Diagnostic de laborator in neuroviroze

2 aspecte clinice

Meningite virale Encefalite virale

Definitie de caz meningita virala

Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre: Cefalee sever i persistent; Redoare de ceafa Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:
Fotofobie Greata Vrsturi; Faringita exudativa Dureri abdominale

La sugari si copii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei

Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM ETIOLOGIE POSIBILA Produs IZOLARE Patologic + IDENTIFICARE
MF SNF LCR De electie Culturi celulare Animal de laborator

Dg. DIRECT =detectie directa

PCR

Dg. INDIRECT =serologie

DA

80%

Enterovirusuri
Polio Cocsackie A si B E.C.H.O. 20%

MENINGITA ASEPTICA

LCR

alte virusuri:
VVZ-VZV V. URLIAN VHS-HSV VCM-CMV V. PARAGRIPALE

De electie Culturi celulare Animal de laborator

PCR

DA

Herpangina - A2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 Enterovirusuri Rinofaringita A21; Conjunctivit hemoragic A24; Stomatit veziculoas A i B; Polioviruses 1, 2, 3 Pleurodinie Bornholm B; Miocardita B3,B4; infecia mamei n primele luni de Coxsackie A1-24/ B1-6 sarcin duce la malformaii cardiace ale ftului. Pericardita B3, B4, B5 ECHO - 33 (Enteric Meningita acut seroas - A i cytopatogenic B; cu faringita sau herpangina. human orphans) Encefalita B3, B5, este letal; Nevrite paralizii faciale -A i Enteroviruses 68-71 poliradiculonevrite - B; Boal diareic acut B4, B5 Hepatita viral -B3, B5 .

V. Poliomielitice
Paralizie flasca Distala Asimetrica Sesibilitate pastrata

Produse patologice
Suspensia de Materii Fecale(MF) Recoltare. ca atare in cantitate de 4-8 grame ( falanga distala index) in solutie 1 M de Mg SO4 suspensie 20% (stabilizeaza infectivitatea) tuseu rectal cu un mic tampon umectat in mediu de transport viral Precizari. enterovirusurile se excreta saptamani la rand , dar sansele de izolare scad, se recomanda recoltarea a 2 -3 probe la interval de 24-48 ore Stocare si transport. la 2-4 C, maxim 2 ore Prelucrare. Se amesteca MF cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile Se centrifugheaza la 1500- 10 si se recolteaza supernatantul Se adauga de gentamicina 100 ug/ml.

Lichid cefalorahidian (LCR)

Recoltare. punctie la nivelul L4-L5, cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea tratamentului antibiotic, asepstic. - 5-6 ml in 3 tuburi sterile se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia, clorurorahia si presiunea LCR. pleiocitoza (cresterea nr. de celule limfo-monocitare in LCR) 1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice. Stocarea. la 2-8 C, fara mediu de transport 1ora Transportul. Rapid. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare se face obligatoriu pe gheata sau la -70 C. Prelucrare. se utilizeaza ca atare.

Spalatura nazo faringiana(SNF)

Recoltare. tampoan steril cu coada introdus in cornetul nazal inferior, secretii de la nivelul peretelui posterior al nazofarinxului. tampon prin cavitatea bucala pentru secretii de pe peretele posterior al faringelui cu evitarea atingerii tamponului de limba, obraji sau buze. Stocare si transport. optim imediat dupa recoltare (cand nu este posibil: -70 C, cu transport pe zapada carbonica) Prelucrare. tamponul se dispune in tub steril cu 15 ml mediu pt. 1 ora centrifugare la 2500 - 15 minute, la 4 C supernatantul este indepartat si sedimentul se resuspendat in 3-4 ml TFS

INFECII CU VIRUSURI COXSACKIE

1. Izolarea virusului pe culturi celulare (exceptnd unele virusuri Coxsackie grup A) se face n culturi primare de rinichi de maimu (Macaccus rhesus) sau n culturi diploide umane. 2. Izolarea pe animale prin inoculare pe diverse ci (intracerebral, intramuscular, intraperitoneal) la oarece sau hamster, nounscut,

pentru virusurile Coxsackie grup A (paralizie flasca geeralizata) i unele virusuri Coxsackie grup B (paralizie localizata cu tonus pastrat).

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI DE CELULE ECP PICNOTIC LITIC (microscop cu inversie de faza)

ECP picnotic litic

RSN

RSN:

IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZARE = VIRUS
NECUNOSCUT/ANTICORPI CUNOSCUTI (SER IMUN DE REFERINTA) SE FOLOSESC DILUTII DE VIRUS SI SE MENTINE SERUL IMUN DE REFERINTA CONSTANT

REACTIA DE SERONEUTRALIZARE=
ANTICORPI NECUNOSCUTI/ VIRUS CUNOSCUT SE FOLOSESC DILUTII DIN SERUL IMUN DE REFERINTA SI SE MENTINE VIRUSUL CONSTANT

ETAPE
1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE 2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE 3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE metoda plajelor

Dilutii seriale ale virusului

Insamantare pe celule susceptibile dupa adsorbtie, 1h la 37, se acopera cu agar Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU

Metoda plajelor

Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor SC35M (H7N7) cu gena NS1 integra sau defectiva pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero)

Dilutie:

105

106

107

Dilutie:

104

105

106

SC35Msalbatic MDCK

SC35MdelNS1 MDCK

Dilutie:

106

107

108

Dilutie:

104

105

106

SC35M1-126 MDCK

SC35MdelNS1

Vero

Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor PR8 (H1N1) cu gena NS1 integra sau defectiva pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero) Dilutie: 104 105 106

PR8-salbatic MDCK

PR8-delNS1 Vero

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE = Repetarea etapei 1 cu amestecurile antigen-anticorp

Lim -Benyesh Melnick

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM ETIOLOGIE POSIBILA Prod. Patologic IZOLARE Dg. DIRECT =detect. directa
PCR IF

Dg. INDIRECT =serologie

NU

ENCEFALITA ACUTA MENINGOENCEFALITA ENCEFALOMIELITA

HERPESVIRUSURI: HSV1 HSV2 VZV EBV CMV ARBOVIRUSURI: TOGAVIRUSURI FLAVIVIRUSURI BUNYAVIRUSURI V. RABIC

LCR
BIOPSIE CEREBRALA SALIVA, AMPRENTE DERMICE, CORNEENE, LCR SANGE BIOPSIE CEREBRALA SNF LCR

Culturi celulare Animal de laborator

Culturi celulare Animal de laborator

PCR IF

De electie pt. ARBO VIRUSURI

POSTINFECTIOASE: V. RUJEOLOS V. URLIAN V. GRIPALE VVZ

Culturi celulare

PCR IF

NU

BIOPSIE CEREBRALA