Prctica N05: AISLAMIENTO DE STAPHYLOCOCCUS 2013 AUREUS COAGULASA POSITIVO

I. OBJETIVOS:

Aislar bacterias de la familia micrococcaceae, gnero staphylococcus y estudiar sus propiedades fermentativas y patogenicidad.

II.

FUNDAMENTO TERICO:

Staphylococcus aureus (conocido como estafilococo ureo, o comnmente estafilococo dorado, es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de coagulasa, catalasa, inmvil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimndose que una de cada tres personas se hallan colonizadas, aunque no infectadas, por ella. Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los antibiticos ms eficaces para combatirlos a los aminoglucsidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina.

Morfologa S. aureus es un coco inmvil, de 0,5 a 1 m de dimetro,15 que se divide en tres planos para formar grupos de clulas irregulares semejantes a racimos de uvas. En extendidos de pus los cocos aparecen solos, en pares, en racimos o en cadenas cortas. Los racimos irregulares son caractersticos de extendidos tomados de cultivos que se desarrollan en medios slidos, mientras que en

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otros cultivos son frecuentes las formas de diplococos y en cadenas cortas. Unas pocas cepas producen una cpsula o capa de baba que incrementa la virulencia del microorganismo. S. aureus es un microorganismo grampositivo pero las clulas viejas y los microorganismos fagocitados se tien como gramnegativos.

Cultivo Los estafilococos crecen rpidamente en casi todos los medios bacteriolgicos bajo condiciones aerobias o microaeroflicas. Las muestras clnicas principalmente se cultivan en medios de agar enriquecidos con sangre de carnero. Cuando se trata de una muestra contaminada, debe ser inoculada primero en agar Columbia adicionado con clistn y cido nalidxico o alcohol fenil-etlico

Color azul/violeta muestra una pared grampositiva

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Alimentos donde comnmente se puede desarrollar la bacteria Staphylococcus aureus en condiciones no higinicas Carne molida

Carne fresca

Leche fresca

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Quesos frescos y madurados

Compotas en conservas abiertas y conservadas en forma antihiginica

Cremas , coberturas de tortas

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BUENAS PRCTICAS DE MANUFACTURA (BPM) DE ALIMENTOS PARA EVITAR CONTAMINACIONES MICROBIANAS

Definicin.Etapas y procedimientos generales que mantienen bajo control las condiciones operacionales dentro de un establecimiento y permiten condiciones favorables para la produccin de alimentos inocuos Para el personal de trabajo

VESTUARIO Deje su ropa y zapatos de calle en el vestuario No use ropa de calle en el trabajo, ni venga con la ropa de trabajo desde la calle.

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VESTIMENTA DE TRABAJO Cuide que su ropa y sus botas estn limpias. Use calzado adecuado, cofia y guantes en caso de ser necesario.

HIGIENE PERSONAL Cuide su aseo personal. Mantenga sus uas cortas. Use el pelo recogido bajo la cofia. Deje su reloj, anillos, aros o cualquier otro elemento que pueda tener contacto con algn producto y/o equipo

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LAVADO DE MANOS CUANDO? Al ingresar al sector de trabajo. Despus de utilizar los servicios sanitarios. Despus de tocar los elementos ajenos al trabajo que est realizando. COMO? Con agua caliente y jabn. Usando cepillo para uas. Secndose con toallas descartables. LAVADO DE BOTAS Lave sus botas cada vez que ingresa al sector de traba

ESTADO DE SALUD Evite, el contacto con alimentos si padece afecciones Evite toser de o piel, heridas, resfros, los diarrea, o intoxicaciones. estornudar sobre alimentos y equipos de trabajo.

CUIDAR LAS HERIDAS En caso de tener pequeas heridas, cubrir las mismas con vendajes y envoltura impermeable.

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Normas de higiene

Atencin con las instalaciones

CUIDE SU SECTOR Mantenga sus utensilios de trabajo limpios. Arroje los residuos en el cesto correspondiente

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RESPETE LOS "NO" DEL SECTOR NO fumar. NO beber. NO comer. NO salivar.

LIMPIEZA FCIL Para facilitar las tareas de limpieza se recomienda: Pisos impermeables y lavables. Paredes claras, lisas y sin grietas. Rincones redondeados.

Atencin con el producto

CUIDADO CON EL ALIMENTO Evite la contaminacin cruzada. COMO? Almacene en lugares separados al producto y la materia prima. Evite circular desde un sector sucio a un sector limpio

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III.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:

Probeta

Placa Petri

Porta objetos

Matraces Erlenmeyer

Asa bacteriolgica

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Agar manitol-salado

Agar baird Parker

Solucin salina al 0,9%

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IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Utilizar el siguiente material de investigacin: Secreciones de la nariz y la garganta. Productos alimenticios contaminados. Realizar siembra en superficie en el Agar baird Parker y en el agar manitolsalado y realizar la prueba de la coagulasa.

1. Preparar las placas. 2. Colocar los medios de cultivo. Se utiliza un medio de cultivo selectivo Baird Parker en que las colonias de Staphylococcus aureus crecen con un aspecto caracterstico. 3. Se deposita sobre la superficie del agar 0,1ml de muestra 4. Se extiende la muestra por toda la superficie de la placa usando un asa bacteriolgica previamente esterilizada. 5. Esperar 2 3 minutos a que se seque el inculo. 6. Se llevan las placas a incubar (la temperatura y el tiempo de incubacin elegidos vara segn el tipo de microorganismos). 7. Pasado el tiempo de incubacin las colonias habrn crecido sobre la superficie del agar.

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V.

RESULTADOS, CLCULOS Y GRFICOS:

Agar manitol-salado MICROORGANISMO Enterobacter aerogenes Escherichia coli Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermis Staphylococcus epidermis CRECIMIENTO inhibido Inhibido Buena a excelente Pobre Buena a excelente COLOR COLONIA Amarillo Rojo Rojo

Agar baird-Parker Microorganismos Staphylococcus aureus Colonias Negras lustrosas convexas, 1 a 5mm de dimetro con borde estrecho, blanquecino, rodeados por un halo claro de 2 a 5mm. De anchura dentro del halo claro presencia de anillos opacos no visibles antes de las 48 horas de incubacin. Negras lustrosas, pero de forma irregular. Al cabo de 24 horas, presencia de zonas opacas alrededor de las colonias. Crecimientos ocasionales, muy pequeas, pardas hasta negras, ausencia de halos de clarificacin. Pardo-obscuras, mate, presencia a veces de halos de clarificacin al cabo de 48 horas. Blancas y sin halos de clarificacin.

Staphylococcus epidermidis

Micrococcus

Bacillus

levaduras

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Un medio selectivo-diferencial es el agar manitol-sal, este medio incluye, en su formulacin un 10% de NaCl, manitol y rojo de fenol como indicador. La concentracin tan alta de sal selecciona las bacterias que lo toleran, y el carbohidrato, manitol, puede ser metabolizado por algunas bacterias produciendo acido, el cual baja el pH, por lo que el indicador cambia del color rojo original al amarillo. Este medio es usado para aislar staphylococcus aureus, el cual presenta en estas medias colonias rodeadas de un halo amarillo. Este medio con alto contenido de sal tambin contiene un indicador de pH que cambia el color si se produce la fermentacin del manitol en el medio de formacin de cido; por consiguiente. Las colonias de s. aureus que fermentan el manitol son diferenciadas de las colonias que crecen en presencia de concentraciones elevadas de sales y fermentan el manitol con produccin de cido pueden identificarse con facilidad por el cambio de color en el medio.

VI.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES: Las Buenas Prcticas de Manufactura se aplican a todos los procesos de manipulacin de alimentos y son una herramienta fundamental para la obtencin de un proceso inocuo, saludable y sano.

El agar manitol salado contiene 7,5% de cloruro de sodio, que inhibe el crecimiento e otros microorganismos y por ende selecciona (favorece el crecimiento) de staphylococcus aureus.

VII.

BIBLIOGRAFA:

Garca V. (2005). Introduccin a la microbiologa (2a ed.) Editorial EUNED

http://www.alimentosargentinos.gov.ar/contenido/publicaciones/calidad/BPM/BP_fol letos/bpm.htm http://books.google.com.pe/books?id=qFRukXHQX6QC&pg=PA20&dq=aislamiento+de +staphylococcus+aureus+informe+de+laboratorio&hl=es&sa=X&ei=uvZzUu_uKqXIsATP 0YLoBg&ved=0CC4Q6AEwAA#v=onepage&q=aislamiento%20de%20staphylococcus%2 0aureus%20informe%20de%20laboratorio&f=false

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