MP'(AN $ami perca a bah!a metode berbasis DNA ang di#elaskan dalam ka#ian ini akan semakin digunakan dalam forensik entomologi penelitian dan kasus%peker#aan di seluruh dunia. :an ak kesempatan" hubungan ang ada bagi para ilmu!an dengan keterampilan biologi molekuler untuk terlibat dalam bidang ini menarik" ang menghadapkan substansial dunia n ata prob%masalah. Yang paling penting" untuk menghindari keguguran keadilan" tetapi #uga untuk mempromosikan penerimaan oleh pengadilan metode%metode baru" kami mendesak para ilmu!an tertarik untuk membiasakan diri dengan standar lokal untuk kesaksian ahli dan literatur ang diterbitkan substansial keprihatinan%ing validasi ilmu forensik.

P<;N 5;N=$ASAN 6. Metode genotip molekul ang digunakan saat ini" atau kemungkinan akan digunakan" oleh ahli entomologi forensik secara luas digunakan oleh para ilmu!an di bidang lain. 3. $arena anggota staf laboratorium DNA forensik biasan a tidak menerima sampel asing seperti serangga" anggota tim investigasi akan meminta seorang ilmu!an akademik melakukan analisis genetik. *. Seorang ilmu!an dihadapkan dengan prospek menarik dari peker#aan forensik mungkin belum terbiasa dengan standar analisis ang diharapkan dan sifat permusuhan dari ban ak sistem hukum. -. :an ak masalah hukum dan profesional ang relevan mengenai DNA forensik dirangkum dalam rangka untuk mengingatkan seorang ahli biologi molekuler ang mungkin terlibat dalam ker#a kasus. 1. >ontoh dari aplikasi ang lebih matang genotip" forensik aitu manusia" biologi konservasi" dan mana#emen hama" mungkin berguna untuk program penelitian untuk pengembangan lebih lan#ut dari aplikasi berbasis DNA untuk forensik entomologi. Penulis tidak mengetahui adan a bias ang mungkin dianggap sebagai mempengaruhi ob#ektivitas ulasan ini. '>APAN /E5;MA $AS;& MPenulis penelitian tentang topik ini didukung oleh 'S National ;nstitute of Gustice )GDB. dan ;nggris Bellcome /rust dan Alam (ingkungan 5esearch >ouncil )G5S.. Pandangan ang dikemukakan adalah dari penulis dan belum tentu orang%orang dari lembaga pemberian.