LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

PERCOBAAN 4 MIKROBIOLOGI: ISOLASI DAN PENANAMAN MIKROBA SERTA UJI ANTIBAKTERI

Disusun oleh: Anis Komariah Aswardi Fatnawati Nur H Khanang Eka !el"ina #iska A %ul"a &"ar' %ain 24030110110022 24030110110066 24030110130064 24030110110000 2403011012004$ 24030110120000

JURUSAN KIMIA FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA UNIVERSITAS DIPONEGORO 2010

A(!)#AK )elah dilakukan *er+o,aan 'ang ,er-udul ./&K#0(&0102&: &!01A!& DAN ENANA/AN /&K#0(A !E#)A 34& AN)&(AK)E#&56 ,ertu-uan untuk mengenal dan mem,uat ,er,agai ma+am medium 'ang digunakan dalam ,idang mikro,iologi6 mengenal dan melakukan teknik *enanaman ,akteri6 menentukan konsentrasi ham,atan minimum 7KH/8 dan tingkat kemam*uan anti ,akteri dari ,e,era*a agen anti,akteri9 /etode 'ang digunakan adalah metode s*read 7/en'e,ar8 dan metode di"usi +akram9 /etode se,ar atau spread plate meru*akan metode *enanaman ,akteri 'ang dilakukan dengan men'em*rotkan sus*ensi ke atas medium agar kemudian men'e,arkann'a se+ara merata dengan trigalski9 !edangkan metode di"usi +akram adalah metode 'ang untuk u-i akti:itas anti,akteri 'ang ,ahan u-in'a 7ekstrak anti,akteri8 di-enuhkan ke dalam kertas +akram 7+akram kertas89 rinsi*n'a adalah akti:itas anti ,akteri dalam mengham,at *ertum,uhan ,akteri tertentu9 ada *er+o,aan ini sam*el 'ang digunakan adalah ekstrak ,unga ,ungur6 dan menggunakan kontrol *ositi" ,eru*a alkohol9 Dimana ;ona ,ening 'ang ter,entuk *ada konsentrasi ekstrak 20< se,esar 161 +m = ekstrak 40< tidak ter,entuk = ekstrak 60< se,esar 16> +m = ekstrak $0< se,esar 162 +m : ekstrak 100< se,esar 162 +m = dan +ontrol *ositi" 7alkohol8 se,esar 163 +m9 Ekstrak ,unga ,ungur mengandung sen'awa tanin6 triter*enoid6 *rotein6 dan asam amino 'ang ,er*eran se,agai anti,akteri dimana mem*un'ai KH/ 'ang da*at mengham,at *ertum,uhan anti,akteri E.coli *ada konsentrasi $0< dengan diameter 16> +m= dan *resentasi KH/n'a se,esar 11>63$<9

PERCOBAAN 4 MIKROBIOLOGI : ISOLASI DAN PENANAMAN MIKROBA SERTA UJI ANTIBAKTERI &9 )343AN 1919 /engenal dan mem,uat ,er,agai ma+am medium 'ang digunakan dalam ,idang mikro,iologi9 1929 /engenal dan melakukan teknik *enanaman ,akteri9 1939 /engisolasi ,akteri untuk menda*atkan ,iakan murni9 1949 /enentukan konsentrasi ham,atan minimum 7KH/8 dan tingkat kemam*uan anti,akteri dari ,e,era*a agen anti,akteri9 &&9 )&N4A3AN 3!)AKA &&919 engertian /ikro,iologi /ikro,iologi adalah telah mengenai organisme hidu* 'ang ,erukuran mikrosko*is9 Dunia mikroorganisme terdiri dari > kelom*ok organisme 'aitu ,akteri6 *roto;oa6 :irus serta algae dan +endawan mikrosko*is9 Dalam ,idang mikro,iologi kita mem*ela-ari ,an'ak segi mengenai -asad?-asad renik ini dimana adan'a +iri?+iri kekera,atan antara sesaman'a se*erti -uga dengan kelom*ok organisme lainn'a9 engendalian dan *eranann'a dalam kesehatan serta kese-ahteraan kita9 /ikroorganisme sangat erat kaitann'a dengan kehidu*an9 (e,era*a diantaran'a ,erman"aat dan 'ang lainn'a merugikan9 (an'ak diantaran'a men-adi *enghuni dalam tu,uh manusia9 (e,era*a organisme men'e,a,kan *en'akit dan 'ang lain terli,at dalam kegiatan manusia se*erti *em,uatan anggur6 ke-u6 'ogurt6 *roduksi *eni+illin serta *roses?*roses *erlakuan 'ang ,erkaitan dengan *em,uangan lim,ah9 7/i+hael6 1@$68 &n"ormasi 'ang di*eroleh dari mikro,iologi memungkinkan kema-uan ,esar dalam kemam*uan kita untuk mengawasi ,an'ak *en'akit menular9

Disam*ing itu mikroorganisme telah digunakan untuk mem*ela-ari ,er,agai *roses ,iokimia 'ang diketahui ter-adi *ada ,entuk kehidu*an 'ang le,ih tinggi9 4adi ,an'ak "akta tentang meta,olisme manusia 'ang diketahui sekarang9 /ula?mula diketahui ter-adi *ada mikroorganisme ,idang ,aru genetika molekuler 'ang men-elaskan ,agaimana gen mengatur akti:itas sel ,erasal dari studi tentang mikroorganisme9 0leh karena itu -elaslah ,ahwa ,idang mikro,iologi ,ukan han'a studi tentang mikroorganisme *en'e,a, *en'akit teta*i meru*akan studi tentang semua akti:itas ha'ati mikroorganisme9 7Aolk6 1@@38 &&929 &denti"ikasi !i"at?si"at /ikroorganisme &&92919 0rganisme Eukariot 19 4amur Fungsi ,ersel ,an'ak'ang dikenal se,agai -amur -auh le,ih kom*leks dari *ada khamir9 4amur se+ara khas ,erkem,ang se,agai *ertum,uhan ,er+a,ang se*erti ram,ut dan se,agian ,esar mem,entuk s*ora seksual dan aseksual9 (e,era*a -amur mem,erikan rasa ,agi ke-u 'ang ,aik 7#oBue"ort6 +amem,ert dan ,rie89 Dilain *ihak sedikit -amur men'e,a,kan *en'akit gawat *ada manusia9 29 roto;oa roto;oa mem*un'ai ,entuk dan ukuran6 ada 'ang lon-ong atau ,er,entuk ,ola9 ada 'ang meman-ang dan ada 'ang ,eru,ah ,entuk9 !am,il ,ergerak diatas *ermukaan9 (e,era*a -enis ada 'ang ,erdiameter 1 sam*ai 2 mm6 sehingga da*at dilihat dengan mata telan-ang9 Ke,an'akan *roto;oa da*at ,erkem,ang ,aik se+ara seksual mau*un aseksual9 7Aolk6 1@@38

292929 0rganisme rokariot 19 (akteri (ersel tunggal6 walau*un kadang ada gum*alan ,ersel ,an'ak9 (akteri le,ih ke+il ukurann'a dari *ada *roto;oa9 (e,era*a sel ,akteri 'ang umum *an-angn'a kira?kira 1 Cm= 2000 ,akteri sema+am ini akan men+a*ai li*utan ke*ala -arum *entul *ada titik terle,ar9 (akteri adalah organisme sangat ke+il 'ang mam*u ,erada dimana sa-a9 (akteri kadang menam*akkan kehadirann'a teta*i seelalu tidak di sadari karena akti:itasn'a 'ang tidak tam*ak karena terlalu ke+il9 (akteri da*at dilihat dengan menggunakan mikrosko*9 29 Algae Dahulu dikenal dengan ganggang ,iru?hi-au6 terse,ar diseluruh dunia ,aik dalam air tawarD air laut9 /em*eroleh energi dengan sema+am "otosintesis 'ang identik dilakukan oleh tum,uhan tingkat tinggi9 Kloro"iln'a tidak terda*at dalam kloro*las teta*i dalam lamella dise,ut ,lakoid ,e,era*a ganggang ,iru?hi-au 'ang ter,entuk ,enang sewaktu?waktu menghasilkan sel 'ang mene,al dise,ut heterosista9 Fungsi utama heterosista adalah mengu,ah nitrogen dalam atmos"er men-adi ammonia dan men'ediakan gas N29 39 Airus Airus adalah *erantara 'ang terke+il dan da*at mengarahkan *engadaann'a sendiri9 (ersi"at ultra mikrosko*is6 terlam*au ke+il6 da*at dilihat dengan mikrisko* +aha'a kon:ensional9 Klasi"ikasi :irus di*isahkan dalam suku ,erdasarkan ,entukn'a6 ada tidakn'a mem,ran6 ti*e asam nukleat dalam :irion 7DNA dan #NA8 ,entuk asam nukleat 7+a,ang ganda6 ,enang tunggal6 lurus6 melingkar8 dan adan'a asam nukleat multi*le atau dalam :irion9 7Aolk6 1@@38

2939 Konse*si (iakan /urni /edia agar meru*akan su,strat 'ang sangat ,aik untuk memisahkan +am*uran mikroorganisme sehingga masing?masing -enisn'a men-adi ter*isah? *isah9 )eknik 'ang digunakan untuk menum,uhkan mikroorganisme *ada media agar memungkinkann'a tum,uh dengan agak ,er-auhan dari sesaman'a -uga memungkinkkan setia* seln'a ,erhim*un mem,entuk koloni9 !ekelom*ok massa sel 'ang da*at dilihat dengan mata se+ara langsung9 !emua sel dalam koloni itu sama6 diangga* kesemuan'a itu meru*akan keturunan 7*rogen'8 satu mikroorganisme dan karena itu mewakili a*a 'ang dise,ut mikro,iologi ,iakan murni9 enggunaan agar *ada media mikro,iologi 'ang semula diusulkan oleh la,oratorium Ko+h *ada awal 1$$0?an teta* digunakan se+ara luas sam*ai kini9 7/i+hael6 1@$68 er+o,aan Ko+h dan *enelitian di la,oratorium mem,uktikan ,ahwa -asad renik tertentu men'e,a,kan tim,uln'a *en'akit tertentu9 ostulat Ko+h ialah: 19 /ikroorganisme tertentu selalu da*at di-um*ai ,erasosiasi dengan *en'akit tertentu9 29 /ikroorganisme itu da*at diisolasi dan ditum,uhkan men-adi ,iakan murni di la,oratorium9 39 (iakan murni mikroorganisme terse,ut akan menim,ulkan *en'akit itu ,ila disuntikan *ada hewan 'ang rentan 7suse*ti,et8 49 enggunaan *rosedur la,oratorium memungkinkan di*erolehn'a kem,ali mikroorganisme 'ang disuntikan itu dari hewan 'ang dengan senga-a diin"eksi dalam *er+o,aan9 7/i+hael6 1@$68

2949 )eknik (iakan /urni 3ntuk menda*atkan koloni ,akteri se,agai sum,er ,iakan murni ada dua teknik 'ang da*at di*akai 'akni : 29491 /etode *iringan goresan 7streak-plate method8 /edium agar steril di+airkan6 didinginkan 4>EF6 dituangkan kedalam +awan *etri steril dan di,iarkan men-adi *adat6 kemudian dengan kawat *enginokulasi 'ang *enuh ,akteri9 2oresan dilakukan diatas *ermukaan agar9 A*a,ila se,aran dilakukan dengan menggerakan kawat gelang9 Kian kemari dari satu ,agian ke ,agian lain dari +awan *etri6 ,akteri 'ang tertinggal *ada kawat gelang semakin ,erkurang9 4ika dilakukan dengan sem*urna goresan akhir akan meninggalkan ,akteri indi:idual +uku* ter*isah satu sama lain6 sehingga setelah mengalami *ertum,uhan koloni dari ,akteri indi:idual akan ,enar?,enar ter*isah satu sama lain6 kemudian koloni tunggal da*at di*indahkan ke medium steril dan tum,uhlah ,iakan murni9 29492 /etode *iringan tuangan 7 our late /ethod8 /etode ini terdiri atas *enginokulasi ,ukan +am*uran ke:dalam ta,ung u:i 'ang mengandung agar men+air 'ang telah diinginkan selama 4>0F9 &sin'a diaduk untuk meman+arkan ,akteri ke seluruh medium9 Fam*uran itu dituangkan kedalam +awan *etri kosong dan medium +air dituangkan diatasn'a9 Fawan di*utar untuk men+am*ur isin'a se,elum medium men-adi *adat9 ertum,uhan koloni dalam medium9 )u-uan kedua *rosedur ialah memisahkan sel?sel ,akteri satu sama lain sehingga sel?sel itu tum,uh men-adi koloni?koloni 'ang ter*isah dari medium 'ang *adat6 kemudian da*at diam,il sel?sel dari koloni untuk menda*atkan ,iakan murni9

Dalam *raktek sering *iringan kedua digores kem,ali dengan organism 'ang ,errasal dari koloni 'ang diisolasi untuk men-amin ,ahwa hasil 'ang di*eroleh adalah ,iakan murni9 7Aolk6 1@@38 29>9 /a+am?ma+am /edia (iakan /edium 'ang *adan'a ,akteri ditum,uhkan akan ,eranak dalam susunann'a sesuai dengan ke,utuhan -enis?-enis 'ang ,ersangkutan9 (e,era*a ,akteri da*at hidu* *ada medium 'ang sangat sederhana 'ang han'a mengandung garam organik ditam,ah sum,er kar,on organik se*erti gula9 (akteri lain memerlukan suatu medium 'ang sangat kom*leks 'ang ke*adan'a ditam,ahkan darah atau ,ahan kom*leks lain9 7Aolk6 1@@38 29>919 /edia !aringan 7Infusion media8 !alah satu media *aling la;im 'ang digunakan untuk memelihara ,akteri sehari?hari dise,ut air kalolu6 di,uat dengan mere,us daging +a+ah dengan air kemudian men'aring materi *adat sehingga di*eroleh +airan -ernih 'ang dise,ut air saringan *e*ton6 'ang meru*akan *rotein 'ang mengalami degradasi se,agian ditam,ahkan air saringan itu se,agai sum,er kar,on6 nitrogen dan ;at anorganik tertentu guna *ertum,uhan ,akteri9 7Aolk6 1@@38 29>929 /edia Kar,ohidrat (er,agai gula 7kar,ohidrat8 da*at ditam,ahkan *ada dasar kaldu 'ang mengandung makanan9 /edium ma+am ini di*akai untuk menentukan a*akah -enis ,akteri 'ang diidenti"ikasi itu mam*u menggunakan gula untuk *ertum,uhann'a9 Dalam media -enis ini 'ang la;im di*akai adalah gula se*erti glukosa6 monosa6 galaktosa6 sukrosa6

maltose dan laktosa9 Disam*ing itu6 digunakan *ula alkohol?alkohol gula se*erti manitol6 gliserol6 dan duisitol9 7Aolk6 1@@38 2969 Fase?"ase *ertum,uhan (akteri 4ika keadaan ,aik6 ham*ir semua ,akteri mam*u ,erkem,ang ,iak dengan amat +e*at9 Gaktu 'ang di*erlukan ,agi satu organisme untuk mem,elah men-adi dua dise,ut waktu generasi9 Dalam mem*ela-ari la-u *ertum,uhan ,iakan ,akteri6 hasiln'a da*at di *ro'eksikan se,agai logaritma -umlah sel terhada* waktu *ertum,uhan9 )erda*at 4 "asa *ertum,uhan6 'aitu : 296919 Fasa tenggang 71ag8 Fasa tenggang adalah *eriode *en'esuaian *ada lingkungan dan laman'a da*at 1 -am hingga ,e,era*a hari9 1ama waktu ini tergantung *ada ma+am ,akteri6 umur ,iakan dan nutrient 'ang terda*at dalam medium 'ang disediakan9 Fasa tenggang ini han'a tenggang dalam *em,iakan sa-a karena se,enarn'a sel itu sangat akti" dalam meta,olisme inklusi diha,iskan9 Dan ada sintesis en;im dan konsituen *enting se+ara akti"9 ada ,agian ,elakang "asa tenggang ter-adi 7Aolk6 1@@38 296929 Fasa 1ogaritma 7log8 Fasa ini adalah *eriode *em,iakan 'ang +e*at dan meru*akan *eriode 'ang di dalamn'a ,iasan'a teramati +irri?+iri khas sel?sel 'ang akti" selama "asa inilah waktu generasi teta* tak ,eru,ah -enis6 -ika di,uat *ro'eksi logaritma -umlah organisme terhada* waktu6 "asa log ini mun+ul se,agai garis lurus6 -adi waktu generasi da*at ditentukan dalam "asa ini9 7Aolk6 1@@38 *er,esaran ukuran keseluruhan9

296939 Fasa !tasioner !ementara ,iakan men-adi tua dan mendekati *o*ulasi ,akteri maksimum 'ang ditun-ang medium6 la-u *em,iakan ,erkurang dan ,e,era*a sel mati9 A*a,ila la-u *em,iakan sama dengan la-u kematian6 -umlah keseluruhan ,akteri akan teta*9 Hal ini dinamakan "asa stasioner9 7Aolk6 1@@38 296949 Fasa Kematian A*a,ila la-u kematian melam*aui la-u *em,iakan6 ,an'akn'a ,akteri 'ang se,enarn'a *em,iakan ,erhenti9 7Aolk6 1@@38 29H9 /ikroorganisme !um,er en;im 'ang *aling ,an'ak digunakan di,andingkan dengan tanaman dan hewan9 /ikroorganisme le,ih menguntungkan karena *ertum,uhann'a +e*at6 da*at tum,uh su,strat 'ang murah le,ih mudah ditingkatkan hasiln'a melalui *engaturan *ertum,uhan dan reka'asa genetika9 Faktor 'ang men*engaruhi *ertum,uhan ,akteri adalah H o*timum dan suhu 'ang sesuai untuk menum,uhkan ,akteri digunakan suhu inku,asi 3HEF9 7Akhdi'a6 20038 29$9 enanaman mikro,a eker-aan memindahkan mikro,a dari medium lama ke medium 'ang ,aru harus dilaksanakan se+ara teliti9 )erle,ih dahulu harus diusahakan agar semua alat?alat 'ang sangkut *autn'a dengan medium dan *eker-aan inokulasi 7*enanaman8 itu ,enar?,enar steril6 hal ini untuk menghindarkan kontaminasi9 (e,era*a langkah *ada *eker-aan inokulasi mikro,a adalah se,agai ,erikut : 19 /en'ia*kan ruangan6 ruangan tem*at inokulasi harus ,e,as angin dan ,ersih9 menurun9 Fasa kematian ini ,iasan'a

29 emindahan dengan kawat inokulasi6 u-ung kawat inokulasi se,aikn'a dari *latina atau dari nikram6 le,ih dahulu u-ung kawat ini di*i-arkan se,elum mengam,il inokulum9 39 emindahan dengan *i*et9 7Galu'o6200>8 3ntuk menanam suatu mikro,a *erlu di*erhatikan "aktor?"aktor nutrisi serta ke,utuhan akan oksigen 7gas 02 atau udara 89 Fara menum,uhkan mikro,a anaero, sangat ,er,eda dengan aero,9 3ntuk semuan'a itu ada +ara? +ara tertentu 'ang harus di*erhatikan9 /enanam mikro,a 'ang aero, relati" le,ih mudah dari*ada 'ang anaero,9 19 enanaman mikro,a aero, Ada ,e,era*a +ara *enanaman mikro,a aero,6 tergantung *ada tu-uan *enanaman9 (erdasarkan atas ,entuk medium dan +ara *enanaman da*at di,edakan men-adi : a9 (iakan agak tegak ,9 (iakan agak miring +9 (iakan air 29 enanaman mikro,a anaero, 3ntuk mikro,a anaero,6 oksigen dari udara ,ersi"at toksik6 karena itu oksigen harus dikeluarkan dari dalam medium9 Ada ,e,era*a +ara untuk menum,uhkan meikro,a anaero,6 'aitu: a9 /enggunakan metode 'ang *aling sederhana dan *aling ,an'ak digunakan9 /edium 'ang digunakan Fhiogl'+ollate?+air6 Fhiogl'+ollate?agar6 glukosa otak dan lain?lain9 /edium?medium terse,ut mengandung ,ahan?,ahan 'ang da*at men'era* oksigen sehingga dalam suasana ,rewer9 ,9 /enutu* oksigen ,e,as dengan *em,akaran9 dalam medium men-adi anaero,6misaln'a medium Fhiogl'+ollate?agar dalam +awan *etri 'ang ditutu* dengan *enutu*

Alat 'ang digunakan misalan'a eksikator6 kedalam eksikator ini ditam,ahkan *hos*hor murni 7 489 !elama ada oksigen6 "os"or akan teroksidasi dan mem,entuk "os"or*entaoksida9 3ntuk mem*er+e*at *era+unana "os"or6 maka *ada dasar eksikator ditam,ahkan air 'ang akan men'era* atau melarutkan "os"or *entaoksida terse,ut9 +9 A,sor*si 0ksigen se+ara Kimia Iang di*erlukan adalah eksikator6 asam *irogalel dan kolt9 3ntuk setia* liter eksikator di,eri 126> ml larutan K0H 20< dan 10 ml larutan asam *irogalol 40<9 d9 /enggunakan anaero, -ari6 anaero, *a+k atau inku,ator anaero,9 7Galu'o6 200>8 29@9 &solasi (akteri /engisolasi suatu mikro,a adalah memisahkan mikro,a terse,ut dari lingkungan di alam dan menum,uhkan'a se,agai ,iakan murni dalam medium ,uatan9 3ntuk isolasi harus diketahui +ara?+ara menanam dan menum,uhkan mikro,a *ada medium ,iakan serta s'arat?s'arat lain untuk *ertum,uhan9 7Kings,urg6 1@$>8 3ntuk mengisolasi ,akteri dari alam men-adi ,iakan murni *ada umumn'a ada dua +ara 'aitu: 19 /etode +awan 2ores 7!treak late /ethod8 Dilakukan dengan +ara menggoreskan -arum ose *enginokulasian 'ang ,erisi ,iakan +am*uran *ada *ermukaan +awan *etri steril ,erisi medium 'ang telah *adat9 Ada ,e,era*a +ara 'ang digunakan namun kesemuan'a meletakkan se,agian ,esar organisme *ada ,e,era*a goresan *ertama dan men'isakan ,akteri indi:idual 'ang +uku* ter*isah satu sama lain *ada goresan terakhir9 (akteri indi:idual ini 'ang ter*isah tum,uh men-adi koloni ,akteri 'ang saling ter*isahkan antara satu s*esies dengan s*esies lainn'a9 7Aolk61@@18

29 )eknik iringan tuangan 7 our late /ethod8 Da*at dilakukan dengan dua +ara6 'aitu: a9 /enginokulasikan ,iakan6 +am*uran ke dalam ta,ung u-i 'ang mengandung agar men+air 'ang telah didinginkan sam*ai suhu 4>EF9 ta,ung ini diketuk agar ,akteri men+a*ai keseluruhan medium9 &si ta,ung u-i lalu dituangkan ke dalam +awan *etri dan di,iarkan men-adi *adat9 ,9 Dengan +ara Shake Culture 7+ara *enanaman mikro,a melalui +ara *iaraan adukan86 'aitu dengan menuangkan inokulum kedalam +awan *etri kosong lalu ditam,ahakan medium agar +air ke atasn'a dan +am*uran ini di*utar 7wadah +awann'a8 untuk men+am*ur isin'a se,elum medium men-adi *adat9 7Aolk6 1@H38 39 Disin"ektan Disin"ektan atau 'ang sering dise,ut -uga larutan sterilisasi dingin 'ang da*at merusak mikroorganisme 7:irus6 ,akteri6 ka*ang8 teta*i tidak da*at mematikan s*ora ,akteri9 Disin"ektan ini tidak da*at menggantikkan sterilisasi autokla"9 Disin"ektan da*at digunakan *ada *ermukaan 'ang keras 7,aki6 kursi6 me-a ds,86 alat?alat 'ang *eka terhada* *emanasan se*erti *lastik6 *i*a ka*iler se,elum dan sesudah *enggunaann'a9 Disin"ektan dalam *enggunaann'a harus mem*erhatikan *rosedur 'ang dian-urkan9 (e,era*a disin"ektan ,ersi"at toksik dan mem,utuhkan *enanganan 'ang khusus dalam *em,uangann'a9 7 el+;ar6 1@$$8 49 !terilisasi Agar ,iakan ,akteri da*at di,uat6 maka medium dan alat?alat 'ang di*erlukan harus disterilsasi se,elum inokulasi9 !terilisasi 'aitu *roses untuk mematikan semua organisme 'ang da*at men-adikan kontaminan9 /etode 'ang la;im digunakan untuk memsterilisasikan media dan alat?alat ialah

dengan *emanasan9 4ika *anas digunakan ,ersama?,ersama dengan ua* air dise,ut sterilisasi ,asah 7menggunakan autokla"86 sedangkan -ika tan*a ua* air dise,ut !terilisasai kering 7menggunakan o:en89 7 el+;ar6 1@$$8 >9 &nokulasi (akteri /enurut ele;ar dan Fhan 71@@686 ada ,er,agai +ara 'ang da*at

digunakan untuk *enanaman ,akteri6 antara lain: a9 em,iakan dengan 1em*engan 7Plate Culture atau Streak Culture8 Di,uat dengan menggeserkan sengkelit 7ose8 'ang telah terinokulasi oleh ,akteri ke atas +awan etri ,erisi media *adat sam*ai meli*uti seluruh *ermukaan dengan gerakan ke kanan dan ke kiri6 sehingga di*eroleh koloni 'ang menggerom,ol dan memenal9 7!alle6 1@H38 ,9 iaraan Agar /iring enanaman ,akteri da*at dilakukan dengan +ara menggerakkan u-ung kawat 'ang ,erisi ,akteri satu kali dari u-ung ,awah ke u-ung atas6 sehingga garis meru*akan diameter meman-ang *ada *ermukaan miring medium9 7!alle6 1@H38 +9 iaraan )usukan 7Stab Culture8 Stab culture di,uat dengan +ara menum,uhkan ose 'ang ,erisi ,akteri dari *ermukaan atas agar tegak6 tegak lurus medium6 tengah?tengah medium9 (akteri 'ang tum,uh di dalam medium da*at ,eru*a ,akteri 'ang memakan gelatin medium mau*un tidak memakan gelatin medium9 7!alle6 1@H38

d9

iaraan Adukan 7Shake Culture8 (akteri dari medium +air atau dari medium *adat 'ang telah dien+erkan sehingga men-adi sus*ensi6 dituangkan ke tengah?tengah +awan *etri kemudian ditam,ahkan gelatin atau agar?agar 'ang ,elum ,eku6 lalu +awan ditutu* dan di*utar sehingga sus*ensi ,er+am*ur dengan medium9 4ika ,akteri telah tum,uh maka akan ,eru*a koloni? koloni 'ang ,erada *ada *ermukaan medium 'ang *ertama adalah ,akteri anaero, dan 'ang kedua adalah ,akteri aero,9 7!alle6 1@H38

29109 Faktor 'ang /em*engaruhi ertum,uhan /ikro,a Kehidu*an mikro,a umumn'a sangat di*engaruhi dan tergantung oleh keadaan lingkungann'a9 !e+ara garis ,esar ada tiga "aktor lingkungan 'ang mem*engaruhi6 'aitu: 19 Faktor Fisik6 misaln'a: suhu6 *H6 tekanan osmotik6 kandungan oksigen6 dll9 29 Faktor Kimia6 misaln'a: sen'awa ra+un9 39 Faktor ,iolagik6 misaln'a: interaksi dengan mikro,a lainn'a9 2910919 Faktor "isik 19 engaruh suhu terhada* *ertum,uhan ,akteri (erdasarkan kisaran suhu *ertum,uhann'a6 mikro,a di,agi tiga: siko"ilik : tum,uh *ada kisaran suhu ?>JF K 20JF

/eso"ilik : tum,uh *ada kisaran suhu 20JF K 4>JF )ermo"ilik : tum,uh di atas suhu 4>JF 29 engaruh *H

!etia* -enis mikro,a memiliki kemam*uan untuk hidu* *ada rentang *H 'ang s*esi"ik9 Namun se+ara umum mikro,a da*at tum,uh *ada kisaran *H antara 4K@ dengan *ertum,uhan o*timum *ada *H 69>K H9> selama *ertum,uhan mikro,a6 *H medium akan ,eru,ah aki,at *roduk? *roduk meta,olisme mikro,a6 'akni asam hasil degradasi kar,ohidrat dan ,asa hasl *enguraian *rotein9 39 engaruh 0ksigen ,e,as7028 ada ,er,agai mikro,a sangat ,er:ariasi6 hal ini men+erminkan

adan'a *er,edaan sistem en;im ,eroksidati" 'ang terda*at dalam mikro,a terse,ut9 (erdasarkan ke,utuhan 026 mikro,a da*at dikelom*okkan men-adi: Aero, : mikro,a *ertum,uhann'a Anaero, : mikro,a *ertum,uhan'a 'ang mem,utuhkan 02 untuk

'ang tidak

mem,utuhkan

02 untuk

Fakultati" : mikro,a 'ang da*at tum,uh dengan mau*un tan*a adan'a 02 /ikroaero"ilik : mikro,a 'ang mem,utuhkan 02 sangat sedikit9 49 engaruh )ekanan 0smotik /edium 'ang di*ergunakan untuk menum,uhkan suatu mikro,a mem*un'ai *ers'aratan tertentu6 salah satun'a adalah medium harus ,ersi"at isotonis terhada* mikro,a9 Kondisi medium 'ang hi*ertonis atau hi*otonik akan mem*engaruhi sel mikro,a sehingga mengganggu *ertum,uhan9 2910929 Faktor Kimia

ada *rinsi*n'a mikro,a ada 'ang ,ersi"at menguntungkan mau*un merugikan ,agi kehidu*an manusia9 (e,era*a metode dikem,angkan untuk mengendalikan mikro,a 'ang ,ersi"at merugikan dengan menggunakan agen "isika dan kimia9 /etode kimia untuk mengendalikan *ertum,uhan mikro,a menggunakan: 19 Antise*tik : sen'awa kimia 'ang digunakan untuk -aringan hidu* untuk mengham,at *ertum,uhan mikro,a9 29 Disin"ektan : sen'awa kimia 'ang mengham,at *ertum,uhan *ada ,ahan 'ang tak hidu*9 3ntuk mengatur *engaruh sen'awa kimia terhada* suatu ,akteri da*at dilakukan dengan menggunakan silinder ka+a 'ang diletakkan diatas medium 'ang telah diinokulasi dengan ,akteri u-i9 engham,atan terhada* *ertum,uhan ,akteri ditun-ukkan dengan tim,uln'a daerah ,ening disekitar +akram u-i9 Daerah ,ening meru*akan daerah 'ang tidak ditum,uhi mikro,a9 Hal ini ter-adi aki,at adan'a di"usi sen'awa kimia ke dalam media akan men'e,a,kan *engham,atan ukuran daerah ,ening sangat di*engaruhi oleh :aria,el? :aria,le teknis 'aitu -umlah inokkulum6 waktu inokulasi6 kom*osisi medium6 *H6 gas? gas udara6 sta,ilitas antimikro,a6 ds,9 39 Faktor (iologis (e,era*a -enis mikro,a mam*u menghasilkan suatu meta,olit 'ang da*at ,ersi"at ra+un ,agi mikro,a lain6 misaln'a anti,iotik9 engaruh terhada* meta,olik mikro,a terhada* mikro,a lain da*at dilakukan dengan teknik ,ioassa' 'ang .melawankan5 mikro,a *enghasil meta,olit dengan mikro,a lain 'ang sensiti"9 72u+hanan6 1@@28

29119 Kur:a ertum,uhan 4asad renik

ada gam,ar diatas 6-ika suatu ,akteri mem*er,an'ak diri men-adi dua dalam waktu 20 menit9 (ila sel terse,ut diingku,asikan *ada medium dengan kondisi o*timum untuk *ertum,uhan'a maka dalam waktu 40 -am sel terse,ut akan mengalami *em,elahan se,an'ak 4$7608D20 kali atau 144 generasi9 4umlah sel setelah 40 -am se+ara teoritis men+a*ai 2L144 sel9 4ika setia* sel mem*un'ai ,erat 10?12 gram6 maka se+ara teoritis ,erat sel setelah 4$ -am akan men+a*ai 2L144 M 10?12 gram atau 292 M 1031 gram 6 atau sama dengan 4000 kali ,erat ,umi9 ada ken'ataan'a tidaklah demikian keadaan'a6 karena tidak semua sel 'ang ter,entuk terus hidu*9 7Galu'o6200>8 29129 (akteri

(akteri meru*akan organism ,ersel tunggal tan*a kloro"il6 memiliki DNA dan #NA6 mam*u menun-ukkan *roses dasar kehidu*an misaln'a tum,uh6 melakukan meta,olism dan ,erkem,ang ,iak9 (erdasarkan kom*osisi seln'a6 ,akteri di,edakan men-adi ,akteri gram *ositi" dan ,akteri gram negati:e ,akteri gram *ositi" +enderung le,ih sensiti:e terhada* kom*onen anti ,akteri untuk masuk kedalam sel dan menemukan sasaran untuk ,eker-a6 sedangkan susunan struktur dinding ,akteri gram negati:e le,ih kom*leks dan ,erla*is tiga6 'aitu la*isan luar 'ang ,eru*a li*o*rotein6 la*isan tengah 'ang ,eru*a *e*tidoglikan dan la*isan dalam li*o*olisakarida9 7Fhan6 1@$$8 29139 Anti,akteri !u,stansi anti,akteri atau mikro,a meru*akan suatu su,stansi 'ang mem*un'ai *engaruh merusak atau mengganggu mikroorganisme9 !u,stansi antimikro,a di,agi men-adi dua kelom*ok ,erdasarkan da'a ker-an'a terda*at ,ateriostatik dan ,akteriosidik9 (akteriostatik meru*akan ;at 'ang han'a mengham,at *ertum,uhan ,akteri6 sedangkan ,akteriosidik meru*akan 'ang da*at mematikan ,akteri9 7Fhan6 1@$$8 !u,stansi anti,akteri ,er*engaruh terhada* sel dengan mekanisme: 19 /engham,at sintesis dinding sel Kerusakan terhada* dinding sel aki,at terham,at *em,entukann'a da*at mengaki,atkan ke*ekaan antara ,akteri gram *ositi" dan gram negati:e terhada* ;at ,akteri ,er,ada dimana ke*ekaan ini ,ergantung *ada *er,edaan susunan dinding sel9 ;at

29

/engham,at "ungsi mem,rane sel !ito*lasma meru*akan *engendali susunan dalam sel9 Adan'a ;at anti,akteri akan mengganggu integritas "ungsi mem,rane sito*lasma 'ang da*at menim,ulkan kerusakan atau kematian sel9

39 %at anti,akteri

/engham,at ker-a en;im mam*u menggangu reaksi ,iomolekul 'ang

men'e,a,kan terganggun'a meta,olisme9 7Fhan6 1@$$8 29149 3-i Anti,akteri engukuran akti:itas anti,akteri da*at dilakukan dengan ,e,era*a metode 'aitu metode di"usi dan metode *engen+eran9 !alah satu metode 'ang *aling umum digunakan adalah metode di"usi9 /etode di"usi da*at dilakukan dengan dua +ara6 'aitu: 19 /etode silinder !ilinder steril dengan diameter $ mm9 ditetesi larutan u-i dan ditem*atkan *ada *ermukaan agar 'ang telah ditanami ,akteri6 daerah lam,at 'ang ter,entuk terlihat se,agai daerah ,ening disekeliling silinder 29 /etode di"usi +akram !e-umlah mikro,a u-i di"okuskan *ada media agar dan +akram 'ang mengandung larutan u-i atau anti,akteri tertentu diletakkan *ada *ermukaan media agar 'ang telah memadai setelah diinku,asi terlihat daerah ham,atan se,agai daerah ,ening 'ang tidak ditum,uhi9 /ikro,a dikelilingi +akram9 39 !en'awa Anti,akteri dan !*ektrum Akti:itasn'a

!en'awa anti,akteri meru*akan suatu sen'awa kimia 'ang mam*u mem,unuh atau mengham,at *ertum,uhan ,akteri6 dan ,erasal dari mikro,a6 tum,uhan6 atau disintesis se+ara kimiawi9 (erdasarkan akti:itas anti,akterin'a6 maka sen'awa anti,akteri da*at dikelom*okkan men-adi 2 kelom*ok6 'aitu ,akteriostatik dan ,akteriosidal9 7Fhan6 1@$$8 291>9 !*ektrum akti:itas anti,akteri !*ektrum akti:itas anti,akteri di,agi men-adi dua ma+am : a9 !*ektrum 1uas 7Brodd Spectrum8 !en'awa anti,akteri memiliki akti:itas anti,akteri 'ang akti" terhada* ,er,agai -enis mikro,a9 ,9 !*ektrum )ak 1uas 7Narrow Spectrum8 !en'awa anti,akteri han'a akti" terhada* satu atau ,e,era*a -enis mikro,a9 71e:inson6 20048 29169 (akteri Eschericia coli (akteri E. Coli ,er,entuk ,atang *endek ,erukuran 161 sam*ai 164 mikrometer6 gram negati"6 anaero, "akultati"6 tidak ,ers*ora6 katalase *ositi"6 terda*at dalam ,entuk tunggal atau ,er*asangan9 Koloni *ada media agar nutrien umumn'a agak +em,ung6 halus6 *ermukaan li+in6 dan ,erwarna a,u K a,u9 (e,era*a galus memiliki ka*sul9 70rsko:6 1@$H8 2916919 #egenerasi E. Coli

Dari sto+k E. Coli diam,il satu masa ose dan diinokulasikan ke erlenme'er 'ang ,erisi 40 ml media nutrienth ,roth 7N(8 steril9 !elan-utn'a ta,ung terse,ut diinku,asi ke dalam inku,ator ,ergo'ang 7shater8 selama 24 -am *ada suhu 3HoF9 7Hida'anti6 20048 2916929 engu-ian Anti,akteri Ekstrak sam*el diu-i konsentrasi ,er,eda 70<6 20<6 40<6 60<6 $0<6 100<8 terhada* *ertum,uhan ,akteri E. Coli9 (iakan ,akteri E. Coli 'ang akan diu-i dengan +ara men+elu*kan +akram kertas saring ,erdiameter 06> +m9 Kemudian +akram ,asah terse,ut diletakkan di atas media *etridish 'ang se,elumn'a sudah diinokulasikan ,akteri E. Coli dengan metode se,ar9 !elan-utn'a diinku,asi *ada suhu 3H oF selama 24 -am9 %ona ter,entuk di sekeliling +akram kertas diukur diameter rata K ratan'a menggunakan *enggaris9 7Hida'anti6 20048 291H9 Anti,iotik Anti,iotik adalah ;at 'ang mem,unuh atau mengham,at *ertum,uhan ,akteri9 Ada ,an'ak +ara menggolongkan anti,iotik6 salah satun'a adalah ,erdasarkan struktur kimian'a9 (erdasarkan struktur kimian'a6 anti,iotik dikelom*okkan se,agai ,erikut : a9 2olongan aminogli+osida Diantaran'a6 amikasin6 di,ekasin6 gentamisin6 kanamisin9 ,9 2olongan ,etala+tam

Diantaran'a golongan kar,a*enem 7erta*enem6 imi*enem86 golongan se*alos*orim 7se*ale*sim6 se*a;olim86 golongan ,etala+tam mono si*li+6 dan golongan *enisilin9 Anti,iotik 'ang lain 'ang *enting se*erti asam "usidat6 ,erdasarkan mekanisme aksin'a6 'aitu mekanisme ,agaimana anti,iotik se+ara selekti" mera+uni sel ,akteri9 7Anonim6 200$8 291$9 ewarnaan 2ram ewarnaan gram atau metode gram adalah salah satu metode em*iris untuk mem,edakan s*esies ,akteri men-adi dua kelom*ok ,esar6 gram *ositi" dan gram negati"6 ,erdasarkan si"at kimia dan si"at "isik dinding sel mereka9 3ntuk mem*ela-ari sel K sel makhluk hidu* lainn'a menggunakan mikrosko*6 ,ahan 'ang aka di*eriksa terle,ih dahulu dinamai dengan suatu metode *ewarnaan gram9 /etode *ewarnaan gram mem,eri hasil ada dua kelom*ok ,akteri9 (akteri K ,akteri *ada *ewarnaan gram tam*ak ,erwarna ,iru dise,ut gram *ositi" dan ,akteri 'ang nam*ak ,erwarna kemerahan dise,ut gram negati"9 7Anonim6 200$8 291@9 Konsentrasi Ham,atan /inimum 7KH/8 Konsentrasi ham,atan minimum adalah konsentrasi terendah dari se,uah antimi+ro,ial 'ang akan mengham,at *ertum,uhan 'ang tam*ak dari se,uah mikroorganisme setelah diinku,asi semalaman6 konsentrasi ham,atan minimum sangat *enting dalam diagnosis la,oratorium untuk mengkon"irmasi ulang resistensi dari mikroorganisme *ada agen mi+ro,ial anti,a+terial dan untuk memantau akti:itas agen anti mi+ro,ial9

7Anonim6 200$8

29209 Analisa ,ahan 2920919 ,ahan *em,uat gel Agar Ekstrak dari se-enis rum*ut laut merat 'ang digunakan se,agai 7gelling agent8 dalam media ,iakan mikroorganisme6 makanan6 o,at?o,atan dank krim kosmetik serta -elli9 Agar nutrient terdiri dari kalau 'ang ter,uat dari ekstrak daging6 darah sa*i6 'ang men-adi gel ,ersama agar kemudian digunakan untuk 7Daintith6 1@@48 2920929 (akteri (er,entuk ,atang *endek6 ,erukuran 161 K 164 mikrometer6 gram negati"6 anaero, "akultati"6 tidak ,ers*ora6 katalase *ositi"6 terda*at dalam ,entuk tunggal atau ,er*asangan9 70rsko:6 1@@H8 2920939 e*ton Fragmen ,elgar 'ang dihasilkan *ada awal *roses hirolisis *rotein6 *en+emaran ,ahan *rotein di+a*ai dengan asam atau en;im6 sum,er utama nitrogen organik9 7Fhan6 1@$$8 292094 #agi 7Ekstrak 'east8 4amur ,ersel 1 'ang terse,ar luas= se,agian ,esar masuk as+om'+orina= ,erkem,ang ,iak dengan *roses *ertunasan= digunakan untuk industr' *em,uatan minuman ,eralkohol dan roti= -uga digunakan se+ara komersial se,agai sum,er *rotein dan :itamin= mem,iakan ,akteri6 -amur6 dan ,e,era*a al'a9

se,agai inang *ada ,e,era*a tekhnik ,ioteknologi untuk *engklonan DNA9 7A,er+rom,ie6 1@@H8 29209> ABuadest Air murni dari *en'ulingan= titik didih 1000F= titik ,ekun'a 00F= rumus molekul H20= tidak ,erwarna 7,ening8= tidak ,erasa= tidak ,er,au= ,iasan'a se,agai *elarut9 7Amiruddin6 1@@38 292096 NaFl adatan Kristal tan*a warna= larut dalam air dan sedikit larut dalam etanol= titik didih 14130F= se,agai ,ahan *engawet dan ,um,u masakan9 7Daintith6 1@@48 29209H Alkohol Di,uat melalui "ermentasi gula6 larutan tidak ,erwarna6 + : 066 grDml6 titik didih : ?102oF6 titik leleh : ?16@oF9 7(asri6 1@@68

&&&9

/E)0DE E#F0(AAN &&&919 Alat dan (ahan &&&91919 19 29 39 49 >9 69 Alat Fawan *etri steril )a,ung reaksi 10 ml Erlenme'er 100 ml Autokla" &nku,ator 4arum 0se @9 Kom*or listrik 109 )utu* ka*as 119 Kertas +oklat 129 (enang kasur 139 engaduk 149 /iNer

H9 $9

Alumunium "oil enangas air

1>9 lastik

&&&91929 19 29 39 49 >9 69

(ahan Ekstrak ragi e*ton NaFl (u,uk agar Akuadest (akteri E. Coli

&&&929 !kema Ker-a &&&92919 em,uatan /edium Nutrien (roth 061> g ragi O 062> g *e*ton O 062> g NaFl Erlenme'er enam,ahan >0 ml aBuadest engadukan ensterilan dengan autokla" selama 20 menit endinginan
Hasil

&&&92929 #egenerasi ,akteri E. Coli >0 ml ,iakan nutrien ,roth Erlenme'er engam,ilan satu mata ose stok ,iakan E. Coli enginku,asian selama 24 -am *ada suhu 3HoF Hasil

&&&92939 em,uatan media nutrien agar 061> g ragi O 062> g *e*ton O 062> g Erlenme'er enam,ahan >0 ml aBuadest engadukan ensterilan dengan autokla" endinginan hingga >0oF enuangan *etridish endiaman hingga memadat Hasil se+ara ase*tik ke dalam

&&&92949 engu-ian anti,akteri Ekstrak sam*el ,unga ,ungur (otol :ial Aariasi konsentrasi 720<6 40<6 60<6 $0<6 100<8 Alkohol H0< 4ml se,agai kontrol *ositi" /edium agar dalam *etridish engam,ilan 20 mml ,akteri E. Coli dari media ,roth dengan *i*et mikro se+ara ase*tik9 en'em*rotan ,akteri E. Coli ke dalam *ermukaan medium agar dalam *etridish9 en'e,aran ,akteri menggunakan s*readtor en+elu*an +akram kertas saring 7diameter 06> +m8 ke masing masing sam*el9 eletakkan +akram ke *ermukaan media agar dan di,eri la,el9 enginku,asian selama 24 -am *ada suhu 3HoF engamatan dan analisis data Hasil

&A9 DA)A EN2A/A)AN No9 19 erlakuan em,uatan /edia Nutrien (roth ? 06>g ragi O 062>g *e*ton O 062>g NaFl dalam erlenme'er ? enam,ahan >0 ml aBuadest ? engadukan ? ensterilan dengan autokla" 29 ? endinginan #egenerasi (akteri E.Coli ? >0 ml ,iakan notrien ,roth dalam Erlenme'er ? engam,ilan satu mata ose stok ,iakan E9Foli ? engingku,asian selama 24 -am6 suhu 3H 0 F 1arutan ,eru,ah men-adi kuning keruh 'ang menun-ukkan adan'a *ertum,uhan ,akteri E.coli Hasil 1arutan -ernih ,erwarna kuning

39

em,uatan /edia Nutrien Agar ? 06>g ragi O 06H>g *e*ton O 06H>g NaFl O 262>g ,u,uk agar dalam Erlenme'er ? enam,ahan >0 ml aBuadest ? engadukan ? ensterilan dengan autokla" ? endinginan hingga >0 0F ? )uangkan se+ara ase*tik kedalam *etri dish ? Diamkan hingga memadat

)er,entuk medium nutrien agar 'ang memadat ,erwarna kuning -ernih

49 ?

engu-ian Anti,akteri em,uatan ektrak sam*el ,unga ,ungur dengan konsentrasi ,er,eda 720< 640< 660<6 $0<6 100<8 ? /en+elu*kan > kertas +akram dalam ekstrak sam*el untuk masing?masing konsentrasi ? /eletakkan kertas +akram diatas media nutrien agar *etridish 'ang se,elumn'a sudah diinokulasi ,akteri E.coli dengan metode se,ar (spread ? &nku,asi selama 24 -am *ada suhu 3HoF ? engamatan

)er,entuk ;ona ,ening *ada masing?masing +akram9

>9

Analisis Data ? ? ? ? ? ? Konsentrasi 20< Konsentrasi 40< Konsentrasi 60< Konsentrasi $0< Konsentrasi 100< Kontrol 7alkohol8

Diameter

? ? ? ? ? ?

161 +m tidak ter,entuk 16> +m 162 +m 162 +m 163 +m

&A9 H& 0)E!A Akan dilakukan *er+o,aan 'ang ,er-udul ./ikro,iologi: &solasi dan enanaman (akteri !erta 3-i Anti,akteri56 ,ertu-uan untuk mem,uat ,er,agai ma+am medium 'ang digunakan dalam ,idang mikro,iologi6 mengenal dan melakukan teknik *enanaman ,akteri6 mengisolasi ,akteri untuk menda*atkan ,iakan murni6 dan menentukan konsentrasi ham,atan minimum 7KH/8 dan tingkat kemam*uan anti,akteri dari ,e,era*a agen anti,akteri9 rinsi* 'ang mendasari adalah akti:itas anti,akteri dalam mengham,at *ertum,uhan ,akteri tertentu9 /etode 'ang digunakan dalam *er+o,aan ini 'aitu metode spread 7se,ar8 dan metode di"usi +akram9 )eknik *er+o,aan *enanaman ,akteri menggunakan media ,iakan 'aitu medium nutrien +air dan medium nutrien agar6 kemungkinan 'ang ter-adi ,akteri akan le,ih mudah diamati *ada medium nutrien agar karena agar meru*akan media *adat9 (erdasarkan data6 akan diketahui *er,andingan diameter rata K rata dari ;ona

,ening 'ang ter,entuk *ada hasil *er+o,aan dengan :ariasi konsentrasi ekstrak sam*el9 enentuan konsentrasi ham,atan minimum dari ekstrak sam*el diukur ,erdasarkan diameter ter,esar dari ;ona ,ening 'ang ter,entuk9

A&9

E/(AHA!AN er+o,aan 'ang ,er-udul ./&K#0(&0102&: &!01A!& DAN

ENANA/AN /&K#0(A !E#)A 34& AN)&(AK)E#&5 ,ertu-uan untuk mengenal dan mem,uat ,er,agai ma+am medium 'ang digunakan dalam ,idang mikro,iologi6 mengenal dan melakukan teknik *enanaman ,akteri6 menentukan konsentrasi ham,atan minimum 7KH/8 dan tingkat kemam*uan anti ,akteri dari ,e,era*a agen anti,akteri9 /etode 'ang digunakan adalah metode s*read 7/en'e,ar8 dan metode di"usi +akram9 /etode se,ar atau spread plate meru*akan metode *enanaman ,akteri 'ang dilakukan dengan men'em*rotkan sus*ensi ke atas medium agar kemudian men'e,arkann'a se+ara merata dengan trigalski9 Dengan ini dihara*kan ,akteri ter*isah se+ara indi:idual6 kemudian da*at tum,uh men-adi koloni tunggal9 Kele,ihan teknik ini adalah mikroorganisme 'ang tum,uh da*at trse,ar merata *ada ,agian *ermukaan media agar 72honi6 201289 !edangkan metode di"usi

+akram adalah metode 'ang untuk u-i akti:itas anti,akteri 'ang ,ahan u-in'a 7ekstrak anti,akteri8 di-enuhkan ke dalam kertas +akram 7+akram kertas89 rinsi*n'a adalah akti:itas anti ,akteri dalam mengham,at *ertum,uhan ,akteri tertentu9 /ikroorganisme da*at ditum,uhkan dan dikem,angkan *ada suatu su,strat 'ang dise,ut medium9 /edium 'ang digunakan untuk menum,uhkan dan mengem,ang,iakkan mikroorganisme terse,ut harus sesuai susunan'a dengan ke,utuhan -enis?-enis mikroorganisme 'ang ,ersangkutan9 (e,era*a mikroorganisme da*at hidu* ,aik *ada medium 'ang sangat sederhana 'ang han'a mengandung garam anargonik di tam,ah sum,er kar,on organik se*erti gula9 !edangkan mikroorganime lainn'a memerlukan suatu medium 'ang sangat kom*leks 'aitu ,eru*a medium ditam,ahkan darah atau ,ahan?,ahan kom*leks lainn'a 7Aolk6 dan Gheeler61@@389 Akan teta*i 'ang ter*enting medium harus mengandung nutrien 'ang meru*akan su,stansi dengan ,erat molekul rendah dan mudah larut dalam air9 Nutrien ini adalah degradasi dari nutrien dengan molekul 'ang kom*leks9 Nutrien dalam medium harus memenuhi ke,utuhan dasar makhluk hidu*6 'ang meli*uti air6 kar,on6 energi6 mineral dan "aktor tum,uh 71a,el6 200$89 3ntuk menelaah ,akteri di dalam la,oratorium 6 *ertama? tama kita harus da*at menum,uhkan ,akteri terse,ut di dalam suatu ,iakan murni9 3ntuk melakukann'a haruslah dimengerti -enis? -enis nutrient 'ang dis'artakan oleh ,akteri dan -uga ma+am lingkungan "isik 'ang mana da*at men'e,a,kan kondisi 'ang o*timum ,agi *ertum,uhann'a terse,ut 7 el+;ar6 1@$689 ada *er+o,aan ini6 se,elum dilakukan *engu-ian anti,akteri6 dilakukan ,e,era*a *erlakuan terle,ih dahulu6 diantaran'a: 691 em,uatan /edium Nutrient Fair (Broth

)u-uan *er+o,aan ini adalah se,agai tem*at atau media untuk menum,uhkan ,akteri E.Coli 'ang di dalamn'a terda*at nutrisi 'ang memenuhi ke,utuhan *erkem,ang,iakan ,akteri terse,ut9 ada *em,uatan medium nutrient +air digunakan nutrien?nutrien ,eru*a ekstrak ragi6 *e*ton6 dan NaFl9 Ekstrak ragi digunakan karena ekstrak ragi mengandung natrium kar,inat dan natrium ,ikar,onat 'ang ,er"ungsi se,agai sum,er kar,on 7)arigan6 1@$$ 89 #agi disini -uga ,er"ungsi se,agai sum,er makanan ,agi ,akteri9 Hal ini karena se-umlah mikroorganisme mem,utuhkan se-umlah kar,on dalam ,entuk kar,ondioksida teta*i ke,an'akan diantaran'a -uga mem,utuhkan ,e,era*a sen'awa kar,on organik6 se*erti gula6 dan kar,ohidrat 7Galu'o6 200> 89 e*ton -uga ,er"ungsi se,agai *rotein karena *e*ton meru*akan sen'awa organi+ dalam ,entuk asam?asam amino 'ang meru*akan sum,er nitrogen 7N86 'ang *enting ,agi *ertum,uhan ,agi ,akteri 7Galu'o6 200> 89 NaFl ,er"ungsi se,agai sum,er ion logam Natrium karena semua organisme hidu* mem,utuhkan ,e,era*a unsure logam se*erti natrium6 kalium6 magnesium6 mangan6 ,esi6 tem,aga6 dan ko,alt9 (er,agai sum,er terse,ut digunakan untuk *ertum,uhan 'ang normal6 tidak terke+uali kuman 7Galu'o6 200>89 Ketigan'a meru*akan nutrien?nutien atau unsur hara 'ang di*erlukan ,akteri agar da*at tum,uh dengan ,aik9 Ketiga nutrien ini lalu di+am*ur dengan akuades didalam erlenme'er 'ang ,er"ungsi se,agai *elarut9 /edium nutrien +air 7,roth8 ini kemudian disterilkan dengan dimasukkan kedalam autokla"9 !e,elum medium?medium terse,ut dimasukkan kedalam autokla"6 erlenme'er 'ang ,erisi ,ahan untuk nutrien +air terse,ut harus tertutu*i dengan aluminium "oil untuk men+egah kontaminasi dari udara luar6 kemudian di,ungkus -uga dengan *lastik9 Hal ini dimaksudkan agar erlenme'er tidak ,asah karena terkena ua* air dari autokla" karena erlenme'er harus ,erada dalam kondisi teta* kering dan steril9

!terilisasi dilakukan dengan memanaskan seluruh alat6 se*erti +awan *etri6 ose6 ta,ung reaksi6 dll di dalam autokla"9 Hal ini dilakukan agar sel?sel :egetati" ,akteri mati6 sehingga da*at menurunkan resiko kontaminasi9 Autokla" meru*akan alat seru*a tangki min'ak 'ang da*at diisi dengan ua* air9 Autokla" memiliki suatu ruangan 'ang da*at menahan tekanan diatas 1 atm9 Dalam autokla"6 'ang mensterilkan adalah *anas ,asah6 ,ukan *ada tekanann'a9 0leh karena itu6 setelah air di dalam tangki mendidih dan mulai ter,entuk ua* air maka ua* air ini akan mengalir keruangan *ensterilan guna mendesak keluar semua udara di dalamn'a9 (ila masih ada udara 'ang tersisa6 maka udara ini akan menam,ah tekanan didalam ruangan *ensteril 'ang akan mengganggu naikn'a suhu dalam ruangan terse,ut 7Galu'o6 200> 89 /edium tem*at *enginokulasian ,akteri memiliki "ungsi masing?masing9 /edium +air ini digunakan untuk menum,uhkan ,akteri9 /edium agar digunakan untuk mem*eroleh ,iakan murni dan medium agar miring digunakan untuk men'im*an 7stock8 ,akteri untuk digunakan lagi di lain waktu9 !etelah *engautokla"an6 dida*atkan hasil +airan kuning ,ening ,eru*a medium nutrien ,rothD +air didalam Erlenme'er9

692

#egenerasi (akteri E.coli )u-uan *ada *er+o,aan ini adalah untuk mengakti"kan kem,ali ,akteri E.coli 'ang inakti" karena *en'im*anan dalam suhu dingin dan mengem,ang ,iakan ,akteri E.coli9 Dilakukan dengan *engam,ilan stok ,iakan E.coli dengan -arum ose dan diinokulasi ke erlenme'er 'ang telah ,erisi medium

nutrient ,roth 7N(8 steril9 ada saat diinokulasi semua alat mau*un media 'ang digunakan harus steril6 dikarenakan agar tidak terkontaminasi dengan unsur? unsur lain atau*un mikroorganisme lain 'ang nantin'a akan mem*engaruhi *erkem,ang,iakan ,akteri E.coli. ensterilan ini dilakukan didalam inkas dengan +ara mem,akar u-ung -arum ose 'ang digunakan untuk mengam,il ,akteri E.coli dan menanamn'a di medium Nutrient Broth 'ang terda*at erlenme'er6 dimana erlenme'er ini u-ung mulut erlenme'er -uga di,akar agar steril9 !etelah itu medium nutrient +air 'ang telah ditanam ,akteri E.coli di inku,asi selama 24 -am *ada suhu 3HoF dalam inku,ator9 Hal ini dikarenakan agar E.coli tum,uh dan ,erkem,ang ,iak dimana E.coli mengalami "asa tenggang (lag . Fasa tenggang (lag meru*akan "asa *en'esuaian *ada lingkungan dan laman'a da*at 1 -am hingga ,e,era*a hari9 1ama waktu ini tergantung *ada ma+am ,akteri6 umur ,iakan dan nutrient 'ang terda*at dalam medium 'ang disediakan9 Fasa tenggang ini han'a tenggang dalam *em,iakan sa-a karena se,enarn'a sel itu sangat akti" dalam meta,olisme inklusi diha,iskan9 Dan ada sintesis en;im dan konsituen *enting se+ara akti"9 ada ,agian ,elakang "asa tenggang ter-adi *er,esaran ukuran keseluruhan 7Aolk6 1@@389 roses inokulasi dilakukan *ada suhu 3HoF 6 karena suhu 'ang sesuai untuk menum,uhkan ,akteri E.coli digunakan suhu inku,asi 'aitu 3HEF 7Akhdi'a6 200389 &nku,ator meru*akan alat dimana *roses inku,asi dilakukan9

eninku,asian adalah *roses memelihara kultur ,akteri *ada suhu tertentu dalam -angka waktu tertentu untuk memantau *ertum,uhan ,akteri9
6939 em,uatan /edium Nutrient Agar 7*adat8

)u-uan dilakukan *er+o,aan ini adalah se,agai media untuk melakukan u-i anti,akteri9 /edia agar ini di,uat dengan menggunakan *e*ton6 ekstrak ragi6

NaFl6 dan ,u,uk agar9 !emua ,ahan di+am*ur dalam erlenme'er dan dilarutkan dengan aBuades agar ,ahan?,ahan terse,ut men-adi larutan 'ang homogen9 Ekstrak ragi digunakan karena ekstrak ragi mengandung natrium kar,inat dan natrium ,ikar,onat 'ang ,er"ungsi se,agai sum,er kar,on 7)arigan6 1@$$89 Ekstrak ragi disini -uga ,er"ungsi se,agai sum,er makanan ,agi ,akteri9 Hal ini karena se-umlah mikroorganisme mem,utuhkan se-umlah kar,on dalam ,entuk kar,ondioksida teta*i ke,an'akan diantaran'a -uga mem,utuhkan ,e,era*a sen'awa kar,on organik6 se*erti gula6 dan kar,ohidrat 7Galu'o6 200>89 e*ton -uga ,er"ungsi se,agai *rotein karena *e*ton meru*akan sen'awa organi+ dalam ,entuk asam?asam amino 'ang meru*akan sum,er nitrogen 7N86 'ang *enting ,agi *ertum,uhan ,agi ,akteri 7Galu'o6 200>89 NaFl ,er"ungsi se,agai sum,er ion logam Natrium karena semua organisme hidu* mem,utuhkan ,e,era*a unsure logam se*erti natrium6 kalium6 magnesium6 mangan6 ,esi6 tem,aga6 dan ko,alt9 (er,agai sum,er terse,ut digunakan untuk *ertum,uhan 'ang normal6 tidak terke+uali kuman 7Galu'o6 200>89 Ketigan'a meru*akan nutrien?nutien atau unsur hara 'ang di*erlukan ,akteri agar da*at tum,uh dengan ,aik9 !edangkan *enam,ahan ,u,uk agar 'ang ,erasal dari alga ,er"ungsi se,agai ,ahan *emadat media9 !etelah larutan homogen6 kemudian larutan dan alat?alat lainn'a se*erti *etridish6 trigalski6 u-ung *i*et :olume6 kertas +akram dan lain?lain di sterilkan menggunakan autokla"9 Hal ini dilakukan agar sel?sel :egetati" ,akteri mati6 sehingga da*at menurunkan resiko kontaminasi9 Ketika di autokla"6 alat?alat atau media di di,alut dengan aluminium "oil dan di,ungkus dengan *lastik9 Hal ini ,ertu-uan agar media tidak ,asah dan tidak mengkontaminasi medim 'ang telah di,uat9 !etelah itu medium di diamkan se,entar sam*ai hangat6 kemudian dituang ke dalam *etridish9 Hal ini dikarenakan agar *enuangan tidak terlalu *anas dan tidak memadat -ika dalam keadaan dingin9 enuangan dilakukan didalam inkas6 agar terhindar dari ,akteri atau unsur?unsur lain 'ang tidak

diinginkan9 1alu medium di,iarkan memadat didalam inkas6 hal ini untuk memudahkan *enanaman ,akteri dan *engu-ian anti,akteri dalam medium agar 7*adat89

694

engu-ian Anti,akteri

)u-uan dari *e+o,aan ini adalah untuk mengetahui tingkat kemam*uan anti,akteri 'ang ,erasal dari ekstrak ,unga ,ungur terhada* ,akteri E.coli9 Dalam *er+o,aan ini terle,ih dahulu di*ersia*kan ;at anti,akteri 'ang ,erasal dari sam*el ,unga ,ungur9 Digunakan tanaman ,ungur karena mengandung ;at akti" utama meli*uti sen'awa tanin6 triter*enoid6 *rotein6 dan asam amino 7Am,u-akshi6 200@89 )anin meru*akan salah satu -enis sen'awa 'ang termasuk ke dalam golongan *oli"enol9 !en'awa tanin ini ,an'ak di -um*ai *ada tum,uhan9 )anin da*at mengikat alkaloid dan glatin9 )anin se+ara umum dide"inisikan se,agai sen'awa *oli"enol 'ang memiliki ,erat molekul +uku* tinggi 7le,ih dari 10008 dan da*at mem,entuk kom*leks dengan *rotein9 )anin memiliki *eranan ,iologis 'ang kom*leks9 Hal ini dikarenakan si"at tannin 'ang sangat kom*leks mulai dari *engenda*an *rotein hingga *engkhelat logam9 )anin -uga da*at ,er"ungs ise,agai antioksidan ,iologis9

)riter*enoid adalah sen'awa 'ang kerangka kar,onn'a ,erasal dari enam

satuan iso*rena dan se+ara ,iosintesis diturunkan dari hidrokar,on F?30 asiklik6 'aitu skualena6 sen'awa ini tidak ,erwarna6 ,er,entuk kristal6 ,ertitik leleh tinggi dan ,ersi"at o*tis akti" 7Har,orne61@$H89

2am,ar !truktur )riter*enoid 74ose*h6 200$8 (unga ,ungur diam,il ekstrakn'a dengan +ara ditum,uk untuk *enghomogenasian dengan meme+ah sel K sel ,unga ,ungur9 Ekstrak 'ang telah di*eroleh di,uat :ariasi konsentrasi se,esar 20<6 40<6 60<6 $0<6 dan 100<9 Aariasi konsentrasi ini ,ertu-uan untuk mengetahui Konsentrasi Ham,atan /inimum 7KH/8 ekstrak ,unga ,ungur terhada* *ertum,uhan ,akteri E. Coli9 Konsentrasi ham,atan minimum adalah konsentrasi terendah dari se,uah antimikro,ial 'ang akan mengham,at *ertum,uhan 'ang tam*ak dari se,uah mikroorganisme9 Konsentrasi Ham,atan /inimum 7KH/8 sangat *enting dalam diagnosis la,oratorium untuk mengon"irmasi ulang resistansi dari mikroorganisme *ada agen mikro,a anti,akterial dan untuk memantau akti:itas agen anti mikro,ial 7Anonim6 200$89 Kontrol *ositi" 'ang digunakan *ada *er+o,aan ini adalah alkohol H0<9 Kontrol ini ,er"ungsi se,agai *em,anding sen'awa anti,akteri 'ang sesuai dalam mengham,at *ertum,uhan E. Coli karena alkohol meru*akan sen'awa anti,iotik 'ang da*at mem,unuh atau mengham,at *ertum,uhan ,akteri9 !e,elum dilakukan *engu-ian anti ,akteri6 terle,ih dahulu dilakukan *enanaman ,akteri E.coli dengan metode spread 7se,ar89 /etode se,ar atau

spread plate meru*akan metode *enanaman ,akteri 'ang dilakukan dengan men'em*rotkan sus*ensi ke atas medium agar kemudian men'e,arkann'a se+ara merata dengan trigalski9 Dengan ini dihara*kan ,akteri ter*isah se+ara indi:idual6 kemudian da*at tum,uh men-adi koloni tunggal9 Kele,ihan teknik ini adalah mikroorganisme 'ang tum,uh da*at terse,ar merata *ada ,agian *ermukaan media agar9 engu-ian anti,akteri dilakukan dengan metode di"usi +akram kertas9 Kertas +akram se+ara steril di+elu*kan *ada ;at anti,iotik dengan :ariasi konsentrasi 'ang telah di,uat6 lalu diletakkan *ada *etridish 'ang ,erisi media nutrient agar 'ang telah ditanami ,akteri E. Coli dengan metode s*read 7se,ar89 Kontrol *ositi" 7alkohol H0<8 -uga di+elu*kan +akram kertas dan kemudian diletakkan di tengah K tengah *ermukaan media agar dengan tu-uan untuk mem*ermudah *roses *em,andingan hasiln'a9 etridish diletakkan etridish dalam inku,ator guna untuk *roses inku,asi selama 24 -am *ada suhu 3HoF9 roses inku,asi ini ,ertu-uan agar ,akteri da*at ,erkem,ang ,iak9 diletakkan se+ara ter,alik dengan tu-uan untuk men+egah ter-adin'a tetesan air *ada *ermukaan agar dari hasil kondensasi9 Hasil *ositi" 'ang di*eroleh 'aitu te,entuk la*isan ,ening *ada ,agian luar kertas +akram 'ang meru*akan ;ona anti,akteri9 Dari data hasil *er+o,aan menun-ukkan ter,entukn'a daerah 7;ona8 ,ening di sekitar +akram9 ada konsentrasi KH/ ekstrak ,unga ,ungur 60< menghasilkan ;ona ,ening dengan diameter 16> +m6 'ang meru*akan diameter ter,esar dari konsentrasi KH/ 'ang lain9 Ekstrak ,unga ,ungur dengan konsentrasi 20<6 40<6 $0<6 dan 100< menghasilkan ;ona ,ening dengan diameter 161= tidak ter,entuk= 162= dan 162 +m9 Kontrol *ositi" 7alkohol H0<8 menghasilkan ;ona ,ening dengan diameter 163 +m9 Adan'a ;ona ,ening *ada agen ,akteri terse,ut menun-ukkan ,ahwa agen ,akteri terse,ut mengandung

sen'awa 'ang da*at ,ertindak se,agai anti,akteri6 se*erti tanin dan triter*enoid 7Am,u-akshi6 200@89 Dari data di atas *ada <KH/ ekstrak ,unga ,ungur dida*atkan hasil 11>63$<9 Hal ini menun-ukkan ,ahwa ekstrak ,unga ,ungur ini mem*un'ai kandungan sen'awa anti,akteri 'ang le,ih ,aik dari kontrol *ositi" 7alkohol H0<89

69>

Analisis Data 3ntuk menganalisis data hasil *er+o,aan dilakukan dengan mem,andingkan diameter rata?rata dari ;ona ,ening 'ang ter,entuk *ada hasil *er+o,aan dengan :ariasi konsentrasi ekstrak sam*el 720< 640< 660<6 $0<6 100<89

enentuan Konsentrasi

Ham,at /inimum 7KH/8 dari ekstrak sam*el diukur ,erdasarkan konsentrasi terke+il ekstrak sam*el 'ang mam*u mengham,at se+ara signi"ikan *ertum,uhan ,akteri E.coli 9 Hal ini da*at ditentukan ,erdasarkan ter,entukn'a ;ona ,ening 'ang n'ata (!iable *ada konsentrasi ekstrak terke+eil terse,ut9 3ntuk menentukan tingkat kemam*uan anti,akteri6 dilakukan dengan mem,andingkan diameter rata?rata ;ona ,ening dari ekstrak sam*el dengan anti,iotik9 ada *er+o,aan ini sam*el 'ang digunakan adalah ekstrak ,unga ,ungur6 dan menggunakan kontrol *ositi" ,eru*a al+ohol9 Dimana ;ona ,ening 'ang ter,entuk *ada konsentrasi ekstrak 20< se,esar 161 +m = ekstrak 40< tidak ter,entuk = ekstrak 60< se,esar 16> +m = ekstrak $0< se,esar 162 +m : ekstrak 100< se,esar 162 +m = dan +ontrol *ositi" 7al+ohol8 se,esar 163 +m9

A&&9 enutu* H919 Kesim*ulan H91919 er+o,aan isolasi dan *enanaman ,akteri E9+oli da*at digunakan dengan menggunakan medium Nutrient Broth dan medium Nutrient Agar dengan metode s*read 7se,ar89 H919 29 engu-ian anti,akteri da*at dilakukan dengan menggunakan metode di"usi +akram9 H91939 Ekstrak ,unga ,ungur mengandung sen'awa tanin6 triter*enoid6 *rotein6

dan asam amino 'ang ,er*eran se,agai anti,akteri dimana mem*un'ai KH/
'ang da*at mengham,at *ertum,uhan anti,akteri E.coli *ada konsentrasi $0< dengan diameter 16> +m= dan *resentasi KH/n'a se,esar 11>63$<9 H92 !aran H92919 erhatikan langkah ker-a dengan ,aik dan teliti9

H92929 !e,aikn'a mengetahui tu-uan dari masing?masing ,ahan 'ang digunakan9 H92939 !e,aikn'a alat 'ang akan digunakan se,elum dan sesudah *er+o,aan diautokla" terle,ih dahulu9

DAF)A# 3!)AKA
Ananthara'an dan #9 9 4a'aran91@H@9 5)eNt,ook o" /i+ro,iolog'59(om,a' Fal+uta : New Delhi Ars'ad6 /9200195Kamus Kimia592ramedia : 4akarta (asri6 !ar-oni91@@695Kamus Kimia59 #ineka Fi*ta : 4akarta (urrows6 G9 1@6195)eNt,ook o" /i+ro,iolog'59 G( !oundeng Fom*an': h'ladel*hhia Daintith6 4ohn91@@495Kamus 1engka* Kimia59 Erlangga : 4akarta 2honi6 A+hmad6 20126 .&solasi dan &nokulasi (akteri56 dalam htt*:DDwww9a+hmadghoni9+omD2012D0>Disolasi?dan?inokulasi?,akteri9html96 diakses 2H Desem,er 2012 2u+hanon6 E9# dan E9N 2i,sons91@@295(erge's /anual o" Deteminate

(a+teriolog'6$th Edition59 )he Gillians and Gilkins Fom*an' : New Iork Handoko6 !riani920009 . /ikro,iolog' Dasar .9 3ni:ersitas Di*onegoro : !emarang 4ose*h D9 Fonnoll' and #o,ert A9 Hill6 Nat. Prod. "ep.6 200$6 256 H@46 dalam situs htt*:DDwww9rs+9orgD u,lishingD4ournalsDN Darti+le9as*P )'*eQ&ssueR4ournal+odeQN R&ssueQ4R!u,IearQ200$RAolumeQ2>R2AQo n6 diakses 2H Desem,er 2012 Kings,urd6 Dtetal91@$>95 /i+ro,iolog' .9 4ohn Gille' R !ons : New Iork /ul'ono9200>95 Kamus Kimia59 2anessa !iratama: (andung ele;ar6 49/ and E9F9!9 Fhan91@@695 Dasar?dasar /ikro,iolog'59 3& ress : 4akarta ud-aatmaka6 Had'ana9200295Kamus Kimia59 (alai ustaka : 4akarta

#o,inson6 )9 1@@>9 Kandungan 0rganik )um,uhan )inggi9 ener-emah: Kosasih admawinata9 (andung: &)( !alle6A9491@H39 .Fundamental rin+i*le o" (a+teriolog'59 /+ 2raw Hills : 3!A !uted-o6 /9 1@@69 ./ikro,iolog' )anah59 #ineka Fi*ta: 4akarta Aolk6 G9A91@@19 ./i+ro,oilog' Dasar alih ,ahasa59 Erlangga : 4akarta Galu'o6 19 20049 ./i+ro,olog' 3mum59 3// ress : /alang

1am*iran erhitungan /enghitung KH/ ekstrak ,unga ,ungur se,agai sam*el anti,akteri dalam mengham,at akti:itas ,akteri9

KH/ sam*el 1agerstromeia 'aitu:

Q 11>63$ <